软骨染色液(甲苯胺蓝法)染色步骤及注意事项

甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法)简介：甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料, 属于醌亚胺染料类, 这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。

甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。

甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。

另外，肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质，遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色，临床上经常用于肥大细胞染色。

Leagene 甲苯胺蓝染色液(Toluidine Blue,1%,硼酸盐法)由于硼酸盐缓冲液呈强碱性，更利于组织细胞的着色。

组成：操作步骤(仅供参考)：(一)肥大细胞染色1、脱蜡至蒸馏水。

2、根据切片厚度和组织的不同，浸染于甲苯胺蓝染色液。

3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗。

4、冰乙酸分化，直到细胞核和颗粒清晰可见。

5、快速和无水乙醇脱水。

6、 二甲苯透明，封固。

染色结果：肥大细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。

(二)软骨染色1、 石蜡切片入二甲苯。

2、 系列乙醇各。

3、 自来水洗。

4、 入Toluidine Blue O Stain ，浸染。

5、 自来水洗，滤纸吸干水分。

6、 丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。

7、 逐级乙醇脱水。

编号 名称 DA0059 Storage Toluidine Blue O stain (0.5%,硼酸盐法) 100ml RT 避光 使用说明书 1份8、二甲苯透明，中性树胶封固。

染色结果：软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。

(三)细胞涂片染色1、用乙醇溶液稀释甲苯胺蓝染色液, 一般要求稀释即可。

2、细胞涂片后，立即放入乙醇中固定，取出放在纸巾上。

3、滴加稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染，加盖玻片让染料渗透到细胞中。

4、将玻片竖起，稍加压力，使多余染料被纸巾吸去。

5、无需干燥，直接镜检。

Masson 三色染色试剂盒（甲苯胺蓝）说明书修订日期：2018.07.31Cat number：KGMST-8004Store at 2-8℃ for 12 monthsFor Research Use Only（科研专用）【适用范围】Masson 三色染色试剂盒主要用于结缔组织染色。

用于判定各种组织、器官的病变程度与修复情况，以不同色调显示与区分某些非结缔组织及物质成分；如显示与区分肌肉及其肿瘤组织的正常或异常成分。

尤适用于软组织肿瘤的鉴别诊断。

【主要成分】【染色步骤】1、切片脱蜡处理至水。

2、滴加 1 滴（50-100µl）苏木素染色液（试剂 A）染色 5-10 分钟。

蒸馏水冲掉染液。

3、蒸馏水或自来水冲洗 2-5 分钟。

4、滴加 1 滴（50-100µl）复合染色液（试剂 B）染色 5 分钟。

5、蒸馏水或自来水冲洗一下（2-3 秒，冲掉染液即可）。

6、滴加 1 滴（50-100µl）磷钼酸（试剂 C）染色 1 分钟。

7、甩干或自然晾干。

8、滴加 1 滴（50-100µl）甲苯胺蓝染色液（试剂 D）染色 5min 左右。

9、蒸馏水或自来水冲洗一下（2-3 秒，冲掉染液即可）。

10、放入烘箱（50－60 摄氏度）烘干。

中性树胶封片。

【结果】胶元纤维、黏液、软骨、神经纤维呈蓝色；肌肉、弹力纤维呈红色；神经轴索呈粉红色；纤维素呈紫红色；红血球呈橘红色。

细胞核呈蓝紫色。

【注意事项】1、不同的固定液或固定时间以及不一样的组织，染色效果可有差异，要根据显微镜下观察来掌握染色或分化时间。

2、染色液必须充分淹盖组织。

3、每次染色宜用阳性切片作对照。

【有效期】12 个月仅供研究、不用于临床诊断。

Leagene 。

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甲苯胺蓝染色液(软骨专用)
简介：
甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料, 属于醌亚胺染料类, 这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。

甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。

另外，肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质，遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色，临床上经常用于肥大细胞染色。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 石蜡切片入二甲苯2次。

2、 系列乙醇各1min ，自来水洗。

3、 入Toluidine Blue O Stain 浸染。

4、 自来水洗。

5、 丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。

染色结果：软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。

编号 名称 DA0054 Storage Toluidine Blue O stain (软骨专用) 50ml RT 避光 使用说明书 1份。

肥大细胞染色液(甲苯胺蓝法)简介：肥大细胞(Mast cell)是疏松结缔组织内常见的细胞，常成群的沿着小血管和淋巴管分布，也常见于支气管和胰腺的小叶间导管周围，一般细胞较大，直径约为20-30μm ，呈圆形或椭圆形，胞核较小、胞质内充满粗大且具有异染性嗜酸性颗粒。

甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。

甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。

肥大细胞颗粒呈紫红色，其他呈蓝色。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、 取新鲜组织立即固定于10%中性福尔马林固定液中，常规脱水包埋。

2、 切片厚度4-5μm ，常规脱蜡至水。

3、 系列乙醇各，自来水洗2min 。

4、 入Toluidine Blue O Stain ，浸染。

5、 自来水稍洗。

6、 TBO 分化液分化，直至细胞核和颗粒清晰，可在显微镜下控制。

7、 自来水稍洗，滤纸吸干或吹风机吹干水分。

8、 95%乙醇1min ，无水乙醇2次，每次2min 。

9、 二甲苯透明，中性树胶封固。

染色结果： 肥大细胞颗粒紫蓝色 背景 淡蓝色注意事项：1、 针对于胃粘膜组织、软骨组织等较难着色组织的染色，浸染于甲苯胺蓝染色液的时间应 编号 名称 DA0050 Storage 试剂(A): Toluidine Blue O Stain 100ml RT 避光 试剂(B): TBO 分化液 250ml RT 使用说明书 1份相应延长。

2、应注意组织要新鲜，取出后立即固定。

3、甲苯胺蓝染色后不宜采用低浓度乙醇脱水，否则容易导致褪色。

4、分色后应快速入95%乙醇、无水乙醇、二甲苯的时间不宜过久，否则容易导致褪色。

有效期：6个月有效。

相关：编号名称DC0032 Masson三色染色液DF0111 中性福尔马林固定液(10%)DG0005 糖原PAS染色液DH0001 改良Lillie-Mayer苏木素染色液DJ0001 普鲁士蓝染色液(核固红法)DK0022 尼氏染色液(焦油紫法)NH0043 SSC缓冲液(20×,pH7.0)TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)。

染色方法:
(一)1.甲苯胺蓝液
甲苯胺蓝0.5g蒸馏水定容至100ml
2.冰醋酸液
冰醋酸0.5ml蒸馏水定容至100ml
染色步骤
1.组织切片常规脱蜡至水
2.入甲苯胺蓝液30min
3.稍水洗
4.入冰醋酸液分化，直到胞核和颗粒清晰。

5.稍水洗，用冷风吹干
6.二甲苯透明，中性树胶封固
(二)
①切片脱腊至水。

②蒸馏水浸洗3次。

③0.1%甲苯胺蓝液浸染10min。

④水洗，洗去多余染液。

⑤各级酒精脱水。

⑥二甲苯透明，中性树胶封固。

试剂的配制
称取0.1g甲苯胺蓝，溶于100ml 0.1M醋酸盐缓冲液中，置室温5天后，即可使用染液于室温下可保存3个月，若放于4℃冰箱则可保存半年左右，但该液的染色效果在早期为最佳，若染液存放时间较长，则染色偏淡，应适应延长染色时间。

软骨染色液(番红O法)简介：软骨组织由软骨细胞和软骨基质组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。

软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。

软骨染色方法有很多种，例如甲苯胺蓝法、阿利新蓝法、番红O法等。

软骨染色液(番红O法)染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色，番红O是一种结合多阴离子的阳离子染料，其显示软骨是基于阳离子染料与多糖中阴离子基团(硫酸软骨素或硫酸角质素)结合。

番红O着色与阴离子的浓度近似成正比关系，间接反映基质中蛋白多糖的含量和分布。

当软骨受到损伤时，软骨中的糖蛋白会释放出来，使基质成分分布不均匀，从而导致番红O淡染或不着色。

通过图像分析软件可对番红O染色的软骨基质进行定量分析，番红O分化很关键，分化过度易导致切片不着色，分化不足易导致切片着色过深。

组成：编号名称DB00712×100mlStorage试剂(A): Safranin O stain 100ml RT 避光试剂(B): Safranin分化液100ml RT使用说明书1份自备材料：1、10%福尔马林固定液2、脱钙液3、蒸馏水4、系列乙醇操作步骤(仅供参考)：1、标本的处理：福尔马林固定、脱钙、石蜡切片。

2、常规脱蜡至水。

3、蒸馏水洗。

4、入Safranin O stain内浸染，蒸馏水洗。

5、用Safranin分化液洗涤切片，蒸馏水洗。

6、分别用95%乙醇、无水乙醇脱水。

7、二甲苯透明，光学树脂封固。

染色结果：软骨基质红色注意事项：1、切片在Safranin O stain中染色不宜过长，否则易导致背景的深红色不易分化掉。

2、切片分化时间应恰当，以背景呈绿色为宜。

3、Safranin O stain染色后，不宜在低浓度乙醇脱水，否则易褪色。

4、95%乙醇脱水时间不宜过长。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。

相关：编号名称DC0032Masson三色染色液TC0713葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)。

北京雷根生物技术有限公司
肥大细胞染色液(甲苯胺蓝法)
简介：
甲苯胺蓝(T oluidine Blue O)中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。

甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。

临床上，经常用甲苯胺蓝对软骨细胞和肥大细胞进行染色。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 石蜡切片入二甲苯2次。

2、 系列乙醇各1min 。

自来水洗。

3、 入Toluidine Blue O Stain 浸染。

4、 自来水洗2min ，滤纸吸干水分。

5、 95%乙醇分色至肥大细胞呈紫蓝色，背景呈淡蓝色。

6、 95%乙醇1min 。

无水乙醇2次，每次2min 。

二甲苯透明，中性树胶封固。

染色结果： 肥大细胞颗粒
紫蓝色 背景
淡蓝色
注意事项：
1、 针对于胃粘膜组织、软骨组织等较难着色组织的染色，浸染于甲苯胺蓝染色液的时间应相应延长。

2、 固定液最好采用Carnoy 固定液。

3、 甲苯胺蓝染色后不宜采用低浓度乙醇脱水，否则容易导致褪色。

4、 分色后应快速入95%乙醇、无水乙醇、二甲苯的时间不宜过久，否则容易导致褪色。

有效期： 12个月有效。

编号 名称 DA0050 Storage Toluidine Blue O Stain 100ml RT 避光 使用说明书 1份。

石蜡切片的甲苯胺蓝染色法
方法一
配方：甲苯胺蓝1g 溶于95%酒精100ml ，置60℃温箱中2h后降至室温。

染液于室温下可保存3个月，若放于4℃冰箱则可保存半年左右，但该液的染色效果在早期为最佳，若染液存放时间较长，则染色偏淡，应适应延长染色时间。

1、脱蜡至蒸馏水。

2、根据切片厚度和组织的不同，浸染于甲苯胺蓝染色液20～30min。

3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗3～5min。

4、(可选)0.5%冰乙酸分化，直到细胞核和颗粒清晰可见。

5、快速95%和无水乙醇脱水。

6、二甲苯透明。

7、封固。

方法二
配方：甲苯胺蓝0.5g蒸馏水定容至100ml。

冰醋酸液：冰醋酸0.5ml蒸馏水定容至100ml
1.组织切片常规脱蜡至水
2.入甲苯胺蓝液30min
3.稍水洗
4.入冰醋酸液分化，直到胞核和颗粒清晰。

5.稍水洗，用冷风吹干
6.二甲苯透明，中性树胶封固。

甲苯胺蓝（Toluidine Blue）染色法用于软骨染色的原理基于该染料的化学性质和软骨组织的特性。

甲苯胺蓝是一种碱性染料，它的分子结构中含有阳离子，使其带有正电荷。

软骨组织中富含酸性黏多糖（如硫酸软骨素、透明质酸等），这些多糖带负电荷，因而能够与甲苯胺蓝中的阳离子形成离子键，从而被染色。

在甲苯胺蓝染色液中，软骨组织特别是软骨基质会被染成蓝紫色，这是因为软骨基质内丰富的酸性黏多糖容易与甲苯胺蓝结合。

此外，软骨细胞核和一些特殊的蛋白质也可能会被甲苯胺蓝染成不同的颜色，从而可以在显微镜下清晰地区分软骨的不同结构成分。

通过甲苯胺蓝染色，研究人员能够准确观察到软骨的形态结构，包括软骨细胞、软骨基质的分布以及软骨损伤等情况，这对于研究关节炎、发育生物学、病理诊断等多种领域都具有重要意义。

肥大细胞染色液(甲苯胺蓝法)简介：肥大细胞(Mast cell)是疏松结缔组织内常见的细胞，常成群的沿着小血管和淋巴管分布，也常见于支气管和胰腺的小叶间导管周围，一般细胞较大，直径约为20-30μm，呈圆形或椭圆形，胞核较小、胞质内充满粗大且具有异染性嗜酸性颗粒。

甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)中的阳离子有染色作用,组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。

甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类,帮助发色团对组织产生染色力,使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。

肥大细胞颗粒呈紫红色，其他呈蓝色。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、取新鲜组织立即固定于10%中性福尔马林固定液中，常规脱水包埋。

2、切片厚度4-5μm，常规脱蜡至水。

3、系列乙醇，自来水洗。

4、入Toluidine Blue O Stain ，浸染1。

5、自来水稍洗。

6、TBO 分化液分化，直至细胞核和颗粒清晰，可在显微镜下控制。

7、自来水稍洗，滤纸吸干或吹风机吹干水分。

8、95%乙醇，无水乙醇，每次。

9、二甲苯透明，中性树胶封固。

染色结果：肥大细胞颗粒紫蓝色背景淡蓝色注意事项：1、针对于胃粘膜组织、软骨组织等较难着色组织的染色，浸染于甲苯胺蓝染色液的时间应编号名称DA0050Storage试剂(A):Toluidine Blue O Stain 100ml RT 避光试剂(B):TBO 分化液250mlRT 使用说明书1份相应延长。

2、应注意组织要新鲜，取出后立即固定。

3、甲苯胺蓝染色后不宜采用低浓度乙醇脱水，否则容易导致褪色。

4、分色后应快速入95%乙醇、无水乙醇、二甲苯的时间不宜过久，否则容易导致褪色。

相关：编号名称DC0032Masson三色染色液DF0111中性福尔马林固定液(10%)DG0005糖原PAS染色液DH0001改良Lillie-Mayer苏木素染色液DJ0001普鲁士蓝染色液(核固红法)DK0022尼氏染色液(焦油紫法)NH0043SSC缓冲液(20×,pH7.0)TC0713葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)。

苯胺蓝染色液使用说明
货号：G1350
规格：100ml
保存：室温避光保存，有效期24个月。

产品说明：
苯胺蓝染色液是Masson三色染色试剂盒的组成之一。

主要有苯胺蓝、弱酸等组成，呈酸性，常与丽春红品红染色液等配合使用对胶原纤维进行染色，染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

操作步骤(仅供参考)：
以Masson三色染色为例：
1、切片常规脱蜡至水。

2、用配制好的Weigert铁苏木素染色液染色5min-10min。

3、酸性乙醇分化液分化、水洗。

4、Masson蓝化液返蓝、水洗。

5、蒸馏水洗1min。

6、丽春红品红染色液染色5-10min。

7、磷钼酸溶液分化1-2min
8、倒掉分化液，直接放入苯胺蓝染色液中染色1-2min。

9、用弱酸工作液洗1min。

10、95%乙醇快速脱水。

11、无水乙醇脱水3次，每次5-10s。

12、二甲苯透明3次，每次1-2min。

13、中性树胶封固。

注意事项：
1.切片脱蜡应尽量干净。

2.切片入苯胺蓝染色液染色前不要水洗，否则可能出现不着色。

3.不同染色参照具体的实验要求。

4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

甲苯胺蓝染色渗透试验
1.目的
根据ASTM F1929-2012标准方法采用染色渗透法检测无菌包装封口泄漏性能
2.设备及工具、材料
天平（万分之一）10mL注射器，甲苯胺蓝、曲拉通X-100（氚X-1004）、纯化水、烧杯、试管
3.配制方法
3.1.用天平称量0.5g Triton X-100，与20ml纯化水混合，搅
拌或摇动容器，混合二者。

待Triton X-100分散后。

再加入纯化水定容至100ml。

3.2.用天平称量0.05g甲苯胺蓝，加入混合了Triton X-100的溶
液中,搅拌或摇动容器混合均匀，即成0.05%甲苯胺蓝染色液4.试验方法
4.1.把已灭菌产品包装在试验开始之前，放置于大气温度23±
2℃（73.4±3.6oF）和相对湿度50±2%环境中进行存贮24小时】
4.2.依据ASTM F1929-2012标准，将足够的染料渗透液注入包装中，
覆盖最长的封边，深度约5mm（0.25英寸）（注入方法：可以使用带有软管的注射器通过切口送入染料渗透剂）使染料渗透液与封边保持接触最少5s最多20s的时间，旋转包装使每道封边都能接触渗透液，如有需要可以补充染色液，确保每道封边都能接触足够量的染色液。

通过包装的透明面目力检测密封区，看有无泄漏或者通道出现，也可使用放大镜进行细致的观察
5.检验标准
在包装透明的一边，用肉眼检测封口区域。

即可看见封口区的通道。

检查染色液有无透过密封区到达另一侧或染色液有无通过确定的通道进入密封区内部的迹象
6.注意事项
染色渗透液与包装材料封边的作用时间不应超过20秒
编写：日期：。

软骨染色液（阿利新蓝法，pH=1.0）货号：G2541规格：2×50mL/2×100mL保存：4℃，避光，12个月。

产品说明：阿利新蓝(Alcian Blue8GX)又称爱先蓝或阿尔辛蓝等，是一种类铜钛花青共轭染料，最初用于纺织纤维染色。

这种阳离子染料与酸性基团结合，即阿尔辛蓝与组织内含有的阴离子基团如羧基和硫酸根形成不溶性复合物。

阿利新蓝由中央含铜的酞菁环与四个异硫脲基通过硫醚键相连而成，该异硫脲基呈中度碱性，使阿利新蓝带阳离子。

软骨染色液(阿利新蓝法，pH1.0)利用染液的不同pH值可区分粘液物质的类属，pH为1时，羧基(COOH)不着色，硫酸基(OSO3H)着色，pH为 2.5时，羧基染色良好而硫酸粘液着色不佳，使硫酸黏蛋白和唾液黏蛋白着色。

本试剂仅适用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

产品组成：名称G25412×50mL G25412×100mL Storage 货号试剂(A):Alcian酸化液50mL100mL RT试剂(B):Alcian染色液50mL100mL4℃，避光操作说明：（仅供参考）1、常规脱钙，二甲苯脱蜡，通过梯度乙醇后，入蒸馏水水化。

2、入Alcian酸化液浸泡3min。

3、入Alcian染色液染色30min。

4、流水冲洗5min。

5、梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

染色结果：硫酸黏蛋白蓝色细胞核淡蓝色注意事项：1、固定液采用10%中性福尔马林。

2、该法可区分鉴别硫酸黏蛋白和蛋白多糖，其pH=1.0。

3、已开封试剂应在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法)简介：甲苯胺蓝(T oluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料, 属于醌亚胺染料类, 这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。

甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。

甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色，甲苯胺蓝染色液(T oluidine Blue,1%,硼酸盐法)由于硼酸盐缓冲液呈强碱性，更利于组织细胞的着色。

组成：操作步骤(仅供参考)：(一)肥大细胞染色1、脱蜡至蒸馏水。

2、根据切片厚度和组织的不同，浸染于甲苯胺蓝染色液。

3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗。

4、(可选)0.5%冰乙酸分化，直到细胞核和颗粒清晰可见。

5、快速95%和无水乙醇脱水。

6、 二甲苯透明，封固。

染色结果：肥大细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。

(二)软骨染色1、 石蜡切片入二甲苯2次。

2、 系列乙醇各。

3、 自来水洗2min 。

4、 入Toluidine Blue O Stain 浸染。

5、 自来水洗2min ，滤纸吸干水分。

6、 丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。

7、 逐级乙醇脱水。

8、 二甲苯透明，中性树胶封固。

染色结果：软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。

编号 名称 DA0059 Storage Toluidine Blue O stain (0.5%,硼酸盐法) 100ml RT 避光 使用说明书 1份(三)细胞涂片染色1、用20%的乙醇溶液稀释甲苯胺蓝染色液, 一般要求稀释到0.1%即可。

2、细胞涂片后，立即放入95%的乙醇中固定，取出放在纸巾上。

3、滴加稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染，加盖玻片让染料渗透到细胞中。

4、后将玻片竖起，稍加压力，使多余染料被纸巾吸去。

5、无需干燥，直接镜检。

染色结果：细胞核、淋巴细胞呈深蓝色；核仁呈紫红色；红细胞呈橘红；细胞质、单核细胞呈淡蓝色。

甲苯胺蓝染软骨原理
甲苯胺蓝是一种常用的软骨染色剂，它的染色原理涉及到其与软骨组织中的多糖类物质的特异性结合。

在进行软骨染色时，甲苯胺蓝会与软骨中的多糖类物质发生特异性反应，形成可见的染色复合物。

软骨组织中含有大量的多糖类物质，如硫酸软骨素和透明质酸等。

这些多糖类物质与甲苯胺蓝之间存在亲和性，甲苯胺蓝分子中的芳香环结构与多糖类物质中的羟基或羧基发生作用，从而形成复合物。

这种复合物在光学显微镜下呈现出特定的颜色，从而使得软骨组织能够被清晰地观察和分析。

甲苯胺蓝染软骨的原理是基于这种特异性结合的化学反应，通过染色使得软骨组织的结构和成分得以清晰展现。

这种染色方法在组织学研究和临床诊断中具有重要的应用意义，能够帮助科研人员和医生观察和分析软骨组织的形态和病变情况，为疾病诊断和治疗提供重要依据。

总的来说，甲苯胺蓝染软骨的原理是基于其与软骨中多糖类物
质的特异性结合，通过形成可见的染色复合物来清晰展现软骨组织的结构和成分，为科研和临床诊断提供帮助。

改良番红O-固绿软骨染色液操作步骤及染色结果说明货号：G1371规格：5×50ml/5×100ml有效期：6个月有效产品简介：软骨组织由软骨细胞、软骨基质和纤维组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。

软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。

软骨染色方法有很多种，例如甲苯胺蓝法、阿利新蓝法、番红O法等。

改良番红0-固绿软骨染色法的染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色，嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而成绿色或蓝色，与呈现红色的软骨对比鲜明，从而将软骨组织和骨组织区分开。

番红O是一种结合多阴离子的阳离子染料，其显示软骨组织是基于阳离子染料与多糖中阴离子基团（硫酸软骨素或硫酸角质素）结合。

番红O着色与阴离子的浓度近似成正比关系，间接反映了基质中蛋白多糖的含量和分布。

当软骨受到损伤时，软骨中的糖蛋白会释放出来，使基质成分分布不均匀，从而导致番红O淡染或不着色。

通过图像分析软件可对番红O染色的软骨基质进行定量分析。

固绿与胶原纤维结合，不宜褪色。

番红O-固绿染色的分化很关键，分化过度易导致切片不着色，分化不足易导致切片着色过深。

产品组成：名称规格5×50ml5×100ml StorageA1:Weigert A液25ml50ml RT避光试剂(A)A2:Weigert B液25ml50ml RT避光临用时，取A1、A2等量混合为Weigert染液，24h后失去染色力，不宜预先配制。

试剂(B):酸性乙醇分化液50ml100ml RT试剂(C):固绿染色液50ml100ml RT避光试剂(D):Safranin O stain50ml100ml RT避光试剂(E):乙酸溶液50ml100ml RT使用说明书1份自备材料：10%福尔马林固定液，脱钙液，蒸馏水，系列乙醇。

操作步骤（仅供参考）：1、标本的处理：10%福尔马林固定、脱钙、石蜡切片。

甲苯胺蓝染色液(1%,磷酸盐法)货号：G3661规格：100ml保存：室温，避光，12个月。

产品说明：甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料,属于醌亚胺染料类。

这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。

甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用,组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。

甲苯胺蓝不仅含有两个发色团，还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类,帮助发色团对组织产生染色力,使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。

肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色。

操作说明：（仅供参考）(一)肥大细胞染色1、脱蜡至蒸馏水。

2、浸染于甲苯胺蓝染色液10-15min，具体的染色时间根据切片厚度和组织的不同而定。

3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗。

4、(可选)0.5%冰乙酸分化，直到细胞核和颗粒清晰可见。

5、快速95%和无水乙醇脱水。

6、二甲苯透明，封固。

染色结果：肥大细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。

(二)软骨染色1、石蜡切片入二甲苯2次每次15min。

2、系列乙醇各1min。

3、自来水洗2min。

4、入Toluidine Blue O Stain浸染30min。

5、自来水洗2min，滤纸吸干水分。

6、丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。

7、逐级乙醇脱水。

8、二甲苯透明，中性树胶封固。

染色结果：软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。

(三)细胞涂片染色1、用20%的乙醇溶液稀释甲苯胺蓝染色液,一般要求稀释到0.1%即可。

2、细胞涂片后，立即放入95%的乙醇中固定，取出放在纸巾上。

3、滴加稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染，加盖玻片让染料渗透到细胞中。

4、将玻片竖起，稍加压力，使多余染料被纸巾吸去。

5、无需干燥，直接镜检。

染色结果：细胞核、淋巴细胞呈深蓝色；核仁呈紫红色；红细胞呈橘红；细胞质、单核细胞呈淡蓝色。

(四)原位杂交染色1、用蒸馏水或去离子水稀释到相应的浓度，凭经验一般稀释比例大于1:100。

甲苯胺蓝染色液(1%,硼酸盐法)简介：甲苯胺蓝(T oluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料, 属于醌亚胺染料类, 这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。

甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。

甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。

甲苯胺蓝染色液(T oluidine Blue,1%,硼酸盐法)由于硼酸盐缓冲液呈强碱性，更利于组织细胞的着色。

组成：操作步骤(仅供参考)：(一)肥大细胞染色1、脱蜡至蒸馏水。

2、根据切片厚度和组织的不同，浸染于甲苯胺蓝染色液。

3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗。

4、(可选)0.5%冰乙酸分化，直到细胞核和颗粒清晰可见。

5、快速95%和无水乙醇脱水。

6、 二甲苯透明，封固。

染色结果：肥大细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。

(二)软骨染色1、 石蜡切片入二甲苯2次。

2、 系列乙醇各1min 。

3、 自来水洗2min 。

4、 入Toluidine Blue O Stain 浸染。

5、 自来水洗2min ，滤纸吸干水分。

6、 丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。

7、 逐级乙醇脱水。

8、 二甲苯透明，中性树胶封固。

染色结果：软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。

编号 名称 DA0057 Storage Toluidine Blue O stain (1%,硼酸盐法) 100ml RT 避光 使用说明书 1份(三)细胞涂片染色1、用20%的乙醇溶液稀释甲苯胺蓝染色液, 一般要求稀释到0.1%即可。

2、细胞涂片后，立即放入95%的乙醇中固定，取出放在纸巾上。

3、滴加稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染，加盖玻片让染料渗透到细胞中。

4、将玻片竖起，稍加压力，使多余染料被纸巾吸去。

5、无需干燥，直接镜检。

染色结果：细胞核、淋巴细胞呈深蓝色；核仁呈紫红色；红细胞呈橘红；细胞质、单核细胞呈淡蓝色。

SD大鼠甲苯胺蓝染色步骤1、甲苯胺蓝染色法鉴定软骨细胞表型Ⅱ代软骨细胞以2x105／ml的密度接种到铺有多聚赖氨酸盖玻片的24孔细胞培养板中，与原代培养条件相同，制作细胞爬片，常规培养48h后行甲苯胺蓝染色。

具体操作步骤如下：(1)倾去培养液，PBS充分漂洗3次，加入10％的中性甲醛常温下固定30min。

(2)倾去10％的中性甲醛，PBS充分漂洗3次，加入70％的乙醇固定30min除去四价铵离子，以免影响染色。

(3)倾去70％的乙醇溶液，PBS充分漂洗3次，晾干，加入甲苯胺蓝乙醇液(甲苯胺蓝0.2g溶于30％乙醇100m1)染色_20min。

(4)PBS充分漂洗3次，迅速用无水乙醇再漂洗1次。

(5)取出爬片，干燥后中性树脂封片，电子显微镜下观察、摄片。

2、型胶原免疫细胞化染色法鉴定软骨细胞表型Ⅱ代软骨细胞以2×105／ml的密度接种到铺有多聚赖氨酸盖玻片的24孔细胞培养板中，与原代培养条件相同，制作细胞爬片，常规培养48h后行免疫细胞化学法染色。

实验过程严格遵照免疫细胞化学染色试剂盒说明书进行操作，PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照组。

具体操作步骤如下：(1)倾去培养液，冰冷的PBS漂洗3x3min，加入4%多聚甲醛1ml室温固定15min。

(2)PBS清洗标本3x3min，每张标本滴加1滴新鲜配制的3％H202，室温下孵育10min。

(3)PBS清洗标本3x3min，每张标本滴加穿膜液0.5m](0.1％timton+o.1M Glycine)冰上孵育30min。

(4)PBS清洗标本3x3min，每张标本滴加5mg／ml的动物非免疫封闭血清(BSA)0.5ml，室温下封闭1h。

(5)滴加1：150稀释的兔抗大鼠II型胶原多克隆抗体50ul于封口膜上，使标本与一抗充分接触，置于湿盒中4℃过夜。

PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照组。

(6)PBS清洗标本3x3min，加入二抗工作液，37℃孵育20min。

骨磨片（ground section）甲苯胺蓝（toluidine blue）染色试剂盒产品说明书（中文版）主要用途骨磨片（ground section）甲苯胺蓝（toluidine blue）染色试剂是一种旨在通过甲苯胺蓝染料的使用，观察分析由成骨细胞和破骨细胞产生的的各种骨组织形成状态的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

广泛应用于各种不脱钙骨组织、类骨质和软骨组织的染色分析。

产品即到即用，性能稳定，显色清晰。

技术背景甲苯胺蓝（toluidine blue）是一种异染性（metachromatic）染料，其分子式是C15H16ClN3S，分子量为305.83。

常用于骨组织浅表染色，观察成骨细胞和破骨细胞产生的的骨粘合线（cement line）、反折线（reversal line）、长线（dermacation line）、类骨质（osteoid）、钙质化新骨（mineralized）等骨组织变化，以评价各种骨整合（osseointegration）、新骨形成、材料再吸收（materials resorption）、骨组织重塑（remodeling）和骨组织计量测定（histomorphometrics）等。

产品内容清理液（Reagent A）毫升净化液（Reagent B）毫升脱水液（Reagent C）毫升染色液（Reagent D）毫升产品说明书1份保存方式保存染色液（Reagent B）在4℃冰箱里，避免光照；其余的保存在室温下；清理液（Reagent A）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月用户自备（偏振光）光学显微镜：观察染色后的组织细胞实验步骤实验开始前，准备好甲基丙烯酸甲酯（methylmethacrylate；MMA）包埋的不脱钙骨组织，进行机器或手动不脱钙骨磨片样品，10至50微米厚（通常为30微米），然后进行下列操作：1．小心加上xx微升清理液（Reagent A），铺满整个样品表面2．室温下，孵育3分钟3．小心移去样品上的清理液（Reagent A）4．室温下，小心将切片置入xx毫升净化液（Reagent B）中浸泡30秒5．小心加上xx微升脱水液（Reagent C），铺满整个样品表面6．室温下，孵育15分钟7．小心移去样品上的脱水液（Reagent C）8．等待切片晾干9．小心加上xx微升染色液（Reagent D），铺满整个样品表面10．室温下，孵育5至20分钟，避免光照11．小心移去切片上的染色液（Reagent D）12．（选择步骤）小心加上xx微升脱水液（Reagent C），铺满整个样品表面13．（选择步骤）小心移去样品上的脱水液（Reagent C）14．室温下，小心将样品置入xx毫升净化液（Reagent B）中浸泡1分种15．小心移去样品上的净化液（Reagent B）16．封片17．即刻在光学或偏振光显微镜下观察：注意事项1．本产品为50次操作2．操作时须戴手套3．染色过程，避免光照4．清理液（Reagent A）具有腐蚀性，注意操作安全5．如果使用包埋后硬组织切片机切片的样品，建议使用无离子水稀释染色液（Reagent D）10倍后染色6．可以进行骨小梁参数计量，借助VIDAS图象分析系统进行测量，参数包括骨小梁的体积、骨小梁的宽度、骨小梁的间隙等7．脱水液（Reagent C）具有脱色作用，如果染色过深，可以使用脱水液（Reagent C）快速处理，避免脱色过度8．骨组织包埋切片或磨片，以及厚度差异，对于染色的孵育时间会有不同9．建议使用非水相封片10．参考图像如下：黑色实体箭头为浅蓝色类骨质；白色空箭头为成骨细胞产生新生骨组织11．本公司提供系列骨组织染色试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定着色清晰。