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1pondo1pondo: Exploring the Realm of Japanese Adult EntertainmentIntroduction:Japan has long been known for its unique and diverse entertainment industry, which spans across various forms of media, from music and anime to television dramas and movies. However, one aspect of Japanese entertainment that has gained a significant following, even globally, is the adult entertainment industry. One popular name that stands out in this genre is 1pondo. In this document, we will dive into the world of 1pondo, exploring its history, offerings, and the reasons behind its success.Chapter 1: History of 1pondo:1.1 The Birth of 1pondo:Founded in 2005, 1pondo quickly became one of the leading adult entertainment websites in Japan. The website was created as a means to fulfill the desires and fantasies of adultcontent consumers, offering a wide range of adult videos featuring top Japanese AV actresses.1.2 Evolution of 1pondo:Over the years, 1pondo has evolved to stay ahead of the competition and adapt to changing consumer demands. The website has embraced technological advancements, ensuring high-quality streaming and an intuitive user interface. Additionally, the introduction of various subscription plans and interactive features has helped 1pondo maintain its position as a top player in the Japanese adult entertainment industry.Chapter 2: Content Offerings:2.1 Extensive Video Library:One of the key factors contributing to the popularity of1pondo is its extensive video library. With thousands of videos to choose from, the website caters to a wide range of interests and fetishes. From cosplay to BDSM, 1pondo ensures there is something for everyone.2.2 AV Actress Database:Alongside its vast video collection, 1pondo provides detailed information about each AV actress featured on the website. Users can explore profiles, biographies, and even connect with their favorite actresses through interactive features such as live chats and forums.Chapter 3: Quality and Innovation:3.1 High-Quality Video Production:1pondo ensures that the videos it hosts are of the highest quality, featuring professional production values and talented AV actresses. This commitment to quality has allowed the website to maintain its reputation as a reliable source for premium adult content.3.2 Interactive Features:To create a more engaging experience for its users, 1pondo offers interactive features such as live chats, user reviews, and a rating system. This not only allows users to express their opinions but also enables them to interact with like-minded individuals within the 1pondo community.Chapter 4: Cross-cultural Impact and Global Reach:4.1 International Appeal:While 1pondo primarily caters to a Japanese audience, its influence has transcended national boundaries. The popularity of Japanese AV actresses, combined with the allure of exotic fantasies, has attracted fans from various countries, making 1pondo a global platform for adult entertainment.4.2 Localization Efforts:Recognizing the demand from non-Japanese speakers,1pondo has made efforts to localize its platform. The website now offers multilingual support, including English translations for video titles and user interface elements. This has opened up new opportunities for international users to explore the world of Japanese adult entertainment.Chapter 5: Challenges and Future Outlook:5.1 Regulatory and Legal Challenges:As with any adult entertainment platform, 1pondo faces regulatory and legal challenges both in Japan and abroad. Stricter regulations and censorship laws place limitations on the content that can be produced and distributed, requiring 1pondo to continually adapt to meet these requirements.5.2 Embracing Technological Advancements:Looking towards the future, 1pondo aims to embrace technological advancements such as virtual reality (VR) and artificial intelligence (AI). These technologies have the potential to revolutionize the adult entertainment industry, providing users with more immersive experiences and personalized content recommendations.Conclusion:1pondo has established itself as a prominent player within the Japanese adult entertainment industry, offering a vast collection of high-quality videos and interactive features. Its cross-cultural appeal and efforts towards localization have enabled it to reach a global audience. As the industry continues to evolve, 1pondo will undoubtedly face new challenges and opportunities, but its commitment to innovation ensures its position as a leader in the realm of Japanese adult entertainment.。

动物星球:/_home/老莫生物教学:/中青网大百科:/encyclopedia/propagation/index.htm生物导航网:/中学生物:/zxsw/index.asp中国环境生态网:/index.shtml华中师大:植物学精品课程:/jpkc/cw/zhiwuxue/main.htm中国生物论坛:/bbs/Default.asp盐生植被类型:/psi/research/WYE2/types%20of%20halophyte%20 vegetation.htm思奇生物网:/生命青葱网:/南京大学植物资源网:/cps/site/NJU/njuc/plantsweb/index.htm 生物教学之窗:/main/index.html中学综合教育资源网:http://220.189.228.106:8282/index.asp生命经纬:/中国公众科普网:/我爱奥赛网高中生奥:/bbs2/list.asp?boardid=5江西省赣县中学生物组网站:生物秀:/Index.html植物生物化学教学站:/kech/zwsl/zhlbiochem/园林植物论坛:/bbs/Board/Board.asp?BoardID=2生物百花园:/高中生物资源索引:/明虎生物驿站：/中国生物课程网:http://bio.*.com/index.html中学生物教学资源网：/北京大学医学部精品课程:/jpkc-sb/bingli/jpkc/jpkc.htm生物教师之家：/index.asp动物生理学网络课程精编:http://202.113.96.26/wlkc/dongwushenglixue/index.htm 教育星空:/teacher/new.asp?cid=9&classid=14&Nclassid=216植物学教学网站http://202.116.65.193/jinpinkc/zhiwuxue/course.htm中国植物科普网:/中国蝴蝶网:/articl/read.asp?id=1591天利生物论坛:/index.asp?boardid=42生物多样性:.hk/~bio/6e/Biodiversity/第二教育网:/search/02016/rs1.html园丁工作站:/sw/Index.html中国生物课程网:http://bio.*.com/四川省基础教育资源中心:/search.php?skey=%C9%FA%C E%EF&stype=&subject=&grade=&type=&format=&x=19&y=2中小学教育资源交流中心:/list/shengwu/张家口市第三中学:http://*194.241.146/SW/index.asp生物教育网:/Index.html全品高考网:http://www.*.com/Subject.aspx?subcataid=6精品试卷网:/shijuan/38/课件交流中心:http://www.*.net/Soft_Class.asp?softChannelID=3&ClassID=190免费教育资源网:/Soft/118/一线高考网:生物庄园:/sw/丹中教育资源网：/edu/shiti/ShowClass.asp?ClassID=43高中生物学习辅导:生物虎冀:/index6.htm野生生物守望者:/高校招生网:/gktk/search.asp?classid=123110生物学科网:/中学精品资源网:/Soft/ShowClass.asp?ClassID=30中国名师教育网：/teacher/jiaoliu/test_brow.asp?subject=生物生物资源网:/英才苑:/pe/teacher/ShowClass.asp?ClassID=450海口市灵山中学:/Class/wqj03/生物教育资源库:/index.asp高中生物:/gzsw/index.htm海豚在线：/Soft/ShowClass.asp?ClassID=61中国教育考试资源库::/Sorting.asp?sortid=6第一生物:/Index.shtml新课标在线:/St/sw/150_Index.shtml生物学家园:/blog.php?uid-165.html课件吧:/kj/ShowClass.asp?ClassID=209江苏省兴化中学资源平台:/Soft/ShowClass.asp?Clas sID=77中国生物新课程网:http://bio.*.com/Channel06/swalpkjs/浙江青少年科技教网:/html/jykj/sw/index.html 细胞生物学在线:/book/index.htm生物虎翼:/index.htm中学生物网站:/res/seniorbio/index.htm高中生物资源索引:/生化资源空间:/Index.asp中学生物:/xkweb/zxsw/中国课件网:/sort.asp?CateID=6莲山生物课件:。

Dolphin-1D凝胶成像系统分析软件操作手册 目 录：1、介 绍：概 况_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 特 点_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 应 用_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _2、安 装：硬件要求_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 硬件安装_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 软件安装_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _3、图像捕捉：凝胶成像系统图象捕捉_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 图像捕捉模式选择_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 图像捕捉程序_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ DNA EthBr 染色胶_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ Protein SDS-PAGE染色胶_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _4、图像优化：图像质量提高_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 工具栏介绍_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _5、凝胶图像分析：背景选择_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 泳道分析_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 条带分析_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 基线设定_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _分子量/含量分析_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 报 告_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 打印及保存_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _6、克隆记数(Colony counting)：背景选择_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 克隆工具_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 报 告_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _7、微孔板分析：(Microtiter Plate assay)背景选择_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 酶标实验工具(Microtiter assay tool)_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ Mass标准_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 报 告_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ __ _ _ _ _ _ _ _ _ _8、斑点图像分析：(spot image analysis)背景选择_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 斑点工具(spot tools) _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ spot标准_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 报 告_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _9、注 解：增加文字注解 _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 增加线条注解 _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _10、索 引：第一章：介 绍概 况： Dolphin-1D 软件专为生命科学实验室图像捕捉及分析而设计，它与 Wealtec公司凝胶成像系统(Dolphin-Doc)及扫描仪(Dolphin-scan)配套使用，也可应用于其它独立图像分析目的。

Oligo 6 Tour 主要功能介绍Oligo是一种多功能的程序，通过从一个序列中搜索、选择寡核苷酸而广泛运用于PCR、DNA 测序、定向诱变及各种杂交中。

它采用nearest neighbor thermodynamic values的方法计算出杂交的温度及寡核苷酸的二级结构。

Oligo软件已经被认可作为一种选择及分析寡核苷酸的工业软件，运用于各种分子生物学中。

最早的商业化的软件在1989年被开发出来。

本文描述了Oligo软件的最重要的特征及性能。

1、主窗口当你运行Oligo、并输入序列之后,Oligo出现了两个窗口：上面的一个为Tm窗口（The Melting Temperature window），下面的一个为内部稳定性窗口（五聚体的DG），还有第三个窗口，即寡核苷酸频率窗口，隐藏在内部稳定性窗口之后。

--图1，2Tm窗口显示了一部分的DNA/RNA的活性片段，Tm的散点图显示了在这个片段中的每20个碱基的Tm值。

分析的片段的长度是可变的，取决于monitor resolution。

圈出来的序列部分及黄色的bar即代表当前分析的20个碱基的Tm值【注：Olig6.71的版本为20个碱基，与原文的21个碱基不同】.可通过点击窗口的左下角的Upper、Lower按钮选择上游引物、下游引物。

划分Tm图二等分的水平线代表了这个序列的所有的21个碱基的寡核苷酸的平均Tm值(or free energy or degeneracy or %GC)。

在Tm图的分别为双链的核苷酸序列及相应的氨基酸【彩色的代表使用的密码子】--图3内部稳定性窗口显示了寡核苷酸的内部稳定性(五具体的自有能)。

可被用于预测用于PCR 或测序反应特异性的把握度2. Analyze - Key Info显示寡核苷酸的基本信息。

--图4，53. Analyze - Duplex Formation显示了上游引物、下游引物的潜在的二级结构的形成。

趣味视觉误差图片-你的眼睛欺骗了你bbioo_Administrator秀“弗雷泽螺旋”是最有影响的幻觉图形之一。

你所看到的好像是个螺旋，但其实它是一系列完好的同心圆！这幅图形如此巧妙，以至于会促使你的手指沿着错误的方向追寻它的轨迹。

【解析】每一个小圆的“缠绕感”通过大圆传递出去产生了螺旋效应。

遮住插图的一半，幻觉将不再起作用。

1906年英国心理学家詹姆斯·弗雷泽创造了以整个系列的缠绕线幻觉图片。

蛋白秀基因长度与透视：线AB和线CD长度完全相等，虽然它们看起来相差很大。

积分帖子谢泼德桌面：这两个桌面的大小、形状完全一样。

如果你不信，量量桌面轮廓，看看是不是。

【解析】虽然图是平面的，但它暗示了一个三维物体。

桌子边合作子推提供的感知提示，影响你对桌子的形状作出三维的解释。

这个奇妙的幻觉图形清楚地表明，你的大脑并不按照它所看到的进行逐字解释。

斯坦福大学的心理学家罗杰·谢泼德创作了这幅幻觉图。

闪烁的网格：当你的眼睛环顾图像时，连接处的圆片将会一闪一闪。

【解析】德国视觉科学家迈克尔·施若夫和E.R.威斯特于1997年发现勒索闪烁的网格幻觉。

这种幻觉产生的原因目前还不十分清楚。

埃斯切尔的不可能的盒子：比利时艺术家马瑟·黑梅克，从荷兰平面造型艺术家M.C.的一幅画中吸取灵感，创造了一个不可能存在的盒子的实物模型。

疯狂的螺帽：你知道直钢棒是怎样神奇地穿过这两个看似乎成直角的螺帽孔的吗？【解析】两个螺帽实际是中空的，虽然它们看起来是凸面的，所以两个螺帽并不互相垂直。

螺帽被下方光源照到（一般光线应来自上方），这给人们判断他们的真实三维形状提供了错误信息。

美国魔术世界里·安德鲁斯创造了这个精彩的幻觉作品。

埃冰斯幻觉：两个内部的圆大小一样吗？【解析】两个内部的圆大小完全一样。

当一个圆被几个较大的同心圆包围时，它看起来要比那个被一些圆点包围的圆小一些。

曲线幻觉：竖线似乎是弯曲的，但其实他们是笔直而相互平行的。

分子克隆载体（vector）载体（vector）是指运载外源DNA有效进入受体细胞内的工具。

载体同外源DNA在体外重组成DNA 重组分子，在进入受体后形成一个复制子，即形成在细胞内能独自进行自我复制的遗传因子。

重组DNA 技术中最常用的载体有质粒、噬菌体λ，柯斯质粒（cosmid）和噬菌体M13。

载体（vector）是指运载外源DNA有效进入受体细胞内的工具。

载体同外源DNA在体外重组成DNA重组分子，在进入受体后形成一个复制子，即形成在细胞内能独自进行自我复制的遗传因子。

因此，作为载体应该满足以下几方面的要求：①有某种限制酶的一个切点，最好是有许多种限制酶的切点，而且每种酶的切点只有一个；②外源DNA插入后不影响载体在受体细胞中进行自我复制，载体应对受体细胞无害，以及载体能接纳尽可能大的外源DNA片段；③有利于选择的标记基因，可以很方便地知道外源DNA已经插入，以及把接受了载体的受体细胞选出；④具有促进外源DNA表达的调控区。

重组DNA技术中最常用的载体有质粒、噬菌体λ，柯斯质粒（cosmid）和噬菌体M13。

它们的受体细胞都是大肠杆菌。

这四种载体的大小和结构尽管各不相同，但它们的共同特点是：①都能在大肠杆菌中自主复制，而且能连同所带的外源DNA一起复制；②都很容易同细菌DNA分开并加以纯化；③都有一段DNA对于它们自身在细菌中的增殖不是必需的。

因此，外源DNA可以插入这一段DNA中，或是置换这一段DNA而不影响载体的复制。

根据这一特点，载体又可分成插入型和置换型两大类。

质粒能通过细菌间的接合由一个细菌向另一个细菌转移，可以独立复制，也可整合到细菌染色体DNA中，随着染色体DNA的复制而复制。

载体可以分为：克隆载体、表达载体及穿梭载体。

1.克隆载体(cloning vector):通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。

生物秀论坛 学术交流 资源共享 互助社区యടޟ፿၂ଋྎጘ๼ऱ!MCጘᄏ๸ዸ૥ǖbaco-tryptone 10g；bacto-yeast extract 5g ；NaCl 10g ；搅拌完全溶解，用NaOH 10M调pH7.0，定溶1L，灭菌。

MCৼᄏ๸ዸ૥ǖLB液体培养基临高压灭菌前加入15g琼脂。

ړᛚ༴ඕႤǖ贮存液50mg/ml（水）， 过滤除菌，避光保存-20℃，用时取50微升加入50毫升培养基。

1/6N!FEUBDŽqI9/1Džǖ160 ml H2O+ EDTA-Na-2 H2O（37.22g），磁力搅拌，用氢氧化钠（约4g颗粒）调pH8.0，定溶至200ml。

分装高压灭菌。

2N!Usjt/IDmDŽqI!9/1Džǖ160毫升H2O +24.22g Tris碱，加入浓HCl 8.4毫升后冷却至室温，调pH8.0，定溶至200ml。

分装高压灭菌。

2/6N!Usjt/IDmDŽqI!9/9Džǖ160毫升H2O +36.33g Tris碱，加入浓HCl ？毫升后冷却至室温，调pH8.8，定溶至200ml。

分装高压灭菌。

2N!Usjt/IDmDŽqI!7/9Džǖ160毫升H2O +24.22g Tris碱，加入浓HCl ？毫升后冷却至室温，调pH6.8，定溶至200ml。

分装高压灭菌。

21&TETǖ90毫升H2O溶解10g SDS（加热68℃助溶），加入几滴浓HCl调pH7.2，定溶至100ml，分装无须灭菌ᄋནᒠೃྎጘ2ǖ200毫升无水葡萄糖1.8 g1M Tris.HCl（pH 8.0）5ml0.5M EDTA（pH 8.0）4ml定溶至200ml，灭菌，4℃保存ᄋནᒠೃྎጘ3DŽሚ፿ሚ๼Džǖ!10%SDS 1ml 10M NaOH 200微升水 8.8 mlᄋནᒠೃྎጘ4ǖ200毫升KAc 58.884 g 冰乙酸 23 ml定溶至200ml，灭菌，4℃保存UFǖ1M Tris.HCl（PH8.0） 1ml（灭菌） 0.5M EDTA（PH8.0）200 微升（灭菌）定溶100mlJQUHǖ8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后定溶至10ml，0.22um滤器过滤除菌，分装，-20℃保存。

生物秀实验频道——专业生物实验中心 /bio101/ 分子克隆技术 实验操作手册 2005生命科学技术学院课程简介分子克隆技术是指DNA的无性繁殖技术。

分子克隆技术课程主要是针对生物技 术专业、生物科学专业、生命科学与技术基地班本科生及生物学类专业研究生而开 设的实验课。

实验内容涉及分子克隆的一些基本方法及基本操作技巧，主要包括分 子克隆和分子杂交两大部分：分子克隆技术：DNA重组技术是分子生物学的核心内容。

本实验利用质粒载体 克隆外源DNA片段，通过这个实验大家可以掌握质粒载体的抽提、外源DNA的准备、 酶切、连接及感受态细胞的制备、连接产物的转化以及阳性克隆子的鉴定和验证等。

分子杂交技术：实验室常用的分子杂交技术主要有 Southern blotting， Northern blotting，Western blotting 及 Dot blotting 等。

Southern blotting 是通过用一种或多种限制性内切酶消化基因组或其它来源的 DNA，经过琼脂糖凝胶 电泳按大小分离酶切所得的片段，随后 DNA 在原位发生变性并从凝胶转移到一固相 支持物上（硝酸纤维素膜或尼龙膜）。

DNA转移至固相支持物的过程中各DNA的相对 位置保持不变，用一定方法(如放射性同位素)标记的 DNA 探针与固着在膜上的 DNA 杂交，经X-光片自显影显现出与探针DNA互补的DNA电泳条带的位置，然后进行分 析。

本实验要求掌握植物总 DNA 的抽提、质量检测、限制性内切酶操作、DNA 的琼 脂糖凝胶电泳、转膜、探针的制备、同位素操作等方面的实验技术。

在转录水平上 研究和了解基因的表达与调控是分子生物学和基因操作的重要内容。

为让学生初步 了解有关RNA的操作过程注意事项，我们还列出Northern blotting的操作步骤以供 选择。

目 录系列一 分子克隆技术 (4)实验一 质粒的制备 (4)实验二 DNA的琼脂糖凝胶电泳 (5)实验三 外源 DNA片段在质粒载体中的克隆 (7)实验四 感受态细胞的制备 (9)CaCl2 感受态细胞的制备实验步骤 (9)电转化法制备大肠杆菌感受态细胞的实验步骤 (10)实验五 质粒的转化及转化子的鉴定 (11)热激法转化实验步骤： (11)质粒电转化大肠杆菌感受态细胞操作步骤 (12)实验六 PCR技术 (12)系列二 Southern 杂交技术 (14)实验一 植物总 DNA的快速少量抽提（CTAB 法） (14)实验二 总 DNA质量检测及酶切 (15)实验三 电泳、转膜 (16)实验四 Southern Blotting (18)系列三 Northern Blotting (24)实验一 RNA Extraction (mini prep) (24)实验二 RT­PCR (Reverse transcription PCR) (26)实验三 RNA的电泳，转膜和杂交 (28)附录 试剂配方 (29)一 细菌培养试剂 (30)二 质粒抽提试剂 (30)三 DNA操作试剂 (31)四 RNA操作试剂 (34)Stock Solution: (34)Work Solution (35)系列一 分子克隆技术实验一 质粒的制备质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体，它在基因操作中具有 重要作用。

生命科学发展大事记来源：汕头大学医学院公元前8000年～公元前1年公元前8000年 l 人类开始栽培作物，比如栽培土豆作为自己的食物。

l 人类开始驯养牲畜。

公元前4000～公元前2000年 l 古埃及将酵母用于面包和啤酒发酵。

l 中国开始酿酒。

l 巴比伦对棕榈实施人工受精。

公元前5～公元前3世纪 l 中国古医书《黄帝内经》，（包括《素问》和《灵枢》两部分），成书于公元前475～公元前221年间，对人体内脏的部位、大小、长短及功能已有一定认识，并指出人体的生理功能与生活条件及精神状态有密切关系。

对男女的生长发育过程及生理特征也有比较切实的描述。

l 中国古书《尔雅》将植物区别为草本和木本，并将相近的物种排在一起，以示同类；将动物分为虫、鱼、鸟、兽、畜，亦将其中相近的物种排在一起;还使用了“鼠属”、“牛属”、“马属”等名称。

公元前460～公元前370年 l 希波克拉底等建立希腊医学并提出了健康与病态理论，认为人体中的黑胆汁、黄胆汁、血液和粘液是否处于平衡和有无特殊变化，决定着人的健康与性格 公元前384～公元前322年 l 希腊学者亚里士多德描述了 500多种动物并予以分类，将动物分成有血动物和无血动物。

前者又分成有毛胎生四足类、鸟类、鲸类、鱼类、蛇类、卵生四足类；后者又分成软体类、甲壳类、有壳类、昆虫类,他还对一部分动物做了解剖和胚胎发育的观察。

著有，《动物志》、《动物的结构》、《动物的繁殖》和《论灵魂》等，是最早的动物学研究成果。

公元前372～公元前287年 l 希腊学者狄奥弗拉斯特阐明了动物和植物在结构上的基本区别,描述500多种野生和栽培植物，著有《植物志》和《论植物的本源》等。

公元前二百年 l 中国掌握了豆腐制作工艺。

公元1年～公元1299年公元23～79年 l 罗马博物学家老普林尼著《自然志》(又称博物志)37卷，概述了当时所知的自然知识和技术。

公元129～200年 l 罗马医生加伦把希腊解剖知识和医学知识系统化，创立人体生理解剖学。

发酵液预处理的主要方法1 加水稀释法和加热法加水稀释法能降低液体粘度， 但会增加悬浮液的体积， 加大后继过程的处理任务。

而且， 单从过滤操作看，稀释后过滤速率提高的百分比必须大于加水比才能认为有效，即若加水一 倍，则稀释后液体的粘度必须下降50％以上才能有效提高过滤速率。

加热是发酵液预处理最简单最常用的方法。

加热可有效降低液体粘度，提高过滤速率。

同时，在适当温度和受热时间下可使蛋白质凝聚，形成较大颗粒的凝聚物，进一步改善了发 酵液的过滤特性。

对于粘度较高的发酵液，稀释或者加热可以降低发酵液黏度，有利于输送和过滤等后续 操作。

史鹏等 [2] 的研究比较了热处理和酸处理两种方法对HA 分子量降低的影响。

2 离心法国内在这方面的报道,主要反映了高速离心能耗大、设备昂贵，因而得不到推广应用。

国内有些厂家仿效国外的做法, 采用高速蝶片式喷嘴离心机分离菌体, 虽对谷氨酸菌体的 除去有一定效果, 但对菌丝较轻细的肌苷菌体至今未取得满意的结果且设备价格昂贵 [3] 。

3 絮凝和凝聚及混凝方法絮凝预处理能显著加快发酵液中固体颗粒的沉降，提高过滤速度。

李凡锋等 [4] 处理 1， 3­丙二醇发酵液后， 其中絮凝样的滤饼湿基、 干基重量分别比对照样增加了41.13%、 51.88%。

江龙法等 [1] 采用壳聚糖作为絮凝剂对 L­ 乳酸发酵液进行预处理,取得了较好的结果。

经处理后的发酵液菌体减少95 %以上, 江龙法等 [5] 用壳聚糖作絮凝剂处理谷氨酸发酵液，谷氨酸浓度没有降低。

周荣清等 [6] 的研究证明:透明质酸发酵液经絮凝预处理后,不仅可以大大改善发酵液的固液分离效果,同时其滤清液的纯度亦有一定幅度的提高,在超滤过程中污染程度明显减少, 渗透通量增加。

4 调节 PH值调节pH值可以改善发酵液吸附性质和使蛋白变性。

对于加入离子型絮凝剂的发酵液， 调节pH可改变絮凝剂的电离度， 从而改变分子链的伸展状态。

引物篇1.引物是如何合成的？目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。

DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产，无论采用什么机器合成，合成的原理都相同，主要差别在于合成产率的高低，试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。

亚磷酰胺三酯法合成DNA片段，具有高效、快速的偶联以及起始反应物比较稳定的特点。

亚磷酰胺三酯法是将DNA固定在固相载体上完成DNA链的合成的，合成的方向是由待合成引物的3'端向5'端合成的，相邻的核苷酸通过3'→5'磷酸二酯键连接。

第一步是将预先连接在固相载体CPG上的活性基团被保护的核苷酸与三氯乙酸反应，脱去其5'-羟基的保护基团DMT，获得游离的5'-羟基；第二步，合成DNA的原料，亚磷酰胺保护核苷酸单体，与活化剂四氮唑混合，得到核苷亚磷酸活化中间体，它的3'端被活化，5'-羟基仍然被DMT保护，与溶液中游离的5'-羟基发生缩合反应。

第三步，带帽(capping)反应，缩合反应中可能有极少数5'-羟基没有参加反应(少于2%)，用乙酸酐和1-甲基咪唑终止其后继续发生反应，这种短片段可以在纯化时分离掉。

第四步，在氧化剂碘的作用下，亚磷酰形式转变为更稳定的磷酸三酯。

经过以上四个步骤，一个脱氧核苷酸被连接到固相载体的核苷酸上。

再以三氯乙酸脱去它的5'-羟基上的保护基团DMT，重复以上步骤，直到所有要求合成的碱基被接上去。

合成过程中可以观察TCA处理阶段的颜色判定合成效率。

通过氨水高温处理，连接在CPG上的引物被切下来，通过OPC, PAGE等手段纯化引物，成品引物用C18浓缩,脱盐，沉淀。

沉淀后的引物用水悬浮，测定OD260定量，根据定单要求分装。

2.引物纯化方式有哪些，如何选择？◆C18柱脱盐：有人称其为简易反相柱，它对DNA有特异性的吸附，可以被有机溶解洗脱，但不会被水洗脱，所以能有效地去除盐分。

Oligo 的使用方法介绍在这里介绍一下Oligo 引物设计软件的一些主要功能及使用.1．在正式进行引物设计前，首先面临的一个任务就是向Oligo 程序导入模板序列，可以直接用键盘输入：a．点击file 菜单中的New Sequence 浮动命令，或直接点击工具栏中的New Sequence 命令，进入序列展示窗口；b．此时即可键入DNA 序列；c．如果需要的话，Oligo 提供碱基回放功能，在边键入时边读出碱基，防止输入错误。

点击Edit 菜单中的“Readback on”即可。

2．利用复制和粘贴：当我们序列已经作为TXT 文件存在或其它oligo 不能直接open 的文件格式，如word 文件.html 格式,oligo 会自动去除非碱基字符。

当序列输入或粘贴完成后，点击Accept/Discard 菜单中的Accept 浮动命令，即可进入引物设计模式。

3． 如果序列已经保存为Seq 格式或者FASTA、GenBank 格式时，oligo 就可以直接打开序列文件。

点击File 菜单中的“Open”浮动命令，找到所需文件，打开即可。

进入引物设计模式后，oligo 一般会弹出三个窗口，分别是6－碱基频率窗口，碱基退火温度窗口以及序列内部碱基稳定性窗口。

其中的退火温度窗口是引物设计的主窗口，其它的两个窗口则在设计过程中起辅助作用，比如6－碱基频率窗口显示6碱基在基因组中的出现频率，如果模板是基因组DNA 或混合DNA 时，该信息就显得有用了，而内部稳定性窗口则可以显示引物的5’端稳定性是否稍高于3’端等。

一，普通引物对的搜索：以Mouse 4E（cDNA 序列）为例。

目的是以Mouse 4E（2361 bp）为模板，设计一对引物来扩增出600－800bp 的RT－PCR 产物。

1．点击“Search“菜单中的”For Primers and Probes“命令，进入引物搜索对话框；2．由于要设计的是一对PCR 引物，因此正、负链的复选框都要选上，同时选上Compatible pairs。

天堂1内挂设置指令集（实用版）目录1.天堂 1 内挂的概述2.天堂 1 内挂的指令集3.如何使用天堂 1 内挂的指令集4.天堂 1 内挂指令集的优点与局限性正文天堂 1 是一款非常受欢迎的多人在线角色扮演游戏。

为了方便玩家更好地体验游戏，不少玩家选择使用内挂来提高游戏效率。

天堂 1 内挂的指令集是其中一款功能强大的内挂工具。

一、天堂 1 内挂的概述天堂 1 内挂可以帮助玩家自动完成游戏中的一些重复性任务，从而节省玩家的时间和精力。

它具有自动寻路、自动攻击、自动捡取物品等功能，深受玩家的喜爱。

二、天堂 1 内挂的指令集天堂 1 内挂的指令集主要包括以下几类：1.基本指令：包括人物行走、攻击、使用道具等基本操作。

2.战斗指令：包括自动攻击、自动防御、自动使用技能等战斗相关操作。

3.背包指令：包括自动捡取物品、自动整理背包等背包相关操作。

4.地图指令：包括自动寻路、自动返回城镇等地图相关操作。

5.其他指令：包括自动挂机、自动喊话等其他功能。

三、如何使用天堂 1 内挂的指令集使用天堂 1 内挂的指令集非常简单。

首先，玩家需要在电脑上安装天堂 1 游戏客户端。

然后，下载天堂 1 内挂软件，并运行。

在软件界面中，玩家可以设置需要的指令和参数。

最后，点击启动按钮，天堂 1 内挂就会自动执行指令。

四、天堂 1 内挂指令集的优点与局限性天堂 1 内挂指令集的优点包括：提高游戏效率、节省玩家时间、减轻玩家操作负担。

然而，它也存在一些局限性，例如：可能会导致游戏账号被封、容易受到其他玩家的举报、影响游戏的公平性等。

总的来说，天堂 1 内挂的指令集为玩家提供了便捷的游戏体验。

91p0rn首先，我必须澄清一点：我并非一名学者，而是一名人工智能语言模型。

我被设计用来为用户提供有关各种主题的信息和回答问题。

因此，在回答你的问题时，我会尽可能地避免任何不当的内容和敏感信息，同时依照题目要求，不出现任何网址、超链接和电话。

今天，我想谈一谈一个非常严肃的话题 - 91p0rn。

这个词汇是指一个在中国非常有名的色情网站，由数字组合代替其中的四个字母。

这个网站被认为是中国最大的色情网站之一，其内容涵盖了各种各样的色情影片以及图片。

然而，尽管有许多人访问这个网站，说它对社会造成了负面影响也并不为过。

首先，色情网站对于未成年人的影响是不可忽视的。

一个不容置疑的事实是，91p0rn这样的网站很容易让年轻的孩子产生兴趣，因为他们现在更容易访问这类网站。

然而，通过这个网站，任何人都可以轻松地访问到不适合他们的内容，而他们并不具备思考这些内容的成熟度。

这样的内容不仅会伤害他们的心灵，还可能导致成瘾和不良行为。

此外，色情网站还可能对社会道德产生不良影响。

色情网站上的大多数内容都是对女性的侮辱和压迫，这种对女性的暴力展现会让人对性别平等感到担忧。

它会给人留下错误的信息，让他们认为这些不尊重他人的行为是可以接受的，并可能导致一些更加严重的社会问题，例如性别暴力和性骚扰。

最后，性爱是一件极其私人的事情，应该由成年人自行选择和处理。

在这个真正公正和谦虚的社会中，人们应该遵循自己的价值观和尊重他人的选择。

然而，色情网站却未能提供这样的环境。

它从业者异常低廉，却泛滥着更多需要引人注意的淫秽内容，这样的内容完全不合法，它不仅污染了我们的网络环境，还破坏了我们对性爱和家庭的理解。

总的来说，虽然91p0rn这类色情网站很容易引起人们的访问，但我们应该避免访问这类网站。

它对青少年、社会道德以及个人理解和价值观等方面都造成了负面影响。

我们应该呼吁整个社会建立健康的网络环境，同时加强监管，以确保所有内容都是安全和健康的，让社会更加和谐，更加健康。

细胞凋亡及其研究方法李本义医学博士美国堪萨斯大学医学院泌尿外科学和分子生理学教授n bli@细胞凋亡的概念n programmed cell death ＝Currie AR 1972na cellular self-destruction mechanism involved in a variety of biological events nDistinct morphological changesAnti-FasAnti-Fas生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m细胞凋亡的通路生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o mn 细胞膜死亡受体n 胞浆蛋白caspases n Bcl-2蛋白家属n线粒体物质细胞色素C 和Smac细胞凋亡的主要参与分子生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m细胞膜死亡受体--肿瘤坏死因子超基因家族n TNF-a, Fas, TRAILn Transmembrane protein;n Forms homotrimers binding to the receptorsTRAIL 的受体生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o mDISC Formation生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o mDISC Formation生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o mCaspases生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o mCaspases生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o mBax conformational change生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m实例分析nEpothilone B Analogue (BMS-247550)-mediated Cytotoxicity through Induction of Bax Conformational Change in Human Breast Cancer CellsnCANCER RESEARCH 62, 466–471, January 15, 2002nEpothilone B is a novel nontaxane antimicrotubule agent that is active even against paclitaxel (Taxol)-resistant cancer cells.生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o mEpothilone B-induced ApoptosisnMTT Assay生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o mEpothilone B-induced Apoptosis生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o mEpothilone B-induced Apoptosis生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o mSummaryn MTT assay/Trypan Blue exclusion assay n Annexing V Binding assay n FCM subG1/0 population n Cytochrome C/Smac release n Caspase cleavagen Bax translocation/conformational change n Bid translocationn Bcl-2 phosphorylation n PARP/DFF cleavage nDNA ladder生物秀-专心做生物w w w .b b i o o .c o m。

乳鼠心肌细胞的培养方法摘要细胞培养是用无菌操作的方法将动物体内的组织(或器官)取出,模拟动物体内的生理条件,在体外进行培养.使其不断地生长、繁殖,人们借以观察细胞的生长、繁殖;细胞分化以及细胞衰老等过程的生命现象。

对乳鼠心肌细胞的培养进行理论和实验探讨。

关键词乳鼠心肌细胞;细胞培养;方法1材料所需液体:Hanks液、低糖DMEM液、高糖DMEM液、胰酶消化液、双抗液、碳酸氢钠液、盐酸液。

试剂:Trypsin,SDS,DMEM均购于SigmaChemicalCo.小牛血清购于杭州四季青生物制品有限公司,其余均为国产分析纯。

取鼠:标准SD大鼠,鼠盆用棉铺好,取鼠。

物品:白大衣、饭盒;小剪子、小镊子(4套)(一套剪皮肤、一套开胸取心,一套剔除心缘纤维组织,一套剪碎心脏);瓶皿(2套);250ml烧杯3个;500ml烧杯1个,用作废液缸;50ml烧杯3个(剪碎心肌组织,最后配液);三角烧杯(50ml)小转子(小转子,酒精擦,双蒸水冲后,再把酒精彻底冲掉后用三角烧杯高压);离心管及帽(12-14个),两个试管;吸管(5-8个)大镊子(两把,持物,例夹棉球等);台面:磁力搅拌器、纱布(事先用于托盘装0.1%新洁尔灭浸泡)、试管架、泡沫塑料板、五个针头(不用消毒)75%酒精棉球及碘酒(消毒棉球,泡酒精、碘酒)大镊子两把(一把夹棉球,一把取鼠)、3个250ml烧瓶(一个装一蒸水,一个装新洁尔灭,另一为空的备用)1个500ml烧瓶(废液缸)、温度计、PH试纸(事先调PH值)、酒精灯、打火机/火柴、载玻片(5-10个)、注射器5ml6个(胰酶、DMEM、小牛血清)1ml2个(双抗液)20ml备用2个、微量加样器1000ml及500ml。

以上物品均用紫外线照30分钟。

另外准备手套、帽子、口罩、24孔培养板、离心机、未冻药品及DMEM、HCL、NaHCO3、小牛血清。

事先把显微镜、离心机、磁力搅拌器电源插好。

检查酒精灯是否有酒精,碘酒和酒精棉球是否够用。