微生物学试验沈萍等高教出版社

(3)染色：滴加石炭酸复红，覆盖整个涂片标本区，放置20~30 秒，使细胞着色。
(4)水洗：染色时间到，用细小的水流慢慢冲洗去载片上多 余的染色液；注意：避免水流直接冲在标本区。
(5)干燥：将洗过的涂片标本晾干，或用吸水纸吸去多余水分， 然后晾干或微热烘干。
(6)镜检：将干燥后的标本置于显微镜下观察。细菌、放线菌用 油镜镜检。注意：务必完全干燥后再进行油镜镜检。
4、其它类型的显微镜：
①暗视野显微镜 ②相差显微镜 ③荧光显微镜 ④电子显微镜；

（二）单染色法
1、定义：仅使用一种染色剂使微生物着色的染色方法，只能识别 微生物细胞的形状和大小。
2、操作步骤： (1)涂片：取少量无菌水滴在干净载片上，用接种环无菌操作取 少量菌种（四联球菌）轻轻混入水中，将其铺成薄层。 (2)固定：自然干燥后，进行热固定：把涂有细菌的一面向上， 小心通过酒精等火焰烘烤3~4次。 固定的目的： ①杀死细胞，固定细胞结构； ②使菌体牢固附着在玻片上，防止标本被水冲洗掉； ③改变染色剂对细胞的通透性，增强染色效果。

实验一、显微镜的使用与单染色法
一、实验目的
1、熟练掌握显微镜的结构及使用方法 2、熟练掌握细菌涂片的制作及单染色法
二、实验材料
1、电光源双目显微镜 2、培养24小时的四联球菌斜面

D  
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

2N  A 2nsin( / 2)

三、试验内容

（一）显微镜的使用
1、普通光学显微镜的构造 （1）机械装置：

实验内容
实验一、显微镜的使用与单染色法 实验二、革兰氏染色与荚膜染色 实验三、放线菌形态观察与芽孢染色 实验四、霉菌形态观察与各大类微生物菌落特征 实验五、酵母菌形态观察、显微计数与显微测量技术 实验六、培养基的制备 实验七、菌种分离纯化技术与平板菌落计数 实验八、水质微生物学检测 实验九、消毒与灭菌技术
镜座、镜臂、镜台、镜筒、物镜转换器、调焦装置等 （2）光学系统：
目镜、物镜、光源等 2、显微镜的工作原理
① N ·A = nsin（α /2）





② D  2N  A  2nsin 

2

3、油镜的使用及维护
（1）反向调节 （2）镜头维护：
① 4~6层镜头纸，单向擦拭； ② 4~6层镜头纸，沾取二甲苯，单向擦拭； ③ 4~6层洁净镜头纸，单向擦拭；
微生物学实验课的目的在于加强课堂讲授的基本理论与基本知 识的理解，掌握研究微生物最基本的操作技能和实验手段，培 养分析问题和从事实践应用的能力。为上好实验课，必须做到： 1. 安全第一！注意水、电、门、窗安全；如有意外，及时报告 2. 严守纪律！严禁迟到、喧哗，吸烟、接打电话，做与实验无 关的事情，不要随意走动。 3. 认真完成实验。实验前预习，明确实验目的、原理、方法； 实验操作要细心谨慎，认真进行观察和记录，培养严谨求实的 科学态度；认证完成实验报告。课上认真听讲，课后积极讨论 4. 爱惜仪器，保持秩序。每次实验之后必须清理好实验台，待 实验老师检查之后才能离开。

四、实验报告
1、油镜的工作原理？ 2、细菌涂片染色前固定的目的？ 3、绘图表示所观察到的菌体形态。
要求：绘制圆形视野图，每张试验报告 纸上不多于2份视野图；标注菌体名称， 放大倍数，染色剂等信息。



实验考核办法：
1、平时成绩占70%，期末卷面成绩占30%。 2、每次实验课预习报告占30分，实验操作占50分，结果
与讨论（实验报告）占20分；∑实验得分/X，为平时成 绩。 3、出现安全责任事故，实验课成绩记为不及格；无故缺课 一次，本次实验为零分；迟到或早退一次，扣20分；逃 避值日或实验后未整理实验台，扣20分；喧哗、接听手 机、随意走动，扣10分。