细菌真菌放线菌培养基配方

实验四细菌、真菌、放线菌的分离与培养实验报告课程名称：环境微⽣物学实验实验类型：综合实验实验项⽬名称：微⽣物的分离与培养与菌落观察学⽣姓名：专业：环境⼯程学号：同组学⽣姓名：指导⽼师：实验地点：实验⽇期：2018 年 10⽉16⽇⼀、实验⽬的和要求1.掌握微⽣物接种培养技术2.掌握微⽣物分离纯化技术3.学习并掌握放菌落形态结构的观察⽅法，认识并理解它们的形态特征。

⼆、实验内容和原理⼟壤是微⽣物⽣活的⼤本营，是寻找和发现具有重要价值微⽣物的主要菌源。

在不同⼟壤中，各类微⽣物的数量千差万别。

为了分离获得某种微⽣物,需要预先制备不同稀释度的菌悬液，并添加相应的抗⽣素抑制不需要的微⽣物，例如，添加链霉素25~50U/mL抑制细菌;添加0.5%重铬酸钾液或制霉素50 U/mL 抑制霉菌。

通过10倍稀释以及平板分离、平板涂布和平板划线等操作，微⽣物可在平板上分散成单个的个体，经过适宜条件培养，单个个体可形成单个菌落。

挑取单个菌落转接⾄新鲜平板上，即可使⽬的菌种纯化。

1.菌种的分离纯化：从混杂微⽣物群体中获得只含有某⼀种或某⼀株微⽣物的过程称为微⽣物分离与纯化。

在分⼦⽣物学的研究及应⽤中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微⽣物群中分离出特定的微⽣物，⽽且还必须随时注意保持微⽣物纯培养物的“单⼀性”，防⽌其他微⽣物的混⼊。

2.平板涂布法：因为将微⽣物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采⽤稀释倒平板法也会使⼀些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧⽓⽽影响其⽣长，因此在微⽣物学研究中常⽤的纯种分离⽅法是涂布平板法。

⽤途上，⼀般多⽤于从菌种的纯化;优点是可以观察菌落特征，对混合菌进⾏分离;但不能计数3.平板划线法：最简单的分离微⽣物的⽅法是平板划线法，其原理是将微⽣物样品在固体培养基表⾯多次作“由点到线”稀释⽽达到分离⽬的的。

划线的⽅法很多，常见的⽐较容易出现单个菌落的划线⽅法有斜线法、曲线法、⽅格法、放射法、四格法等。

放线菌放线菌（Actinomycete）原核生物的一个类群。

大多数有发达的分枝菌丝。

菌丝纤细，宽度近于杆状细菌，约0.5～1微米。

可分为：营养菌丝，又称基质菌丝，主要功能是吸收营养物质，有的可产生不同的色素，是菌种鉴定的重要依据；气生菌丝，叠生于营养菌丝上，又称二级菌丝。

在气生菌丝上分化出可产生孢子的孢子丝，孢子丝的形状和排列方式因种而异。

成熟的孢子丝上产生成串的分生孢子。

孢子的表面结构、形状及颜色在一定条件下比较稳定，是鉴定菌种的重要依据。

以无性孢子和菌体断裂方式繁殖。

绝大多数为异养型需氧菌。

有的种类可在高温下分解纤维素等复杂的有机质。

在自然界分布很广，绝大多数为腐生，少数寄生。

产生种类繁多的抗生素，据估计，已发现的4000多种抗生素中，有2/3是放线菌产生的。

与人类关系十分密切。

重要的属有：链霉菌属，小单孢菌属和诺卡氏菌属等。

放线菌的形态比细菌复杂些，但仍属于单细胞。

在显微镜下，放线菌呈分枝丝状，我们把这些细丝一样的结构叫做菌丝，菌丝直径与细菌相似，小于1微米。

菌丝细胞的结构与细菌基本相同。

大部分放线菌的菌体由多细胞分枝状菌丝组成。

菌丝大多无隔膜，其粗细与杆状细菌相似，直径为1微米左右。

细胞中具核质而无真正的细胞核，细胞壁含有胞壁酸与二氨基庚二酸，而不含几丁质和纤维素。

根据菌丝形态和功能的不同，放线菌菌丝可分为基内菌丝、气生菌丝和孢子丝三种。

链霉菌属是放线菌中种类最多、分布最广、形态特征最典型的类群。

基内菌丝又称营养菌丝，匍匐生长于营养基质表面或伸向基质内部，直径在0.2～0.8微米之间。

它们象植物的根一样，具有吸收水分和养分的功能。

有些还能产生各种色素，把培养基染成各种美丽的颜色。

放线菌中多数种类的基内菌丝无隔膜，不断裂，如链霉菌属和小单孢菌属等；但有一类放线菌，如诺卡氏菌型放线菌的基内菌丝生长一定时间后形成横隔膜，继而断裂成球状或杆状小体。

气生菌丝是基内菌丝长出培养基外并伸向空间的菌丝。

实验报告课程名称：环境微生物学实验实验类型：综合实验实验项目名称：微生物的分离与培养与菌落观察学生姓名：专业：环境工程学号：同组学生姓名：指导老师：实验地点：实验日期：2018 年 10月16日一、实验目的和要求1.掌握微生物接种培养技术2.掌握微生物分离纯化技术3.学习并掌握放菌落形态结构的观察方法，认识并理解它们的形态特征。

二、实验内容和原理土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现具有重要价值微生物的主要菌源。

在不同土壤中，各类微生物的数量千差万别。

为了分离获得某种微生物,需要预先制备不同稀释度的菌悬液，并添加相应的抗生素抑制不需要的微生物，例如，添加链霉素25~50U/mL抑制细菌;添加0.5%重铬酸钾液或制霉素50 U/mL 抑制霉菌。

通过10倍稀释以及平板分离、平板涂布和平板划线等操作，微生物可在平板上分散成单个的个体，经过适宜条件培养，单个个体可形成单个菌落。

挑取单个菌落转接至新鲜平板上，即可使目的菌种纯化。

1.菌种的分离纯化：从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。

在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“单一性”，防止其他微生物的混入。

2.平板涂布法：因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。

用途上，一般多用于从菌种的纯化;优点是可以观察菌落特征，对混合菌进行分离;但不能计数3.平板划线法：最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。

划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。

用途一般多用于筛选菌株。

常用微生物培养基分离真菌：注：抗生素所有培养基灭菌放置不烫手背时（温度约为40°C左右），同时加入氯霉素和链霉至终浓度为0.5 mg/mL（提前配置好，用0.22 µm微孔滤膜过滤，-20℃存储），混匀后倒平板，用于抑制细菌生长。

1.GPY培养基：葡萄糖20 g，蛋白胨10 g，酵母提取物10 g，海盐15 g，琼脂20 g，蒸馏水1 L，pH 7.5，115℃，30 min灭菌2.PDA培养基：Potato Dextrose Agar干粉39 g/L，海盐15 g，蒸馏水1 L，pH 6.5-7.0，121℃，15 min灭菌3.马丁培养基：葡萄糖10 g，蛋白胨5 g，磷酸二氢钾1 g，七水合硫酸镁0.5 g，孟加拉红0.03 g，海盐15 g，琼脂20 g，蒸馏水1 L，115℃、30 min灭菌4.MEA培养基：麦芽浸粉17g，蛋白胨3g，海盐15g，蒸馏水1L，121℃，20 min 灭菌5.YPD培养基：酵母提取物10 g/L，蛋白胨20 g/L，葡萄糖20 g/L，琼脂20 g/L，115℃，30 min灭菌6.沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA，每升培养基）：蛋白胨（peptone）10.0 g，葡萄糖（glucose）40.0 g，琼脂（agar）15.0 g，pH 4.0 - 6.0；7.酵母汁麦芽提取物琼脂培养基（YM，每升培养基）：麦芽浸粉（malt extract）3.0 g，酪蛋白胨（casein peptone）5.0 g，酵母提取物（yeast extract）3.0 g，葡萄糖（glucose）10.0 g，琼脂（agar）15 g，pH 6.0 - 6.5；8.察氏培养基（CDA，每升培养基）：硝酸钠（NaNO3）3. 0 g，氯化钾（KCl）0.5 g，蔗糖（sucrose）30. 0 g，七水合硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.5 g，七水合硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）0. 01 g，磷酸氢二钾（K2HPO4）1.0 g，琼脂（agar）15.0 g，pH 6.0 - 6.5；分离放线菌：注：抗生素所有培养基灭菌放置不烫手背时（温度约为40℃左右），同时加入制霉菌素（终浓度为100.0 μg/ml）和萘啶酮酸（终浓度为25.0 μg/ml）（提前配置好，用0.22µm 微孔滤膜过滤，于-20℃冻存），混匀后倒平板，分别用于抑制真菌和细菌生长。

[沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂，沙堡弱培养基，SDA]（一）组成葡萄糖 40.0g蛋白胨 10.0g琼脂12.0～15.0g蒸馏水 1000ml（二）制法上述混合后加入200mg氯霉素，121摄氏度10分钟灭菌后备用。

（三）目的是常用的分离或保存菌种的培养基。

[沙氏液基，SDB]（一）组成葡萄糖 40.0g蛋白胨 10.0g蒸馏水 1000ml（二）制法上述混合后加入200mg氯霉素，121摄氏度10分钟灭菌后备用。

[加抗生素沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基，SDA with antibiotic]（一）组成葡萄糖 40.0g蛋白胨 10.0g琼脂12.0～15.0g蒸馏水 1000ml（二）制法上述混合后加入200mg氯霉素。

250mg放线菌酮，121摄氏度10分钟灭菌后备用。

[改良沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基，modified SDA]（一）组成葡萄糖 20.0g蛋白胨 10.0g琼脂12.0～15.0g蒸馏水 1000ml（二）制法上述混合后121摄氏度10分钟灭菌后备用。

（三）目的保存菌种培养基。

[马铃薯葡萄糖琼脂，PDA]（一）组成马铃薯 200.0g葡萄糖 20.0g琼脂12.0～15.0g蒸馏水 1000ml（二）制法先将马铃薯洗净去皮切片，加水180ml，煮沸30分钟后过滤，再加葡萄糖、琼脂，将过滤液补足到1000ml，121摄氏度灭菌后备用。

（三）用途此培养基是培养真菌较好的培养基，同时也是鉴定真菌较好的培养基之一。

鉴定皮肤癣菌一般不用此培养基。

[玉米吐温80琼脂，CMA with Tw80]（一）组成玉米粉 40.0g琼脂15.0g蒸馏水 1000ml吐温80 10ml（二）制法先将玉米粉混于水中，65摄氏度水浴一小时，过滤，再补足水量，然后加入琼脂和吐温80，121摄氏度10分钟灭菌后备用。

（三）用途用于观察白念珠菌厚壁孢子及假菌丝；红色毛癣菌在此培养基产色素较好。

[米饭培养基rice grain medium](一) 组成大米 300.0g蒸馏水 1000ml（二）制法将3g大米放入试管中，加入10ml蒸馏水，高压121摄氏度10分钟灭菌后备用。

常见微生物培养基Medium含有碳水化合物、含氮应用化学药品配成并标液体培养基不易长期保有不同。

一般培养基在对一些需严格灭菌的培2~6。

C的冰箱内。

1、细菌培养基配方一牛肉膏琼脂培养基牛肉膏0.3克 1.00.5 1.5水100毫升在烧杯内加水100火上加热。

待烧杯内各10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.27.6,30分钟。

配方二马铃薯培养基250500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。

在烧杯上做好2pH值调到7.5左右。

每支试管内加入10毫升配方三根瘤菌培养基葡萄糖10克磷酸氢二钾0.5克碳酸钙3克硫酸镁0.2克酵母粉0.4克琼脂20克水1000毫升1%结晶紫溶液1毫升2、放线菌培养基配方一可溶性淀粉2克硝酸钾0.1克磷酸氢二钾0.05克氯化钠0.05克硫酸镁0.05克硫酸亚铁0.001克琼脂2克水100毫升595使它溶解。

在烧杯外做好pH值到7.27.4备用。

配方二面粉琼脂培养基面粉60克琼脂20克水1000毫升50030分钟。

另取500pH值到7.43、真菌培养基配方一Sabouraud’s蛋白胨10克琼脂20克麦芽糖40克水1000毫升40本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。

配方二马铃薯糖琼脂培养基2001000液中加入10煮沸溶解后加糖20用。

把这培养基的pH值调到7.27.4杆菌。

配方三黄豆芽汁培养基黄豆芽100克琼脂15克葡萄糖20克水1000毫升301000把这培养基的pH值调到7.27.4配方四豌豆琼脂培养基豌豆80粒琼脂5克水200毫升取801小4、食用菌菌种培养基配方一马铃薯—蔗糖--琼脂培养基20%马铃薯煮汁1000毫升蔗糖20克琼脂18克200100020分钟足水分到100020%pH配方二综合马铃薯培养基20%马铃薯煮汁1000 毫升磷酸二氢钾3克硫酸镁1.5克葡萄糖20克维生素10毫克琼脂18克先配制20%整pH值到6该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。

放线菌的分离和鉴定放线菌的分离和鉴定实验器材：1.⼟壤材料 5 ---10cm 处⼟壤，放于采集袋中带回实验室。

2.培养基淀粉琼脂培养基（⾼⽒Ⅰ号培养基( w /v)）可溶性淀粉2%，KNO3 0. 1%，NaCL 0. 05%，K2HP04 0. 05%，MgSO4 0. 05%，FeSO4 0. 001%，琼脂2% 3.溶液和试剂（1) 20% ⽢油( 2) 0. 1%美蓝 A 液: 美蓝0. 3g ，95% ⼄醇300ml;B 液: 0. 01% KOH 100ml 混合A 和B 液即成⾰兰⽒染液3( 1) 结晶紫染⾊液: 甲液结晶紫2g，95% ⼄醇20ml;⼄液草酸铵0. 8g，蒸馏⽔80ml。

甲⼄液先分别溶解，然后混合在⼀起，过滤除去残渣后装⼊滴瓶中备⽤。

( 2) 碘液: 碘1g，碘化钾2 个，蒸馏⽔100ml 先取少量蒸馏⽔加⼊碘和碘化钾，使碘完全溶解后再加⼊全部蒸馏⽔，分装于滴瓶中备⽤。

( 3) 复红酒精溶液: 碱性复红0. 4g，95%⼄醇100ml，溶解装⼊滴瓶备⽤。

4.仪器和其他⽤品⽆菌纸、带玻璃珠的三⾓烧瓶、1ml⽆菌吸管、⽆菌试管、⽆菌培养⽫⼀.⽬的要求：1. 掌握倒平板的⽅法和常⽤分离纯化微⽣物的基本操作。

2. 初步观察⼟壤中放线菌菌落形态。

3. 初步了解掌握微⽣物分类的基本⽅法。

⼆.实验原理：放线菌在⾃然界中主要⽣存于陆地和淡⽔中，⼟壤为这类微⽣物的主要习居场所，⽆论在种类和数量上都⽐其他地⽅繁多。

在中性或偏碱性的⼟壤和有机质等丰富的⼟壤中较多。

放线菌以孢⼦和菌丝⽚段的形式存在于⼟壤，每克⼟壤内含有数万、数⼗万的孢⼦。

放线菌的⽣活史和形态特征放线菌的孢⼦和孢囊孢⼦在适宜的环境下吸收⽔分，膨胀萌发，⽣出芽管1 －3 个，芽管伸长长出分枝，分枝越来越多，形态菌丝体。

因其菌丝体在培养基内，即基内菌丝或称营养菌丝体。

基内菌丝体⼀般没有横隔，由于菌丝体长⼊培养基内和培养基表⾯，并纠缠在⼀起形成密集的菌落，所以⽤接种针将整个菌落培养基挑起⽽不破裂。

此文档下载后即可编辑[沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂，沙堡弱培养基，SDA]（一）组成葡萄糖40.0g蛋白胨10.0g琼脂12.0～15.0g蒸馏水1000ml（二）制法上述混合后加入200mg氯霉素，121摄氏度10分钟灭菌后备用。

（三）目的是常用的分离或保存菌种的培养基。

[沙氏液基，SDB]（一）组成葡萄糖40.0g蛋白胨10.0g蒸馏水1000ml（二）制法上述混合后加入200mg氯霉素，121摄氏度10分钟灭菌后备用。

[加抗生素沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基，SDA with antibiotic] （一）组成葡萄糖40.0g蛋白胨10.0g琼脂12.0～15.0g蒸馏水1000ml（二）制法上述混合后加入200mg氯霉素。

250mg放线菌酮，121摄氏度10分钟灭菌后备用。

[改良沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂基，modified SDA]（一）组成葡萄糖20.0g蛋白胨10.0g琼脂12.0～15.0g蒸馏水1000ml（二）制法上述混合后121摄氏度10分钟灭菌后备用。

（三）目的保存菌种培养基。

[马铃薯葡萄糖琼脂，PDA]（一）组成马铃薯200.0g葡萄糖20.0g琼脂12.0～15.0g蒸馏水1000ml（二）制法先将马铃薯洗净去皮切片，加水180ml，煮沸30分钟后过滤，再加葡萄糖、琼脂，将过滤液补足到1000ml，121摄氏度灭菌后备用。

（三）用途此培养基是培养真菌较好的培养基，同时也是鉴定真菌较好的培养基之一。

鉴定皮肤癣菌一般不用此培养基。

][玉米吐温80琼脂，CMA with Tw80（一）组成玉米粉40.0g琼脂15.0g蒸馏水1000ml吐温80 10ml（二）制法先将玉米粉混于水中，65摄氏度水浴一小时，过滤，再补足水量，然后加入琼脂和吐温80，121摄氏度10分钟灭菌后备用。

（三）用途用于观察白念珠菌厚壁孢子及假菌丝；红色毛癣菌在此培养基产色素较好。

[米饭培养基rice grain medium](一)组成大米300.0g蒸馏水1000ml（二）制法将3g大米放入试管中，加入10ml蒸馏水，高压121摄氏度10分钟灭菌后备用。

培养基配方1、PDA培养基（用于分离、培养植物内生真菌）：马铃薯（去皮）200g , 葡萄糖20g , 蒸馏水1000 ml , 琼脂粉15g。

用于分离内生真菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的氯霉素和硫酸链霉素各50 μ g/ml，用于抑制细菌的生长。

2、NA培养基（用于分离、培养植物内生细菌）：牛肉膏3g，蛋白胨5g，葡萄糖2.5g，琼脂粉15g，蒸馏水1000ml，pH 7.0。

用于分离内生细菌时在倒平板之前加入已过滤除菌的放线菌酮50μg/ml，用于抑制真菌生长。

115℃，20min 灭菌。

3、LB培养基：胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，NaCl 10 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0；4、DSM1培养基：磷酸三钾26.631 g（pH=7.0)，二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，牛肉膏3 g，NaCl 5 g，胰蛋白胨10 g，葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL，pH=7.0；5、DSM2培养基：磷酸三钾26.631 g（pH=7.0)，二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，牛肉膏3 g，NaCl5 g，细菌学蛋白胨10 g，葡萄糖1 g 蒸馏水至1000 mL,pH=7.0；6、Msgg培养基：磷酸钾5 mmoL/L(pH7.0)，MOPs 100 mmoL/L（pH7.0），MgCl2 2 mmoL/L，CaCl2 700 mmoL/L，MnCl2 50 μM，FeCl3 50 μM，ZnCl2 1 μM，VB1 2 μM，甘油0.5 %，谷氨酸0.5 %，色氨酸50 μg/mL，苯丙氨酸50 μg/mL，蒸馏水1000 mL，pH 7.0。

7、N%NA培养基：牛肉膏3.0 g，细菌学蛋白胨10 g，NaCl 5 g，琼脂粉N*10 g，8、BGM1培养基：牛肉膏3 g，胰蛋白胨10 g，NaCl 5 g，磷酸三钾26.631 g（pH7.0），二水柠檬酸三钠9.999 g，硫酸镁0.2465 g，硫酸铵19.821 g，葡萄糖1 g，蒸馏水1000 mL，pH 7.0。

实验用培养基配制 >1 ．牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养）牛肉膏3g ，蛋白胨10g ，NaCl 5g ，水1000mL ，pH7.4 ～7.62. 高氏1 号培养基( 用于放线菌培养)可溶性淀粉20g ，KNO 3 1g ，NaCl 0.5g ，K 2 HPO 4- · 3H 2 O 0.5g ，MgSO4 · 7H 2 O 0.5g, ，FeSO4 · 7H 2 O 0.01g ，水1000mL ，pH7.4 ～7.6 。

配制时注意，可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。

3 ．马丁氏（Martin ）培养基（用于从土壤中分离真菌）K 2 HPO 4 1g ，MgSO 4 · 7H 2 O 0.5g ，蛋白胨5g ，葡萄糖10g ，1/3000 孟加拉红水溶液100mL, 水900mL ，自然pH ，121 ℃湿热灭菌30min 。

待培养基融化后冷却55 ～60 ℃时加入链霉素( 链霉素含量为30 μ g/mL).4. 马铃薯培养基(PDA)( 用于霉菌或酵母菌培养)马铃薯( 去皮)200g, 蔗糖( 或葡萄糖) 20g, 水1000mL配制方法如下: 将马铃署去皮, 切成约2cm 2 的小块, 放入1500mL 的烧杯中煮沸30min, 注意用玻棒搅拌以防糊底, 然后用双层纱布过滤, 取其滤液加糖, 再补足至1000mL, 自然pH. 霉菌用蔗糖, 酵母菌用葡萄糖.5. 察氏培养基( 蔗糖硝酸钠培养基)( 用于霉菌培养)蔗糖30g, NaNO 3 2g, K 2 HPO 4 1g, MgSO 4 · 7H 2 O 0.5g, KCl 0.5g, FeSO4 · 7H2 O 0.1g, 水1000mL, pH7.0 ～7.26. Hayflik 培养基( 用于支原体培养)牛心消化液( 或浸出液)1000mL, 蛋白胨10g, NaCl 5g, 琼脂15g, pH7.8 ～8.0,分装每瓶70mL, 121 ℃湿热灭菌15min, 待冷却至80 ℃左右, 每70mL 中加入马血清20mL,25% 鲜酵母浸出液10mL, 15 醋酸铊水溶液2.5mL, 青霉素G 钾盐水溶液(20 万单位以上)0.5mL, 以上混合后倾注平板. 注意: 醋酸铊是极毒的药品, 需特别注意安全操作.7 ．麦氏(McCLary) 培养基( 醋酸钠培养基)葡萄糖0.1g, KCl 0.18g ，酵母膏0.25g ，醋酸钠0.82g, 琼脂l.5g ，蒸馏水l00mL 。

实验报告课程名称：环境微生物学实验实验类型：综合实验实验项目名称：微生物的分离与培养与菌落观察学生姓名：专业：环境工程学号：同组学生姓名：指导老师：实验地点：实验日期：2018 年 10月16日一、实验目的和要求1.掌握微生物接种培养技术2.掌握微生物分离纯化技术3.学习并掌握放菌落形态结构的观察方法，认识并理解它们的形态特征。

二、实验内容和原理土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现具有重要价值微生物的主要菌源。

在不同土壤中，各类微生物的数量千差万别。

为了分离获得某种微生物,需要预先制备不同稀释度的菌悬液，并添加相应的抗生素抑制不需要的微生物，例如，添加链霉素25~50U/mL抑制细菌;添加0.5%重铬酸钾液或制霉素50 U/mL 抑制霉菌。

通过10倍稀释以及平板分离、平板涂布和平板划线等操作，微生物可在平板上分散成单个的个体，经过适宜条件培养，单个个体可形成单个菌落。

挑取单个菌落转接至新鲜平板上，即可使目的菌种纯化。

1.菌种的分离纯化：从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。

在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“单一性”，防止其他微生物的混入。

2.平板涂布法：因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。

用途上，一般多用于从菌种的纯化;优点是可以观察菌落特征，对混合菌进行分离;但不能计数3.平板划线法：最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。

划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。

用途一般多用于筛选菌株。

实验一培养基的配制与灭菌技术一、目的要求1 掌握配制培养基的一般方法和步骤。

2 学习高压灭菌锅的操作方法。

二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。

其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NACL提供无机盐。

在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。

琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。

琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。

由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。

高氏1号培养基是分离和培养放线菌的合成培养基，是由可溶性淀粉作碳源，KNO3作氮源，NaCl，K2HPO4.3H2O，MgSO4.7H2O，FeSO4.7H2O为微生物提供钠、钾、磷、镁、硫等离子。

高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。

待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。

在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固；二是湿热的穿透力比干热大；三是湿热的蒸汽有潜热存在，这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。

灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等具体情况而有所改变。

通常为15磅/英寸2(121.3℃)灭菌15—20分钟；不耐高压的培养基则可采用流通蒸汽灭菌或间歇灭菌。

含糖培养基用112.6℃（8磅/英寸2）灭菌15分钟。

紫外线灭菌是用紫外线灯进行的，紫外线杀菌机制主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成，从而抑制了DNA的复制；由于辐射能使空气中的氧电离成[O]再使O2氧化生成臭氧O3或使水H2O氧化生成过氧化氢H2O2，O3和H2O2均有杀菌作用。

工业化生产乳酸菌的液体培养基的配方工业化生产乳酸菌的液体培养基的配方产品要菌体,菌种是复合菌种,做进一步的发酵用的,十分感谢!其实工业培养基跟实验室培养基只是说原料粗糙度或者说是原料选择的区别,品级不一样而已,要看楼主对于乳酸菌培养的要求了,比如楼主是要做高密度培养呢,还是直接就获取代谢产物,菌体离心收集后洁净度是否要高,还有发达就是楼主选择的工艺是否时候使用低品级的工业培养基呢,这些问题需要综合考虑才能最后定论培养基的内容。

1、细菌培养基配方一牛肉膏琼脂培养基牛肉膏0.3克,蛋白胨1.0克,氯化钠0.5克,琼脂1.5克,水100毫升在烧杯内加水100毫升,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠,用蜡笔在烧杯外作上记号后,放在火上加热。

待NDS烧杯内各组分溶解后,加入琼脂,不断搅拌以免粘底。

等琼脂完全溶解后补足失水,用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2~7.6,分装在各个试管里,加棉花塞,用高压蒸汽灭菌30分钟。

配方二马铃薯培养基取新鲜牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀细细剁成肉末后,加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。

在烧杯上做好记号,煮沸,转用文火炖2小时。

过滤,滤出的肉末干燥处理,滤液pH值调到7.5左右。

每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心,灭菌,备用。

配方三根瘤菌培养基葡萄糖10克磷酸氢二钾0.5克碳酸钙3克硫酸镁0.2克酵母粉0.4克琼脂20克水1000毫升1%结晶紫溶液1毫升先把琼脂加水煮沸溶解,然后分别加入其他组分,搅拌使溶解后,分装,灭菌,备用。

2、放线菌培养基配方一淀粉琼脂培养基(高氏培养基)可溶性淀粉2克硝酸钾0.1克磷酸氢二钾0.05克氯化钠0.05克硫酸镁0.05克硫酸亚铁0.001克琼脂2克水100毫升先把淀粉放在烧杯里,用5毫升水调成糊状后,倒入95毫升水,搅匀后加入其他药品,使它溶解。

在烧杯外做好记号,加热到煮沸时加入琼脂,不停搅拌,待琼脂完全溶解后,补足失水。