小鼠睾丸支持细胞分离培养

一种小鼠或大鼠真皮成纤维细胞的分离培养方法真皮成纤维细胞是一种重要的细胞类型，其在生物医学研究、组织工程和再生医学等领域具有广泛的应用前景。

以下是一种常用的小鼠或大鼠真皮成纤维细胞的分离培养方法：1. 实验前准备：- 小鼠或大鼠- 麻醉剂，如异氟醚等- 消毒剂- 必需的培养基和培养液2. 小鼠/大鼠的取材：- 麻醉小鼠或大鼠，确保其在实验过程中不会感到疼痛或不适。

- 消毒动物的表面，以减少细菌或其他微生物的污染。

- 取下小鼠/大鼠的皮肤。

使用消毒剪刀和镊子将皮肤切割成小块，以便后续的分离过程。

3. 细胞的分离和培养：- 将皮肤块转移到含有酶解消化液（如胰蛋白酶）的培养皿中，并在37°C的恒温搅拌器上进行酶解（通常为1-2小时）。

- 将酶解后的皮肤块过滤，移至新的培养皿中，加入培养基和培养液，如DMEM/F12或RPMI-1640，并添加10%胎牛血清。

- 将培养皿放在37°C的细胞培养箱中，保持适当的温度、湿度和CO2浓度。

- 培养皿中的细胞会开始生长和扩增。

定期更换培养基，并进行细胞的孵育以保持其正常生长。

4. 细胞的传代：- 当细胞密度达到80-90%时，使用胰蛋白酶或胰蛋白酶-EDTA溶液将培养皿中的细胞与培养皿底部松散的连接断开。

- 将细胞计数，并根据需要的细胞数量进行传代。

一般情况下，将细胞按照1:3或1:4的比例重新分装到新的培养皿中。

- 重复上述步骤，直到获得足够数量且健康的细胞。

这种方法能够有效地分离和培养小鼠或大鼠真皮成纤维细胞，为相关研究提供了重要的细胞资源。

通过优化培养条件和细胞的传代方法，可以获得高质量和稳定的细胞群体，以支持各种实验或应用的需要。

小鼠睾丸支持细胞小鼠睾丸支持细胞产品说明：为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。

派瑞金提供的小鼠睾丸支持细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。

研发的小鼠睾丸支持细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。

同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。

注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。

3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。

4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。

5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。

小鼠睾丸支持细胞产品简介：产品名称：小鼠睾丸支持细胞组织来源：小鼠睾丸产品规格：5×105cells / 25cm2培养瓶小鼠睾丸支持细胞细胞简介：睾丸支持细胞又称sertoli细胞。

它是生精细胞的支架,为其提供必需的营养物质,能合成与分泌雄激素结合蛋白,为其提供高浓度的雄激素环境等,还具有构成血-睾屏障,形成睾丸内微环境,调节精子发生等功能。

制备高活率的sertoli 不仅对sertoli的基础研究有重要价值,而且在精子发生等领域有重要意义。

本研究旨在建立小鼠sertoli的快速高效分离方法,并根据其分泌FasL的特性,采用细胞免疫化学方法对分离的小鼠sertoli进行鉴定,以期为进一步研究和应用sertoli奠定基础。

小鼠星形胶质细胞原代培养及分离纯化实验方案小鼠星形胶质细胞（astrocytes）是中枢神经系统中一种重要的胶质细胞，主要起支持和维护神经元生存、供能以及调节神经元活动等功能。

原代培养和分离纯化小鼠星形胶质细胞是研究其生物学特性和相关疾病发生机制的重要实验方法。

以下是一种常用的小鼠星形胶质细胞原代培养及分离纯化实验方案。

实验材料和仪器：1.小鼠（新生仔小鼠）2.离心管、培养皿、显微镜3.无菌生理盐水、套管、吸头4. DMEM/F12培养基、FBS、胰蛋白酶、DNase I5.离心机、试管摇床、显微镜、离心管架6.显微针、细胞计数板、加热振荡器实验步骤：1.小鼠的准备：a.使用新生仔小鼠，从母鼠的子宫中取出。

b.将小鼠头部朝下放在无菌生理盐水中，用套管轻轻吸出小鼠颅内的脑组织。

c.将脑组织转移到含有DMEM/F12培养基的离心管中，并用离心管摇床低速振荡15-20分钟使细胞均匀分散。

2.细胞分离：a.将离心管架放在显微镜下，用显微针将脑组织均匀挫碎。

b.将脑组织转移到含有DMEM/F12培养基的培养皿中。

c. 添加0.25%胰蛋白酶和10 U/ml DNase I，37°C孵育30分钟。

d.轻轻吸入含有酶切的脑组织，并用吸头轻轻洗涤脑组织，收集上清液。

e.将上清液通过0.22μm的滤网过滤，除去大颗粒的细胞。

3.细胞培养：a. 将滤过后的细胞悬液计数，计算细胞密度并将其稀释至10^6细胞/ml。

b.取DMEM/F12培养基，添加10%FBS，将稀释后的细胞悬液转移到培养皿中。

c.在培养皿中加入5%CO2，37°C孵育。

d.每两天更换一次培养基，直到细胞至80%～90%的密度。

4.纯化小鼠星形胶质细胞：a.将培养皿中的细胞收集到离心管中，进行离心。

b.用无菌生理盐水洗涤细胞，去除不附着的细胞和残留的培养基。

c.将洗涤后的细胞用DMEM/F12培养基重新悬浮，计数并计算细胞密度。

d.用磁层细胞分选仪，通过细胞表面标记的抗体对细胞进行阳性选择，分离纯化小鼠星形胶质细胞。

小鼠睾丸发育及精子生成机制的研究睾丸是人体内男性生殖器的重要组成部分，它主要负责生产精子和分泌睾丸激素。

对于男性而言，睾丸的健康发育和正常功能对于其生殖和性功能的正常运作至关重要。

近年来，关于睾丸发育及精子生成机制的研究越来越引起人们的注意。

1.小鼠睾丸发育及精子生成基础结构睾丸是负责精子生成和睾酮分泌的器官，由支持细胞、生精细胞和间质细胞构成。

其中，生精细胞包括精原细胞、精母细胞、精子和卵细胞。

生精细胞位于支持细胞之间，形成支持细胞和生精细胞的完整的输精管壁。

而支持细胞则主要由睾丸索和附睾的间质细胞构成。

间质细胞是红染细胞、血管和淋巴管组成的间质细胞。

2.小鼠睾丸发育及精子生成的调控机制小鼠睾丸发育及精子生成过程中的调控机制则涉及到了一系列的各种因素，包括内分泌调节，如睾酮，催乳素，卵巢素等，还有生长因子，细胞因子和转录因子等。

2.1 内分泌调节等等2.2 生长因子生长因子在生殖系统的发育过程中起到了重要的作用，它们能够通过调节生殖细胞的增殖和分化、细胞凋亡等方面来影响睾丸发育及精子生成的全过程。

2.3 细胞因子细胞因子属于生殖细胞与支持细胞间的信息传递体系，可以通过信号通道来调节生殖细胞的分化和发育。

2.4 转录因子转录因子是基因表达调控的关键因素，调节了睾丸及生殖细胞分化及生长过程中的基因表达。

小鼠睾丸发育及精子生成机制是一个相当复杂的过程，涉及到了内分泌调节，生长因子，细胞因子和转录因子等诸多的调节因素。

对于众多的研究者而言，深入了解这些机制，以期修复或预防男性不育症状的发生和纷繁复杂后遗症的发展，无疑对于人类的生殖健康和美好幸福生活的发展具有重要的意义。

小鼠睾丸输出管注射法建立转基因小鼠的试验研究作者：王鹤曹文广来源：《天津农业科学》2013年第04期摘要：应用玻璃针将脂质体包裹的质粒pEGFP-C1通过睾丸输出管注射到4周龄昆明（KM）小白鼠睾丸曲精细管内。

共注射6只小鼠，其中一只注射后马上做石蜡切片观察转染液注射入曲细精管内的情况，其他5只继续饲养，1周后取1只小鼠培养睾丸的支持细胞，观察是否有荧光出现。

4周后，用PCR法检测剩余4只小鼠睾丸组织曲细精管基因组中的外源DNA，4只都显示为阳性。

表明用睾丸输出小管注射法将外源基因导入小鼠睾丸是一条简便可行的新途径。

关键词：小鼠；转基因；睾丸输出管注射法中图分类号：S865.1文献标识码：ADOI编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2013.04.008Construction of Transgenic Mice by Testicular Efferent Duct InjectionWANG He1，2， CAO Wen-guang2（1. College of Animal Science， Xinjiang Agriculture University， Urumqi， Xinjiang 830052， China； 2.Institute of Animal Science， Chinese Academy of Agricultural Sciences，Beijing 100193， China）Abstract： Using glass needle plasmid pEGFP-C1 liposome-encapsulated was injected into the testicular efferent of 4 weeks male KM mice. Do immediately after an injection of paraffin sections to obserne the transfection solution was injected into the seminiferous tules， remanent mouse to continue to raise， after a week， take one mouse cultivating testicular sertoli cells. After four weeks， exogenous DNA in the PCR method for detecting the remaining four mouse testis seminiferous tubules genome， all as positive. The result indicated that the data in this study to transgenic animals could be established by testicular efferent injection.Key words： mice；transgenic；testis efferent injection转基因动物在生命科学、医学、生物制药等领域有着广泛的研究和应用前景，因此，科学家们一直在探索一种更简便易行、经济实用而又高效的转基因方法。

组织消化1.取小鼠睾丸组织，放入1xPBS中，剥去白膜组织，用镊子轻轻撕开；2.15ml离心管中加入6ml的消化体系：5.88ml DMEM + 120ul 胶原酶+ 3ulDNAase；3.37℃消化10min：其中消化5min时上下吹打10次，再继续消化5min；4.消化期间，配制胰酶消化体系：取15ml离心管，加入5.28ml DMEM + 600ul胰酶+ 120ul 胶原酶+ 3ul DNase, 37℃预热；5.消化完成的组织室温静置2分钟后期弃上清，加入预热后的胰酶消化液，上下吹打10次后，放入37℃培养12min；6.12min后，取出，上下吹打10次，继续消化12min；7.将消化后的组织加入2ml的血清，终止消化，100um滤网过滤；8.过滤后100g离心5min,弃上清，加入含10%FBS的DMEM，40um过滤，进行镜检；流式分选1.镜检后的单细胞悬液，根据细胞量进行染：Hochest浓度：6ug/million细胞（我们的Hochest浓度是10ug/ul），避光染色1h；2.100g离心5min，弃上清；3.加入2%FBS的1xPBS重悬细胞，进行上机分选，同时准备含10%FBS的DMEM培养基收集细胞；染色体铺展1.分选出的细胞，400g,4℃，离心5min，弃上清，1xPBS重悬，并转移到1.5ml的EP管中；2.400g,4℃，5min，弃上清；3.用染色体铺展的低渗Buffer重悬细胞，一般50ul重悬，室温放置30min；（低渗Buffer: 现用现配：250ul蔗糖溶液+150.15ul Tris+85ul柠檬酸钠溶液+50ulEDTA+2.5ulDTT+25ulPMSF, 补ddH20至5ml。

以上所有溶液均配制的储存液）4.准备多聚赖氨酸处理过的玻片，玻片用之前在多聚甲醛Buffer中浸润；（PFA Buffer: 现用现配：称0.1gPFA加入10ml水中，100℃加热溶解，冷却后加入38.137mg硼酸钠和20ul Tritonx-100）5.处理后的细胞，用20ul枪头轻轻吹打，滴加在浸润过PFA的玻片上，自然晾干5h以上；免疫荧光1.将玻片放入12孔板中，用含5%BSA的PBS封闭1h；2.弃封闭液，染1抗：1:200，染色1h, 350ul/孔，染色液：1xPBS即可；3.用含0.1%Triton 的1xPBS洗3遍，5min/次；4.染2抗，避光，室温1h, 二抗：1:1000, 350ul/孔（DAPI可在该步骤一起染，1:1000）；5.按上述同样步骤洗三遍6.封片：取普通载玻片，滴加7ul封片剂，将含有细胞的玻片压在上面，注意不要产生气泡；7；待晾干后进行荧光检测试剂及耗材的位置：所有的抗体在4℃均有分装用的消化的酶4℃分装用的也有，DNase在-20度染色体伸展Buffer：用的几个试剂存储液在实验台上50ml离心管中存储，DTT 和PMSF在-20度存储血清，培养基，1XPBS在4℃PFA粉末在4℃硼酸钠及Triton在实验台上抗淬灭剂在4℃包好的盖玻片在试验台抽屉中50ml离心管中，普通载玻片在实验台抽屉中。

细胞原代培养实验报告细胞原代培养实验报告细胞原代培养是一种常用的实验方法，用于研究细胞的生物学特性和功能。

本实验旨在通过原代培养的方式，观察和分析细胞在体外环境下的生长和变化。

我们选择了小鼠胚胎成纤维细胞作为实验对象，以下是实验的详细步骤和结果分析。

实验步骤：1. 细胞分离：将小鼠胚胎取出，用无菌PBS洗涤去除血液和其他污染物。

然后将胚胎组织切碎，并用胰酶和胆汁酸溶液进行消化。

最后通过过滤器筛选，获取单个细胞悬浮液。

2. 细胞培养：将细胞悬浮液转移到含有培养基的培养皿中，加入适量的血清和抗生素。

将培养皿放入恒温培养箱中，保持适宜的温度、湿度和二氧化碳浓度。

3. 细胞观察：每天观察细胞的生长情况，记录细胞数量和形态的变化。

使用显微镜观察细胞的形态和结构，拍摄照片以备后续分析。

4. 细胞传代：当细胞达到80-90%的密度时，使用胰酶和胆汁酸溶液将细胞从培养皿上剥离下来。

将细胞悬浮液转移到新的培养皿中，加入新的培养基，并按照相同的条件进行培养。

实验结果：在细胞培养的过程中，我们观察到小鼠胚胎成纤维细胞的生长和变化。

初始阶段，细胞悬浮液中的细胞数量较少，呈现单个细胞的状态。

随着培养时间的延长，细胞开始聚集成群，形成细胞聚落。

在观察细胞形态时，我们发现细胞呈现出典型的成纤维细胞形态特征。

细胞体积较小，形状呈椭圆或长条状，有较长的细胞突起。

细胞质呈现出丰富的胞浆，胞核位于细胞的中央位置。

随着细胞的传代，我们观察到细胞的增殖速度逐渐加快。

细胞密度逐渐增加，细胞聚落的大小也逐渐增大。

同时，我们还观察到细胞形态的变化，细胞突起的数量和长度有所增加。

实验讨论：细胞原代培养是一种常用的实验方法，可以用于研究细胞的生长、增殖和分化等生物学特性。

在本实验中，我们成功地将小鼠胚胎成纤维细胞进行原代培养，并观察到了细胞的生长和变化。

细胞的形态特征对于细胞的功能和特性具有重要的指示意义。

在本实验中，我们观察到小鼠胚胎成纤维细胞呈现出典型的成纤维细胞形态特征，这与之前的研究结果一致。

一、实验目的1. 熟悉细胞分离培养的基本原理和操作步骤。

2. 掌握原代细胞和传代细胞培养的方法。

3. 学会细胞传代过程中细胞计数、细胞纯度鉴定和细胞活力检测。

二、实验原理细胞分离培养是指将生物体内的细胞取出，在体外模拟生物体内的生理条件，使其在人工培养条件下生长、繁殖和传代的过程。

细胞分离培养技术是细胞生物学研究的重要手段，广泛应用于生物工程、医学、生物学等领域。

三、实验材料1. 实验动物：小鼠2. 组织：小鼠结肠3. 试剂：胰蛋白酶、胶原酶、DMEM培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素、培养瓶、移液器、细胞计数板、显微镜等。

四、实验方法1. 细胞分离（1）取小鼠结肠组织，置于含胰蛋白酶和胶原酶的消化液中，37℃水浴消化30分钟。

（2）消化完成后，用吸管吹打组织块，使细胞充分分散。

（3）将细胞悬液过滤，去除组织碎片。

2. 细胞培养（1）将过滤后的细胞悬液接种于培养瓶中，放入37℃、5%CO2培养箱中培养。

（2）每隔24小时更换一次培养基。

3. 细胞传代（1）待细胞长满瓶底后，用0.25%胰蛋白酶消化细胞。

（2）收集细胞悬液，计数，调整细胞浓度。

（3）将细胞悬液接种于新的培养瓶中，放入培养箱中培养。

4. 细胞计数（1）取适量细胞悬液，加入细胞计数板。

（2）在显微镜下观察细胞计数。

5. 细胞纯度鉴定（1）取适量细胞悬液，进行细胞形态学观察。

（2）取适量细胞悬液，进行细胞免疫荧光染色。

6. 细胞活力检测（1）取适量细胞悬液，进行MTT法检测细胞活力。

（2）取适量细胞悬液，进行台盼蓝染色，检测细胞死亡率。

五、实验结果1. 细胞分离：消化后的细胞呈圆形或椭圆形，细胞浓度约为1×10^6个/mL。

2. 细胞培养：细胞在培养瓶中生长良好，呈单层贴壁生长。

3. 细胞传代：细胞传代过程中，细胞生长速度逐渐加快，细胞活力逐渐提高。

4. 细胞计数：细胞计数结果为1×10^5个/mL。

5. 细胞纯度鉴定：细胞形态学观察和免疫荧光染色结果显示，细胞为小鼠结肠细胞。

ftm培养基用途
FTM培养基是一种常用的细胞培养基，其全称为Fetal Testis Medium，即胎儿睾丸培养基。

该培养基主要用于培养和维持小鼠胚
胎睾丸细胞系，以及研究睾丸发育和生殖细胞分化等方面的基础研究。

FTM培养基的主要成分包括DMEM/F12培养基、胎牛血清、L-谷氨
酰胺、胰岛素、转铁蛋白、胆固醇、维生素等。

这些成分能够提供细
胞生长所需的营养物质和生长因子，同时保持细胞的稳定状态，促进
细胞增殖和分化。

FTM培养基的应用范围很广，主要包括以下几个方面：
1. 研究睾丸发育和生殖细胞分化：FTM培养基可以用于培养小鼠胚胎睾丸细胞系，研究睾丸发育和生殖细胞分化的机制和调控因素，为生
殖医学和生殖健康提供理论基础。

2. 研究生殖毒性和生殖毒理学：FTM培养基可以用于评估化学物质和环境污染物对生殖系统的毒性和影响，为环境保护和公共卫生提供科
学依据。

3. 研究生殖干细胞和生殖细胞治疗：FTM培养基可以用于培养和扩增
生殖干细胞和生殖细胞，为生殖细胞治疗和生殖医学提供技术支持。

4. 研究生殖系统肿瘤和肿瘤干细胞：FTM培养基可以用于培养和维持生殖系统肿瘤细胞系和肿瘤干细胞，研究肿瘤发生和发展的机制和治疗策略。

总之，FTM培养基在生殖医学、生殖健康、环境保护、公共卫生等领域具有广泛的应用前景和重要的研究价值。

未来随着生殖医学和生殖健康的发展，FTM培养基的应用将会越来越广泛，为人类健康和福祉做出更大的贡献。

小鼠t细胞分离步骤
小鼠T细胞分离技术是一种非常重要的实验技术，在动物模型的研究中被广泛使用。

本文将详细介绍小鼠T细胞分离技术的步骤，让大家更好地了解这项技术。

以下是小鼠T 细胞分离技术的步骤：
1.制备工具与试剂
首先，需要准备一些工具和试剂。

这些工具包括离心管、移液器、显微镜、电子天平等。

试剂则包括PBS，对乙酰氨基酚，L-甲硫氨酸，乙二胺四乙酸（EDTA），乳化剂和小鼠T细胞抗体。

2.收集淋巴结细胞
将小鼠体内的淋巴结取出，并将其放入含有PBS的离心管中。

通过离心法，将淋巴结中的细胞分离出来，获得淋巴结细胞。

可在显微镜下观察分离效果
3.分离T细胞
将分离出来的淋巴结细胞转移至含有对乙酰氨基酚的培养基中，利用对乙酰氨基酚的作用，去除细胞中的红细胞。

然后，将细胞转移至含有小鼠T细胞抗体的培养基中，通过乳化剂的作用将细胞和抗体混合。

最后，将混合物离心，获得纯化后的小鼠T细胞。

4.使用乙二胺四乙酸抑制T细胞增殖
将获得的小鼠T细胞放入含有L-甲硫氨酸、PBS和乙二胺四乙酸的培养基中，通过乙二胺四乙酸的作用，抑制T细胞的增殖。

在培养过程中，可以使用显微镜观察T细胞的形态和数量，以确认分离效果。

以上就是小鼠T细胞分离技术的主要步骤。

在实际操作中，还需要注意一些细节，比如对温度、培养基的选择和合适的离心速度等。

通过合理的分离方法和技术，可以获得高质量的小鼠T细胞，为后续实验的开展提供保障。

Accutase酶在精原干细胞原代分离中的应用刘珊珊;徐丽萍;朱蔚云;马宁芳【摘要】背景：有研究报道胰酶消化在一定程度上会破坏精原干细胞表面抗原并影响细胞活性，对后续的细胞分选及下游实验有一定影响。

Accutae 酶具有蛋白酶和胶原酶的双重活性，在消化结束时无需终止和清洗，有保护细胞表面抗原的特殊作用，因而被应用于多种干细胞的培养及消化传代中。

<br> 目的：比较Accutase酶和胰酶在原代消化分离睾丸组织获取精原干细胞中的作用。

<br>方法：新生5-7 d昆明雄鼠45只，取双侧睾丸胶原酶初步消化，混悬液定容后分为Accutase酶组、胰酶组、混合酶组(透明质酸酶+胰酶组)，不同组别小鼠睾丸组织分别于酶消化1，3，5 min后显微镜下观察并拍照，比较各组不同时间点的消化状态及形成单细胞所需的时间；获取单细胞悬液后分别计算单位体积内所得细胞总数及死亡率；通过差速贴壁方法去除间质细胞及支持细胞，经包被有干细胞标志分子 CD90.2的免疫磁珠进行分选，将所得 CD90+及 CD90-细胞用精原干细胞表面标志分子--胶质细胞源性神经营养因子受体α1标记，流式细胞仪检测不同组别CD90+及 CD90-细胞群中胶质细胞源性神经营养因子受体α1精原干细胞的阳性率。

<br> 结果与结论：不同类别的消化酶对小鼠睾丸的消化作用有明显差异，其中 Accutase 酶能更快获取单细胞悬液，其细胞团及破膜细胞明显少于胰酶组和混合酶组，其所得细胞总数高于其余2组，而细胞死亡率则低于其余2组。

差速贴壁后细胞免疫磁珠分选结果显示Accutase酶组CD90+精原干细胞得率高，流式分选结果显示胶质细胞源性神经营养因子受体α1+/CD90+细胞为72.24%，高于胰酶组及混合酶组(51.16%，71.27%)；而胶质细胞源性神经营养因子受体α1+/CD90-细胞比率(15.03%)则低于胰酶组及混合酶组(18.8%，24.23%)。