病理制片过程? ? 在临床病理科和组织学实验室，切片是最重要的技术之一。
切片的质量不好，就无法对标本进行观察。
好的切片机只是整个样品制备过程中的一个环节。
要制备一张好的切片，必须要将技术、知识和技巧进行完美的结合。
如果固定不充分，样品的质量就会有欠缺。
组织必须在选定的固定剂中浸泡足够长的时间，使大分子保持固有形态。
正确的固定可以防止样品在脱水剂中发生变性以及后期处理步骤对于样品造成的损害。
固定不充分可能增加切片的困难，表现出过度收缩，并且会导致细胞核染色不足和/或胞核呈现“泡沫”状。
1.2巨检? ? 样品需要修切成薄片，并尽可能做到均匀，否则很难在切片机上切出好的片子。
如果样品太厚以至于无法渗透充分，则必须经过再次处理才能进行切片。
这样会影响样品的质量，更浪费时间。
从最初的步骤开始就正确处理会使后面的工作更简单，因此在大体取材的时候多花些功夫会为以后的步骤节省大量时间和精力。
备注：包埋盒塞满组织且组织过厚就无法很好的固定，后续的处理步骤也会效果欠佳。
1.3脱钙? ? 为了后期进行石蜡包埋切片，骨组织需要进行脱钙，钙必须被完全去除才能确保切片的完整，并且可以防止刀具的损坏。
在用酸溶液进行脱钙之前，骨组织必须经过彻底的固定，这样其中的软组织成分才能够被保护，且防止细胞核在酸的作用下被破坏，比如蛋白质水解作用。
处理步骤：（一）脱水：脱水的关键就是将样品置于脱水试剂中足够长的时间，其中的游离水分子被除去，但是脱水时间也不宜过长，否则结合水分子也会被除去，会导致结构的变化。
而脱水时间过短致使水分还残留在样品中，就会导致包埋介质无法很好渗透入样品。
但是，脱水过度会导致样品的皱缩变脆。
从过度脱水的组织块上切到的切片，一旦放入水中，切片就会膨胀最后破碎。
如果将整个组织块浸入水中，则组织的表面会因为水化而膨胀，这样再进行切片，虽然片子的性状会有所改善，但是形态学会发生改变，而且染色后会发生色彩偏淡，对比度较弱。
最常用的脱水剂是乙醇和变性酒精。
甲基酒精有毒性，会破坏肝脏中的甲醛，因此不太单独使用。
异丙醇是乙醇最佳替代物，常规在微波处理中使用。
丁醇，剧毒，适用于较慢的组织处理过程，，而且多用在植物和动物组织。
无水酒精往往会含有水分，因此最好能检测一下试剂的纯度。
可以用液体比重计来测定，也可以将几毫升酒精滴入几毫升二甲苯或甲苯，如果混合液出现混浊就表示酒精中至少含有2％的水分。
（二）透明：石蜡是石油裂解物的提取物，属于惰性的碳氢化合物的混合物。
在脱水机中使用石蜡，温度最好设定在熔点以上2°－4°，在最后一步石蜡渗透完成后，脱水缸必须用透明剂彻底清洗，不能有任何石蜡的残留。
负压可以增强渗透的效果，但是在处理活检样本的时候，负压和加热都必须慎用。
另外还需要注意，即便有些脱水机增加到了4个蜡缸，总的渗透时间不能延长。
在确保渗透效果的基础上，组织在石蜡中停留的时间越短越好。
1.5石蜡包埋包埋是将正确定位的组织包裹在一种介质中（此处以石蜡为例）然后固化。
每个实验室都会创建一套特有的处理方法，这就决定了样品在处理后的硬度。
用来包埋的石蜡必须能够和样品的硬度相匹配，这样才能确保进行切片的蜡块质地尽可能均匀。
另外有两点对于切片也至关重要：温度和样品的定位。
组织包埋机已被广泛使用，机器最大的优点就是能够在每个步骤上都达到确的温控。
石蜡熔化并保持熔化状态的这个温度非常重要，必须确保一些添加剂完全溶解入石蜡。
模具，样品和石蜡之间的温和以往的观点相反，将石蜡设定在高温（大约85°C）持续数星期，反而是无害的。
尽管石蜡中添加了稳定剂，在氧化作用下，石蜡仍然会变质。
最初的征兆就是颜色转变为草黄色直到黄色。
随后可能有异味产生。
选择尺寸恰当的模具，确保样品的四周都被石蜡包围，样品置于中心。
用压平装置或者弯头镊子的背部轻柔地将样品展平（易碎样品可能会被压碎）。
不要让样品在模具中撑太满。
大或硬的样品必须按照一定角度放置在模具中。
如果同一个样品包含多种不同密度的成分，则包埋的时候要确保样品最硬的部分必须最后接触到锋利的刀刃。
皮肤往往带有毛发，则包埋的时候必须保证毛发最后才被切到。
动物样本中，如果组织的来源不同但是切片的性状相似则可以包埋在同一个塑料－增加硬度，对硬组织起到很好的支撑作用，得到更薄的切片DMSO（二甲基亚砜）－增强渗透（警告！－腐蚀性）1.5.3熔点和凝固点：绝大多数用于组织学的石蜡是多种石蜡的混合物，这样可以确保的硬度和指定的凝固点。
“凝固点”是制造商使用的术语，其实相当于“ 熔点”。
这个温度是指在石蜡中插入小木棒后，石蜡开始在木棒上凝固的那个温度。
凝固点和熔点温度往往是同一个温度或者在两个温度之间。
市售石蜡的特性往往根据其添加物和熔点的不同而有一定差异。
56°C 到58°C这个范围被常规实验室中普遍应用。
较低熔点的石蜡(50°C 到53°C)往往有其特殊的应用。
一般情况，低熔点的石蜡往往比较柔软，因此更适合包埋较软的组织。
进行较薄的切片比较困难，但是很容易连片。
（可以选购质地较硬但是熔点较低的埋的一批组织块不需要对表面进行调节或仅需要很小的调节。
环行模具也偶尔会用到，其中必须充填足够的包埋剂，而且不能夹持太紧。
圆形的支撑物经常在塑料包埋时使用。
木块：这是廉价的包埋盒替代物。
尽可能使用硬质木材（避免使用松软的松木）并进行切割以适合夹具的形状。
木块的表面可以开槽，从而增加黏附力。
注意：木制的支撑物在水中浸泡后会膨胀，导致在样品夹上固定效果欠佳。
金属：金属支撑物在塑料包埋时使用较多。
金属支撑物可以重复使用，但是相对比较贵，在使用时需要进行X/Y向的定位调节。
而且调节这个平面有一定的难度。
如果组织块附着恰当，这种夹具的稳定性非常好。
使用切片机必须遵从最佳的工作秩序，无论使用钢刀还是一次性刀片，切缘2.2切片机常见的功能回缩功能：无回缩功能：没有回缩功能的切片机，当样品头下降的时候，组织块就经过刀锋，随后沿同一平面上返回到起始位置，然后样品头按照指定的厚度前进重复下进行下一个动作。
有回缩功能：带回缩功能的切片机，当样品头向下移动时和无回缩切片机的动作完全一样，但是在样品头上升时，样品头会离开原来的平面，朝刀刃的反向移动，从而防止样品表面和刀锋接触。
这个功能有很大的好处，因为首先可以延长刀的使用寿命，还可以减少样品表面可能的摩擦（从而降低热膨胀），并且防止碎屑积聚在的刀刃背面并确保切片的一致性。
安全功能：手轮锁：切片机一般都配备手轮锁，可以将手轮锁定于任意位置，防止机器闲置期间意外触及手轮，导致人员意外伤害样或品头撞击刀具。
更人性化的切片机往往还配备第二手轮锁，手轮把手只能被锁定于最高点，便于在切片过程中随时更换样品或刀具。
刀架护刀器：无论钢刀刀架还是一次性刀片架，都应当配有牢固的护刀器，在更换样品观察，斜边笔直，不会出现锥形。
斜边上出现锥形会使刀刃发生弯曲，导致刀刃只在某个点上贴近蜡块，而其余部分相对远离。
所以减小斜面很重要，否则刀刃更多的区域就需要进行打磨以避免刀对样品的刮擦。
刀刃上的擦痕显然会影响切片的质量。
放大100倍对刀刃进行观察，应该看到一道很细的反光，呈笔直、不间断的明亮的细线。
不理想的刀刃看上去是不规则并有中断的线条。
刀的角度：刀刃上用来进行切片的区域是由两个相交的平面组成，叫做切面。
在这两个平面之间形成的夹角叫做斜角，（通常27°-3 2°），这个角度通常大于楔角（通常15°-18°）在切片机上进行角度的调节：当刀安装到切片机的刀架上时，必须呈一定角度，这样才能在刀刃接触组织平面的那个小平面和组织块平面之间形成一个间隙。
这个角度就是间隙角。
在切片机上都一个数字刻度表示间隙角的大小，这个读数在不同的切片机上可能会有差别。
更换了不同的切片刀后，这个数值可能需要调节。
寻找合适角度的方法，最好采取试错法。
刀片的宽度同样会影响到间隙角。
经过多次磨刀后，刀的宽度会变窄，为了和样品有一个正确的切入点，刀必须被抬高。
刀架必须经过调节，这样被磨过（变窄）的刀的刀锋必须处在和新（宽的）的刀锋一样高低的位置。
不同的剖面：在一次性刀片，采用优质的不锈钢，由于其便利性和经济性，在绝大多数实验室里作为重复使用型刀的替代品。
大多数的切片机都带有集成的刀片刀架，但是一次性刀片也可以插入安装在标准钢刀刀架上的刀片夹内使用。
宽型和窄型刀片：一次性刀片通常区分为宽型和窄型，这就表明了刀的宽度。
大多数窄型刀宽度为1/4英寸（约6mm），厚度为0.010英寸（约0 .23mm）；也有制造商采用厚度为0.012英寸（约0.27mm）的规格。
宽型刀大约宽度为1/2英寸（约11.4mm），常规的刀片厚度通常在0.012英寸（约0.27mm），重力刀片（硬组织切片专用）厚度可达0.033英寸（约0.75mm）。
实际的尺寸可能因为不同的制造商会有很大的差别，其中可能有些刀片在宽度和厚度上无法适应刀架。
请确保刀片和刀架之间兼容性。
无涂层vs.带涂层：一次性刀片的表面可以带有很薄的镀层或涂层。
不同制造商可能采用不同的涂层，但是几乎所有的涂层中都会含有聚四氟乙烯（PTFE ）类聚合物中的一种，这是一种类似Teflon的环保型涂层。
涂层的好处在于可以防止刀刃氧化，延长刀片的使用寿命并且可以降低摩擦力从而减少切片压力。
但是如果涂层过厚也会有坏处，最初的几张切片可能卷曲或者打卷，给人造成刀片“过于锋利”的感觉。
当刀片切过数张片子后，涂层被磨去部分，则卷曲的现象会有所改善。
在一些物体的表面摩擦刀片这种方法不是很值而压板的作用是将一次性刀片固定在恰当的位置，因此压力板必须保持清洁，也不能有任何损坏。
如果在压板表面有明显可见的弧度，而这部分又会和刀片接触，并导致刀片发生弯曲。
因此刀刃会以一种不正常的方式接触阻止块的表面。
同样，刀片上的碎屑也会导致同样的效果。
刀夹的夹力：作用在刀片上的压力必须均匀分布在刀片被覆盖的全部长度。
力度必须足够大以确保刀片的稳定，防止任何可能的振动。
但是也不能夹持过紧，否则会导致刀片弯曲而切出不规则的切片。
为了达到这种微妙的平衡，需要在反复实践中提高技巧。
3.正确的切片技术：3.1人体工程学和因工造成的肌肉骨骼损伤：工作习惯合并日常生活方式很可能导致职业相关的肌肉骨骼损伤，比如腕管综合症，肌腱炎和腱鞘炎。
不恰当使用切片机完全可以造成潜在的伤害。
在这里，我们会介绍一些实用的小诀窍：a.添置一把符合人体工程学的座椅。
调节座椅高度，保证手可以轻松够到手轮，且不占用搁置腿脚的空间。
如果脚不能踏到地板，请使用脚凳。
b.将水浴缸放置在切片机区域旁L型的延伸段，这样只需要稍微转动身体和椅子就可以够到水浴缸，不必频繁倾斜身体。
