Imatinib_Mesylate_HNMR_05482_MedChemExpress

莫博赛替尼化学结构全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：莫博赛替尼（Imatinib，商品名格列卫）是一种靶向治疗白血病的药物，也被用于治疗一些其他类型的癌症。

它是通过靶向特定的蛋白质，从而阻断癌细胞的生长和扩散。

莫博赛替尼的化学结构是一种非常复杂的有机分子，其分子式为C29H31N7O，分子量为493.604克/摩尔。

莫博赛替尼的化学结构包含一个核心环结构，由苯环和嘧啶环连接而成。

苯环是由六个碳原子和六个氢原子组成的环状结构，而嘧啶环是由一个氮原子和四个碳原子组成的环状结构。

这两个环通过一个氮原子相连，形成了一种特殊的结构，这种结构对于莫博赛替尼的药效非常重要。

莫博赛替尼在体内主要靶向作用于一种叫做BCR-ABL融合蛋白的蛋白质。

这种融合蛋白质是一种异常的蛋白质，由Bcr（一种信号传导蛋白）和Abl（一种酪氨酸激酶）两种蛋白质的部分结构融合而成。

这种异常蛋白质的产生是由于某些白血病细胞的染色体发生了特定的基因突变，导致Bcr和Abl两种基因相互融合。

而莫博赛替尼正是针对这种异常的蛋白质进行靶向治疗的。

莫博赛替尼的化学结构设计和药效机制是经过长期的研究和开发的。

科学家们通过不断的实验和研究，逐渐了解了白血病细胞的基因突变以及融合蛋白质的结构和功能特点。

通过对这些信息的深入研究，他们最终设计出了莫博赛替尼这种能够精准干预癌细胞生长的药物。

莫博赛替尼在临床应用中被证实具有显著的疗效，尤其是对于慢性髓细胞白血病（CML）和胃肠间质瘤（GIST）等罕见白血病和恶性肿瘤的治疗效果非常显著。

通过连续服用莫博赛替尼，患者的白血细胞数量可以得到控制，进而延缓疾病的进展并提高生存率。

莫博赛替尼的治疗效果和安全性已经得到了许多临床试验和长期随访的验证，被广泛应用于临床治疗。

莫博赛替尼是一种非常重要的抗癌药物，通过靶向作用于异常蛋白质来抑制癌细胞的生长和扩散。

其化学结构复杂且精确，对于白血病和其他类型的癌症具有显著的治疗效果。

5th Edition, revised in Dec, 2013（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）去甲肾上腺素(NA/NE)酶联免疫吸附测定试剂盒 使用说明书NA/NE (Noradrenaline/Norepinephrine) ELISA Kit 产品货号：E-EL-0047c使用前请仔细阅读说明书。

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叶雨萌，荣雨，李包娟，等. 石榴花水提物调节AHR/BNIP3改善糖尿病小鼠肝脏胰岛素信号[J]. 食品工业科技，2024，45（7）：320−327. doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023100075YE Yumeng, RONG Yu, LI Baojuan, et al. Pomegranate Flower Water Extract Modulates AHR/BNIP3 to Improve Hepatic Insulin Signaling in Diabetic Mice[J]. Science and Technology of Food Industry, 2024, 45(7): 320−327. (in Chinese with English abstract). doi:10.13386/j.issn1002-0306.2023100075· 营养与保健 ·石榴花水提物调节AHR/BNIP3改善糖尿病小鼠肝脏胰岛素信号叶雨萌，荣　雨，李包娟，周克春，张䶮之*（新疆医科大学药学院，新疆乌鲁木齐 830000）摘　要：目的：探讨石榴花水提物（pomegranate flower water extract ，PFW ）对2型糖尿病小鼠肝脏胰岛素信号传导的影响及机制。

方法：将C57BL/6J 随机分为正常组、模型组、二甲双胍组（Met ）、石榴花水提物低剂量组（PFWL ）和石榴花水提物高剂量组（PFWH ）。

连续给药11周后，称小鼠体质量，检测空腹血糖（FBG ）、胰岛素（INS ）、甘油三酯（TG ）和总胆固醇（TC ）的含量，计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR ）；苏木素-伊红（HE ）染色观察肝组织病理变化；Western blot 法检测肝组织中胰岛素受体底物1（IRS1）、p-IRS1（Ser307）、蛋白激酶B （AKT ）、p-AKT （Ser473）、糖原合成酶激酶-3β（Gsk3β）、p-Gsk3β（S9）、芳香烃受体（AhR ）、磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶（PEMT ）、Bcl-2/腺病毒E1B-19kDa 相互作用蛋白3（BNIP3）蛋白表达。

麻疯树叶提取物对恶性黑色素瘤A375细胞增殖抑制及诱导凋亡作用的影响 【编者按】：医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果的论说性文章。

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 麻疯树叶提取物对恶性黑色素瘤A375细胞增殖抑制及诱导凋亡作用的影响 作者：李星，唐琳，雷蕾，刘娟，陈放 【摘要】目的研究麻疯树叶提取物对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响。

方法用MTT法测定不同浓度麻疯树叶提取物对体外培养的人恶性黑色素瘤A375细胞增殖的抑制作用，采用倒置显微镜观察细胞形态学的改变，并用Annexin-V-FIFT/PI双染色法检测细胞的凋亡。

结果麻疯树叶提取物能抑制A375细胞增殖，诱导其凋亡，引起细胞形态学的改变，这些影响呈药物浓度剂量依赖性，并与药物作用时间正相关。

结论麻疯树叶提取物在体外对人恶性黑色素瘤A375细胞的增殖具有显著的抑制作用，并能诱导其发生凋亡。

 【关键词】麻疯树; 黑色素瘤A375细胞; 细胞增殖; 细胞凋亡 Abstract：ObjectiveTo investigate the anticancer effects of extract from leaves of Jatropha curcas L.on the inhibition of cell proliferation and apoptosis induction in human melanoma cell line A375 in vitro. MethodsThe A375 cells was cultured with different concentration of extract from leaves of Jatropha curcas L. The cell proliferation inhibition of A375 cells were measured by methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) colorimetric assay. The morphological changes of A375 cells were observed by the light microscope. The cell apoptosis ratio was assessed by Flow Cytometry with the Annexin-V-FIFT/PI affinity assay. ResultsExtract from Leaves of Jatropha curcas L.significantly inhibited the proliferation of A375 cells and it induced cell apoptosis and morphological changes in dose-and time-dependent manners. ConclusionExtract from leaves of Jatropha curcas L.can inhibit the cell proliferation and induce cell apoptosis of malignant melanoma cells. Key words：Jatropha curcas L.; A375 cells; Malignant melanoma cells; Cell proliferation; Cell apoptosis 麻疯树为大戟科(Euphorbiaceae)麻疯树属(Jatropha)植物，在亚洲、非洲和美洲的热带和亚热带地区广泛分布。

艾玛昔替尼化学结构艾玛昔替尼（Imatinib Mesylate），是一种口服的小分子靶向抗癌药物，属于酪氨酸激酶抑制剂。

它被广泛应用于慢性骨髓性白血病（CML）和胃肠道间质瘤（GIST）等肿瘤的治疗。

艾玛昔替尼的化学结构是一种咪唑基取代的苯甲酰胺类化合物。

它的分子式为C29H31N7O，相对分子质量为493.61。

艾玛昔替尼的结构中含有苯环、咪唑环和胺基等功能基团。

艾玛昔替尼通过抑制酪氨酸激酶（tyrosine kinase）的活性，从而干扰了癌细胞的信号传导通路，抑制了癌细胞的增殖和存活。

具体来说，艾玛昔替尼通过与BCR-ABL融合蛋白结合，阻断了BCR-ABL激酶的活性，从而抑制了CML细胞的增殖和存活。

此外，艾玛昔替尼还可以抑制肿瘤细胞中的KIT受体激酶，从而发挥对GIST 的治疗作用。

艾玛昔替尼的药物代谢途径主要是通过肝脏的细胞色素P450酶系统进行。

它主要经过CYP3A4酶代谢，形成活性代谢产物N-甲基艾玛昔替尼。

这些代谢产物具有较强的抗肿瘤活性，对于药物的治疗效果起到了重要的作用。

在临床应用中，艾玛昔替尼一般口服给药，每日一次。

由于其强烈的作用靶点选择性，艾玛昔替尼在治疗CML和GIST方面取得了显著的疗效。

然而，艾玛昔替尼也存在一定的副作用，如恶心、呕吐、腹泻等消化系统反应，以及水肿、皮疹、疲乏等全身反应。

此外，由于艾玛昔替尼的药物代谢途径主要经过肝脏，因此在用药过程中需要注意肝功能的监测。

尽管艾玛昔替尼在治疗白血病和肿瘤方面取得了巨大的成功，但也有部分患者出现耐药现象。

这主要是由于药物靶点的突变导致药物失效。

为了克服耐药问题，科学家们进行了大量的研究工作，开发了多种新型的靶向抗癌药物，如二代和三代BCR-ABL抑制剂。

这些药物在治疗耐药患者方面显示出了很大的潜力。

艾玛昔替尼作为一种重要的靶向抗癌药物，通过抑制酪氨酸激酶的活性，抑制了癌细胞的增殖和存活，取得了显著的疗效。

然而，其副作用和耐药问题仍然需要我们进一步研究和解决。

一甲基澳瑞他汀e 化学结构-概述说明以及解释1. 引言1.1 概述一甲基澳瑞他汀（Simvastatin）是一种广泛应用于临床治疗高胆固醇血症和心血管疾病的药物。

它属于被称为他汀类药物的一员，是一种竞争性抑制HMG-CoA还原酶的药物，通过降低胆固醇的合成来达到降低血浆胆固醇的效果。

随着现代生活方式的改变和不良饮食习惯的普遍存在，高胆固醇血症在全球范围内变得越来越普遍。

该疾病不仅与心血管疾病的发展密切相关，还可能导致其他严重的健康问题，如动脉粥样硬化和心肌梗死等。

一甲基澳瑞他汀由黄曲霉属真菌产生，即通过天然发酵法生产得到。

然而，为了提高其药代动力学性质和治疗效果，科学家们通过改进和优化合成方法，合成了合成一甲基澳瑞他汀。

现在，一甲基澳瑞他汀已经成为一种被广泛研究和临床使用的药物。

在本篇文章中，我们将介绍一甲基澳瑞他汀的化学结构、合成方法、性质与用途等方面的内容。

通过深入了解一甲基澳瑞他汀，我们可以更好地理解它在治疗高胆固醇血症和心血管疾病方面的作用机制，并有望对该药物的未来发展提供一定的启示。

在接下来的章节中，我们将详细介绍一甲基澳瑞他汀的化学结构、合成方法以及它在临床上的广泛用途。

最后，我们将总结这篇文章的主要观点，并对一甲基澳瑞他汀的未来进行展望。

通过本文的阅读，读者将能够全面了解一甲基澳瑞他汀，为今后的相关研究和临床实践提供有益的指导与参考。

文章结构部分的内容如下：1.2 文章结构本文主要包含以下几个部分：引言、正文和结论。

引言部分通过概述一甲基澳瑞他汀的化学结构和合成方法，介绍背景知识和研究意义。

此外，本部分还会明确文章的目的，即对一甲基澳瑞他汀进行全面的分析和探讨。

正文部分将围绕一甲基澳瑞他汀展开讨论。

首先，我们将介绍一甲基澳瑞他汀的化学结构，包括其分子式、分子量等信息，并通过图表等形式直观地展示其结构。

其次，我们将详细介绍一甲基澳瑞他汀的合成方法，包括起始原料的选择、反应步骤和条件等。

大鼠内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin) 的含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin) 水平。

用纯化的大鼠内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin) ，再与HRP标记的内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin) 抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin) 呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin) 浓度。

注意事项：1．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

2．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。

一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

5．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。

如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

希美替尼结构式-概述说明以及解释1.引言1.1 概述希美替尼（Imatinib）是一种广泛应用于白血病和其他恶性肿瘤治疗的靶向治疗药物。

它是第一代酪氨酸激酶抑制剂，通过抑制异常的酪氨酸激酶活性，阻止了癌细胞的生长和扩散。

希美替尼已被证明在治疗慢性髓性白血病（CML）、急性淋巴性白血病（ALL）和一些消化道肿瘤等疾病中具有显著的疗效。

随着对希美替尼的深入研究，人们对其治疗机制和潜在的临床应用也有了更深入的了解。

本文将着重介绍希美替尼的化学结构、药理作用以及临床应用，以期为读者提供更全面的了解和认识。

1.2 文章结构文章结构部分主要是说明整篇文章的结构安排，帮助读者更好地理解文章的内容组织。

本文的结构分为引言、正文和结论三个部分。

引言部分主要包括概述、文章结构和目的三个方面。

在概述部分，会简要介绍希美替尼这种药物的背景和重要性。

文章结构部分即是本段，将会介绍整篇文章的结构安排。

目的部分则明确了本文撰写的目的和意义。

正文部分包括了希美替尼的化学结构、药理作用以及临床应用三个方面，分别介绍了这种药物的化学成分、作用机制以及临床使用的情况。

结论部分则对全文的内容进行总结，强调希美替尼的重要性和未来发展的展望。

同时，通过结论部分可以让读者更清晰地理解全文的核心意义和价值。

最后，结尾的结束语也是文章的收尾部分，可以对全文进行一个简短的总结或思考。

整个文章结构分明，逻辑清晰，能够很好地引导读者了解希美替尼这一药物的相关知识和重要性。

1.3 目的：本文的主要目的是详细介绍希美替尼这一药物的化学结构、药理作用以及临床应用，以便读者能够更全面地了解这一重要药物。

通过对希美替尼的研究和分析，可以帮助读者更好地认识并理解希美替尼在临床上的作用机制和应用领域，为医学研究和医疗实践提供参考和指导。

希美替尼作为一种重要的药物，对于肿瘤治疗以及其他相关疾病的治疗具有重要的意义，因此深入了解和研究希美替尼，可以为临床医生和研究人员提供更多选择和参考，有助于促进医疗领域的发展和进步。

离子色谱法测定甲磺酸伊马替尼中残留的二甲胺嵇海澄;李孝壁;李琴;姜涛;胡春勇【摘要】Objective To establish a method the determination of dimethylamine in imatinib mesylate by ion chromatography. Methods The determination was carried out on a Dionex IonPacCS12A(250mm×4.6mm)column with 20mmol/L methanesulfonic acid solution as eluent by electrical conductivity detector.The flow rate was1.0mL/min,The column temperature was 30℃,and temperature of conductivity detection pool was 35℃. Results There was a good linearity over the range of 0.10-9.84μg/mL with a the correlation coefficient r higher than 1.0000(n=6).The RSD for repeatition was 0.11%(n=6),The average recovery was 97.5%with RSD of accuracy at 1.8%. Conclusion The Methods was simple,accurate and good reproducibility,which can be used for the determination of dimethylamine for imatinib mesylate.%目的：建立了一种离子色谱法测定伊马替尼中二甲胺的方法。

组织肉毒碱棕榈酰转移酶I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途组织肉毒碱棕榈酰转移酶I（CARNITINE PALMITOYL-TRANSFERASE I）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过肉碱和脂酰辅酶A以及特定抑制剂反应系统中释放出巯基辅酶A，使用Ellman试剂，产生黄色5-巯基-2-硝基苯甲酸产物吸光峰值的变化，即采用比色法来测定组织裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

其适用于各种组织裂解悬液样品（动物、人体等）肉毒碱棕榈酰转移酶I的特异活性检测。

产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景脂肪酸β氧化过程（β-oxidation）在动物组织的线粒体发生的脂肪酸代谢通路，可概括为活化、转移、β氧化及最后经三羧酸循环被彻底氧化生成CO2和H2O，并释放能量等四个阶段。

大于10个碳（C10）的活化型长链脂酰辅酶A是不能直接透过线粒体内膜，需要借助肉碱（camitine），即L-3羟-4-三甲基铵丁酸，而被转运入线粒体内，在线粒体内膜的外侧及内侧分别有肉碱脂酰转移酶（carnitine palmitoyl transferase；CPT；EC2.3.1.21）I和Ⅱ。

位于内膜外侧的酶Ⅰ，促进脂酰CoA转化为脂酰肉碱，后者可借助线粒体内膜上的转位酶（或载体），转运到内膜内侧，然后，在酶Ⅱ催化下脂酰肉碱释放肉碱到胞浆，留下脂酰CoA。

由此位于胞浆的活化脂肪酸―脂酰CoA穿过线粒体内膜进入基质而被氧化分解。

肉碱脂酰转移酶缺失症导致机体无法代谢脂肪酸。

基于肉碱和脂酰辅酶A在丙二酰辅酶A（malonyl CoA）存在与否的条件下，通过肉碱脂酰转移酶的作用，产生脂酰肉碱，并释放出巯基辅酶A（CoA-SH），与Ellman试剂5,5-二硫基-双（2-硝基苯甲酸）[5,5’-dithiobis-（2-nitrobenzoic acid）；DTNB]反应后，产生黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoic acid；TNB），通过其吸收峰值的变化（412nm波长），来定量分析丙二酰辅酶A敏感性肉碱脂酰转移酶I的特异活性。

迷迭香酸（罗丹酚酸）对H2O2处理过的皮肤黑色素瘤细胞的抗氧化作用Sun Mi Yoo1 and Jeong Ran Kang2*1.韩国光州500-741号东冈大学美容系2.韩国首尔143-701号建国大学生物工程系2009.2.6收到 2009.4.17接收本学科旨在检测迷迭香酸对人工孵育的皮肤黑色素瘤细胞在ROS下的抗氧化作用。

通过XTT比色法，以细胞毒性和抗氧化作用来分析细胞粘附活性，DPPH自由基清除活性以及H2O2处理1-10h和未经处理的两种情况下乳酸脱氢酶的活性。

用20-110 μM 的H2O2处理皮肤黑色素瘤细胞5-7h后，细胞活性的降低呈剂量和时间依赖性。

通过XTT比色法测得H2O2的半抑制浓度（IC50 ）为90μM。

同时H2O2增强了LDH细胞的剂量依赖性。

用50-90μM的H2O2处理8h后测得LDH50为60 μM H2O2。

迷迭香酸能增强细胞活性和DPPH自由基清除活性，降低乳酸盐脱氢酶的活性。

细胞的H2O2处理证实了对人工孵育的皮肤黑色素瘤细胞的强抗氧化作用。

通过H2O2的处理，迷迭香酸能在细胞内能增强细胞活性和DPPH 自由基清除活性，降低乳酸盐脱氢酶的活性。

这被认为是迷迭香酸对ROS（ROS）如H2O2的抗氧化作用。

Key words：DPPH-radical scavenging, LDH, rosmarinic acid, XTT assay关键字：DPPH自由基清除活性，乳酸脱氢酶，迷迭香酸，XTT比色法据研究发现，ROS通过氧化应激对细胞的损伤和一些脑部疾病比如帕金森症或心脏疾病例如心肌梗塞之间有很大的关联[Difazio et al., 1992; Delanty and Dichter, 1998].尤其是研究人员认为ROS是皮肤老化的一个主要的因素后，一直试图从ROS方面研究衰老。

[Yokozawa et al., 1998].据研究表明，ROS的氧化应激会通过萎缩细胞引起各种疾病，例如超氧自由基、H2O2（H2O2）或羟基自由基的巯基蛋白反应中断酶的活性，破坏脱氧RMA（DNA）或RMA（RNA），诱导细胞膜脂质过氧化。

益生菌对阿尔茨海默病作用的研究进展发布时间：2021-12-14T06:08:15.523Z 来源：《中国结合医学杂志》2021年12期作者：宋鑫萍1,2，李盛钰2，金清1[导读] 阿尔茨海默病已成为威胁全球老年人生命健康的主要疾病之一，患者数量逐年攀升，其护理的经济成本高，给全球经济造成重大挑战。

近年来研究显示，益生菌在适量使用时作为有益于宿主健康的微生物，在防治阿尔茨海默病方面具有积极影响，其作用机制可能通过调节肠道菌群，影响神经免疫系统，调控神经活性物质以及代谢产物，通过肠-脑轴影响该病发生和发展。

宋鑫萍1,2，李盛钰2，金清11.延边大学农学院，吉林延吉 1330022.吉林省农业科学院农产品加工研究所，吉林长春 130033摘要：阿尔茨海默病已成为威胁全球老年人生命健康的主要疾病之一，患者数量逐年攀升，其护理的经济成本高，给全球经济造成重大挑战。

近年来研究显示，益生菌在适量使用时作为有益于宿主健康的微生物，在防治阿尔茨海默病方面具有积极影响，其作用机制可能通过调节肠道菌群，影响神经免疫系统，调控神经活性物质以及代谢产物，通过肠-脑轴影响该病发生和发展。

本文综述了近几年来国内外益生菌对阿尔茨海默病的作用进展，以及其预防和治疗阿尔茨海默病的潜在作用机制。

关键词：益生菌；阿尔茨海默病；肠道菌群；机制Recent Progress in Research on Probiotics Effect on Alzheimer’s DiseaseSONG Xinping1,2，LI Shengyu2，JI Qing1*(1.College of Agricultural, Yanbian University, Yanji 133002，China)(2.Institute of Agro-food Technology, Jilin Academy of Agricultural Sciences, Chanchun 130033, China)Abstract：Alzheimer’s disease has become one of the major diseases threatening the life and health of the global elderly. The number of patients is increasing year by year, and the economic cost of nursing is high, which poses a major challenge to the global economy. In recent years, studies have shown that probiotics, as microorganisms beneficial to the health of the host, have a positive impact on the prevention and treatment of Alzheimer’s disease. Its mechanism may be through regulating intestinal flora, affecting the nervous immune system, regulating the neuroactive substances and metabolites, and affecting the occurrence and development of the disease through thegut- brain axis. This paper reviews the progress of probiotics on Alzheimer’s disease at home and abroad in recent years, as well as its potential mechanism of prevention and treatment.Key words：probiotics; Alzheimer’s disease; gut microbiota; mechanism阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD），系中枢神经系统退行性疾病，属于老年期痴呆常见类型，临床特征主要包括：记忆力减退、认知功能障碍、行为改变、焦虑和抑郁等。

甲磺酸伊马替尼的合成甲磺酸伊马替尼是英文名字为ImatinibMesylate，是一种广泛应用于抗癌治疗的药物。

它是一种黏液体，无色至浅黄色，有较强的稳定性。

它是由6-氨基-2-甲基-3-碘咪唑衍生物的水杨酸乙酰胺（也称为Imatinib Mesylate）合成而成。

甲磺酸伊马替尼的合成是一个既复杂又具有挑战性的过程。

在一系列反应中，由一开始的原料2-甲基-3-碘咪唑到最终的甲磺酸伊马替尼，每一步都有可能遇到难题，影响最终成果。

首先，将原料2-甲基-3-碘咪唑与甲氨基氯化钠反应，产生2-甲基-3-碘咪唑甲氨基氯化物缩合物。

然后，将此缩合物水解，生成6-氨基-2-甲基-3-碘咪唑。

接下来，将6-氨基-2-甲基-3-碘咪唑与水杨酸脂肪酰胺反应，产生6-氨基-2-甲基-3-碘咪唑乙酰胺。

最后，将6-氨基-2-甲基-3-碘咪唑乙酰胺与甲磺酸氢钠反应，产生甲磺酸伊马替尼，这一步也叫做“甲磺酸化”。

甲磺酸伊马替尼的合成并不是一步到位，它是一个复杂而又费时费力的过程。

每一步都是关键，都有可能影响最终的成果。

因此，必须对各步骤的条件、温度、比例等都细致入微的控制，以确保最终获得甲磺酸伊马替尼的质量。

甲磺酸伊马替尼是一种广泛应用于抗癌治疗的有效药物，它的发明为抗癌治疗的发展做出了重要贡献。

由于其优越的生物学性质，甲磺酸伊马替尼更是受到了社会的广泛关注，已经成为科研领域的一项新兴研究项目。

甲磺酸伊马替尼的合成是一个复杂而具有挑战性的过程，要求从采购原料到最终成品的每一步都仔细控制，以确保甲磺酸伊马替尼的质量达到最佳要求。

虽然这一过程是复杂的，但是理论和实践的发展，给了生产者们充满信心，使他们能够更好地合成出高品质的甲磺酸伊马替尼。

CAS：152459-95-5中文名称：伊马替尼英文名称：imatinib常用名：甲磺酸伊马替尼; 伊马替尼甲磺酸盐;英文别名：Imatinib; 4-[(4-methylpiperazin-1-yl)methyl]-N-[4-methyl-3-[(4-pyridin-3-ylpyrimidin-2-yl)amino]phenyl]benzamide; Imatinib free base; 1iep; 1xbb;分子式：C29H31N7O分子量：493.60300物理化学性质[ 密度]：1.3±0.1 g/cm³[ 沸点]：451℃[ 熔点]：113℃[ 分子式]：C29H31N7O[ 分子量]：493.603[ 闪点]：196℃[ 精确质量]：493.259003[ PSA ]：86.28000[ LogP ]：2.48[ 蒸汽压]：6.03E-24mmHg at 25℃[ 折射率]：1.672[ 分子结构]：1、摩尔折射率：147.092、摩尔体积（cm³/mol）：393.03、等张比容（90.2K）：1110.04、表面张力（dyne/cm）：63.65、极化率（10-24cm3）：58.31[ 计算化学]：1.疏水参数计算参考值（XlogP）:3.52.氢键供体数量:23.氢键受体数量:74.可旋转化学键数量:75.互变异构体数量:66.拓扑分子极性表面积86.37.重原子数量:378.表面电荷:09.复杂度:70610.同位素原子数量:011.确定原子立构中心数量:012.不确定原子立构中心数量:013.确定化学键立构中心数量:014.不确定化学键立构中心数量:015.共价键单元数量:1[ 更多]：1.熔点（℃）：211～231。

㊀基金项目:国家自然科学基金青年项目(Ｎｏ.８２２０４６９３)ꎻ滨州医学院高层次人才科研启动基金项目(Ｎｏ.ＢＹ２０２０ＫＹＱＤ１３)作者简介:兀琦ꎬ女ꎬ硕士ꎬ研究方向:中药药理学ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｗｕｑｉ０９０５２０２１＠１６３.ｃｏｍ通信作者:张加余ꎬ男ꎬ博士ꎬ教授ꎬ研究方向:中药质量控制及体内代谢ꎬＴｅｌ:０５３５－６９１３７１３ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｚｈａｎｇｊｉａｙｕ０６１５＠１６３.ｃｏｍꎻ杨爱琳ꎬ女ꎬ博士ꎬ副教授ꎬ研究方向:中药药理学ꎬＴｅｌ:０５３５－６９１３７１９ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｙａｎｇａｉｌｉｎ０４１８＠１６３.ｃｏｍ华蟾素通过抑制谷胱甘肽合成酶表达诱导肝癌细胞发生铁死亡的作用机制研究兀琦ꎬ杨静依ꎬ陈启梅ꎬ王安美ꎬ孙艺轩ꎬ张加余ꎬ杨爱琳(滨州医学院药学院ꎬ山东烟台２６４００３)摘要:目的㊀研究华蟾素(ｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎ)通过抑制谷胱甘肽合成酶(ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｓｙｎｔｈｅｔａｓｅꎬＧＳＳ)表达诱导肝癌细胞发生铁死亡的作用机制ꎮ方法㊀不同浓度华蟾素(０㊁２㊁４㊁６㊁８μｇ ｍＬ－１)分别与铁螯合剂(ｄｅｆｅｒｏｘａｍｉｎｅꎬＤＦＯ)５０μｍｏｌ Ｌ－１或还原型谷胱甘肽(ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅꎬＧＳＨ)５ｍｍｏｌ Ｌ－１联合处理肝癌细胞４８ｈꎬ采用ＣＣＫ－８检测细胞活性ꎮ采用活性氧(ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓꎬＲＯＳ)㊁丙二醛(ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅꎬＭＤＡ)和ＧＳＨ检测试剂盒检测华蟾素(８μｇ ｍＬ－１)干预后肿瘤细胞内ＲＯＳ㊁ＭＤＡ和ＧＳＨ含量ꎮ通过实时荧光定量ＰＣＲ(ＱＲＴ－ＰＣＲ)和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测华蟾素处理对肝癌细胞ＧＳＳ表达的影响ꎮ并采用ＲＮＡ干扰技术探究在肝癌细胞中ＧＳＳ对ＧＳＨ含量及肝癌细胞增殖的影响ꎮ结果㊀与单独使用华蟾素相比ꎬ铁螯合剂ＤＦＯ能够部分逆转华蟾素对肝癌细胞的增殖抑制作用ꎮ与对照组相比ꎬ华蟾素干预组能够增加肿瘤细胞内的ＲＯＳ和ＭＤＡ含量ꎬ降低ＧＳＨ含量ꎮ同时ꎬ研究显示ＧＳＨ能够部分逆转华蟾素对肝癌细胞的增殖抑制作用ꎮ深入机制研究发现ꎬ华蟾素能够抑制ＧＳＳ蛋白表达ꎮＲＮＡ干扰实验的结果表明ꎬ下调ＧＳＳ蛋白表达能够降低ＧＳＨ水平ꎮ敲低ＧＳＳ能够削弱ＤＦＯ对华蟾素增殖抑制的逆转作用ꎬ且敲低ＧＳＳ能够在一定程度上抑制肝癌细胞的生长ꎬ并增强华蟾素的增殖抑制作用ꎮ结论㊀华蟾素能够诱导肝癌细胞发生铁死亡ꎬ其机制与干预ＧＳＳ水平有关ꎮ该研究为华蟾素临床应用提供理论基础ꎬ并对中药抗肿瘤新药开发起到积极的推动作用ꎮ关键词:华蟾素ꎻ肝癌ꎻ铁死亡ꎻ谷胱甘肽合成酶中图分类号:Ｒ２８５.５㊀文献标志码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２４)０３－０２１４－００７ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２４.０３.００２ＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎｉｎｉｎｄｕｃｉｎｇｆｅｒｒｏｐｔｏｓｉｓｏｆｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｓｂｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＷＵＱｉꎬＹＡＮＧＪｉｎｇｙｉꎬＣＨＥＮＱｉｍｅｉꎬＷＡＮＧＡｎｍｅｉꎬＳＵＮＹｉｘｕａｎꎬＺＨＡＮＧＪｉａｙｕꎬＹＡＮＧＡｉｌｉｎ(ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙꎬＢｉｎｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＹａｎｔａｉ２６４００３ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎｉｎｉｎｄｕｃｉｎｇｆｅｒｒｏｐｔｏｓｉｓｏｆｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｓｂｙｉｎｈｉｂ￣ｉｔｉｎｇｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ(ＧＳＳ).Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀Ｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｓｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎ(０ꎬ２ꎬ４ꎬ６ꎬ８μｇ ｍＬ－１)ｏｒｉｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈｄｅｆｅｒｏｘａｍｉｎｅ(ＤＦＯ)５０μｍｏｌ Ｌ－１ꎬｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ(ＧＳＨ)５ｍｍｏｌ Ｌ－１ｆｏｒ４８ｈꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.ＣＣＫ－８ｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｃｅｌｌｖｉａｂｉｌｉｔｙ.Ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ(ＲＯＳ)ꎬｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ(ＭＤＡ)ａｎｄＧＳＨａｓｓａｙｋｉｔｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔＲＯＳꎬＭＤＡꎬａｎｄＧＳＨｌｅｖｅｌｓｉｎｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓａｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎ(８μｇ ｍＬ－１).Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ(ＱＲＴ－ＰＣＲ)ａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎｏｎＧＳＳｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｓ.ＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｗａｓｕｓｅｄｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＧＳＳｏｎＧＳＨｌｅｖｅｌａｎｄｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｐｏｔｅｎｔｉａｌｏｆｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｓ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎｔｒｅａｔｍｅｎｔａｌｏｎｅꎬｔｈｅＤＦＯｃｏｕｌｄｐａｒｔｉａｌｌｙｒｅｖｅｒｓｅｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｆｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎｏｎｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ.ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐꎬｔｈｅＲＯＳａｎｄＭＤＡｌｅｖｅｌｓｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄａｎｄｔｈｅＧＳＨｌｅｖｅｌｗａｓｄｅｃｒｅａｓｅｄｉｎｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐ.ＡｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅꎬｔｈｅｓｔｕｄｙｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＧＳＨｃｏｕｌｄｐａｒｔｉａｌｌｙｒｅｖｅｒｓｅｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｆｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｓ.ＦｕｒｔｈｅｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｔｕｄｙｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎｃｏｕｌｄｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＧＳＳｐｒｏｔｅｉｎ.ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆＲＮＡｉｎ￣ｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｄｅｐｌｅｔｉｏｎｏｆＧＳＳｃｏｕｌｄｒｅｄｕｃｅＧＳＨｌｅｖｅｌꎬｋｎｏｃｋｄｏｗｎｏｆＧＳＳｃｏｕｌｄｉｍｐａｉｒｔｈｅｒｅｖｅｒｓｅｅｆｆｅｃｔｏｆＤＦＯｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎꎬａｎｄｋｎｏｃｋｄｏｗｎｏｆＧＳＳｃｏｕｌｄｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｓꎬａｎｄｅｎｈａｎｃｅｔｈｅｂｌｏｃｋｉｎｇｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎｏｎｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀ＣｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎｃａｎｉｎｄｕｃｅｆｅｒｒｏｐｔｏｓｉｓｉｎｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｓꎬａｎｄｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｉｓｒｅｌａｔｅｄｔｏＧＳＳｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ.Ｔｈｉｓｓｔｕｄｙｐｒｏｖｉｄｅｓａｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｃｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎꎬａｎｄｐｌａｙｓａｎａｃｔｉｖｅｒｏｌｅｉｎｐｒｏｍｏｔｉｎｇｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒｄｒｕｇｓｉｎｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＣｉｎｏｂｕｆｏｔａｌｉｎꎻＨｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａꎻＦｅｒｒｏｐｔｏｓｉｓꎻＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ㊀㊀癌症是导致人类死亡的主要原因之一ꎬ据２０２０年ＧＬＯＢＯＣＡＮ项目研究表明肝癌的死亡率位居世界第三ꎬ占癌症总死亡率的８.３％[１]ꎮ肝细胞癌(ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａꎬＨＣＣ)是原发性肝癌最常见的一种类型ꎮ早期发现可通过手术切除㊁射频消融术㊁肝移植等方法治疗ꎬ然而大多数肝癌患者确诊时已为中晚期[２]ꎮ截至目前ꎬ化疗依旧是晚期肝癌治疗的主要方法ꎬ但在临床治疗中ꎬ化疗往往会引起一系列不良反应ꎬ例如肝功能异常㊁高血压㊁腹泻等ꎮ因此迫切需要开发新的有效㊁低毒性抗肝癌药物ꎮ中医药有着悠久的历史ꎬ近年来在抗肿瘤领域引起广泛关注ꎮ中医药能够增强化疗疗效ꎬ提高生存期ꎮ华蟾素是从蟾蜍科动物中华大蟾蜍或黑眶蟾蜍(ＢｕｆｏＢｕｆｏｇａｒｇａｒｉｚａｎｓＣａｎｔｏｒ)蟾蜍干皮中提取所得ꎬ其主要活性成分为蟾蜍二烯内酯㊁生物碱和肽类[３]ꎮ华蟾素胶囊㊁华蟾素注射液等广泛应用于临床肝癌的治疗[４－５]ꎮ临床研究表明ꎬ华蟾素联合化疗药物能够显著提高晚期癌症患者药物疗效和生活质量[６]ꎮ另外ꎬ有研究表明华蟾素能够通过抑制细胞增殖㊁诱导细胞凋亡㊁抑制上皮间充质转化和抑制肿瘤血管生成等多方面机制发挥抗肿瘤功效[７]ꎮ铁死亡是由于失去对膜脂质过氧化的控制而导致的细胞死亡的形式ꎬ其发生过程中伴随铁依赖性脂质累积㊁谷胱甘肽过氧化物酶４(ＧＰＸ４)功能异常㊁活性氧(ＲＯＳ)升高和还原型谷胱甘肽(ＧＳＨ)含量下降[８－９]ꎮＧＳＨ是人体内重要的抗氧化剂ꎬ能够清除活性氧ꎮ此外ꎬ有研究表明ＧＳＨ合成障碍导致脂质活性氧累积ꎬ导致铁死亡发生[１０]ꎮＧＳＳ催化λ－谷氨酰半胱氨酸与甘氨酸反应生成还原性ＧＳＨꎬ不受ＧＳＨ反馈抑制的调节[１１]ꎮ另有资料显示ꎬ在肝癌细胞中ꎬ核糖核苷酸还原酶Ｍ２肽(ＲＲＭ２)依赖于ＧＳＳ刺激ＧＳＨ合成ꎬ从而抑制铁死亡[１２]ꎬ且有研究表明通过药物诱导铁死亡为目前肿瘤治疗的新策略及研究热点[１３]ꎮ关于华蟾素能否诱导肝癌细胞发生铁死亡及作用机制目前鲜有报道ꎬ本研究从铁死亡角度探讨华蟾素抑制肝癌细胞生长的机制ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀试验药物㊀华蟾素胶囊(批号:ＯＤ０４)来自于陕西东泰制药有限公司ꎮ１.２㊀细胞系㊀人肝癌ＨｅｐＧ２细胞(ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ)ꎮ１.３㊀试剂㊀ＤＭＥＭ基础培养基㊁胎牛血清(ＦＢＳ)㊁青霉素－链霉素混合液和０.２５％的胰蛋白酶(美国康宁公司)ꎻＣＣＫ－８细胞活性检测试剂㊁还原型谷胱甘肽(批号:ＢＮ２７００５ꎬ北京百瑞极生物科技有限公司)ꎻ铁螯合剂(ＤＦＯꎬ批号:Ｄ９５３３ꎬＳｉｇｍａ公司)ꎻＭＤＡ检测试剂盒㊁ＧＳＨ和氧化型谷胱甘肽(ＧＳＳＧ)检测试剂盒㊁ＲＯＳ检测试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)ꎻＢＣＡ蛋白浓度测定试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)ꎻＧＳＳ(批号:ｓｃ－１６６８８２)和β－ａｃｔｉｎ(批号:ｓｃ－４７７７８)(美国ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司)ꎻＨＲＰ标记的羊抗鼠二抗(美国ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ公司)ꎮ１.４㊀仪器㊀ＳｐｅｃｔｒａＭＡＸＭ２型多功能酶标仪(美国ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓ公司)ꎻＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ９６型实时荧光定量ＰＣＲ(德国罗氏公司)ꎻＤＹＹ－６Ｄ电泳仪电源(北京六一生物科技有限公司)ꎻＣ６００多功能荧光化学发光成像仪(ＡｚｕｒｅＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ公司)ꎻＴＵＳ－２００Ｐ震荡型恒温金属浴(上海恒科有限公司)ꎮ１.５㊀方法㊀１.５.１㊀细胞培养与细胞活性检测㊀将细胞培养在含８９％ＤＭＥＭ基础培养基㊁１０％ＦＢＳ和１％的青霉素－链霉素的完全培养基中ꎬ放入含５％ＣＯ２的３７ħ恒温培养箱中进行培养ꎮ通过细胞活性检测实验研究华蟾素对人肝癌ＨｅｐＧ２细胞增殖的影响ꎮ首先ꎬ将ＨｅｐＧ２细胞(３.５ˑ１０３个/孔)铺于９６孔板中ꎬ２４ｈ后ꎬ吸出上清ꎬ将细胞与华蟾素药液０㊁２㊁４㊁６㊁８μｇ ｍＬ－１单独或者分别与ＤＦＯ５０μｍｏｌ Ｌ－１㊁ＧＳＨ５ｍｍｏｌ Ｌ－１联合处理４８ｈꎮ之后ꎬ吸出上清ꎬ每孔加入１００μＬ１０％ＣＣＫ－８工作液ꎬ将培养板放入培养箱敷育１ｈ后用酶标仪在４５０ｎｍ波长下进行检测ꎮ１.５.２㊀细胞ＭＤＡ含量检测㊀将肝癌细胞铺于６孔板中ꎬ待细胞密度达到９０％时进行药物干预ꎬ设置华蟾素浓度为０㊁８μｇ ｍＬ－１ꎬ培养２４ｈꎮ细胞样品处理方法:用胰蛋白酶消化后ꎬ加入１ｍＬＤＭＥＭ完全培养液吹打收集细胞ꎬ１０００ˑｇ离心５ｍｉｎꎮ移除上清ꎬ将细胞用１ｍＬＰＢＳ清洗ꎬ再次离心５ｍｉｎꎬ移除上清ꎬ加入７０μＬＰＢＳꎮ细胞样品采用反复冻融的方法进行裂解细胞ꎬ将其放入－８０ħ冷冻ꎬ１０ｍｉｎ后取出冷冻的细胞放置于３７ħ金属浴融化５ｍｉｎꎮ反复冻融４次后ꎬ收集上清ꎮ之后根据ＭＤＡ检测试剂盒说明书对细胞样品进行检测ꎮＭＤＡ含量通过样品的蛋白浓度归一化ꎬ蛋白浓度由ＢＣＡ蛋白测定试剂盒测定ꎮ１.５.３㊀细胞内ＧＳＨ含量检测㊀将肝癌细胞铺于６孔板中ꎬ待细胞密度达到９０％时进行药物干预ꎬ设置华蟾素浓度为０㊁８μｇ ｍＬ－１ꎬ培养２４ｈꎮ之后根据试剂盒说明书对细胞样品进行处理检测ꎮＧＳＨ含量通过细胞数量进行归一化ꎮ１.５.４㊀细胞内ＲＯＳ水平测定㊀将肝癌细胞铺于６孔板中ꎬ待细胞密度达到９０％时进行药物干预ꎬ设置华蟾素浓度为０㊁８μｇ ｍＬ－１ꎬ培养２４ｈꎮ之后收集细胞ꎬ悬浮于稀释好的ＤＣＦＨ－ＤＡ(１ʒ１０００)中ꎮ放置于３７ħ培养箱中避光敷育２０ｍｉｎꎬ并每间隔５ｍｉｎ颠倒混匀一下ꎬ使探针与细胞充分接触ꎮ敷育结束后ꎬ用无血清ＤＭＥＭ基础培养基洗涤细胞３次ꎬ以充分去除未进入细胞内的探针ꎮ最后将细胞悬浮于２００μＬＰＢＳ中ꎬ在３０ｍｉｎ内进行流式细胞仪上机检测ꎮ采用ＦｌｏｗＪｏ软件分析荧光强度ꎮ１.５.５㊀实时荧光定量ＰＣＲ(ＱＲＴ－ＰＣＲ)㊀将肝癌细胞铺于６ｃｍ皿中ꎬ待密度达到８５％时进行药物干预ꎬ设置华蟾素药物浓度为０㊁８μｇ ｍＬ－１ꎬ培养２４ｈꎮ使用Ｅ.Ｚ.Ｎ.Ａ. ＴｏｔａｌＲＮＡＫｉｔＩ(ＯＭＥＧＡ)根据试剂盒说明书进行总ＲＮＡ抽提ꎮ使用ＮａｎｏＤｒｏｐ２０００分光光度计测定ＲＮＡ浓度ꎮ使用ＴａｋａｒａＰｒｉ￣ｍｅＳｃｒｉｐｔＲＴＲｅａｇｅｎｔＫｉｔ进行ｃＤＮＡ逆转录ꎮ以下引物用于ＱＲＴ－ＰＣＲ:Ｈｕｍａｎａｃｔｉｎ(Ｆｏｒｗａｒｄ):５ᶄ－ＧＧＧＡＣＣＴＧＡＣＴ￣ＧＡＣＴＡＣＣＴＣ－３ᶄＨｕｍａｎａｃｔｉｎ(Ｒｅｖｅｒｓｅ):５ᶄ－ＴＣＡＴＡＣＴＣＣＴＧＣＴ￣ＴＧＣＴＧＡＴ－３ᶄＨｕｍａｎＧＳＳ(Ｆｏｒｗａｒｄ):５ᶄ－ＧＴＡＣＴＣＡＣＴＧＧＡＴ￣ＧＴＧＧＧＴＧＡＡＧＡ－３ᶄＨｕｍａｎＧＳＳ(Ｒｅｖｅｒｓｅ):５ᶄ－ＣＧＧＣＴＣＧＡＴＣＴＴ￣ＧＴＣＣＡＴＣＡＧ－３ᶄ１.５.６㊀Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ㊀肝癌细胞用不同浓度的华蟾素药液(０㊁２㊁４㊁８μｇ ｍＬ－１)处理２４ｈꎮ细胞用预冷的ＰＢＳ洗涤两次ꎬ加入细胞裂解液ꎬ充分裂解后收集细胞裂解物ꎮ在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶上分离细胞裂解物ꎬ之后转移到ＰＶＤＦ膜上ꎮ膜在４ħ下用含５％脱脂牛奶的ＴＢＳＴ缓冲液封闭过夜ꎮ第２天ꎬ将膜与特异性一抗(１ʒ１０００)在４ħ下孵育过夜ꎬ将膜用ＴＢＳＴ缓冲液洗涤４０ｍｉｎꎬ然后与ＨＲＰ偶联的二抗(１ʒ２０００)在４ħ下孵育过夜ꎮ最后ꎬ用ＴＢＳＴ缓冲液洗涤４０ｍｉｎ后ꎬ使用ＥＣＬ超敏发光液检进行蛋白检测ꎬ并通过凝胶图像系统(ＡｚｕｒｅＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓＣ６００ꎬ美国)显示条带ꎮ１.５.７㊀ｓｉＲＮＡ转染㊀将肝癌细胞铺于６孔板中ꎬ待细胞密度达到５０％进行转染ꎮ将Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００５μＬ与ｏｐｔｉ－ＭＥＭ培养液２５０μＬ混合在一起ꎬ用枪轻轻吹匀ꎮ将ｓｉＲＮＡ１０μＬ加到ｏｐｔｉ－ＭＥＭ培养液２５０μＬ中ꎬ与加有Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００的ｏｐｔｉ－ＭＥＭ培养液混合在一起ꎬ室温静置２０ｍｉｎꎮ之后将６孔板中的培养基弃掉ꎬ加入ｏｐｔｉ－ＭＥＭ培养液１５００μＬꎬ将含有Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００的ｓｉＲＮＡ溶液５００μＬꎬ补齐至每孔２ｍＬ体系ꎬ放入细胞培养箱中６ｈ后将上清替换为ＤＭＥＭ完全培养基ꎮｓｉＲＮＡ序列如下:ｓｉＮＣ(ｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌꎬＮＣ):５ᶄ－ＵＵＣＵＣＣＧＡ￣ＡＣＧＵＧＵＣＡＣＧＵＴＴ－３ᶄꎻｓｉＧＳＳ:５ᶄ－ＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣＴＧＴＧＧＴＴＴＡ－３ᶄꎮ１.６㊀统计学方法㊀所有数据统计及分析作图采用ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ８ꎮ数据比较采用ｔ检验ꎮＰ<０.０５表明组间差异具有统计学意义ꎮ２㊀结果２.１㊀华蟾素诱导肝癌细胞发生铁死亡㊀前期通过研究发现华蟾素能够明显抑制肝癌细胞的生长[３]ꎮ为了研究华蟾素抑制肝癌细胞生长的形式ꎬ采用细胞铁螯合剂ＤＦＯ干预不同浓度华蟾素处理的细胞ꎮ结果显示ꎬＤＦＯ能够部分逆转华蟾素对人肝癌ＨｅｐＧ２细胞的增殖抑制能力ꎬＨｅｐＧ２细胞用不同浓度华蟾素药液(０㊁２㊁４㊁６㊁８μｇ ｍＬ－１)或与ＤＦＯ(５０μｍｏｌ Ｌ－１)联合处理４８ｈꎬ采用ＣＣＫ－８检测细胞活力ꎬ结果见图１ꎮ由此可见ꎬ华蟾素能够通过诱导人肝癌ＨｅｐＧ２细胞发生铁死亡的形式抑制增殖ꎮ图１㊀华蟾素对肝癌细胞铁死亡的影响注:与０μｇ ｍＬ－１华蟾素药液组相比ꎬ∗∗∗∗Ｐ<０.０００１ꎮ２.２㊀华蟾素能够增强肝癌细胞ＲＯＳ和脂质过氧化水平㊀铁死亡的直接表现是诱导细胞内ＲＯＳ累积和脂质过氧化诱导的细胞损伤[１４]ꎮ因此ꎬ首先通过流式细胞术检测人肝癌ＨｅｐＧ２细胞经过华蟾素处理后的ＲＯＳ水平ꎮ用浓度为０㊁８μｇ ｍＬ－１的华蟾素药液处理ＨｅｐＧ２细胞４８ｈ后ꎬ用ＤＣＦＨ－ＤＡ染色并通过流式细胞仪分析结果显示ꎬＨｅｐＧ２细胞经华蟾素处理后荧光强度增强ꎬ说明华蟾素能够诱导ＨｅｐＧ２细胞产生ＲＯＳ(见图２Ａ)ꎮ为了进一步研究华蟾素是否通过铁死亡介导的脂质过氧化诱导细胞发生损伤ꎬ通过检测细胞内ＭＤＡ水平发现ꎬ用华蟾素药液(０㊁８μｇ ｍＬ－１)处理ＨｅｐＧ２细胞２４ｈꎬ检测ＭＤＡ水平与对照组相比ꎬＨｅｐＧ２细胞内ＭＤＡ水平显著升高(见图２Ｂ)ꎬ暗示细胞脂质过氧化程度和细胞损伤的加重ꎮ图２㊀华蟾素对肝癌细胞活性氧(ＲＯＳ)和丙二醛(ＭＤＡ)的影响㊀注:与０μｇ ｍＬ－１华蟾素药液组相比ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎬ∗∗∗∗Ｐ<０.０００１ꎮ２.３㊀华蟾素通过降低肝癌细胞ＧＳＨ水平抑制细胞增殖㊀前期文献报道ꎬＧＳＨ能够避免细胞发生氧化性损伤ꎬ更重要的是铁死亡途中伴随着ＧＳＨ的损失ꎬ除了ＭＤＡ检测ꎬ铁死亡的脂质过氧化的指标还有ＧＳＨ合成的变化[１０ꎬ１５]ꎮ细胞中存在多个对抗铁死亡的防御途径ꎬ其中最主要的一个是由ＧＰＸ４所介导的ꎬ通过ＧＳＨ特异性催化过氧化脂质来抑制铁死亡的发生[１６]ꎮ用华蟾素药液(０㊁８μｇ ｍＬ－１)处理ＨｅｐＧ２细胞２４ｈꎬ检测ＧＳＨ水平ꎬ相比空白对照组ꎬ华蟾素干预组ＧＳＨ水平显著降低(见图３Ａ)ꎮ为了进一步探究华蟾素是否通过下调ＧＳＨ水平抑制肿瘤细胞生长ꎬＨｅｐＧ２细胞用不同浓度华蟾素药液(０㊁２㊁４㊁６㊁８μｇ ｍＬ－１)或与ＧＳＨ(５ｍｍｏｌ Ｌ－１)联合处理４８ｈꎬ采用ＣＣＫ－８检测细胞活力ꎮ结果显示ꎬＧＳＨ能够部分逆转华蟾素对肝癌细胞的增殖抑制作用(见图３Ｂ)ꎮ综上ꎬ华蟾素可能通过降低肝癌细胞内的ＧＳＨ水平诱导铁死亡从而表现出抑制肝癌生长的作用ꎮ图３㊀华蟾素对肝癌细胞谷胱甘肽(ＧＳＨ)含量的影响㊀注:与０μｇ ｍＬ－１华蟾素药液组相比ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎬ∗∗∗Ｐ<０.００１ꎬ∗∗∗∗Ｐ<０.０００１ꎮ２.４㊀华蟾素能够抑制肝癌细胞ＧＳＳ水平㊀ＧＳＳ能够催化λ－谷氨酰半胱氨酸与甘氨酸反应形成ＧＳＨ[１１]ꎮ我们首先检测华蟾素对人肝癌ＨｅｐＧ２细胞中的ＧＳＳ水平的影响ꎮ用华蟾素药液(０㊁８μｇ ｍＬ－１)处理ＨｅｐＧ２细胞２４ｈꎬ采用ＱＲＴ－ＰＣＲ检测ＧＳＳ的ｍＲＮＡ水平ꎮ如图４Ａ所示ꎬ与对照组相比ꎬ华蟾素干预后肝癌细胞ＧＳＳ的ｍＲＮＡ水平降低ꎬ表明华蟾素干预导致ＧＳＳ的转录抑制ꎮ此外ꎬＨｅｐＧ２细胞采用０㊁２㊁４㊁８μｇ ｍＬ－１的华蟾素药液处理２４ｈꎬ通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测ＧＳＳ蛋白水平ꎮ华蟾素给药干预后肝癌细胞中ＧＳＳ蛋白表达减弱(见图４Ｂ)ꎮ图４㊀华蟾素对肝癌细胞中谷胱甘肽合成酶(ＧＳＳ)水平的影响㊀注:与０μｇ ｍＬ－１华蟾素药液组相比ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎬ∗∗∗Ｐ<０.００１ꎮ２.５㊀抑制肝癌细胞ＧＳＳ水平能够降低ＧＳＨ产生㊀接下来ꎬ我们研究在肝癌细胞中ＧＳＳ是否影响ＧＳＨ产生ꎮ用靶向ＧＳＳ(ｓｉＧＳＳ)或阴性对照(ｓｉＮＣ)的ｓｉＲＮＡ转染肝癌ＨｅｐＧ２细胞ꎮ通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ￣ｔｉｎｇ检测敲低ＧＳＳ后ＨｅｐＧ２细胞ＧＳＳ蛋白水平的变化ꎮ如图５Ａ所示ꎬ敲低ＧＳＳ能够显著抑制ＨｅｐＧ２细胞ＧＳＳ的蛋白表达ꎮ同时我们对ＨｅｐＧ２细胞敲低ＧＳＳ后其ＧＳＨ含量进行检测ꎬ结果表明敲低ＧＳＳ组与ｓｉＮＣ组相比ꎬ细胞内ＧＳＨ含量降低(见图５Ｂ)ꎮ以上结果表明华蟾素可能通过抑制肝癌细胞ＧＳＳ水平进而抑制ＧＳＨ的产生ꎮ图５㊀敲低ＧＳＳ对肝癌细胞ＧＳＨ含量的影响㊀注:与阴性对照相比ꎬ∗∗∗∗Ｐ<０.０００１ꎮ２.６㊀华蟾素诱导肝癌细胞铁死亡部分通过干预ＧＳＳ实现㊀我们进一步研究华蟾素是否部分通过抑制ＧＳＳ诱导肝癌细胞铁死亡ꎬＨｅｐＧ２细胞(转染ｓｉＮＣ或ｓｉＧＳＳ)用不同浓度华蟾素药液(０㊁０.５㊁１㊁２μｇ ｍＬ－１)或与ＤＦＯ(５０μｍｏｌ Ｌ－１)联合处理４８ｈꎬ采用ＣＣＫ－８检测细胞活力ꎮ如图６Ａ所示ꎬ敲低ＧＳＳ会削弱ＤＦＯ对华蟾素增殖抑制的逆转作用ꎮＨｅｐＧ２细胞(转染ｓｉＮＣ或ｓｉＧＳＳ)用不同浓度华蟾素药液(０㊁０.５㊁１㊁２μｇ ｍＬ－１)处理４８ｈꎬ采用ＣＣＫ－８检测细胞活力ꎮ如图６Ｂ所示ꎬ敲低ＧＳＳ在一定程度上能够抑制肝癌细胞的生长ꎬ并能够增强华蟾素对肿瘤细胞的增殖抑制作用ꎮ上述结果表明华蟾素诱导肝癌细胞铁死亡可能通过干预ＧＳＳ水平来实现ꎮ３㊀讨论目前ꎬ大多数肝癌患者确诊时已为晚期ꎬ只有１５％患者能够手术治疗ꎮ索拉非尼是ＦＤＡ批准唯一用于肝癌晚期治疗的药物[１７]ꎬ然而其具有较强的毒副作用ꎬ因此迫切需要开发新的抗肝癌药物ꎮ在临床中ꎬ中药应用于癌症治疗历史悠久[１８]ꎮ华蟾素作为中成药已广泛应用于临床治疗肝癌㊁胃癌和胰图６㊀华蟾素部分通过抑制ＧＳＳ诱导肝癌细胞铁死亡㊀注:与０μｇ ｍＬ－１华蟾素药液组相比ꎬ∗Ｐ<０.０５ꎬ∗∗Ｐ<０.０１ꎬ∗∗∗Ｐ<０.００１ꎬ∗∗∗∗Ｐ<０.０００１ꎮ腺癌等[１９－２０]ꎮ铁死亡是一种独特的细胞死亡方式ꎮ研究表明通过药物诱导铁死亡能够抑制肿瘤发生发展[２１]ꎬ其发生的主要机制为多不饱和脂肪酸途径诱导脂质过氧化导致ＲＯＳ累积最终造成细胞损伤[２２]ꎮＭＤＡ是脂质过氧化的副产物[２３]ꎬ是铁死亡的标志物ꎮ通过研究发现铁螯合剂ＤＦＯ能够部分逆转华蟾素对肝癌细胞的增殖抑制作用ꎬ我们又进一步检测了铁死亡标志物ＲＯＳ与ＭＤＡꎬ结果显示华蟾素能够诱导肝癌细胞内ＲＯＳ和ＭＤＡ的累积ꎬ可见华蟾素能够诱导肝癌细胞发生铁死亡ꎮＧＳＨ缺失可诱导肿瘤细胞铁死亡[２４]ꎮ研究表明抑制ＧＳＨ能够增加脂质ＲＯＳ含量ꎬ增强ＨＣＣ对铁死亡的敏感性ꎬＧＳＨ合成的变化能够反映铁死亡的脂质过氧化程度[２５]ꎮ细胞中存在多个对抗铁死亡的防御途径ꎬ其中最主要的一个是由ＧＰＸ４所介导的ꎬ通过ＧＳＨ特异性催化过氧化脂质来抑制铁死亡的发生[９]ꎮ此外ꎬ研究证实Ｅｒａｓｔｉｎ能够通过直接降低ＧＳＨ水平ꎬ诱导缺乏ＧＰＸ４的敏感细胞发生铁死亡[２６]ꎮ因此ꎬ抑制ＧＳＨ合成是诱导铁死亡的主要方法ꎮ我们检测华蟾素干预后肝癌细胞内ＧＳＨ含量ꎬ结果发现华蟾素干预后ＧＳＨ水平降低ꎬ且ＧＳＨ能够减弱华蟾素对肝癌细胞的增殖抑制作用ꎮ因此ꎬ华蟾素可能通过抑制ＧＳＨ诱导人肝癌ＨｅｐＧ２细胞发生铁死亡进而表现出抑制肝癌细胞生长的作用ꎮＧＳＳ是ＧＳＨ生物合成的关键酶ꎬ研究表明ＧＳＳ在肿瘤组织中呈现升高趋势[１３]ꎮ此外ꎬ有研究证实抑制ＧＳＳ能够降低肝癌细胞活性ꎬ且ＧＳＨ能够减弱由ＧＳＳ抑制所诱导的细胞增殖抑制作用[２７]ꎮ通过研究发现华蟾素能够抑制ＧＳＳ水平ꎬ且敲低ＧＳＳ能够抑制ＧＳＨ水平ꎮ进一步研究结果显示敲低ＧＳＳ能够削弱ＤＦＯ对华蟾素增殖抑制的逆转作用ꎬ且敲低ＧＳＳ能够在一定程度上抑制肝癌细胞生长ꎬ并增强华蟾素对肿瘤细胞的增殖抑制作用ꎮ综上ꎬ我们认为华蟾素诱导人肝癌细胞铁死亡可能是通过干预ＧＳＳ来实现的ꎮ本研究有助于阐明华蟾素复杂的抗肝癌作用ꎬ为华蟾素应用于肝癌临床治疗提供新的理论支持ꎮ参考文献:[１]㊀ＳＵＮＧＨꎬＦＥＲＬＡＹＪꎬＳＩＥＧＥＬＲＬꎬｅｔａｌ.ＧｌｏｂａｌＣａｎｃｅｒＳｔａｔｉｓｔｉｃｓ２０２０:ＧＬＯＢＯＣＡＮＥｓｔｉｍａｔｅｓｏｆＩｎｃｉｄｅｎｃｅａｎｄＭｏｒｔａｌｉｔｙＷｏｒｌｄｗｉｄｅｆｏｒ３６Ｃａｎｃｅｒｓｉｎ１８５Ｃｏｕｎｔｒｉｅｓ[Ｊ].Ｃａ－ＣａｎｃｅｒＪＣｌｉｎꎬ２０２１ꎬ７１(３):２０９－２４９.[２]陈敏山.中国肿瘤整合诊治指南－肝癌(２０２２精简版) [Ｊ].中国肿瘤临床ꎬ２０２２ꎬ４９(１７):８６５－８７３.[３]ＷＵＱꎬＷＡＮＧＳꎬＳＵＮＸꎬｅｔａｌ.ＨｕａＣｈａｎＳｕｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓｔｕｍｏｒｇｒｏｗｔｈａｎｄｉｎｔｅｒｆｅｒｅｓｗｉｔｈｇｌｕｃｏｓｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓｂｙｒｅｓｔｒａｉｎｉｎｇＨｅｘｏｋｉｎａｓｅ－２[Ｊ].ＩｎｔＪＢｉｏｃｈｅｍＣｅｌｌＢꎬ２０２２(１４２):１０６１２３. [４]罗展雄ꎬ倪秉强ꎬ郑青平ꎬ等.华蟾素注射液对晚期恶性肿瘤患者Ｔ淋巴细胞亚群及ＮＫ细胞的影响[Ｊ].现代肿瘤医学ꎬ２００９ꎬ１７(２):３４０－３４１.[５]朱必胜ꎬ田红岸ꎬ舒诚荣ꎬ等.华蟾素胶囊联合放疗治疗晚期胰腺癌的临床效果观察[Ｊ].中国医药ꎬ２０２０ꎬ１５(５):７４９－７５２.[６]张晨ꎬ宋亚熙ꎬ贵永贤.华蟾素胶囊联合化疗干预晚期肺癌的价值[Ｊ].实用中医内科杂志ꎬ２０２２ꎬ３６(１):１０２－１０４.[７]ＣＨＥＮＧＣＳꎬＷＡＮＧＪＱꎬＣＨＥＮＪꎬｅｔａｌ.Ｎｅｗｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｓｐｅｃｔｓｏｆｓｔｅｒｏｉｄａｌｃａｒｄｉａｃｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ:ｔｈｅａｎｔｉｃａｎｃｅｒｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆＨｕａｃｈａｎｓｕａｎｄｉｔｓｍａｉｎａｃｔｉｖｅｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔＢｕｆａｌｉｎ[Ｊ].ＣａｎｃｅｒＣｅｌｌＩｎｔꎬ２０１９(１９):９２.[８]ＳＵＹＷꎬＺＨＡＯＢꎬＺＨＯＵＬＦꎬｅｔａｌ.Ｆｅｒｒｏｐｔｏｓｉｓꎬａｎｏｖｅｌｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｎｔｉ－ｃａｎｃｅｒｄｒｕｇｓ[Ｊ].ＣａｎｃｅｒＬｅｔｔꎬ２０２０(４８３):１２７－１３６.[９]杨凤娟ꎬ谭宁ꎬ张天禹ꎬ等.谷胱甘肽在肿瘤细胞发生铁死亡过程中的作用研究[Ｊ].世界华人消化杂志ꎬ２０２１ꎬ２９(１５):９０１－９０７.[１０]陈意ꎬ温海滨ꎬ谭宁ꎬ等.ＳｙｓｔｅｍＸｃ－在肿瘤中的调控研究进展[Ｊ].生命的化学ꎬ２０２２ꎬ４２(７):１３４４－１３５６. [１１]ＢＡＮＳＡＬＡꎬＳＩＭＯＮＭＣ.Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎｃａｎｃｅｒｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ[Ｊ].ＪＣｅｌｌＢｉｏｌꎬ２０１８ꎬ２１７(７):２２９１－２２９８.[１２]ＣＨＥＮＰꎬＷＡＮＧＬꎬＳＵＮＳꎬｅｔａｌ.Ｈｉｇｈ－ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔｓｃｒｅｅｎｉｎｇｓｕｇｇｅｓｔｓｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｓｙｎｔｈｅｔａｓｅａｓａｎａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒｔａｒｇｅｔｏｆｐｏｌｙｄａｔｉｎｕｓｉｎｇｈｕｍａｎｐｒｏｔｅｏｍｅｃｈｉｐ[Ｊ].ＩｎｔＪＢｉｏｌＭａｃｒｏｍｏｌꎬ２０２０(１６１):１２３０－１２３９.[１３]全菲ꎬ杨勇.靶向铁死亡的癌症疗法[Ｊ].药学研究ꎬ２０２０ꎬ３９(６):３１１－３１６.[１４]田吴爱ꎬ陈乃清ꎬ黄丽华ꎬ等.益母草碱激活ｐ６２/Ｎｒｆ２/ＨＯ－１信号通路抑制肾小管上皮细胞铁死亡的作用机制[Ｊ].中国中药杂志ꎬ２０２３ꎬ４８(８):２１７６－２１８３.[１５]李艳纯ꎬ周怡ꎬ王鑫ꎬ等.二氢青蒿素通过诱导铁死亡抑制肝癌细胞生长[Ｊ].中国生物化学与分子生物学报ꎬ２０１９ꎬ３５(１２):１３６１－１３６６.[１６]ＣＯＮＣＨＥＣꎬＦＩＮＫＥＬＭＥＩＥＲＦꎬＰＥŠＩＣ'Ｍꎬｅｔａｌ.ＣｏｍｂｉｎｉｎｇｆｅｒｒｏｐｔｏｓｉｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎｗｉｔｈＭＤＳＣｂｌｏｃｋａｄｅｒｅｎｄｅｒｓｐｒｉｍａｒｙｔｕｍｏｕｒｓａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｅｓｉｎｌｉｖｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅｔｏｉｍｍｕｎｅｃｈｅｃｋ￣ｐｏｉｎｔｂｌｏｃｋａｄｅ[Ｊ].Ｇｕｔꎬ２０２３(７２):１７７４－１７８２.[１７]ＫＩＭＤＷꎬＴＡＬＡＴＩＣꎬＫＩＭＲ.Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ(ＨＣＣ):ｂｅｙｏｎｄｓｏｒａｆｅｎｉｂ－ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ[Ｊ].ＪＧａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔＯｎｃｏｌꎬ２０１７ꎬ８(２):２５６－２６５.[１８]ＬＵＯＨꎬＶＯＮＧＣＴꎬＣＨＥＮＨＢꎬｅｔａｌ.Ｎａｔｕｒａｌｌｙｏｃｃｕｒｒｉｎｇａｎｔｉ－ｃａｎｃｅｒｃｏｍｐｏｕｎｄｓ:ｓｈｉｎｉｎｇｆｒｏｍＣｈｉｎｅｓｅｈｅｒｂａｌｍｅｄｉｃｉｎｅ[Ｊ].ＣｈｉｎＭｅｄ－Ｕｋꎬ２０１９ꎬ１４(１):４８.[１９]ＮＩＴＹꎬＷＡＮＧＨＢꎬＬＩＤꎬｅｔａｌ.ＨｕａｃｈａｎｓｕＣａｐｓｕｌｅｉｎ￣ｈｉｂｉｔｓｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｖｉａＡｋｔ/ｍＴＯＲｐａｔｈｗａｙ[Ｊ].ＢｉｏｍｅｄＰｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒꎬ２０１９(１１８):１０９２４１.[２０]ＹＡＮＧＴꎬＳＨＩＲＬꎬＣＨＡＮＧＬꎬｅｔａｌ.ＨｕａｃｈａｎｓｕｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓｈｕｍａｎｂｌａｄｄｅｒｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅＦａｓ/ＦａｓｌａｎｄＴＮＦ－ａｌｐｈａ/ＴＮＦＲ１ｐａｔｈｗａｙｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｉｎｖｉｖｏ[Ｊ].ＪＥｘｐＣｌｉｎＣａｎｃＲｅｓꎬ２０１５ꎬ３４(１):２１.[２１]徐文慧ꎬ李沧海ꎬ姜廷良.铁死亡通路与中药干预机制研究进展[Ｊ].中国中药杂志ꎬ２０１８ꎬ４３(２０):４０１９－４０２６.[２２]刘鑫玉ꎬ周洋ꎬ周建敏ꎬ等.铁死亡机制及其在肝细胞癌治疗中的应用[Ｊ].生命的化学ꎬ２０２２ꎬ４２(１０):１８８１－１８８７.(下转第２３５页)３㊀讨论ＰＣＩ术和冠状动脉搭桥等都是治疗冠心病的主要手段ꎬ而术后支架内再狭窄也是导致心血管事件发生率升高的主要因素ꎮ血管内膜炎性细胞浸润㊁内皮细胞增生㊁血管平滑肌(ＶＳＭＣ)迁移至内膜等导致内膜增厚ꎬ是管腔狭窄的主导因素ꎬ因而如何抑制血管内膜增厚㊁防止血管发生再狭窄是心血管疾病的研究热点之一[６]ꎮ目前临床上用于ＰＣＩ术的药物主要有雷帕霉素㊁紫杉醇等ꎮ此类药物阻止损伤部位血管平滑肌增殖迁移的同时ꎬ也会干预损伤血管内皮化ꎬ这就会引起血管迟发性再狭窄以及迟发性血栓的生成ꎬ导致ＰＣＩ术后心血管不良事件的发生ꎮ因此寻找安全有效的治疗血管再狭窄药物ꎬ具有重要的临床研究意义ꎮ研究发现[７]大鼠球囊损伤后２４ｈ可引起ＶＳＭＣ增殖㊁迁移ꎬ１４ｄ后内膜增生达到最高峰ꎻ２１ｄ模型对照组内膜呈进行性弥漫性增厚ꎬ其中以平滑肌为主ꎬ中膜细胞排列紊乱ꎬ管腔面积明显缩小ꎮ本研究建立大鼠腹主动脉球囊损伤术模型发现ꎬ假手术组管壁结构完整ꎬ血管内膜呈现良好的连续性ꎬ中膜边缘可见ＶＳＭＣｓ规则排列ꎮ模型对照组大鼠与假手术组相比ꎬ大鼠主动脉血管内皮剥落ꎬ内膜明显增厚ꎬ血管腔变窄ꎮ麝香心痛宁组大鼠腹主动脉内皮剥脱㊁内膜增厚㊁血管平滑肌迁移等病理现象减少ꎬ表明麝香心痛宁可抑制腹主动脉球囊损伤大鼠血管内膜增生ꎮＮＯ㊁ＥＴ－１和ＶＥＧＦ是反映血管内皮功能的因子ꎬＮＯ具有舒张血管平滑肌ꎬ抑制炎症因子和血小板黏附于血管的作用ꎬＥＴ－１可促进血管平滑肌细胞增殖ꎬ并收缩血管ꎬＶＥＧＦ可促进内皮细胞的迁移和增殖[８]ꎮ麝香心痛宁可调节血管内皮相关因子的含量[９]ꎬ从而抑制内膜增生的发展进程ꎮ通过检测大鼠血管炎症相关因子ＩＬ－１β表达发现麝香心痛宁可降低ＩＬ－１β表达ꎮ此外ꎬ麝香心痛宁可抑制Ｒｈｏ/Ｒｏｃｋ通路相关因子的表达ꎮ综上所述ꎬ麝香心痛宁具有保护血管内膜㊁抑制内膜增生的作用ꎬ并具有抗氧化损伤和抗炎作用ꎮ麝香心痛宁抑制血管损伤后内膜增生的药理作用机制可能与其抑制Ｒｈｏ/Ｒｏｃｋ信号通路相关ꎮ参考文献:[１]㊀ＹＯＮＧＦＳꎬＪＵＮＪＬꎬＫＥＺꎬｅｔａｌ.Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ－ｉｎｄｕｃｅｄｔｏｘ￣ｉｃｉｔｙ:Ａｎｉｎｔｅｇｒａｔｅｄｖｉｅｗｏｆｔｈｅｒｏｌｅｏｆｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｉｎｍｕｌｔｉ￣ｐｌｅｄｉｓｅａｓｅｓ[Ｊ].ＣｅｌｌＭｅｔａｂꎬ２０２１ꎬ３３(１０):１９１１－１９２５. 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