实验七杀菌剂生物活性测定方法――抑菌圈法

抑菌圈法实验流程
（1）实验准备：准备相关菌种（二氧化硫克隆体、硝酸盐克隆体等）和试剂；准备法兰管材质的抑菌圈，在它的内部划分两个回路；抑菌圈内
装有空气泵，来实现对空气进行不同强度的抽压，以达到抑菌目的；
（2）实验方法：将抑菌圈里装有的菌种悬液加入到两个回路中，使
用空气泵来实现抽压；在调节空气流量的情况下，可以观察抑菌圈法对菌
种的抑制情况；
（3）数据分析：当抑菌圈的空气流量调节到一定程度时，可以观察
到抑菌圈内的菌种数量有明显的下降；
（4）讨论：抑菌圈法是一种新型的抑菌方法，它可以有效地抑制菌
种的繁殖，有效地减少菌种的数量，保护人类环境。

但是，抑菌圈法也有
一定的缺点，抽压太大会导致菌种基因组的变异，并且会产生抗性菌株，
同时也会使抑菌方法失效。

日化产品长效抑菌效果的评价方法一、微生物培养法微生物培养法是通过将一定量的日化产品加入培养基中，然后接种微生物，在一定温度下培养一段时间后，观察和测量生长的菌落数来评价抑菌效果。

该方法可以直观地反映微生物的生长情况，从而判断抑菌效果。

二、抑菌圈法抑菌圈法是在琼脂平板上划线接种已知菌种，然后将待测的日化产品涂布于平板上，观察抑菌圈的大小来判断抑菌效果。

该方法简单易行，适用于表面抑菌剂效果的测定。

三、重量法重量法是通过测量抑菌前后样品的质量变化来评价抑菌效果。

该方法适用于能够去除微生物的日化产品效果的测定，如某些洗手液、清洁剂等。

四、表面观察法表面观察法是通过观察实验前后样品表面的变化来判断抑菌效果。

该方法适用于表面杀菌剂效果的测定，如某些消毒液、抗菌湿巾等。

五、残留量法残留量法是通过测量抑菌后样品中有效成分的残留量来判断抑菌效果。

该方法适用于能够定量检测有效成分的日化产品效果的测定。

六、计时法计时法是在一定的时间内，观察抑菌剂对微生物生长的抑制作用，通过比较抑菌剂处理组和对照组微生物的生长情况来判断抑菌效果。

该方法适用于能够观察到微生物生长变化的抑菌剂效果的测定。

七、反复实验法反复实验法是在相同条件下进行多次重复实验，取平均值作为实验结果，以提高实验的准确性和可靠性。

该方法适用于任何需要重复实验的抑菌剂效果的测定。

八、质量控制法质量控制法是通过建立质量控制标准，对实验全过程进行质量监控，以保证实验结果的准确性和可靠性。

该方法适用于任何需要保证实验质量的抑菌剂效果的测定。

九、微生物计数法微生物计数法是通过在琼脂平板上接种一定量的待测微生物样品，在一定温度下培养一段时间后，对菌落进行计数来判断抑菌效果。

该方法适用于能够进行微生物计数的抑菌剂效果的测定。

一、实验目的本实验旨在通过抑菌圈实验，观察不同抗生素对特定细菌的抑菌效果，了解抗生素的抗菌活性，并学习如何通过抑菌圈的大小判断细菌对抗生素的敏感性。

二、实验原理抑菌圈实验是微生物学中常用的方法之一，用于检测抗生素对细菌的抑制作用。

实验原理基于抗生素对细菌生长的抑制作用，当抗生素与细菌接触时，细菌的生长会受到抑制，从而在含有抗生素的培养基上形成一个无细菌生长的区域，即抑菌圈。

抑菌圈的大小可以反映抗生素的抗菌活性，通常抑菌圈越大，说明抗生素的抗菌活性越强。

三、实验材料与仪器1. 材料：- 细菌菌株：金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）- 抗生素：青霉素、红霉素、庆大霉素、链霉素- 琼脂培养基- 牛肉膏蛋白胨培养基- 水浴箱- 滴管- 铅笔- 玻璃板2. 仪器：- 培养箱- 电子天平- 灭菌器四、实验步骤1. 制备培养基：- 称取牛肉膏蛋白胨培养基，加入适量的蒸馏水，溶解后用电子天平称量，使培养基浓度为10g/L。

- 将溶解后的培养基分装至锥形瓶中，每瓶100mL，121℃高压灭菌15分钟。

- 待培养基冷却至50℃左右，加入琼脂粉，充分搅拌均匀。

- 将琼脂培养基倒入培养皿中，待其凝固。

2. 接种细菌：- 将金黄色葡萄球菌接种至牛肉膏蛋白胨培养基中，37℃培养24小时。

3. 制备抗生素纸片：- 将抗生素粉末用生理盐水溶解，配制成一定浓度的溶液。

- 用滴管将溶液滴加到无菌滤纸上，使滤纸充分浸润。

- 将滤纸晾干，制成抗生素纸片。

4. 抑菌圈实验：- 将制备好的琼脂培养基上的细菌菌落刮去，并用无菌镊子将抗生素纸片贴在培养基表面。

- 将培养皿倒置放入培养箱中，37℃培养24小时。

5. 观察与记录：- 观察培养皿中抗生素纸片周围是否形成抑菌圈，并记录抑菌圈的大小。

五、实验结果与分析1. 实验结果：- 青霉素：抑菌圈直径为15mm- 红霉素：抑菌圈直径为10mm- 庆大霉素：抑菌圈直径为20mm- 链霉素：抑菌圈直径为8mm2. 结果分析：- 根据抑菌圈的大小，可以判断金黄色葡萄球菌对不同抗生素的敏感性。

2.1.1制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。

取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。

经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。

2.1.2抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。

同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。

切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。

抑菌圈法实验流程
实验目的：通过抑菌圈法检测不同抗生素对细菌的敏感性，为临床治疗提供参考依据。

实验原理：利用纸片或圆筒在琼脂平板上制造抑菌圈，测定不同药物对细菌的抑制能力。

当细菌被抗生素抑制生长时，抑菌圈周围的菌落会出现明显的清晰区域，即抑菌圈。

抑菌圈大小与细菌对该药物的敏感性成正比。

实验步骤：
1. 培养细菌：选取待测菌种，在无菌条件下接种于琼脂平板上，进行预培养。

2. 制备药物纸片：将不同抗生素药物浸泡在无菌纸片中，使纸片充分吸收药物。

3. 在琼脂平板上制造抑菌圈：用无菌铁环或无菌棉签将药物纸片放置于琼脂平板表面，轻轻压实，使药物充分扩散。

然后在纸片周围接种待测菌种，使其均匀生长。

4. 培养细菌：将琼脂平板倒置，放入培养箱中，在适宜的温度下培养细菌。

5. 观察抑菌圈：经过一定时间的培养，观察琼脂平板上细菌的生长状态，记录不同药物纸片周围的抑菌圈大小和形态。

6. 结果分析：根据抑菌圈的大小和形态，判断该菌株对不同药物的敏感性，为临床治疗提供参考。

实验注意事项：
1. 所有操作均在无菌条件下进行，避免外界微生物的污染。

2. 选择合适的药物浓度，避免药物过浓或过稀而影响实验结果。

3. 操作时要注意卫生，避免药物接触到皮肤或口腔。

4. 实验后应及时处理琼脂平板和药物纸片，避免造成环境污染。

实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法work Information Technology Company.2020YEAR实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法一、实验目的学习并掌握杀菌剂的离体活性测定方法——抑菌圈法。

二、实验原理抑菌圈法即水平扩散法基本原理是在已接种供试菌的琼脂培养基上施以少量抗菌性物质或杀菌剂，使之接触培养基和病菌，经定温培养一定时间后，因药剂的渗透扩散作用，施药部位周围因杀死了病菌而抑制了其在培养基上的生长，从而产生了抑菌圈。

在一定范围内，抑菌圈直径的平方或面积与药剂浓度的对数呈直线函数关系，从而可比较供试样品杀菌活性大小。

其最大优点是精确度高，操作简单，能较快得出结果。

但测定结果受药剂溶解性和扩散能力影响很大，具一定局限性。

根据药剂施加在琼脂培养基表面方式不同，又分为管碟法（牛津杯法）、滤纸片法、孔碟法、滴下法等，其中以管碟法和滤纸片法应用最广。

三、实验材料供试药剂：速克灵或扑海因。

供试病原菌：番茄灰霉病菌。

实验器材：无菌水、无菌接种针、灭菌三角瓶、玻璃珠、灭菌双层纱布、75%酒精棉球、消毒摄子、移液管、试剂瓶、吸耳球、超净工作台、胶头滴管、尺子。

四、实验方法采用管碟法。

将供试药剂加于放置在琼脂培养基表面的用不锈钢制成的小圆筒（又称为牛津杯，一般为外径8 mm，内径6 mm，高10 mm）内，定温培养一定时间后测量抑菌圈大小。

1．配制药液：用灭菌蒸馏水将供试药剂配成一系列梯度浓度，一般5-7个浓度。

灭菌蒸馏水为对照。

2．制备一定“浓度”的供试菌悬浮液：如真菌，则宜用孢子悬浮液。

在培养好的菌种上倒入10 mL灭菌水，用接种针轻轻刮动平面孢子悬浮，倾于灭菌三角瓶内（事先装数粒玻璃珠）摇动5 min，将孢子悬浮液用灭菌双层纱布过滤入另一灭菌三角瓶内。

用低倍（15×20倍）显微镜检查，调节孢子浓度，每视野80-100个孢子为宜；以上操作应在无菌条件下进行，动作要迅速准确。

农药生物活性测定实验指导游红编实验一供试目标昆虫的饲养——棉铃虫的饲养一、实验目的：1、明确标准目标昆虫饲养在生物测定中的意义；2、了解常见目标昆虫的饲养条件及方法；3、学习棉铃虫的饲养方法。

二、实验原理：杀虫剂生物测定必须使用大量、群体整齐、健康程度一致，龄期一致的标准目标昆虫，才能保证对杀虫剂毒力的反应准确。

因此，进行杀虫剂生物测定必须采用人工饲养标准目标昆虫，以保证供试昆虫的充分供应，这是农药毒力试验工作中的最基本的组成部分。

饲养目标昆虫的种类，除采用农作物害虫外，仓库害虫、卫生害虫及其他繁殖力强，便于饲养的昆虫也可采用，通过饲养条件的控制，促使供试目标昆虫尽量达到生理状况一致，以减少试验中的误差。

棉铃虫（Helicoverpa armigera H.）属鳞翅目夜蛾科。

食性杂，可长年饲养。

但因幼虫在三龄期以后有相互残杀习性，故必须单头饲养。

对该虫可采用天然植物饲料，如棉蕾铃、青豌豆、新鲜玉米和辣椒等。

若连续大量饲养，须用人工饲养。

三、主要仪器及试材：1、试虫：棉铃虫；2、饲养用具：养虫室，培养皿（15cm），培养皿（5cm）,养虫缸，纱布等。

3、饲料：（1）、饲料组成：熟大豆粉（g）20.0 玉米粉（g）30.0大麦粉（g）30.0 抗坏血酸（g） 1.0干酵母（g）8.0 琼脂（g） 3.5苯甲酸钠（g）0.8 棉油(ml) 0.536％醋酸(ml) 6.0 10％甲醛(ml) 1.0水(ml) 200(2)、配制方法：取总水量30％的水，加入玉米粉等成分搅拌；另取70％的水，以溶解琼脂，冷却至70℃时与上述成分混合搅拌；饲料均匀倒入培养皿（15cm）内，厚度 1.0——1.5cm，冷却后备用。

四、实验方法与步骤：1、饲养条件：养虫室温度保持26——28℃，相对湿度60%——70%，12小时光照。

2、饲养方法：（1）、在培养皿（16cm）放入约0.3——0.5mm厚的饲料若干块，将附有卵块的纱布放入皿内，用黑布将皿口封住，布上压玻璃板，缸下部对着光源，孵化的幼虫可很快到饲料上取食。

抑菌圈法实验流程
抑菌圈法是一种用于评价抗菌剂和抗微生物物质活性的方法。

其实验流程如下：
1. 准备培养基和细菌：选取合适的培养基，接种待测菌株，培养至适宜的生长期。

2. 稀释菌液：将培养的菌液按一定比例稀释至一定浓度，以便于后续实验操作。

3. 制备平板：将准备好的培养基倒入通气性好的培养皿中，待其凝固后，以均匀的方式涂布已稀释好的菌液，让其在平板上覆盖均匀。

4. 加入试剂：将待测药物或化合物加入到培养皿上，让其在平板上扩散均匀。

5. 孵育：将制备好的培养皿，反转放置在孵化箱中，以适合待测菌株的生长温度和时间进行孵育。

6. 读数：观察培养皿上的菌落是否受到药物或化合物的抑制，并通过测量抑制菌落周围形成的清晰区域（抑菌圈）的直径，来评价药物或化合物的抗菌活性。

需要注意的是，实验中要注意消毒操作、依照标准化操作程序进行实验、精确测量并记录数据，以得到可靠的实验结果。

抑菌圈实验说明抑菌圈法是衡量杀菌防霉剂效果的一种方式，主要用于测定杀菌防霉剂对细菌、霉菌、酵母菌的抑菌作用，是定性或半定量的方法。

通过杀菌防霉剂在琼脂平板上的扩散能力来初步筛选更有效的杀菌防霉剂品种。

用具和材料精品文档，你值得期待霉菌培养皿，无菌吸管（或针筒），圆片滤纸（直径2cm），带玻璃珠的无菌水，带过滤漏斗的三角牌，镊子，接种针（环），熔化状态的琼脂培养基（最好保温于45℃左右水浴中），一定浓度的药剂，供试验用的菌种。

试验过程1.用接种环挑取各试管斜面的菌种于带玻璃珠的无菌水中，用手振荡数分钟使孢子分散，过滤后制成混合孢子悬液。

2.用无菌吸管（或针筒）向各培养皿中注入一定浓度的混合孢子悬浮液0.5mL。

3.向各培养皿内注入15Ml~20ml的熔化状琼脂培养基（约45℃），将菌液与培养基混合均匀，待其冷却。

4.用镊子将圆片滤纸在不同浓度的防霉剂中浸渍片刻，取出置于带菌培养基平板的中央，盖上盖子5.置适宜温度下，培养2~3d，观察滤纸片圆片周围抑菌圈的有无及大小。

注意事项1.所有的操作用具和材料都要事先做灭菌处理，操作必须在无菌室（或无菌箱）内于火焰旁进行。

2.霉菌、细菌、酵母菌等各种微生物都必须分别配置混合菌液，即这里指的混合菌液是霉菌或酵母菌等诸种菌的分别混合液，并非霉菌、细菌和酵母菌的混合液。

3.混合菌液的浓度一般为106~108cfu/mL.4.倒入培养皿的琼脂培养基温度不能太高（一般为45℃左右），否则会引起微生物死亡。

也不能太低，因为琼脂会很快凝结，以致搅拌不均匀，影响试验结果。

5.各种微生物的最适生长温度不同（例如霉菌一般为25~30℃，细菌一般为32~37℃等），恒温培养时宜分开放置。

结果评判由于滤纸圆片所吸附的药液慢慢向四周扩散，因此在滤纸片的周围就出现清晰的抑菌圈（加入该防霉剂对供试菌有抑制效果）。

抑菌圈的大小代表药剂抗菌力的高低。

在一定的药剂浓度范围内，药剂的浓度越高则抑菌圈的直径越大。

实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法摘要：本实验主要研究了七杀菌剂的生物活性测定方法，抑菌圈法。

该方法通过在琼脂平板上播种细菌，再在平板上施加一定浓度的七杀菌剂，观察并测量周围的抑菌圈直径，从而评估七杀菌剂对细菌的抑制作用。

实验结果表明，抑菌圈直径与七杀菌剂浓度呈正相关关系，且抑菌圈直径越大，表示七杀菌剂的抑菌效果越好。

通过该方法可以快速、简便地评估七杀菌剂的生物活性，为进一步研究其抗菌机制和优化配方提供了参考。

关键词：七杀菌剂；抑菌圈法；生物活性；抑菌圈直径一、引言七杀菌剂是一类特殊作用机制的植物杀菌剂，具有广谱杀菌、低滴效、低残留、不发生抗性等优点，被广泛应用于农业防病生产中。

评估七杀菌剂的生物活性是研究抗病机理、筛选优良品种和优化配方的重要手段。

目前，常用的七杀菌剂生物活性测定方法包括最小抑菌浓度法、抑菌圈法和微量滴定法等。

本实验采用抑菌圈法对七杀菌剂的生物活性进行测定，该方法简单易行、时间短，能够客观直观地评估抗菌剂的抑菌效果，被广泛应用于杀菌剂的筛选和评估中。

二、材料与方法2.1实验材料-七杀菌剂：根据实验需要选择合适的七杀菌剂；-革兰氏染色培养基：包括琼脂和所需培养成分；-细菌：根据实验需要选择合适的细菌菌种；- 培养皿：直径90 mm的培养皿；-无菌棉花：消毒后用于吸水；-直尺：用于测量抑菌圈的直径。

2.2实验步骤步骤一：制备琼脂平板1)按照革兰氏染色培养基的配方将琼脂和所需培养成分溶解在适量的蒸馏水中；2)加热溶液，使其均匀溶解；3)微量加热，使溶液达到沸腾状态；4)关火，冷却至50-60°C左右；5)待溶液冷却至室温，但还能滴落时，加入适量的细菌菌液；6)快速均匀摇晃培养皿，使菌液均匀分布；7)等待琼脂凝固，形成琼脂平板。

步骤二：制备七杀菌剂根据使用七杀菌剂的需要，按照使用说明书中的配方调配适量的七杀菌剂浓度。

步骤三：进行抑菌实验1)在琼脂平板表面平均涂布一层细菌菌液；2)在涂布完成后，使用消毒的锥形杯钻按规定距离在琼脂平板上扎孔；3)将七杀菌剂溶液滴入孔内，注意控制滴入的量和浓度；4)将培养皿倾斜，使溶液均匀涂布在琼脂平板上；5)撤去孔内的溶液，用无菌棉花吸干孔内的溶液；6)将培养皿倒置放置于恰当的环境中进行培养；7)培养一定时间后，观察并测量抑菌圈的直径。

抑菌试验方法抑菌圈测量是微生物分析的经典方法。

它是利用抑菌物质在涂布特定试验菌的琼脂培养基内成球形立体状扩散，抑制试验菌的繁殖，在抑菌物质的周围形成透明圈，即抑菌圈。

管碟法测定生物效价：利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，采用量反应平行线原理的设计，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。

制药企业，药检所常常进行抗生素的效价测定，最普遍的方式就是管碟法测定生物效价。

管碟法测定生物效价实验中存在大量抑菌圈测量工作，常规都是用游标卡尺手工测量抑菌圈的直径，如今可以用仪器自动进行分析，提高检测精度，减少测量误差。

迅数-自动抑菌圈测量系统是通过CCD 采集数字图像后，进行自适应差分滤波预处理，采用改进的四叉树交叉熵分割算法进行准确快速的分析，精确检测出抑菌圈直径数据，最后对数据建模统计，自动得到分析结果。

所有分析过程只要一秒就可以完成。

手动测量存在的问题有：1. 重现性差，准确性不够：同一培养皿，不同的人测量结果有差异；2. 当抑菌圈呈卵原形、边缘模糊或出现双层圈时，边界确定的人为误差大；3. 一个培养皿内有大量抑菌圈时，如做菌种筛选时，无法人工测量；自动抑菌圈测量的好处在于：快速、精度高、重现性好、操作简单。

示意;将试样剪成直径为2-3公分的园片,紧紧平贴在已接种试验菌种的FDA琼脂培养基表面上,经37℃24小时培养,培养基表面上长出密密麻麻的菌落,?而试样周围有一个不长菌落的"晕圈".测量晕圈环的宽度,用毫米表示.(如果没有晕圈?,应揭开试样,检查样品复盖若无菌落可视为样品具有非溶出性抗菌作用.应进一步用摇晃烧瓶?--菌落数测定法评价效将细菌植入或嫁接入营养琼脂培养基的表面，通过在营养琼脂培养基上形成的抑制圈来评估其抗菌效果。

目前普遍采用该方法来观测抗菌素的抗菌效果。

图1描述了抑菌圈测试方法。

图1: 涂层后基于抑菌圈的抗菌测试日本工业标准(JIS)Z2801:20009和ASTME2180-0110是目前使用最广泛的测试评估方法。

抑菌圈实验知识点(一)抑菌圈实验什么是抑菌圈实验？抑菌圈实验是一种常用的微生物学实验方法，用于测定不同物质对细菌生长的抑制能力。

通过在寒天培养基上均匀涂敷已经培养好的细菌，并在上面滴加待测物质溶液，观察并测量细菌生长受到抑制的范围。

实验步骤1.准备培养基：将寒天粉加入蒸馏水中溶解，并煮沸消毒，冷却至约50℃时均匀分装到培养皿中。

2.培养细菌：将待测的细菌涂布在寒天培养基表面，使其均匀生长。

3.添加抑制物：在涂布好细菌的寒天培养基上滴加待测物质溶液，通常是药物或化合物。

4.孵育：将培养皿倒置放在恒温培养箱中，经过一段时间后细菌会在寒天培养基上形成菌落。

5.观察与测量：观察并测量细菌生长抑制的范围，即抑菌圈的直径。

实验结果解读•抑菌圈直径的大小可以反映待测物质对细菌的抑制能力，直径越大表示抑制能力越强。

•如果抑菌圈的直径接近或超过寒天培养基的直径，说明待测物质具有较强的杀菌或抑菌作用。

•如果没有出现抑菌圈，说明待测物质对所选细菌无抑制作用，或者浓度过低。

实验注意事项•实验操作要严格遵守无菌技术，避免细菌的外源性污染。

•涂布细菌时要均匀、细心，避免形成片状或丛状生长。

•添加待测物质时要注意均匀滴加，避免产生溢出和扩散。

•移动培养皿时要轻拿轻放，尽量不晃动，以避免菌落的移位或扩散。

•实验后要妥善处理寒天培养基和培养皿，避免细菌的传播。

应用领域抑菌圈实验广泛应用于药物研发、食品安全检测、环境污染监测等领域。

通过该实验可以初步评估化合物或药物的抗菌能力，并为后续进一步研究提供参考依据。

结语抑菌圈实验是一种简单、直观的实验方法，对于评估物质的抗菌能力有着重要的意义。

通过了解抑菌圈实验的基本原理和操作步骤，我们可以更好地理解该实验在微生物学研究中的应用和意义。

实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法一、实验目的学习并掌握杀菌剂的离体活性测定方法——抑菌圈法。

二、实验原理抑菌圈法即水平扩散法基本原理是在已接种供试菌的琼脂培养基上施以少量抗菌性物质或杀菌剂，使之接触培养基和病菌，经定温培养一定时间后，因药剂的渗透扩散作用，施药部位周围因杀死了病菌而抑制了其在培养基上的生长，从而产生了抑菌圈。

在一定范围内，抑菌圈直径的平方或面积与药剂浓度的对数呈直线函数关系，从而可比较供试样品杀菌活性大小。

其最大优点是精确度高，操作简单，能较快得出结果。

但测定结果受药剂溶解性和扩散能力影响很大，具一定局限性。

根据药剂施加在琼脂培养基表面方式不同，又分为管碟法（牛津杯法）、滤纸片法、孔碟法、滴下法等，其中以管碟法和滤纸片法应用最广。

三、实验材料供试药剂：速克灵或扑海因。

供试病原菌：番茄灰霉病菌。

实验器材：无菌水、无菌接种针、灭菌三角瓶、玻璃珠、灭菌双层纱布、75%酒精棉球、消毒摄子、移液管、试剂瓶、吸耳球、超净工作台、胶头滴管、尺子。

四、实验方法采用管碟法。

将供试药剂加于放置在琼脂培养基表面的用不锈钢制成的小圆筒（又称为牛津杯，一般为外径8 mm，内径6 mm，高10 mm）内，定温培养一定时间后测量抑菌圈大小。

1．配制药液：用灭菌蒸馏水将供试药剂配成一系列梯度浓度，一般5-7个浓度。

灭菌蒸馏水为对照。

2．制备一定“浓度”的供试菌悬浮液：如真菌，则宜用孢子悬浮液。

在培养好的菌种上倒入10mL灭菌水，用接种针轻轻刮动平面孢子悬浮，倾于灭菌三角瓶内（事先装数粒玻璃珠）摇动5min，将孢子悬浮液用灭菌双层纱布过滤入另一灭菌三角瓶内。

用低倍（15×20倍）显微镜检查，调节孢子浓度，每视野80-100个孢子为宜；以上操作应在无菌条件下进行，动作要迅速准确。

3．浇制双层培养基：将装在试管内已灭菌的清水琼脂培养基10 mL溶化后，趁热倒入9 cm直径培养皿中，水平冷凝。

将适合供试菌生长发育的100 mL培养基熔化后冷至45-50℃左右后，迅速吸取10 mL菌液加入培养基中，充分混匀后，立即吸取5mL 带菌培养基加在已凝固的清水琼脂培养基上，并使之均匀地铺在底层上。

抑菌圈实验的步骤和原理
抑菌圈实验是指通过测量细菌生长的最小抑菌浓度（MIC）来衡量细菌对供试菌的抑制作用的一种方法。

抑菌圈实验分为平板法和管碟法两种。

平板法：将试验菌（通常是大肠杆菌）接种到含有细菌的营养琼脂培养基中，使菌体繁殖生长形成菌落群，再将菌落群中不同的细菌接种到含有抑菌圈（直径约5 mm）的平板上，培养一定时间后，测量抑菌圈直径。

一般把抑菌圈直径大于5 mm作为阳性。

将此结果与其他菌种进行比较，即可鉴别出试验菌。

管碟法：把试验菌（通常是金黄色葡萄球菌）接种到含有抑菌圈的营养琼脂培养基中，在无菌条件下，使菌体繁殖生长形成菌落群，再将此结果与其他菌种进行比较即可鉴别出试验菌。

抑菌圈实验的步骤如下：
1.灭菌
将经灭菌处理过的试验菌接种到含有营养琼脂培养基的管碟板上。

用接种环套在管碟板外，先把管碟板放入37℃培养箱内培养一天（约24小时）后取出，将管碟板放回灭菌箱内灭菌，再把管碟板放回菌液培养箱中培养。

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一、实验目的1. 了解抑菌圈实验的基本原理和操作步骤。

2. 通过抑菌圈实验，探究不同抗生素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果。

3. 掌握抑菌圈直径的测量方法，并分析抗生素的抑菌活性。

二、实验原理抑菌圈实验是微生物学中常用的一种实验方法，用于测定抗生素对细菌的抑菌效果。

实验原理是：将含有抗生素的纸片放置在已接种有细菌的琼脂平板上，抗生素会通过扩散作用渗透到琼脂中，抑制细菌的生长，形成透明圈，即抑菌圈。

抑菌圈的大小可以反映抗生素的抑菌活性。

三、实验材料与仪器1. 材料：金黄色葡萄球菌、青霉素、链霉素、头孢噻肟钠、肉汤培养基、琼脂、无菌生理盐水、无菌棉签、无菌镊子、无菌培养皿、无菌滤纸、酒精灯、放大镜等。

2. 仪器：恒温培养箱、天平、电子显微镜、显微镜等。

四、实验方法1. 制备菌悬液：将金黄色葡萄球菌接种于肉汤培养基中，37℃恒温培养24小时，用无菌生理盐水调整菌悬液浓度为1×10^8 CFU/mL。

2. 准备平板：将熔化的琼脂倒入培养皿中，待凝固后，用无菌棉签将菌悬液均匀涂布于平板表面。

3. 制备抑菌圈：将含有不同抗生素的纸片分别放置于平板表面，用无菌镊子轻轻按压使其与琼脂表面紧密接触。

4. 培养平板：将平板倒置放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。

5. 测量抑菌圈直径：用放大镜观察平板，用尺子测量抑菌圈的直径，取平均值。

五、实验结果与分析1. 实验结果：实验结果显示，青霉素、链霉素、头孢噻肟钠对金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌作用，抑菌圈直径分别为15mm、12mm、10mm；而其他抗生素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果较差。

2. 结果分析：抑菌圈直径越大，说明抗生素的抑菌活性越强。

根据实验结果，青霉素、链霉素、头孢噻肟钠对金黄色葡萄球菌的抑菌活性较强，可作为治疗金黄色葡萄球菌感染的首选抗生素。

六、实验结论通过抑菌圈实验，我们成功探究了不同抗生素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果。

实验结果表明，青霉素、链霉素、头孢噻肟钠对金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌作用，可作为治疗金黄色葡萄球菌感染的首选抗生素。