第28卷第4期河南工业大学学报(自然科学版)Vol .28,No .42007年8月Journal of Henan University of Technol ogy (Natural Science Editi on )Aug .2007收稿日期:2007201229作者简介:任顺成(19632),男,山东东明人,博士,副教授,研究方向为天然活性成分及其功能评价.文章编号:167322383(2007)0420034203玉米须黄酮类成分的提取分离与结构鉴定(Ⅱ)任顺成1,丁霄霖2(1.河南工业大学粮油食品学院,河南郑州450052;2.江南大学食品学院,江苏无锡214036)摘要:从玉米须中提取、分离黄酮类成分.方法:通过溶剂法提取醇溶性成分,柱层析法得到黄酮类化合物,光谱法(MS,1H -NMR,13C -NMR,DEPT -NMR 和H MQC -NMR )鉴定其结构,结果:得到6种黄酮类化合物,其中,化合物Ⅴ和化合物Ⅵ经鉴定分别为7,4′2二羟基252甲氧基黄酮-2″-O -α-L -鼠李糖基-6-C 2岩藻糖苷和6,4′2二羟基-3′,5′2二甲氧基黄酮-7-O -葡萄糖苷.关键词:玉米须;黄酮类;分离;结构鉴定中图分类号:TS201.2 文献标识码:B0 前言玉米须(Corn silk or S tigm a m aydis )为玉米(Zea m ays L.)的花柱和柱头,它含有多种化学成分,如挥发油、皂苷、生物碱、黄酮类、多聚戊糖、尿囊素、有机酸等.其味淡、性平,有利尿、泄热、平肝、利胆之功效,可用于治疗肾炎、胆结石、糖尿病、黄疸、麻疹、乳糜血尿、血蹦等症[1].现代药理研究证明,玉米须的利尿[2]、降血糖[3]、抑菌[4,5]、降压[6]、增强免疫[6]、、抗癌[7]等功效尤其显著.从平原到海拔3000m 以上的西藏,由北纬50°的黑龙江到海南岛都有玉米种植[8],因此,作为玉米副产物的玉米须的资源十分丰富.然而,对它的开发利用非常有限,除少量入药外,大部分被白白丢弃.鉴于玉米须有明显的药理价值和一定的食疗特征,进行开发利用前景相当广阔.由于我国各地水土、气候等生长条件差异很大,再加上玉米品种繁多,玉米须中的黄酮类单体必有差异.国外研究不多,国内鲜有报道.本研究在于确定玉米须中黄酮类化合物的提取、分离及单体的结构,进一步研究其生理活性,寻找其临床疗效的依据.1 材料与方法1.1 材料与试剂仪器玉米须,购自郑州中药店;石油醚,沸点30~60℃;正丁醇,分析纯;乙醇,工业酒精;GF 254硅胶板,青岛海洋化工厂生产;大孔吸附树脂,南开大学化工厂生产;聚酰胺(80~100目/英吋),浙江台州化工厂生产;Toyopearl H W -40,进口分装.1.2 仪器与设备Avance 500型核磁共振仪,B ruker 公司;W a 2ters p latfor m Z MD 4000型液质联用仪,美国W a 2ters 公司;RE52CS 型旋转蒸发器,上海亚荣生化仪器厂.1.3 实验方法1.3.1 黄酮类提取将洗净、晾干、剪碎的玉米须分批放入15L 密闭容器中,加入80%乙醇(料液比1∶10),不定期搅拌,浸提72h 后,乙醇滤出、回收,再将回收的乙醇调配成80%(V /V )浓度,加入到浸提容器中,补充至最初的刻度,反复3次,合并乙醇提取液,温度≤50℃下旋转蒸发,浓缩成红褐色糖浆状.第4期任顺成等:玉米须黄酮类成分的提取分离与结构鉴定(Ⅱ)351.3.2 乙醇提取物的处理将乙醇浸提物用石油醚脱脂3次,再用水饱和正丁醇反复萃取多次,直到正丁醇无色时为止.合并正丁醇相,温度≤50℃下旋转蒸发、浓缩.1.3.3 黄酮类的分离将正丁醇萃取物加入适量去离子水,超声,抽滤.滤液上AB-8柱(60mm×600mm),第一步,先用去离子水洗脱,再用体积分数为30%、50%、75%、95%的乙醇梯度洗脱,分步收集,薄板检测,相近组分合并,得到组分Ⅰ、组分Ⅱ、组分Ⅲ;第二步,将组分Ⅰ~组分Ⅲ溶解后,分别上聚酰胺柱(40mm×600mm),先用去离子水洗脱,再用乙醇梯度洗脱,30mL收集一管,薄板检测,相近组分合并,得到6个组分,标为Ⅰa、Ⅰb、Ⅱc、Ⅱd、Ⅲe、Ⅲf;第三步,将组分Ⅰa~Ⅲf溶解后,反复上T oy opearl H W-40(35mm×500mm),乙醇梯度洗脱,每管收集15mL,薄板检测,得到化合物Ⅰ~Ⅵ.1.3.4 黄酮类的结构鉴定将所得的化合物Ⅰ~Ⅵ的单体用氘代DMS O 溶解后,进行1H-NMR、13C-NMR、DEPT-NMR、H MQC-NMR等分析,鉴定它们的结构.2 结果与分析2.1 化合物Ⅴ的结构鉴定化合物Ⅴ为黄绿色粉末,氨熏呈黄色,溶于甲醇,1H-NMR图谱显示:低场区仅有一个活泼氢,表明只含1个酚羟基;在芳香区有5个氢信号,说明有取代苯环存在;有2个端基质子信号(δ=5. 0,4.73),表明有两个糖;δ=3.89处的信号为-OCH3.高场区(δ=1.13,0.54)有两个甲基,13C -NMR图谱表明:δ181.7处的信号为羰基,在δ141.7~163.3区间有6个连氧碳,δ136.4处有1个碳信号,在δ121~94.8区间有7个芳香碳信号,推断该化合物为黄酮类化合物,从δ136.3的信号判断,该化合物应为黄酮醇类化合物.从13C -NMR来看只有1个端基碳(δ100.6),说明另1个糖为非O-糖苷,而δ71.3处的信号表明含有C-糖苷,δ=56.0为-OCH3,δ17.6,δ17.5甲基分别为鼠李糖和另一个糖所有.ESI-MS:m/z592[M H]+1H-NMR(DMS O,400MHz):δ7.54(2H,s, H-2′,6′),6.94(1H,d,J=8.4,H-5′),6.84 (1H,s,H-8),5.0(1H,d,J=12.1,H-1″),4.73 (1H,d,J=9.3,H-1′′′),3.89(3H,s,-OCH3), 3.2-3.8(糖上氢).化合物Ⅴ碳的化学位移δ及碳位见表1.表1 化合物Ⅴ碳的化学位移值及碳位碳位化合物Ⅴδ/ppmDEPT碳位化合物Ⅴδ/ppmDEPTC-4181.7C C-1 100.6CHC-2163.3C C-894.8CHC-7159.1C C-2″76.0CHC-9156.7C C-3″74.0CHC-4′148.2C C-5″73.6CHC-3′141.7C C-4″72.2CHC-3136.3C C-4 71.5CHC-5130.2CH C-1″71.3CHC-1′121.1C C-2 70.6CHC-6′120.3CH C-3 70.4CHC-5′115.9CH C-5 68.2CHC-2′110.0CH C-6 17.6CH3 C-6109.1CH C-6″17.5CH3C-10102.9C OCH356.0CH3化合物Ⅴ的MS图谱见图1.图1 化合物Ⅴ的MS图谱通过以上分析,对照类似化合物的参考文献[9],确定化合物Ⅴ为7,4′2二羟基-3′2甲氧基黄酮-2″2O2α2L20鼠李糖基-6-C-岩藻糖苷,化学结构式见图2.图2 化合物Ⅴ的结构式2.2 化合物Ⅵ的结构鉴定化合物Ⅵ与Ⅴ同为黄绿色粉末,氨熏呈黄色,溶于甲醇.UV 光谱显示黄酮类的特征吸收峰,λmax:267n m ,371n m ,经LC -MS 、1H -NMR 检测,该化合物纯度不高,含量甚微,收集量太少,给进一步纯化带来困难.但从所做的ESI -MS 、1H -NMR 等光谱信息判断,通过对Ⅳ和Ⅵ的MS 图谱(见图3~图4)对比,Ⅵ刚好比Ⅳ[10-11](结构见图5)多1个甲氧基(-OCH 3),因此,据有关图谱信息我们推测Ⅵ为6,4′2二羟基-3′,5′2二甲氧基黄酮-7-O -葡萄糖苷,可能的化学结构为图6.3 结论本研究通过乙醇溶剂浸提得到玉米须黄酮类,借助色谱分离法得到6个黄酮类化合物,利用多种光谱法对它们的结构进行了鉴定,其中化合物Ⅴ和化合物Ⅵ分别被鉴定为7,4′-二羟基-3′-甲氧基黄酮-2″-O -α-L -鼠李糖基-6-C -岩藻糖苷和6,4′-二羟基-3′,5′-二甲氧基黄酮-7-O -葡萄糖苷.参考文献:[1] 吴征镒.新华本草纲要[M ].上海:上海科学技术出版社,1990,525.[2] 王鼎,郭蓉.玉米须利尿作用的初步研究[J ].内蒙古中医药,1991,(2):38.[3] 李伟,陈颖莉,杨铭.玉米须降血糖的实验研究[J ].中草药,1995,26(6):305.[4] 纪丽莲,范怡梅.玉米须提取物对食品腐败菌及致病菌抑制作用的研究[J ].食品科学,2000,21(12):1312134.[5] Joseph N N.I nhibiti on of as pergillus flavusgr owth by silk extracts of resistant and sus 2cep tible[J ].Corn J Agic Food Che m ,1996,44:198221983.[6] 汤鲁宏,丁霄霖,尤丽芬.玉米须生物活性成分的初步研究—玉米须多糖及其免疫增强作用[J ].无锡轻工大学学报,1995,14(4):3192324.[7] 马虹,高凌.玉米须提取物ES M 对K562和SGC 细胞的作用[J ].南京中医药大学学报,1998,14(1):28229.[8] 苏广达.作物学[M ].广州:广东高等教育出版社,2000,151.[9] Snook M E,W idstr om N W ,W ise man B R,et al .Ne w C -4″-hydr oxy derivatives of maysin and 3′-methoxy maysin is olati on fr om corn silks (Zea m ays )[J ].J Agric Food Che m ,1995,43:274022745.[10] 任顺成,丁霄霖.玉米须黄酮类的提取分离与结构鉴定(I )[J ].中草药,2004,35(8):8572858.[11] 任顺成.玉米须黄酮类的分离、纯化、结构鉴定及生物活性研究[D ].无锡:江南大学,2004.(下转第40页)[3] 贡长生.茶多酚的提取和应用研究进展[J].现代化工,1998,19(2):24226. 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Flavonoid constituents were separated by column chr omat ography method and the structures were identified on the basis of extensive s pectral analysis(MS,1H-NMR,13C-NMR,H MQC-NMR and DEPT-NMR).The results showed six flavonoid constituents were is olated fr om corn silk and their che m ical structures were identi2 fied.Among them,compoundⅤwas7,4′-dihydr oxy-3′-methoxyflavone-2″-O-α-L-rha mnosyl -6-C-fucoside,compoundⅥwas6,4′-dihydr oxy-3′,5′-di m ethoxyflavone7-O-glucoside.Key words:corn silk;flavonoids;is olati on;structure identificati on。