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硒酵母中硒含量测定方法的研究作者：王建荣马传芳来源：《科学与财富》2019年第08期摘 ;要：在进行硒酵母中硒含量测定方法研究的过程中，常用的测定方法主要有有机硒、总硒、无机硒等测定方法，在进行研究的过程中，相关人员要建立有机硒和无机硒的测定的方法，并且还要将有机硒和无机硒分离处理，采用透析的方法对其进行处理，对五种晒酵母采用不同的培养条件对其进行培养，才能为添加剂领域和医药领域的发展提供科学、合理的数据。
关键词：酵母;有机硒;无机硒1 试验部分1.1 主要仪器与试剂Backman公司DU一7分光光度计1、2、3、4、5为5种不同含硒量的硒酵母在培养基中添加不同量的亚硒酸钠，接种酵母菌，在3O℃下培养48h而得。
变色酸：0.03tool·L-1，称取变色酸1.0930g，定容至100ml。
盐酸苯肼：0.03mol·L-1。
称取0.4400g盐酸苯肼，定容至100ml。
EDTA：0.02tool·L-1，称取EDTA钠盐0.7450g定容至100m|。
氯酸钾：0.6mol·L-1，称取7.3500g氯酸钾。
1#、2#、3#、4#、5#为5种不同含硒量的硒酵母：在培养基中添加不同量的亚硒酸钠.接种酵母菌.在30°C下培养48h而得。
变色酸：0.03mol·L-1，称取变色酸1.0930g.定容至100ml。
盐酸苯肼：0.03mol·L-1，称取0.4400g盐酸苯肼，定容至100ml。
EDTA：0.02mol·L-1，称取EDTA钠盐0.7450g定容至100ml。
氯酸钾：0.6mol·L-1，称取7.3500g氯酸钾、定容至100ml。
HCI-KC1缓冲液：0.2tool·L，取浓盐酸2.50ml稀释至150ml;再取氯化钾2.2500g，定容至150ml，两者混匀。
亚硒酸标液：称取亚硒酸0.08167g，定容至500ml，然后再稀释500倍混合酸：浓硝酸400ml与高氯酸100ml，混匀。
第45卷第21期2017年11月广州化工Guangzhou Chemical IndustryVol.45No.21Nov.2017富硒酵母中有机硒含量测量方法的探究+周琼，赵松(安康学院化学化工学院，陕西安康725000)摘要：本研究选用透析袋透析法分离富硒酵母中的有机硒和无机硒，用氢化物原子荧光光谱法测定有机硒的条件，选用 100 D分子量的透析袋进行透析，比较不同温度，水流速率下，透析袋对富硒酵母中有机硒和无机硒的分离效果，筛选出最佳分 离条件，该方法检测了不同富硒酵母中的总硒含量，含量为1.40~3.20mg/g;其中有机硒含量为1.30~2.97mg/g，加标回收率 结果为 77. 3%c ~86. 6%〇。
关键词：透析袋；富硒酵母；有机硒；无机硒中图分类号：TQ914. 1文献标志码：B文章编号：1001-9677(2017)21-0121-03 Study on Measurement Method of Selenium Content in Selenium Enriched YeastZHOU Qiong, ZHAO Song(School of Chemistry and Chemical Engineering, Ankang University, Shaanxi Ankang 725000, China)A b s t r a c t：Organic and inorganic selenium in yeast were separated using dialysis bag-dialysis method, the condition of organic selenium was determined by hydride generation atomic fluorescence spectrometry. Dialysis with 100 D molecular weight dialysis bag, the separation effect of dialysis bags on organic and inorganic selenium in yeast at different temperatures and flow rates was compared, and the best separation conditions were selected. The content of total selenium in different selenium enriched yeast was detected. The content ranged from 1.40 ~ 3. 20 mg/g. The organic selenium content ranged from 1. 30 ~2. 97 m g/g, and the recovery rate was 77. 3% ~86. 6%.K e y w o r d s: dialysis bag; selenium enriched yeast; organic selenium；inorganic selenium硒是人体和动物体内必需的微量元素，有多种重要的生物 学功能[1]。
硒的形态分析方法概述及其在生物有效性研究中的应用摘要：硒的形态研究是了解环境中硒的毒性、生物可利用性、迁移和生物地球化学循环等方面的基础。
本文总结了环境样品中硒形态的研究方法，及其形态分析在生物有效性研究中的应用。
关键词：硒；形态分析；方法；生物有效性；应用1前言硒位于第六主族, 是一种准金属元素。
地壳中硒的丰度仅为0.05-0.09 µg/g, 但由于人为因素与自然因素的影响使硒在自然界中分布日益广泛, 一般大气、水、土壤中硒水平为µg/g-ng/g级。
一定条件下, 各种形态的硒类化合物可相互转化。
有报道以葡萄糖作为外加碳源, 研究天然水体中亚硒酸钠通过微生物反应转化为单质硒和挥发态硒(如二甲基硒、二甲基二硒) 的实验。
1957年，Schwar首先证明硒作为谷胱甘肽过氧化物酶的活性中心, 是人体必需的微量元素。
近年来, 适量的硒摄入水平与癌症、心血管病、糖尿病、白内障、老年痴呆症等各种疾病的密切相关性日益引起人们的重视。
我们在贫硒地区通过口服亚硒酸钠来治疗预防克山病、大骨节病。
硒作为多种重金属元素(如Cd、Hg等)的天然解毒剂、可拮抗环境中多种有害物质的毒性。
硒化合物的生理、生物活性，及其在环境中的迁移转化规律，同硒存在的化学形态及不同化学形态下硒的浓度水平直接相关。
硒分析方法在研究生命科学、环境科学、材料科学等领域均具重要意义。
1 环境中硒的存在形式硒存在形式的早期研究主要集中于矿床学、矿物学和环境地球化学。
朱建明等[1]于2003年对已发现的107种硒矿物进行了总结和归类，概述了表生环境中硒的存在形式。
环境中硒主要以无机和有机硒形式存在(表1)[2-4,5]，不同硒形态间会因pH、Eh和生物作用(如甲基化)等因素的影响而发生转变，其中pH-Eh是主要的影响因素。
图1给出了常温常压下不同形态硒稳定存在的pH-Eh范围。
表一环境中主要的硒化合物[2,5]Table 1 The major selenium compounds in the environment硒化合物化学式存在条件无机硒硒化氢(-Ⅱa) H2Se b气体，不稳定，水中易分解成Se0硒氢化物(-Ⅱ) Se2-还原环境，金属硒化物，土壤中元素硒(0) Se0还原环境稳定存在，水中不溶解亚硒酸盐(Ⅳ) SeO32-弱氧化条件，易溶解，如土壤或大气颗粒偏亚硒酸盐(Ⅳ) HSeO32-酸性或中性条件，易还原，如土壤中二氧化硒(Ⅳ) SeO2化石燃料燃烧放出的气体，易溶于水硒酸盐(Ⅵ) SeO42-弱氧化条件，易还原，易为植物利用硒酸根(Ⅵ) SeO42-，HSeO4-一般土壤环境有机硒二甲基硒化物(DMSe) (CH3)2Se b土壤中微生物、细菌形成的挥发组分二甲基二硒化物(DMDSe) (CH3)2Se2b植物形成的挥发组分二甲基硒砜(CH3)2SeO2b DMSe的前期还原挥发产物，由代谢形成三甲基硒(CH3)3Se+动物代谢产物，以尿形式排放注：a表示无机硒化合物中硒的价态；b表示该硒化合物具有挥发性。
![富硒酵母的营养价值研究[文献综述]](https://img.taocdn.com/s1/m/1b236704d5bbfd0a785673a8.png)
文献综述生物工程富硒酵母的营养价值研究摘要富硒酵母作为有机硒饲料添加剂, 具有硒利用率高、毒性低、对环境污染小等优点, 其添加效果优于亚硒酸钠。
就目前国内外对富硒酵母在动物营养中的研究进展及在动物饲料中的应用现状进行了综述。
关键词富硒酵母; 有机硒; 动物 ;营养前言在世界很多国家和地区( 包括美国和欧盟) 都已允许富硒酵母作为矿物质饲料添加剂用于动物饲料中, 我国也将富硒酵母与亚硒酸钠共同列为允许使用的饲料添加剂。
尽管亚硒酸钠仍然是目前动物日粮中主要的补硒形式, 但由于亚硒酸钠存在生物有效性低、毒性大、易污染环境等缺陷, 因而其使用量受到严格限制, 例如瑞典已限制其在乳猪料中使用, 而日本则禁止在动物饲料中添加亚硒酸钠。
富硒酵母作为有机硒饲料添加剂, 具有硒利用率高、毒性低、对环境污染小等优点, 其添加效果大大优于亚硒酸钠, 因而受到广泛的重视, 并呈现逐渐取代亚硒酸钠在饲料中添加的趋势。
1 从亚硒酸钠到富硒酵母的过渡进程1817 年, 瑞典化学家Berzelius 发现元素硒( Se) 。
但此后100 多年, 人们一直将硒作为有毒元素来研究。
直至1957年,Schwarz 与Foltz 发现, Se 是从酵母分离的一个活性因子(“活性因子3”) 的不可或缺的成分, 能防治大鼠的肝坏死,从而认识到Se 是动物健康的必需元素, 这是首次揭示Se的营养重要性。
当时, 对“活性因子3”的具体成分还不能鉴别。
现已知道,“活性因子3”主要是由酵母中存在的主要含硒化合物———硒蛋氨酸( SeMet)组成的( Schrauzer, 2003)。
1962 年, 75SeMet 可获得, 并被用作胰腺放射成像剂( Blau等, 1962) 。
1972 年, Rotruck 证实, 硒是谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)的一种重要组成成分, 从而揭开了硒具有抗氧化功能之谜。
1973 年, 世界卫生组织确认, 硒是人和动物活动必需的微量元素。
生物体中微量元素硒的检测方法研究进展作者：何家红， 张铮， HE Jia-hong， ZHANG Zheng作者单位：淮北煤炭师范学院生命科学学院,安徽,淮北,235000刊名：淮北煤炭师范学院学报（自然科学版）英文刊名：JOURNAL OF HUAIBEI COAL INDUSTRY TEACHERS COLLEGE(NATURAL SCIENCE)年，卷(期)：2009,30(2)1.ERZSEBET P;ZOLTAN M;PETER F Determination of selenoamino acids by high-performance liquid chomatography-hydranlia high pressure nebulization -a tomic fluorescence spectrometry[外文期刊] 1999(06)2.FELDMANN I;JAKUBOWSKI N;THOMAS C Application of a hexapole collision and reaction cell in ICP-MS Part Ⅱ:Analytical figures of merit and first applications 1999(05)3.LU G H;LIU J H;HANG Y P Polarographic determination of selenium in tea leaves using a dropping mercury electrode[外文期刊] 1996(02)4.RIANSARES M O;DONARD O F X;CaMARA C Analytical techniques applied to the speciation of selenium in environmental matrices 1994(03)5.BERMEJO B P;LORENZO M J;BERMEJO B A Selenium determination in mother and child's hair by electrothermal atomic absorption spectrometry 2000(1-3)6.孙沂;马文昭;李好枝测定血浆中微量硒的三元包合物荧光分析法[期刊论文]-分析测试学报 2001(02)7.胡益水;苏文周一阶导数荧光法测定茶叶的硒 1996(03)8.KARIN J;LUO X G;AKE Olin Rapid one-step derivatization of Se(Ⅵ) to a piazselenol for the spectrofluorimetric determination of selenium in biological material 1995(12)9.郑文杰;欧阳政植物有机硒的化学及其医学应用 200110.徐辉碧;黄开勋硒的化学、生物化学及其在生命科学中的应用 199411.谢华林微波消解电感耦合等离子体发射光谱法同时测定水产品中铅镉铬汞砷硒有害元素的研究[期刊论文]-食品科学 2002(02)12.盛华栋电感耦合等离子体原子发射光谱法测定8种蔬菜中微量元素[期刊论文]-理化检验-化学分册 2008(01)13.李宝林;张培梧;周宝石硝酸铜稳定消化-超声络合萃取测定硒[期刊论文]-分析试验室 1997(02)14.JULIAN T F;NILS S G;CHRISTOPHER H P Determination of Se in urine by flow injection hydride generation electrothermal atomic absorpfon spectrometry with in-atomizer trapping 1995(12)15.LI F S;WALTER C;KURT I J Determination of selenium compounds by HPLC With ICP-MS or FAAS as selenium-specific detector 1999(03)16.邓桂春;侯松嵋;铁梅富硒蛹虫草试样中硒的形态分析[期刊论文]-分析科学学报 2006(01)17.韦昌金;刘霁欣;裴晓华离子交换色谱-氢化物发生双道原子荧光法同时测定砷和硒形态[期刊论文]-分析化学2008(08)18.农恶琦;蔡瑞仁;欧阳政硒半胱氨酸和硒胱氨酸的间接气相色谱法测定-溴化氰-气相色谱法[期刊论文]-色谱1994(01)19.郝索娥;滕冰硒酵母中有机硒及硒代氨基酸含量的测定方法[期刊论文]-分析测试学报 1999(03)21.吴永尧;罗泽民;陈建英水稻硒蛋白及其硒结合形态研究[期刊论文]-华中师范大学学报(自然科学版) 2000(02)22.MARIAN C Determination of selenium in biological materials by neutron activation analysis[外文期刊] 1996(08)23.YURIY K;VALENTINA K;ALEXANDER C Analysis of trace elements in scalp hair of healthypeople,hyperplasia and breast cancer patients with XRF method 2000(1-2)24.刘树文;严方X射线荧光分析法测定生物样品中的硒 1998(02)25.李方实;陈金良螺旋藻中痕量硒的示波极谱测定[期刊论文]-南京化工大学学报（自然科学版） 2000(03)26.RECAI I;GuLER E;GuLER S Differential pulse polarographic determination of selenium(Ⅳ) in whole blood using the catalytic hydrogen wave[外文期刊] 2000(04)27.ROSA S;ROSER R;LYDIA G-B Selenium determination in urine with atomic fluorescence detection[外文期刊] 2001(02)28.ADELOJU S B;JAGNER D;RENMAN L Cathodic stripping petentionsetric determination of selenium in biological and environmental materials on a combined electrode with a rotating sample platform1997(03)29.RECAI I;GuLER S A direct method for the determination of selenium and lead in cow' s milk by differential pulse stripping vohammetry[外文期刊] 2000(03)30.贾奎寿催化光度法测定微量硒消除干扰离子的研究[期刊论文]-光谱实验室 2002(04)31.李玉环;王锋催化动力学光度法测定植物中的痕量硒(Ⅳ)[期刊论文]-微量元素与健康研究 2002(02)32.赖海涛;白月采用次甲基兰催化动力学光度法测定食品中的痕量硒(Ⅳ)[期刊论文]-食品与发酵工业 2006(02)33.刘有芹;伦韦峰茶叶中硒含量测定[期刊论文]-微量元素与健康研究 2008(03)34.于朝云;丁良应用等色染料离子对的褪色反应测定中草药中硒(Ⅳ)的含量[期刊论文]-中国医药导报 2008(04)35.高静娴硒-硫氰酸盐-罗丹明B体系微孔滤膜富集分光光度法测定痕量硒 1997(08)36.贺萍;许卉;李静双硫腙-四氯化碳萃取分光光度法测定海产品中痕量硒[期刊论文]-分析化学 2000(11)37.于朝云;丁良;杨慧分光光度法测定中草药中硒(Ⅳ)的含量[期刊论文]-时珍国医国药 2008(08)38.邓斌紫外分光光度法测定石榴皮中微量元素硒[期刊论文]-微量元素与健康研究 2008(01)39.高甲友吖啶红荧光猝灭法测定痕量硒[期刊论文]-理化检验-化学分册 2003(08)40.栗晹;刘世熙;曹槐微波消解、流动注射-氢化物发生原子荧光光谱法测定三七中硒含量[期刊论文]-光谱实验室 2002(02)41.李四生;董晓根;李家涛甲苯萃取-微波消解-原子荧光光谱法测定富硒保健品中有机硒和总硒[期刊论文]-中国卫生检验杂志 2008(01)42.BURGUERA J L;CARRERO P;BURGUERA M Flow injection for the determination of Se(IV) and Se(VI) by hydride generation atomic absorption spectrometry with microwave oven on-line prereduction of Se(Ⅵ) to Se(Ⅳ) *1 1996(14)43.MENA M L;GóMEZ M M;Palacios M A Fast on-line selenium determination in enriched yeast slurry by microwave digestion-hydride generation-atomic absorption spectroscopy 1999(02)44.刘蕙麒氢化物发生原子吸收分光光度法测定发硒含量[期刊论文]-环境与健康杂志 2001(02)45.LI M;NI Z MING;RAO Z Determination of selenium in biological tissue samples rich in phosphorusacid as a mixed chemical modifier 1998(10)46.董银桥;沈惠君石墨炉原子吸收光谱法测定奶牛血清中硒[期刊论文]-光谱学与光谱分析 2002(04)47.RENATO Z A;FERNANDO B J R;SAMUEL S S Direct determination of selenium in whole blood by electrothermal atomic absorption spectrometry using W-Rh-coated platform and co-injection of Rh as thermal stabilizer 2002(02)48.DING W W;STURGEON R E Minimization of transition metal interferences with hydride generation techniques[外文期刊] 1997(03)49.金同顺;贝源;陈逸君氢化物发生电感耦合等离子体原子发射光谱法同时测定水和生物样品中砷、铋、锑和硒1996(03)50.范哲锋;冀向利;解惠敏微波消解氢化物发生ICP-AES法测定川山紫中痕量硒[期刊论文]-理化检验-化学分册2001(11)51.陈建华;冯莉;崔海容阳离子交换树脂分离-ICP光谱法测定茶叶中微量硒 2000(03)本文链接：/Periodical_hbmsyxb200902009.aspx。
甲苯萃取-微波消解-原子荧光光谱法测定富硒保健品中有机硒和总硒李四生1董晓根2李家涛1周勤文1李建伟1(1.合肥市疾病预防控制中心,合肥230022;2.北京市丰台区疾病预防控制中心,北京100071)摘要目的:成立分离、消解、测定富硒保健品中有机硒和总硒的分析方式。
方式:采用甲苯萃取分离样品中的有机硒后,利用HNO3-H2O2消解体系微波消解,原子荧光光谱法测定样品中的有机硒和总硒。
结果:在优化工作条件下,硒的检出限为μg/L,相对标准误差为% ~%,线性范围为0~200μg/L,应用该方式检测不同富硒保健品中的总硒含量为~ mg/kg,有机硒含量为~ mg/kg,总硒加标回收率为% ~%。
结论:该方式简便、灵敏、重现性好、干扰少,适合富硒保健品中的有机硒和总硒测定。
关键词甲苯萃取;微波消解;原子荧光光谱法;富硒保健品;有机硒;总硒Determination of organic and total selenium contents in selenium-enriched health food by methylbenzene extraction-microwave-assisted digestion-atomic fluorescencespectrometryLiSi-sheng1, DongXiao-gen2, LiJia-tao1, Zhou Qin-wen1, LiJian-wei1(1·HefeiCentre for Disease Control and Prevention, Hefei230022,China;2·FengtaiCentre for Disease Control and Prevention, Beijing 100071, China)Abstract Objective: To develop a method for the separation, digestion and determination of organic and total selenium in selenium-enriched health food·Methods: The organic selenium extracted and separated from selenium-enriched health food was digested by a mixture of concentrated nitric acid and hydrogen peroxide(HNO3-H2O2) in the sealed vessel·Then the organic selenium was subjected to the analysis by atomic fluorescence spectrometry(AFS)·Except the methylbenzene extraction, total selenium was digested and measured as same as organic selenium·Results: Under the optimal work condition, the detection limit of selenium by this method was μg/L, the linear range 0~200μg-3C18.2MM去离子水,所用玻璃器皿均经硝酸(1+9)浸泡留宿处置,所用酸为优级纯,其他试剂为分析纯。
![一种硒蛋白中硒代氨基酸的测定方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s1/m/60185bf4ab00b52acfc789eb172ded630a1c985a.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201911133352.3(22)申请日 2019.11.19(71)申请人 恩施土家族苗族自治州农业科学院（恩施土家族苗族自治州硒应用技术与产品开发研究院）地址 445000 湖北省恩施土家族苗族自治州恩施市施州大道517号(72)发明人 陈永波 刘淑琴 张朝阳 胡百顺 李卫东 黄光昱 陈娥 秦邦 瞿勇 (74)专利代理机构 北京高沃律师事务所 11569代理人 吕纪涛(51)Int.Cl.G01N 30/02(2006.01)G01N 30/06(2006.01)(54)发明名称一种硒蛋白中硒代氨基酸的测定方法(57)摘要本发明提供了一种硒蛋白中硒代氨基酸的测定方法，涉及分析检测技术领域。
本发明提供的测定方法包括以下步骤：(1)将硒蛋白样品与盐酸混合，进行微波水解，得到水解液；所述硒蛋白样品的质量为10～30mg ；所述水解的温度为140～170℃，时间为10～40min；(2)调节所述水解液的pH值至6～8，得到前处理液；(3)采用高效液相色谱-氢化物发生-原子荧光光谱法对所述前处理液进行测定，得到硒代氨基酸的含量。
本发明提供的测定方法采用微波水解硒蛋白，然后通过高效液相色谱-氢化物发生-原子荧光光谱法测定硒代氨基酸，测定方法操作简便，节省时间和成本，能够快速、准确地对各类含硒蛋白中的硒代氨基酸进行测定。
权利要求书1页 说明书7页 附图3页CN 110780006 A 2020.02.11C N 110780006A1.一种硒蛋白中硒代氨基酸的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将硒蛋白样品与盐酸混合，进行微波水解，得到水解液；所述硒蛋白样品的质量为10～30mg；所述水解的温度为140～170℃，时间为10～40min；(2)调节所述水解液的pH值至6～8，得到前处理液；(3)采用高效液相色谱-氢化物发生-原子荧光光谱法对所述前处理液进行测定，得到硒代氨基酸的含量。
硒代氨基酸的保健作用
金明官
【期刊名称】《世界元素医学》
【年(卷),期】2008(015)002
【总页数】4页(P38-41)
【作者】金明官
【作者单位】北京循环化学研究所,北京100096
【正文语种】中文
【中图分类】R979.1
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硒的形态分析方法概述及其在生物有效性研究中的应用摘要：硒的形态研究是了解环境中硒的毒性、生物可利用性、迁移和生物地球化学循环等方面的基础。
本文总结了环境样品中硒形态的研究方法，及其形态分析在生物有效性研究中的应用。
关键词：硒；形态分析；方法：生物有效性；应用1前言硒位于第六主族，是一种准金属元素。
地壳中硒的丰度仅为0. 05-0. 09 Mg/g,但山于人为因素与自然因素的影响使硒在自然界中分布日益广泛，一般大气、水、土壤中硒水平为Mg/g-ng/g级o一定条件下，各种形态的硒类化合物可相互转化。
有报道以葡萄糖作为外加碳源, 研究天然水体中亚硒酸钠通过微生物反应转化为单质硒和挥发态硒（如二中基硒、二屮基二硒）的实验。
1957年，Schwar首先证明硒作为谷胱甘肽过氧化物酶的活性中心，是人体必需的微量元素。
近年来，适量的硒摄入水平与癌症、心血管病、糖尿病、白内障、老年痴呆症等各种疾病的密切相关性日益引起人们的重视。
我们在贫硒地区通过口服亚硒酸钠来治疗预防克山病、大骨节病。
硒作为多种重金属元素（如Cd、Hg等）的天然解毒剂、可拮抗环境中多种有害物质的毒性。
硒化合物的生理、生物活性，及其在环境中的迁移转化规律，同硒存在的化学形态及不同化学形态下硒的浓度水平直接相关。
硒分析方法在研究生命科学、环境科学、材料科学等领域均具重要意义。
1环境中硒的存在形式硒存在形式的早期研究主要集中于矿床学、矿物学和环境地球化学。
朱建明等皿于2003年对已发现的107种硒矿物进行了总结和归类，概述了表生环境中硒的存在形式。
环境中硒主要以无机和有机硒形式存在(表l)>t5\不同硒形态间会因pH、Eh和生物作用(如中基化)等因素的影响而发生转变，其中P H-Eh是主要的影响因素。
图1给出了常温常压下不同形态硒稳定存在的P H-Eh范用。
表一环境中主要的硒化合物”同Table 1 The major selenium compounds in the environment硒化合物化学式存在条件硒化氢(-1D H：Se b气体，不稳定，水中易分解成Se°硒氢化物(-11) Se，还原环境，金属硒化物，土壤中无元素硒(0) Se°还原环境稳定存在，水中不溶解机亚硒酸盐(【V) SeO广弱氧化条件，易溶解，如土壤或大气颗粒硒偏亚硒酸盐(【V) HSeO广酸性或中性条件，易还原，如土壤中二氧化硒(IV) SeO：化石燃料燃烧放出的气体，易溶于水硒酸盐(VI) SeO广弱氧化条件，易还原，易为植物利用硒酸根(VI) SeOHSeOr 一般土壤环境有二甲基硒化物(DMSe) (CH3)2Se h土壤中微生物、细菌形成的挥发组分机二甲基二硒化物(DMDSe) (CH3) :Se? 植物形成的挥发组分硒二中基硒砚(CH3) :SeO:b DHSe的前期还原挥发产物，山代谢形成三甲基硒(CH3)3Se+动物代谢产物，以尿形式排放注：a表示无机硒化合物中硒的价态；b表示该硒化合物具有挥发性。
第18卷第3期分析测试学报Vo l.18N o.31999年5月FENXI CESHI XUEBAO(J ou rnal of Instrum ental Analy sis)M ay1999硒酵母中有机硒及硒代氨基酸含量的测定方法郝素娥滕冰(哈尔滨工业大学应用化学系哈尔滨150001)(东北农业大学分析测试中心哈尔滨150030)摘要报道了人工培养硒酵母中有机硒及硒代胱氨酸(S eC y s)和硒代蛋氨酸(SeM et)含量的测定方法。
采用透析处理法使硒酵母中的无机硒和有机硒得以分离,并采用催化分光光度法测定了硒酵母中有机硒的含量;采用氨基酸自动分析仪测定了硒酵母中S eCy s和SeM et的含量。
关键词硒酵母,有机硒,硒代胱氨酸,硒代蛋氨酸硒是生物体必需的微量营养元素,缺硒会导致很多疾病。
人体缺硒会诱发心血管疾病和癌症;动物缺硒会导致白肌病和生长缓慢等。
目前用于防治疾病和作为饲料添加剂的主要是无机硒[1]。
有机硒与无机硒相比,具有较高的生物活性(比无机硒约高100倍)和较低的毒性[2],故人们越来越重视有机硒的补充。
硒酵母中有机硒含量较高[3],是一种比较理想的硒营养剂。
为了测定硒酵母中有机硒的含量,首先建立了一种无机硒和有机硒的鉴别方法,并且采用透析处理法使硒酵母中的无机硒和有机硒得以分离,再利用催化分光光度法,测定了硒酵母中有机硒的含量;为了确定硒酵母中有机硒的存在形式,采用氨基酸自动分析仪,测定了硒酵母中硒代胱氨酸(SeC y s)和硒代蛋氨酸(SeM et)的含量。
1实验部分1.1材料和仪器透析袋,SeM et(S3625),SeC y s(S3875)购自美国Si g ma公司。
分析仪器选用美国产的DU-7分光光度计和日立835-50氨基酸分析仪。
其他试剂均为分析纯级化学试剂。
1.2有机硒含量的测定1.2.1测定原理Se(Ô)能够催化氯酸钾氧化苯肼生成偶氮离子,继而与变色酸偶合成红色偶氮染料,生成的红色偶氮染料的吸光度与一定含量范围的硒成正比,因而可利用催化分光光度法测定Se(Ô)的量[4]。
采用透析处理使硒酵母中的无机硒和有机硒得以分离,并对透析内液进行消化测定,便可测得硒酵母中有机硒的含量。
收稿日期:1998-11-06;郝素娥,女,34岁,讲师(上接71页)Abstract A derivative gas chrom atographic m ethod for the determ ination of the content of dihydroxy2 acetone in its enz y me p roduction is described.D erivation conditions b y usin g trimeth y lchloro_silane,N, O_bis(trimeth y lsil y l)_acetamide,and m ixed a g ent of trimeth y lchloro_silane and hexam eth y l disilaz ane as derivative agent w ere discussed respectively.T he recovery and RSD of the method are98.3%~101.3% and2.02%~3.58%,respectively.Ke y words G as chromato g ra p h y,Dih y drox y acetone,Gl y cerine,Trim eth y l sil y lation第3期郝素娥等:硒酵母中有机硒及硒代氨基酸含量的测定方法73图1硒酵母的分析谱图Fig.1C hrom atog ram o f selenium y east1.S eC y s;2.SeM et表1硒酵母中有机硒、SeCy s 及S eM et 含量的测定结果Table 1D eterm inatio n results of organic selenium ,SeCy s andSeM et in seleniu m yeasts w /10-6Sam ple1#2#3#4#5#有机硒367.18478.92582.36699.16552.18S eC y s 569.34669.89858.28348.35698.28SeM et226.00261.02333.43318.40269.101.2.2透析方法将新鲜的硒酵母加入pH=8.6三羟甲基氨基甲烷-盐酸-甘油缓冲液中,加入SiO 2研磨,在电子显微镜下检查,待酵母细胞完全破碎后,装入事先处理好的透析袋内,扎紧上端,于蒸馏水中透析,其间不断换水,用无机硒和有机硒的定性鉴别方法,分别检测透析外液和透析内液,直到透析外液中检测不出硒时,停止透析。
1.2.3无机硒和有机硒的定性鉴别方法取含一定量硒(浓度大于50L mo l/L)的样品试液放入试管中,加入15%(w )的半胱氨酸溶液,摇匀后静置,加入1~2滴亚甲蓝溶液,并开始计时,对于有机硒,亚甲蓝的退色时间为5~10min;对于无机硒,亚甲蓝的退色时间为30~60s 。
根据退色时间即可定性鉴别无机硒和有机硒。
1.2.4消化方法准确称取一定量硒酵母样品于锥形瓶中,加入HNO 3-HClO 4混酸(体积比1B 4),加热至发烟,待溶液变为淡黄色后,再加热2~3min,此时溶液变为无色,冷却后,定容,即可进行测定。
1.2.5测定方法分别取含硒0.2m g /L 的亚硒酸标液0、1、2、3、4、5mL ,硒酵母样品3~6mL 于比色管中,然后依次加入0.02m ol #L-1ED TA 1mL,0.2mo l #L-1HCl-KCl 缓冲液2mL ,0.6mol #L-1氯酸钾2mL ,0.03m ol #L -1变色酸2mL ,0.03mo l #L-1盐酸苯肼l mL ,然后加水至刻度,摇匀,在沸水浴中加热20min,于冷水中冷却后,用l mL 比色皿于520nm 波长下测定吸光度。
1.3硒酵母中Se C y s 和Se M et 含量的测定1.3.1样品前处理准确称取硒酵母样品(0.5g 左右)于试管中,加入6mo l #L -1HCl 6mL,充氮气后封管,于50e 水解50h 。
1.3.2测定方法采用氨基酸自动分析仪测定硒酵母中SeMet和SeCy s 的含量,SeM et 的保留时间为(62.9?0.5)m in;SeCys 保留时间为(54.6?0.5)min 。
分析谱图见图1。
2结果与讨论2.1实验结果硒酵母中有机硒、SeCys 及SeMet 含量的测定结果见表1。
1#、2#、3#、4#、5#为作者制备的5种不同含硒量的硒酵母,硒酵母的制备过程中,培养基中亚硒酸钠的添加量分别为5、10、15、20、25m g /L 。
2.2硒酵母中有机硒含量测定方法的讨论如何测定生物样品中有机硒的含量,是目前亟待解决的一个问题。
本实验是利用透析的方法,使硒酵母细胞完全破碎后,选择一种比较合适的透析膜,只允许未被酵母同化的小分子无机硒通过,而与蛋白质或氨基酸结合的大分子有机硒不能通过。
在透析过程中不断换水,使内液中的无机硒不断通过透析膜转移到透析外液中,并利用半胱氨酸与无机硒和有机硒反应情况不同,而导致亚甲蓝退色时间不同来鉴别无机硒和有机硒,当透析外液检不出硒时,即已透析完全,此时透析内液中只能检测出有机硒了。
透析方法成功的关键是选择合适的透析袋,并利用新鲜酵母进行透析。
在利用催化分光光度法测定硒酵母中硒含量的过程中,消化方法和加热时间对测定结果影响较大,实验结果表明,用硝酸-高氯酸进行消化,加热20min 时,测定结果最接近于真实值,重复性也最好。
2.3硒酵母中Se M et 、SeC y s 含量测定方法的讨论采用普通的分析方法来分析包括SeMet 、SeC y s 在内的氨基酸混合物时,SeMet 的峰和SeC y s 的峰与其他氨基酸的峰相重叠,实验中采用了降低流速(1#泵的流速为0.275mL /min),长柱(4mm @250m m)的方法,使SeMet 、SeCys 与其他氨基酸的分离度达到了90%以上,比文献[5]报道的方法分离度显著提高,分析时间也缩短了7h。
74分析测试学报第18卷2.4硒酵母中有机硒的存在形式硒酵母作为一种有机硒补品,探明其有机硒的存在形式,对研究硒在生物体内的存在形式及其作用机制,对从分子水平阐明某些酶的催化作用以及许多疾病的发病机理等方面具有重要的理论意义;而对其在安全性、营养作用及合理服用等方面具有重要的实际意义。
经过实验确定,硒酵母中有机硒的主要存在形式是SeC y s(70%)和SeMet(20%),尚有10%左右有机硒是以其它形式存在,但由于其它有机硒的标准样品难以制备和买到,目前还无法确定其形式和含量。
硒酵母中有机硒及SeMet和SeCys含量的测定方法,对于其他生物制品中有机硒含量及含硒氨基酸含量的测定具有重要的参考价值;硒酵母中有机硒及SeMet和SeCy s的定量分析数据,对硒酵母今后在医药及添加剂领域的应用也具有重要的参考价值。
参考文献1徐辉碧.生物微量元素)))硒.武汉:华中工学院出版社,1983.15~202Schrauzer G N,W hite D A.Elem en tal seleniu m in o rganic selenium co m po und s:their chem istry an d bio lo gy.B io ino rg C hem,1983, 8(3):3033W estermark T.Selen ium and selenid es.Acta Pharm acal T ox ical,1987,4(1):1214顾钢,朱万珥,孙林林.利用新的催化显色反应测定人发中痕量硒.分析化学,1988,16(6):5595Peterso n P J,B utler G W.Pa p er chro m ato g ra p hic and electro p ho retic s y stem s for th e in ten tificatio n o f su l p hu r and selenium am ino acids.J C hrom ato g r,1962,8(1):70D eterm ination of Co ntent of Or g anic S elenium and S eleniumAm ino Acids in Selenium YeastsHao Su.e(D e p artment of A pp lied Chemistr y,Harbin Institute of Technolo gy,Haerbin15001)T en g Bin g(Analy sis Centre,Northeast A gricultural University,Haerbin150030)A bstract D etermination of content of organic selenium,selenocystine(SeCys)and selenom ethionine (SeM et)in cultured selenium y easts is re p orted.T he inor g anic selenium and or g anic selenium w ere se p erated w ith dial y sis ba g,and the content of or g anic selenium in selenium y easts w as determined b y catalytic spectrophotometry;the content of selenocystine and selenomethionine in selenium yeasts w ere determined b y amino acid anal y z er.K e y words Selenium y east,O r g anic selenium,S elenoc y stine,Selenom ethionine[书讯]5现代化学试剂手册6第6分册由周良模、商振华、万邦和等教授编写的5现代化学试剂手册6第6分册/仪器分析试剂0(精装本)已于1998年1月由化学工业出版社发行,全书共分气相色谱、高效液相色谱、平面色谱、光谱、波谱、电化学及衍生化试剂等9章,近143万字,900页,汇集约1300种试剂,分别介绍了它们的名称、结构、物化性能、制备方法及应用等,是从事仪器分析、试剂研制、开发人员必备的工具书。
