蕨菜中黄酮类化合物的提取与测定

第２ １卷 第 ４ 期
２ ０１ １经
信阳农业高等专科学校学报
Ｊ ｕ ｎ ｌｏ ｎ ａ ｇＡｇｉｕｔｒ ｏｌｇ ｏ ｒ ａ ｆ Ｘｉｙ ｎ ｒ ｌ ａ Ｃ ｌ ｅ ｃ ｕｌ ｅ
Ｖ０ ． ． １ ２１ Ｎｏ ４ Ｄｅ ． ０１ ｃ２ １
１ ２月
蕨 菜 中黄 酮 类化 合 物 的提 取 与 测 定
赵丽平 ， 李 向
（ 阳农业高等专科学校 生物技术系 ， 信 河南 信阳 ４４０ ） ６００
摘 要 ： 用乙醇提取蕨菜中黄酮类化合物， 得到粗黄酮。利用分光光度法测定了蕨菜粗黄酮含量 ， 用颜色反应
做定性分析并与标准 品芦丁作 比较实验。结果表 明 ： 蕨菜干粉 中总黄酮含量为 ７２ ％ ， ．１ 粗黄铜 中黄酮含 量为 １． ３
进行了研究 ， 并进行了吸收光谱测定 ， 聚酰胺薄膜层 酸 、 水 、 酸 、 氧 化 钠 、 ％ 氯 化 铝 、％ 氯 化 铁 、 氨 盐 氢 １ １ ０ ５ 析定性分析黄酮成分等， 为蕨菜保健功能的研究提供 １ ％硝酸 铝 、％ 硝酸 钠等均 为分 析纯 。
依据。
２ 试 验 方 法
作者简介 ： 赵丽平 （９９）女 ， ， 许昌人 ， １７一， 讲师 河南 硕士 ， 主要从事化学方面教学与研 究
・
ｌ９・ １
第２ １卷 第 ４期
信 阳农业 高等 专科 学校 学报
２１年 １ ０ １ ２月
层石 油醚 ， 下层 乙醇浸 提 液 定 容一 粗 黄 酮 液一 水 浴 ， 因子的条件下的最佳提取剂是否吻合 ， 因此选定提取 减压 浓缩一 １３ ０℃烘 干 粉碎 一粗 黄酮粉
６ ％ ， 菜黄酮类 化合 物主要有黄酮和黄酮醇两类 。 ６ 蕨
关键词 ： 蕨菜； 黄酮； 层析； 分光光度法； 颜色反应
中图分类号 ：２４２ 文献标识码 ： Ｒ８． Ａ
文章编号： ０ － １ （０ １０ －１９０ １ ８ ９６ ２ １ ）４０ １－ ０ ４ ３
Ｅｘｒ ｃｉｎ ａ ｄ ｄ ｔｒ ｎ ｔ ｎ ｏ ａ ｏ ｏｄ ｒ ｍ ｔｒｄｕ ａ ｕｌ ｕ ｖ ｒ １ｔ ｓｕｕ ｔａ ｔ ｎ ｅｅ ｍｉａｉ ｆｆ ｖ ｎ ｉｓｆｏ Ｐ ｅｉｉｍ ｑ ｉｎ ｍ ａ ．ａｉ ｃ ｌｍ ｏ ｏ ｌ ｉ ｕ
不同的温度 、 提取时间、 提取剂、 提取剂用量等条件下 ３ 进行 了平行试验 ， ｈ 测其总黄酮分别为 ４ ３６ ％、． ．５２ ４
做单 因子平行试验。 根据平行试验的结果 ， 采用正交 ４ ７ ％ 、． ４ ８ 、 ． ６ ５ 。结 果 显 示提 取 时 间 ２ ５ ６ ４ ５３ ％ ４ ３８ ％ ｈ 试验设计 ， 应用 ３ 正交表 ， 对提取剂 、 提取温度、 时 总含量 最大 。为 了确 定在 多 因子条 件 下 与 单因子 提 取 时间 、 提取 剂用 量 ４因子 在 ３个 水平 进 行优 选 ， 见 的条 件下 的最佳提 取剂是 否 吻合 ， 因此选定 提取 时 间 表 １结 果采用 直观分 析和 方差分 析 。 ， １ 、ｈ３ ｈ２ 、ｈ作 为正交试 验 的 ３个水 平 。
Ｋｅ ｒ ｓ Ｐ ｅｉ ｕ ｑ ｉｎ ｒ ａ． ａ ｕｃ ｕ ｌ ｖｎ ｉ ；ｃｒｍａ ｇ ｐ ｙ ｌ ａ ｉ ｅ ｖ ｉ ｅ ｓｅ ｔ ｏ ｏｏ ｔ ； ｙ ｗｏ ｄ ： ｔ ｄ ｍ ａ ａｌ ｕｎ ｖｌ １ｔ ｓｕ ｍ；ｆ ｏ ｏ ｒｉ ｉ ｅ ｉ ｌ ａ ｄ ｈ ｏ ｔ ｒ ｈ ；ｕｔ ｖｏ ｔ ｉ ｂ ｐ ｃ ｏｈ ｔ ｒ ｏａ ｒ ｌ－ｓ ｌ ｒ ｍｅ ｙ
ｂ ｏｏ ａｉ ｎ ａ ｄ ｃ ｍｐ ｒ ｅ ｒ ｓ ｈ ｉ ｅ ｒ ｓ ｌ ｆｒ ｔ ｔｎ ａ ｄ ｓ ｍｐｉ ｇ ｙ ｃ ｌｒ ｔ ｎ ｏ ａ ｅ ｔ ｅ ｕ ｓ ｗ ｔ ｔ ｅ ｕ ｔ ｏ ｕ ｉ ｓａ ｄ ｒ ａ ｌ ．Ｒｅ ｕ ｔ ｓ ｏ ｈ ｔｔ ｅ ｔ ｔｌｆ ｖ ｎ ｉ ｏ ｈ ｈｈ ｓ ｎ ｎ ｓ ｌｓ ｈ ｗ ｔ ａ ｏａ ａ ｏ ｏｄ ｈ ｌ
ｃ ｎ ｅ ｔ ｎ ｔ ｅｄ ｙ ｗ ｉｈ ｆＰ ｅ ｉｉ ｍ ｑ ｉ ｕ ｖ ｌ １ｔ ｓ ｕｕ ｉ ７ ２１ ， ｕ ｅｆ ｖ ｎ ｉ ｏ ｇ ａ ｏ ｏｄ ｉ ３ ６ ｏ ｔｎ ｒ ｅｇ ｔ ｔｒ ｕ ａ ｕ ｌ ｍ ａ ． ａｉ ｃ ｌ ｍ ． ％ ｐ ｒ ａ ｏ ｏ ｄ ｉ ｒ ｕ ｈ ｆ ｖ ｎ ｉ １ ． ６％ ， ｉ ｈ ｏ ｄ ｉ ＂ ｕ ｓ ｌ ｎ ｌ ｓ ｌ ｏ ｏｄ ｆＰ ｅ ｉ ｕ ｎ ａ ｕ ｌ ｕ Ｖ ｔ ｃ ｍ ｒ ｉｌ ａ ｏ ｏｄ ａ ｏ ｏｓ ｆ ｖ ｎ ｉｓ ｏ ｔｒ ｉｒ ｑ ｉ ｎ ｍ ｕ ．ｉ ｓ ｕ ｕ ａ ｅ ｍａｎ ｙ ｆ ｖ ｎ ｉ ｓ ａ ｄ ｆ ｖ ｎ ｌ． ａ ｄ ｉ ｒ ｕ ｌ ｌ ｎ ｌ
表 １ 正 交试 验 的 因子 与 水 平
３ １４ 提 取 剂 用量 的 选择 ．．
在 ８ ℃ 用 ７ ％ 乙醇 溶 Ｏ ０
液提 取相 同时 间 ， 对提取 剂 １１ 、 ：５ １３ 、 ：５进 ：５ １２ 、 ：５ １４ 行 了 平 行 试 验 ， 其 总 黄 酮 分 别 为 ３ ６８ ％ 、 ． 测 ． ６３ ３
物与铝 盐 生 成 红 色 络合 物， 芦 丁为 标 准 品， 以 在 ５０ ｍ处测 定 吸光度 。所 得数 据 经 回归处 理 可 得 标 １ｎ 准 曲线 的 回归方程 ： ＝１ ．１ ４．０ １ ｃ为芦 丁浓 Ａ ３ ０ Ｃ ３０ １ （ 度 ｍｇｍ ， 为 ５０ ｍ 的 吸光 度 ） 相 关 系 数 ｒ ． ／ ｌＡ １ｎ ， ＝０ ９７ 。由回归方 程计 算 出黄酮含 量 。 ９６
７５ ％ 、．６７ 、 ．４８ 。为 了确 定 在 多 因子 条 ２ １ ３ ５２ ％ ３ ５３ ％
２ ３ 蕨菜 黄酮提 取物 的颜 色反应 【 ． ２ 】
件下于单因子的条件下的最佳提取剂是否吻合 ， 因此 选定 料液 比 １１ 、 ：５ １３ 为正 交试 验 的 ３个 水 ：５ １２ 、：５作
２ ２ 提取 条件选 择 ．
温度 ６ ℃ 、０ 、 ｃ作为正交试验的 ３ ０ ７℃ ８ 【 Ｏ＝ 个水平。 ３ １３ 提 取 时 间 的 选 择 料 液 比 １ ３ 、０ 用 ．． ：５ ８℃
称取 ５ ｇ蕨菜 粉末 若 干 份进 行 平 行试 验 ， 别在 ７ ％乙醇溶液作为提取剂对提取 时间 １ 、． ｈ２ 、 分 ０ ｈ １５ 、ｈ
２ １ 蕨菜 提取 工艺流 程 ．
１ 材料与仪器
１ １ 材料 ．
干燥密封保存的蕨菜 （ 信阳贤山上采摘 ） 。
１２ 仪器 。
收稿 日期 ：０ 】１－２ ２ １ 一０２
烘干＿ 粉碎 称量＿ ＋ ＋乙醚脱脂 ， 除色素 挥尽 乙醚 — ％ 已醇 回流 提取 浸 提 液无 色 ， １ ０ 约 ０次 合并浸提液＿浓缩定容 １１ ÷ ： 加石油醚脱脂 弃上
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ｅ ｔ ｃ ｒｕ ｈｉ ｖ ｎ ｉ ｆ ｍ Ｐｅ ｄｕ ｑ ｉｎ ｒ ｖ ｒ１ ｉｓｕｕ ｙｕ ｉｇａ ｏ ｏ ， ｎ ｌｚ ｕ ｈ ｆ ｖ ｎ ｉ ｓｒ ｃ ： ｘｒ ｔ ｏ ｇ ａｏ ｏ ｏ ｔｒ ｉｍ ａ ｕｌ ｕ ａ．ａ ｕ ｃ ｌｍ ｂ ｓ ｌ ｈ ｌ ａ ａ ｅｒ ｇ ａ ｏ ｏ ａ ｌ ｄｒ ｉ ｉ ａ ｔ ｎ ｃ ｙ ｏ ｌ ｄ
ｃ ｎｅ ｔ ｉ ｈ ｔｒｄ ｕ ａ ｕ ｌ ｕ Ｖ ． １ ｔ ｓ ｕ ｕ ｂ ｐ ｃ ｏ ｈ ｔｍｅｒ ｉ ｔｏ ｓ ｎ ｅ ｋ ｕ ｉ ｔ ｅ ａ ａ ｙ ｉ ｏ ｔｎ ｓ ｎ ｔｅ Ｐ ｅｉ ｉ ｍ ｑ ｉ ｎ ｍ ， ．ａ ｉ ｃ ｌ ｍ ｙ ｓ ｅ ｔ ｐ ｏｏ ｔ ｃ ｍｅ ｄ ，ａ ｄ ｔ ｎ ｍａ ｅ ｑ ａ ｔ ｉ ｎ ｌｓｓ ｉ ９ Ｆ ｕ ｒ ｙ ｈ ｈ ｌ ａｖ
由极 差 数 据 Ｋ 可 外取定容后的芦丁 ６ １ ｍ 分别置于 ６ 只试管中， 相应依 以提取 温度 对 提取 率 的影 响 最 大 ， 各 提 提 次加 人 浓 硫 酸 、 酸 一 镁 粉 、 Ｌ １ ＦＣ， 氨 水 、 见 ， 因子对 提 取 率 的影 响依 次 为 ： 取 温 度 、 取 盐 Ａ Ｃ ｅ １、 提取 时 间 、 提取 料液 比。直观分 析正 交试 验结果 ， ＮＯ ａ Ｈ进行反 应 ， 反应后 出现 明显 的颜 色 变化 。结 果 剂 、
病能 力与 自愈 能力 的作 用 ， 有 抗 衰老 、 节 内分 泌 （０５ 微升 ， 还 调 １－ ０ 上海联盛实验仪器厂 ） 。
和脂质代谢 、 促进肌 肉生长等功能…。此外 ， 还有抗 １３ 试 剂 ．
菌 、 制真 菌和 酪氨 酸 蛋 白激 酶 活性 、 抑 改善 皮 肤 增强 芦 丁 （ 化试剂 ， 生 中国药 品生 物 制 品检 定所 ） 无 ； 美 容 的功能 。本 文对 蕨 菜 黄酮 的提 取及 其 含 量 测定 水 乙醇 、０ 乙醇 、 油 醚 、 ７％ 石 甲醇 、 乙酸 、 粉 、 硫 冰 镁 浓
分别取最佳条件下 的粗黄酮液和 ０ ０ ｇ ． １ 芦丁用 平 。 ． ７ Ｏ乙醇定 容至 １ ０ ｌ进行 下 面的定性 颜色反 应 。再 ３ ２ 正交试 验结 果及直观 分析 ０ｍ ， 由表 ２ 表 ３可看 出 ， 、 在正 交 试验 的 ４个 因子 中 ， 分别取 定容后 粗 黄酮液 １ １ 别置 于 ６只试 管 中 ， ｍ分 件 的选 择 ． ３ １ １ 最佳提 取剂 浓度 的选 择 ．． 料液 比 １ ２ 、 ：５ 水
浴 ８。 提取 时间 ， 不 同乙醇浓 度提取 剂 ３％、 ＯＣ 对 ０ ５ ％ 、０ 、０ 进 行 平 行 试 验 ， 其 总 黄 酮 分 别 为 ０ ７％ ９％ 测
ｃ ｌ ｒｔ ｎ ｒａ ｔ ｎ ｏ ｏ ａｉ ｅ ｃ ｉ ｏ ｏ
Ｕ ． ２紫外可见分光光度计 （ Ｖ７ ５ 上海精 密科学仪 蕨菜， 学名 Ｐｅｄ ｍａｕｉ ｍ ｖｔ１ｉ ｃｌ 别 ｔｉ ｑｉ ｕ ． ｔ ｓ ｕ ｒｕ ｌ ｎ ａ ａｕ ｕ ｍ， 名拳头菜 、 龙爪菜、 如意菜等 ， 属于凤尾蕨科。因其生 器 有 限公 司 ） Ｚ －Ａ 型 手 提 式 紫 外 分 析 仪 （５ ｎ ；Ｆ５ ２４ ｍ， 长在 山林野地 ， 少受污染 ， 并富含对人体有益的营养 上 海 国麟 实 验设 备有 限公 司 ） ＨＨ 数 显 恒 温 水 浴 ； － ４ 成分 ， 而备受人们青睐。但是有关蕨菜含黄酮类物质 锅 （ 国华电器有 限公 司） Ｆ ４ ０ ；Ｗ－ Ａ倾 斜式 高速万能 ０ 的研究却鲜见报道 。黄酮类物质具有提高人体 的抗 粉碎机 （ 北京 中兴伟业仪器有限公 司） 微量移液器 ；
ＺＨＡＯ — ｎ Ｌｉｐｉ ｇ，ＬＩＸｉ ｎ ａｇ
（ ｅａｍ ｎ ｏＢｏｅｎｌ ｙ ｆ ｉ ａｇ ｇｃｌｒ ｏｅ ，ｉ ａｇ ６００ Ｃ ｉ ） Ｄｐｒ ｅｔｆ ｉｅｈｏ ｇ ｏ Ｘｎ ｎ ｒｕｕ ｌ ｌｇ Ｘｎ ｎ ４０ ，ｈ ａ ｔ ｔ ｏ ｙ Ａ ｉ ｔａ Ｃ ｌｅ ｙ ４ ｎ
见表 ４ 。 ２ ４ 黄酮 含量 的测定 Ｌ ． ３
确定最 佳工 艺条件 为 Ａ ＢＣ Ｄ ， ， 。 即提 取 剂用 ７ ％ 乙 ０
醇溶液 ， 液 比 １３ （ ｍ ） 提取 时 间 ２ ， 取 温度 料 ：５ １ ， ｈ提
表 ２ 各 因子 极 差
０ 用分光 光度法 测定 黄酮含 量 ， 利用 黄酮类 化合 ８ ℃ 及