人乳头状瘤病毒16型、18 型、单纯疱疹病毒2 型和 巨细胞病毒感染与宫颈癌的关系

CMV 病毒的阳性例数中，宫颈癌组分别与 CIN 组、CIN 组与慢性宫颈炎组比较差异无统计学意义（c2=1.758，c2=0.000，
c2=0.937，P>0.05）；在宫颈癌组中单独或合并 HPV-16、HPV-18、HSV-2、CMV 的感染率明显高于非宫颈癌组。 结论
HPV 在引起宫颈癌的作用是主要的，HSV-2、CMV 合并感染可能会增加患病的危险性，可将性传播疾病患者作为宫颈
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疾病预防控制通报 2013 年第 28 卷第 1 期 Bull Dis Control Prev 2013 Vol.28, No.1
• 实验研究 •
人乳头状瘤病毒 16 型、18 型、单纯疱疹病毒 2 型和 巨细胞病毒感染与宫颈癌的关系*
木则帕尔·太来提 1，阿尼克孜·阿不都艾尼 1，玛依努尔·尼牙孜 2**，朱开春 2
疾病预防控制通报 2013 年第 28 卷第 1 期 Bull Dis Control Prev 2013 Vol.28, No.1
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直受到国内外重视，特别是近十多年对宫颈癌的病因 及癌变机制的研究表明，人乳头状瘤病毒（human papillomavirus，HPV）是宫颈癌的主要致癌因素[2]。其中， 约 50%～60%的宫颈癌与 HPV-16/18 型感染相关。文 献报道，疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）和巨细胞病毒（CMV） 与宫颈癌都有很强的相关性，尤其当感染的病毒种类 增加时，患病的危险性也随之增高[3]。本研究分别对 宫颈癌、宫颈上皮内瘤样病变（CIN）和慢性宫颈炎进 行 HPV16、18 型、HSV-2 和 CMV 病毒的聚合酶链反应 （PCR）检测，以分析其与宫颈癌发生、发展的关系。
目前，全球每年宫颈癌新发病例已超过 57 万，死 于宫颈癌的妇女 27.51 万例，其中约 80%发生在发展
中国家，宫颈癌已成为发展中国家妇女死亡的主要原 因之一[1]，因此宫颈癌的病因及其发病机制的研究一
* 作者简介：木则帕尔·太来提（1986-），男（维吾尔族），药师，学士，E-mail：ank1114@126.com ** 通讯作者：玛依努尔·尼牙孜，E-mail：mynr68@yahoo.com.cn
癌风险人群进行防癌筛查，以提高早期诊断和早期治疗率。
关键词：人乳头状瘤病毒；单纯疱疹病毒 2 型；巨细胞病毒；宫颈癌
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中图分类号：R737.33
文献标志码：A
文章编号：1000-3711（2013）01-0010-04
Relationship between infection of HPV16, HPV18, HSV-2, cytomegalovirus and cervical cancer
1 材料和方法 1.1 标本采集 宫颈癌及 CIN 患者为 2010 年 8～12 月 在新疆维吾尔自治区人民医院妇科门诊及住院患者 的宫颈组织，均经病理学鉴定为宫颈癌或各级 CIN。 宫颈癌患者平均年龄 51 岁（31～81 岁）；CIN 患者平均 年龄 46 岁（34～68 岁）。上述标本均在放疗和化疗之 前收集并放置-70℃冰箱保存。 1.2 主 要 试 剂 血 液/细 胞/组 织 DNA 提 取 试 剂 盒 ， Taq DNA 聚合酶和 dNTP 均购自北京天根生物工程有 限公司。 1.3 引物设计与合成 根据公布的β-actin、HPV-16、 HPV-18 基因序列设计特性引物对。β-actin 上游和下 游 引 物 序 列 分 别 为 P1：5′-AGCCATGTACGTAGCCATCC-3′ 和 P2 ：5′-CTCTCAGCTGTGGTGGTGAA-3′ 。 HPV-16 上 游 和 下 游 引 物 序 列 分 别 为 P1：5′-TGCTAGTGCTTATGCAGCAA-3′ 和 P2：5′-ATTTACTGCAACATTGGTAC-3′。HPV-18 上游和下游引物序列 分别为 5′-TGCCAGAAACCGTTGAATCC-3'和 5′-TCTGAGTCGCTT AATTGCTC-3′。根据已知的 HSV-2gpG 基因序列设计合成了两对检测 HSV-2 引物 P1：5′-TCAGCCCATCCTCCTTCGGCAGTA-3′ 、P2：5′-GATCTGGTACTCGAATGTCTCCG-3′、P3：5′-AGACGTGCGGGTCGTACACG-3′ 、P4:5′-CGCGCG GTCCCAGATCGGCA-3′。根据 CMV 基因序列也设计合成了两对检测 CMV 引 物 P1：5′-TGAGGATAAGCGGGAGATGT-3′ 、 P2：5′-ACTGAGGCAAGTTCTGAGT-3′、P3：5′-AGCTGCATGATGTGAGCAAG-3′、P4：5′-GAAGGCTGAGTTCTTGGTAA-3′。上述引物均在上海生工生物工程 有限公司合成。 1.4 宫颈病样组织 DNA 的提取及 PCR 的检测 按 天根生化科技（北京）有限公司血液/细胞/组织 DNA 提取试剂盒说明书提取宫颈病理组织 DNA，并以此 DNA 为模板，分别用β-actin 基因和 HPV-16、HPV18 基 因的特异性引物对进行 PCR 扩增反应，β-actin 基因
法检测 HPV-16、18 型、HSV-2 和 CMV 感染情况。 结果 HPV-16、18 型、HSV-2、CMV 阳性率从宫颈癌组到慢性宫颈炎
组均有递减趋势；HPV-16 型病毒的阳性例数中宫颈癌组分别与 CIN 组比较、慢性宫颈炎组比较差异有统计学意义（c2=
28.714，c2=55.907，P<0.05），CIN 组与慢性宫颈炎组比较差异有统计学意义（c2=11.507，P<0.05）；HPV-18、HSV-2 和
PCR 扩增参数为：95℃ 5 min；95℃ 20 s，55℃ 20 s， 72℃ 20 s，30 个循环；72℃ 7 min。HPV-16 基因 PCR 扩增参数为：95℃ 5 min；94℃ 45 s，49℃ 30 s，72℃ 30 s，35 个循环；72℃ 7 min。HPV18 基因 PCR 扩增参 数为 95℃ 5 min；94℃ 30 s，60℃ 45 s，72℃ 45 s，30 个 循环；72℃ 5 min。HSV-2 和 CMV 所用的是巢式 PCR 方法。HSV-2 基因 PCR 扩增参数为：第一次 PCR 反应 用引物 P1 和 P2；93℃ 30s，55℃ 60 s，72℃ 60 s,35 个 循环；72℃ 5 min。第二次 PCR 反应用 P3 和 P4，模板 为第一次 PCR 扩增产物取 3 μl，93℃ 2 min；93℃ 30 s， 55℃ 60 s，72℃ 60 s，30 个循环；72℃ 5 min。CMV 基 因 PCR 扩增参数为：第一次 PCR 反应同样用引物 P1 和 P2；94℃ 35 s，60℃ 30 s，72℃ 45 s，35 个循环；72℃ 5 min。第二次 PCR 反应以同样的条件用 P3 和 P4 引物， 模板为第一次 PCR 扩增产物取 3 μl，反应 20 个循环。 1.5 统计学分析 本实验用 Spss 17.0 软件，病毒检 测阳性例数和阳性率比较采用χ2独立性检验。
1. 新疆喀什地区第一人民医院，新疆 喀什 844000； 2. 新疆维吾尔自治区人民医院，乌鲁木齐 830001
摘要： 目的 探讨人乳头状瘤病毒（HPV）-16、18 型、单纯疱疹病毒 2 型（HSV-2）和巨细胞病毒（CMV）感染与宫颈癌的
关系。 方法 对 66 例宫颈癌、58 例宫颈上皮内瘤样变（CIN）、20 例慢性宫颈炎患者宫颈活检组织用聚合酶链反应方
Muzappar TALAT*, Anikiz ABDUHINI, Mynur NIYAZ, ZHU Kai-chun *The First People’s Hospital of Kashi Prefecture, Kashi, Xinjiang 844000, China
Abstract: Objective To explore relationship between human papilloma virus (HPV)-16, 18 type, herpes simplex virus type 2 (HSV-2), cytomegalovirus (CMV) infection and cervical cancer. Methods Sixty-six cases with cervical cancer, including 58 cases with cervical intraepithelial neoplasia (CIN), 20 cases with chronic cervicitis were detected for infection of HPV-16 and 18, HSV-2 and CMV by polymerase chain reaction, 58 cases with cervical intraepithelial neoplasia (CIN), and 20 cases with chronic cervicitis. Results There was decrement tendency of positive rate of HPV-16 and 18 type, HSV-2 and CMV from cervical cancer group to chronic cervicitis group. The positive rate was of statistical significance in HPV16 among groups of cervical cancer, CIN (c2=28.714, P<0.05) and chronic cervicitis (c2=55.907, P<0.05), and between groups of CIN and chronic cervicitis (c2=11.507, P<0.05), and also in HPV-18, HSV-2 and CMV respectively among groups of cervical cancer, CIN (c2=0.037, c2=4.336, c2=2.225，P>0.05) and chronic cervicitis (c2=2.474, c2=1.758, c2=0.000, P>0.05), CIN groups and chronic cervicitis groups (c2=1.758, c2=0.000, c2=0.937，P>0.05). In cervical cancer group, single or combined infection rates of HPV-16, HPV-18, HSV-2, CMV virus were significantly higher than those of non-cervical cancer group. Conclusions HPV plays predominant role in causing cervical cancer, while HSV-2, CMV infection may increase the risk of cervical cancer. Sexually transmitted disease can be considered as a cervical cancer risk for screening, in order to improve the rate of early diagnosis and treatment. Key Words: Human papillomavirus (HPV); Herpes simplex virus 2; Cytomegalovirus; Cervical cancer