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高效液相色谱法在药品检验中的应用和效果张莉洁发布时间：2023-05-18T09:53:22.247Z 来源：《中国科技信息》2023年4期作者：张莉洁[导读] 经典液相色谱是高效液相色谱法的基础，高效液相色谱法是药品检验过程中经常使用的一种重要方法兴安盟食品药品检验检测中心内蒙古兴安盟乌兰浩特市 137400摘要：经典液相色谱是高效液相色谱法的基础，高效液相色谱法是药品检验过程中经常使用的一种重要方法，是从经典液相色谱法中衍生出的一种色谱法，高效液相色谱法的优点具有灵敏度高、分离效率高、周期短等特点，能够达到提高药物质量的目的。
本文在对高效液相色谱的原理和技术条件进行介绍的基础上，研究分析了高效液相色谱法在药品检验中的应用，并对测定药品吡罗昔康（酰胺类化合物）和盐酸萘甲唑啉鼻用剂型凝胶中的盐酸萘甲唑啉含量的含量进行了实例分析。
关键词：高效液相色谱法；药品检验；应用；效果引言高效液相色谱法又被称为高压液相色谱、高分离度液相色谱和高速液相色谱及近代柱色谱。
高效液相色谱法是现阶段使用范围较广、应用效果高且检测速度快的一种药品检测、分析方法。
其除了可以分离分析药物成分，与此同时，可定性定量分析药物，所以，相比于单一的分析方法，其优点显著，在我国药品检测中具有显著作用。
但是现阶段，由于中药成分等因素的作用，致使重要有效成分的研究已经成为重点。
而高效液相色谱法能够为中药有效成分问题解决提供新的方法与思路，从而推动我国医疗事业进一步发展。
随着我国经济的发展和人民生活水平的提高，人们对药品质量的要求也越来越高，而合格的药品需要严格的检测流程和先进的检测方法。
其中，高效液相色谱技术（HPLC）就是目前最常使用的检测手段，其在所有的药品质量检测技术中运用已较为成熟。
而液相色谱法起初并没有用于药品检测，仅仅是将混合物按不同组分进行分离，一直到20世纪50年代，这种分离手段才开始运用到药品检测中，是当前化学分析过程中应用最普遍的手段之一，其具有很高的分离速度与分离效率，且具有极高的检测灵敏度，近些年来，逐渐成为药品质量控制的重要手段。
柱后衍生交换离子色谱法测定氨基酸组成
柱后衍生交换离子色谱法（Postcolumn Derivatization Ion Exchange Chromatography，PDIEC）是一种常用来测定氨基酸组成的分析方法。
该方法使用带有离子交换功能的柱进行色谱分离，将样品中的氨基酸分离开来。
在柱后，通过衍生化反应将氨基酸与某种试剂发生反应形成带有荧光或紫外可见吸收性质的产物，并通过检测这些产物的荧光或吸收信号来定量分析。
常用的衍生试剂有二硫染料（如二硫苏丹黑D、二硫苏丹红G 等）、芳香酮类（如二硫二羟甲基苯基乙酮，DABS-Cl）等。
这些试剂在与氨基酸发生反应后，会产生被吸收或荧光激发的物质，从而使氨基酸能够被检测到。
PDIEC方法具有高分离能力、高灵敏度和高选择性的优点，能够同时测定多种氨基酸，且对一些特定的氨基酸有较好的分析效果。
同时，该方法还能够测定非天然氨基酸和残基组成，对于生物样品的分析具有较高的应用价值。
总之，柱后衍生交换离子色谱法是一种常用的测定氨基酸组成的分析方法，可用于生物样品的分析和研究。
固相萃取-高效液相色谱-质谱联用法同时测定食品中9种人工合成甜味剂唐吉旺;袁列江;肖泳;王秀;王淑霞【摘要】建立了固相萃取-高效液相色谱-串联质谱快速检测食品中安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、三氯蔗糖、阿斯巴甜、阿力甜、纽甜、甘素及新橙皮甙二氢查尔酮等9种人工合成甜味剂的方法.样品中的甜味剂经三乙胺缓冲溶液(pH 4.5)提取,采用亲水亲脂平衡填料固相萃取柱净化,经Phenomenex Knietex?F5色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.6μm)分离,以0.1％(v/v)甲酸-5 mmol/L甲酸铵溶液和甲醇为流动相,进行梯度洗脱,以电喷雾离子源正负离子切换多反应监测(MRM)模式进行质谱检测.采用内标法定量,进一步降低样品基质效应的影响.结果表明:本方法在去除样品基质干扰方面取得良好效果,9种甜味剂的检出限和定量限分别在2～30μg/L和6～100μg/L之间,在各自的线性范围内线性关系良好(相关系数r2>0.999).9种甜味剂空白样品在3个水平下的加标回收率在86.3％～106.3％之间,相对标准偏差(RSD)在1.2％～5.9％之间.本方法快捷、高效、准确可靠,可用于复杂食品基质中9种人工合成甜味剂的快速检测.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2019(037)006【总页数】7页(P619-625)【关键词】高效液相色谱-串联质谱;固相萃取;人工合成甜味剂;食品【作者】唐吉旺;袁列江;肖泳;王秀;王淑霞【作者单位】湖南省产商品质量监督检验研究院,湖南长沙 410007;中南大学化学化工学院,湖南长沙 410083;湖南省产商品质量监督检验研究院,湖南长沙 410007;湖南省产商品质量监督检验研究院,湖南长沙 410007;湖南省产商品质量监督检验研究院,湖南长沙 410007;湖南省产商品质量监督检验研究院,湖南长沙 410007【正文语种】中文【中图分类】O658甜味剂是赋予食品甜味的功能性食品添加剂。
离子色谱在锂离子电池电解液组分中的方法及检测分析【摘要】：随着科技的不断发展，对锂离子电池的研究热度逐渐提高，锂离子作为新型能源被广泛的应用在各个领域。
研发锂离子电池也成为了高新技术产业，符合国家可持续发展战略的规划要求。
对于离子色谱的优势特点进行分析，可以对锂离子电池产生重要的作用，构建出全新的检测体系。
对离子色谱的检测方法进行研究，以多种检测方式，来提升检测精准度。
本文通过对离子色谱在锂离子电池电解液组分中的方法进行探究，对离子色谱的技术进行介绍，帮助提升锂离子电池的检测效率。
【关键词】：离子色谱；锂离子电池；检测分析引言：近年来，锂离子电池的技术不断提升，被应用在多个技术领域，对锂离子的研究也成为了新能源的技术研究，凭借着锂离子电池的多项技术优势，在多种电池种类中受了更多的关注。
锂离子电池与其他种类的电池相比，它最大的特点就是它的电解液区别于传统电池，由特殊的电解液成分构成，让电池在整个性能上有力较大幅度的提升，这就让锂离子电池成为了更加环保的新能源研究项目，但对于锂离子电池的生产加工就提出了更高的标准，必须具备高标准的监测技术，而离子色谱在锂离子电池电解液组分中能够有效的发挥作用，本文就离子色谱的监测方法和分析进行研究，旨在帮助提高锂离子电池的监测效果，进一步提升锂离子电池的实际应用水平[1]。
1.概述1.1离子色谱通过1975年的抑制电导理论的出现，对电导率等检测技术的不断研究，衍生出了离子色谱技术，经过不断探索和发展，得出了多种色谱分析的方法。
也逐渐开始对这些色谱分析的方法应用到实际的生活工作中，例如在对环境监测中，以及食品和药品的检测中，在多个领域都得到了有效的应用，并且具备了较高的检测效果。
伴随着相关的仪器的精密度提高，对离子色谱检测的样品处理方法也产生了变化，对样品提取也逐渐演变出多种方式，从而利于对杂质的清除。
阀切换技术作为新型的应用技术，在实际的检测中能达到明显的检测效果，所以在离子色谱中，阀切换技术可以应用在分析时间更短，检验步骤更便捷的检测中[2]。
最全色谱联用技术汇总人类进入21世纪,科学技术高度发展,先进的分析仪器不断涌现,每一类分析仪器在一定范围内起独特作用,并且要求在一定的条件下使用。
如色谱作为一种分析方法,其最大特点在于能将一个复杂的混合物分离为各自单一组分,但它的定性、确定结构的能力较差,而质谱(MS)、红外光谱(IR)、紫外光谱(UV)、等离子体发射光谱(ICP—AES)和核磁共振波谱(NMR) 等技术对一个纯组分的结构确定变得较容易。
因此,只有将色谱、固相(微)萃取、膜分离等分离技术与质谱等鉴定、检测仪器联用才能得到一个完整的分析,取得丰富的信息与准确的结果。
分析仪器联用技术已在全行业样品分析中得到应用,并有广阔的发展前景。
随着新物质不断出现,以及科技的进步,对分析工具的技术要求更高,仪器联用将发挥重要的作用。
1色谱—色谱联用技术样品组分较简单时,通常用一根色谱柱,一种分离模式即可以得到很好的分离,但对于某些较复杂的组分,无论如何优化色谱条件、参数也无法使其中一些组分得到较好的分离,这时可采用色谱—色谱联用技术。
色谱—色谱联用技术也称为多维色谱。
气相色谱—气相色谱(GC—GC)联用该联用技术已有30多年的历史,在工业分析中得到广泛的应用,GC—GC联用仪已商品化。
如采用SE-52毛细管柱分析柠檬油时,采用二级GC联用能将化合物的对映异构体得到很好分离。
液相色谱—液相色谱(LC—LC)联用Hube于20世纪70年代提出LC—LC联用,技术的关键是柱切换,通过改变色谱柱与色谱柱、进样器与色谱柱、色谱柱与检测器之间的连接,以改变流动相的流向,实现样品的分离、净化、富集、制备和检测。
液相色谱有多种分离模式,可以灵活选用分离模式的组合,其选择性调节能力远大于GC—GC联用技术,具有更强的分离能力。
该接口技术比GC—GC联用的要复杂得多,至今市场上尚未见商品化的LC—LC 联用系统,分析工作者多是自行组装LC—LC系统,适用于特定组分的分离和分析。
柱切换法在复方丹参滴丸中丹参素药代动力学研究中的应用赵新锋;祝忠民;刘爱芳;汪珍;郑晓晖【期刊名称】《中成药》【年(卷),期】2004(026)006【摘要】目的:建立一种复方丹参滴丸(丹参、三七、冰片)中丹参素在人血清中高效的色谱分析技术.方法:采用柱切换技术高效液相色谱法对人血清中的丹参素进行定性、定量分析.结果:在本文的分析条件下,丹参素在24h内稳定;线性范围为0.0248～0.3720μg,方法平均回收率99.0%,精密度和重现性的RSD%分别为2.45%(n=5)、1.01%(n=5).丹参素的代谢过程为"单室模型",半衰期为5.54h.结论:方法简便灵敏,为复方丹参滴丸药代动力学研究及临床药物监测提供了方法.【总页数】3页(P490-492)【作者】赵新锋;祝忠民;刘爱芳;汪珍;郑晓晖【作者单位】西安交通大学中草药现代化研究及工程中心,陕西,西安,710061;西安交通大学中草药现代化研究及工程中心,陕西,西安,710061;西安交通大学中草药现代化研究及工程中心,陕西,西安,710061;西安交通大学中草药现代化研究及工程中心,陕西,西安,710061;西安交通大学中草药现代化研究及工程中心,陕西,西安,710061【正文语种】中文【中图分类】R927.1【相关文献】1.丹七注射液中丹参素钠在Beagle犬体内药代动力学及生物利用度研究 [J], 蒋亚萍;胡小鹰2.采用柱切换色谱-离子阱质谱联用法研究复方丹参滴丸中丹参素及其代谢产物 [J], 裴渭静;赵新锋;胡震;赵文明;郑晓晖3.高效液相色谱柱切换技术在药代动力学与生物利用度研究中的应用 [J], 李章万;郭平4.复方丹参滴丸中丹参素的药物动力学研究 [J], 洪馨;宓穗卿;王宁生5.柱切换法在复方丹参滴丸中丹参素药代动力学研究中的应用 [J], 赵新锋;祝忠民;刘爱芳;汪珍;郑晓晖因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
气相色谱-质谱联用仪原理
气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）是一种将气相色谱仪和质谱
仪联用的仪器，其原理是将样品在气相色谱柱中进行分离，并通过柱后的装置将分离的化合物进入质谱仪进行分析。
首先，样品通过进样口进入气相色谱柱，然后通过加热将样品中的化合物转化为气相，进入气相色谱柱。
在气相色谱柱中，化合物会根据其性质的不同被分离。
分离后的化合物通过柱后的载气将其推入质谱仪。
在质谱仪中，化合物首先通过一个进样接口被引入质谱仪的真空系统。
在真空系统中，化合物被从气相转化为离子状态。
这个过程通常是通过电子轰击（EI）或化学离子化（CI）来实现的。
在EI中，化合物被电子击中并失去电子从而形成正离子；而在CI中，化合物与离子源中的离子反应，形成分子离子。
离子化后，化合物进入质谱仪的质量分析部分。
在质量分析部分，化合物的质量-电荷比（m/z）被测量。
质谱仪通过电场对
离子进行加速，然后经过一个质量过滤器，根据其m/z比例将离子从电子发射器分离出来。
离子进入一个荧光屏或者离子检测器，产生一个质谱图。
质谱图展示了每个m/z比例对应的离子的丰度，这可以用来识别化合物的分子结构。
GC-MS联用仪的优势在于它能够将气相色谱的分离能力与质
谱的分析能力结合起来，实现化合物的高分辨率分离与结构确认。
这种联用仪广泛应用于许多领域，如环境监测、食品安全和药物分析等。
液相色谱在中药分析中的应用摘要液相色谱法的发展非常迅猛，许许多多的新方法不断涌现，它具有分离效率高，选择性好，分析速度快，操作自动化和应用范围广的特点。
本文主要简单介绍液相色谱的知识及其在药物分析中的广泛应用，通过实例描述了液相色谱法的优点。
液相色谱(HPLC)是结合经典液相色谱及气相色谱的分离原理。
由于与气相色谱法相比，液相色谱法具有下列主要优点：①不受试样的挥发性和热稳定性的限制，应用范围广②可选用不同性质的各种溶剂作为流动相，而且流动相对分离的选择性有很大作用，因此分离选择性高；③一般在室温条件下进行分离，不需要高柱温。
因而广泛应用于生物化学，生物医学，石油化工，合成化学，环境监测，食品卫生，以及商检，法检和质检等许多分析检验部门。
液相色谱不仅仅是一种有力的分析工具，而且越益成为分离制备和纯化的手段。
液相色谱在国内和国外已被广泛地应用于药物分析，尤其在我国，近十几年来HPLC方法越来越受到重视。
中国药典1985年版才规定使用，该版只有8个品种规定使用HPLC方法检测，到了1995版达到113个品种，2000版药典的应用达到了282种，2005版仅药典一部的应用达到了479种，涉及518项；药典二部中采用液相色谱法的品种有848种，较2000年版增加了566次，其中复方制剂、杂质或辅料干扰因素多的品种多采用液相色谱法。
2010年药典则更多的用液相色谱法取代了某些药物含量测定的薄层法，并引入了各式各样的检测器。
由此可见，我国液相色谱法在药物分析中的重要性。
关键词：液相色谱；气相色谱；药物分析1液相色谱的简介液相色谱简称HPLC，又称高速或高压液相色谱。
该法吸收了普通液相层析和气相色谱的优点，经过适当改进发展起来的，既有普通液相层析的功能，又有气相色谱的特点（即高压，高速，高分辨和高灵敏度）。
HPLC是近年来迅速发展起来的一项新颖的分离技术，不仅适用于很多不易挥发，难热分解物质（如蛋白质，肽类，氨基酸及其衍生物等）的定性定量分析，而且也适用于上述物质的制备和分离。
盐酸倍他司汀片加热降解杂质的定性检测陈红;朱蓉;李欣;谢莉;张姮婕【摘要】A method for qualitative analysis of impurity in betahistine hydrochoride tablets by heat treatment was established. Betahistine hydrochoride tablets powder was heated in 4 h, and the degradation impurities were extracted by mobile phase. Qualitative analysis of the impurities was detected by 2 D-LC-IT-TOF. Result showed that one of the three degradation impurities could be detected qualitatively. The molecular formula, fragmentation pattern and structure type possibly were inferred from by sample information and multistage high resolution mass spectrometry. The method is accurate and sensitive, and can be used for qualitative analysis of impurity in betahistine hydrochloride.%建立了盐酸倍他司汀片加热降解杂质的定性检测方法。
样品粉末105益下加热4 h后，用流动相溶解，滤过后采用二维液质联用(2D-LCMS-IT-TOF)杂质鉴定系统，对盐酸倍他司汀热降解杂质进行定性检查。
4.柱切换高效液相色谱法的原理和特点。
柱切换高效液相色谱法（Column Switching High Performance Liquid Chromatography，简称CSP-HPLC）是一种高效的液相色谱法，是在传统的HPLC法基础上发展而来的一种新型色谱技术。
它通过柱与柱之间的切换，实现多种不同性质的样品成分的分离与净化，具有快速、高效、简便和灵敏度高等优点。
CSP-HPLC的原理CSP-HPLC采用的是柱切换技术，它由前截取柱和后分离柱组成。
在前截取柱中，样品与气体或液体混合后，通过固定在柱中的吸附剂或阴离子交换剂进行固相萃取，此时某些物质难以被吸附剂或阴离子交换剂吸附，即相对亲水性强，轻易流失，其他物质被吸附固定在柱上。
前截取柱的主要作用是去除样品中的成分杂质和过量物质，只保留目标物质，样品成分经前截柱处理后再将其引入到后分离柱中。
后分离柱则是通过不同类型、不同规格和不同度数的固定相材料实现异构体的之间的分离。
在后分离柱中，一般采用反相柱，如C18固定相材料，随后根据目标物质的性质选择优化的色谱条件进行分离并测定。
CSP-HPLC的特点1. 高效快速：CSP-HPLC在柱与柱之间的切换过程中，分离后的样品迅速能被重新治理分离，从而使分析时间大大缩短，分离效率迅速提升。
2. 灵敏度高：CSP-HPLC样品经过固相萃取后，可以去除试样中的干扰物，同时提取出样品中的目标成分，使得分析结果具有更好的稳定性和准确性。
3. 适用范围广：CSP-HPLC可以应用于多种化合物的分析。
例如化学反应中残留物质的分析、药物中杂质成分的分析、特定成分的分离、食品添加物的分析等等。
同时，由于CSP-HPLC的自动收集技术，可实现对单一成分、多组分及矩阵中目标物质的不同形态的定位选择进行加工处理。
4. 降低溶剂消耗量：CSP-HPLC的柱切换技术可以降低溶剂消耗量，减少了对环境的影响。
总之，柱切换高效液相色谱法是一种快速、高效、灵敏度高的液相色谱法，它在传统的HPLC法基础上实现了多种不同性质的样品成分的分离和净化，成为当今青睐的分析方法之一，并得到广泛应用。
柱切换离子色谱法测定原油中盐含量范艳璇;何沛【摘要】A fast determination method for salt content in crude oil by ion chromatography was de-veloped. The samples were extracted by high frequency oscillation extraction using mixture of water, ethanol,and xylene. The column-switching technique was then used on line to eliminate the interference of ethanol in extraction solution in chromatography analysis. Then the chloride was detected by ion chro-matography. The results show a great linear relationship in the concentration range from 0. 1 to 100 mg-NaCl/L,the correlation coefficient is greater than 0. 999. The detection limit for ion chromatography is 0. 01 mgNaCl/L based on signal/noise ratio of 3. The difference between this method and the coulometry method is not significant. The column-switching ion chromatography can meet the analysis requirement of salt content in crude oil but much fast and simple.%建立了用离子色谱方法快速批量测定原油中盐含量的方法,通过手动高频震荡萃取后,利用柱切换技术在线消除萃取液中乙醇对离子色谱系统的干扰,然后经过离子色谱柱对无机氯化物进行分离分析,在优化的色谱条件下,盐质量浓度在0. 1～100 mgNaCl/L范围内线性相关系数均大于0. 999,离子色谱检出限为0. 01mgNaCl/L(信噪比为3).该方法与现行标准方法电量法之间的差异不显著,可满足原油中盐含量的分析要求.【期刊名称】《石油炼制与化工》【年(卷),期】2018(049)007【总页数】5页(P90-94)【关键词】离子色谱法;柱切换;盐含量;原油【作者】范艳璇;何沛【作者单位】中国石化石油化工科学研究院,北京 100083;中国石化石油化工科学研究院,北京 100083【正文语种】中文原油中含有一定量的无机氯化物，在原油的储藏、运输、加工等过程中这些氯化物可能会造成设备的腐蚀、管线结垢堵塞、加热设备效率降低以及催化剂中毒失活等问题，还会影响到最终产品的质量[1]。
气相色谱法-质谱联用气相色谱法–质谱法联用（英语：Gas chromatography–mass spectrometry，简称气质联用，英文缩写GC-MS)是一种结合气相色谱和质谱的特性，在试样中鉴别不同物质的方法。
GC-MS的使用包括药物检测（主要用于监督药物的滥用）、火灾调查、环境分析、爆炸调查和未知样品的测定。
GC-MS也用于为保障机场安全测定行李和人体中的物质。
另外，GC-MS 还可以用于识别物质中以前认为在未被识别前就已经蜕变了的痕量元素。
GC-MS已经被广泛地誉为司法学物质鉴定的金标方法，因为它被用于进行“专一性测试”。
所谓“专一性测试”就是能十分肯定地在一个给定的试样中识别出某个物质的实际存在。
而非专一性测试则只能指出试样中有哪类物质存在。
尽管非专一性测试能够用统计的方法提示该物质具体是那种物质，但存在识别上的正偏差。
目录1 历史2 仪器设备2.1 GC-MS吹扫和捕集2.2 质谱检测器的类型3 分析3.1 MS全程扫描3.2 选择的离子检测3.3 离子化类型3.3.1 电子离子化3.3.2 化学离子化3.4 GC-串联MS4 应用4.1 环境检测和清洁4.2 刑事鉴识4.3 执法方面的应用4.4 运动反兴奋剂分析4.5 社会安全4.6 食品、饮料和香水分析4.7 天体化学4.8 医药5 参考文献6 参考书目7 外部链接历史用质谱仪作为气相色谱的检测器是上个世纪50年代期间由Roland Gohlke和Fred McLafferty首先开发的。
当时所使用的敏感的质谱仪体积庞大、容易损坏只能作为固定的实验室装置使用。
价格适中且小型化的电脑的开发为这一仪器使用的简单化提供了帮助，并且，大大地改善了分析样品所花的时间。
1964年，美国电子联合公司（Electronic Associates, Inc. 简称EAI)-美国模拟计算机供应商的先驱在开始开发电脑控制的四极杆质谱仪Robert E. Finnigan的指导下[3]开始开发电脑控制的四极杆质谱仪。
自俄国植物学家Tswett创立色谱法以来，已有近100年的历史.1903年Tswett在华沙自然科学协会提出论述吸附色谱的论文，详尽的研究了叶绿素在100多种吸附剂上的吸附现象，提出了色谱法的概念，虽然他所用的方法分离效率不高，分离速度缓慢，一次分离需要儿小时甚至几天的时间，但一直到20世纪40年代中期，仍然是人们所采用的惟一的一种色谱方法.20世纪40年代到50年代初，先后出现了纸色谱法( Paper Chromatography, PC)和薄层色谱法( thin-layer chromatography,TLC).这两种方法的特点是简单，分离时间短，用样量也比经典的柱色潜法少得多.1952年，James和Martin提出了气相色谱法( gas chrnmatography, GC ).使色谱法的发展大大前进了一步.由于应用面广泛而受到人们的重视.特别是20世纪60年代初Giddings等人对色谱理论的研究成果，为高效液相色谱的发展奠定了理论基础.虽然气相色谱的应用领域十分广泛，但仍不能解决大量的挥发性差和热不稳定的化合物的分离难题，经典的液相色谱仍然是用于分析这类化合物的手段.直到20世纪60年代后期由于新型柱填料、高压输液泵和高灵敏度检测器的出现，才使液相色谱快速地发展起来，并发展成为高效液相色谱( high performance liquid chromatography, HPLC).高效液相色谱发展现状及前景2011-12-09 中国化工仪器网点击：379液相色谱分析是指流动相为液体的色谱技术,是色谱法中最古老的一种,但通过改进填料的粒度及柱压,在经典的液相柱色谱的基础上引入了气相色谱的塔板理论,在技术上采用了高压输液泵,高效固定相和高灵敏度的检测器,实现了分析速度快、分离效率高和操作自动化,这种色谱技术被称为高效液相色谱法(HighperformanceliquidchromatographyHPLC)。
色谱质谱联用技术色谱质谱联用技术是分析化学领域中较为成熟的联用技术之一。
该技术结合了色谱和质谱两种分析方法，弥补了它们本身的缺陷，同时提高了样品的检测灵敏度和分析能力。
本文将简要介绍色谱质谱联用技术的工作原理、分类和应用等方面。
一、工作原理色谱质谱联用技术的工作原理是将色谱分离的化合物经过前处理后送入质谱分析器进行检测。
具体操作步骤如下：1. 样品制备：将待检测的样品进行前处理，如固相萃取、溶剂萃取、化学反应等，以提高样品的纯度和富集度，使得检测结果更为准确。
2. 色谱分离：将前处理完成的样品注入色谱柱中进行分离。
色谱分离的选择因样品性质和所需分离精度不同而不同，例如气相色谱（GC）适用于描记化合物，液相色谱（LC）适用于生物大分子等。
3. 质谱分析：利用高速质谱扫描特性和在线分子离子诱导撞击电离（MIKES）等多种离子化技术进行离子产生，然后在离子束中进行质量分析，确定化合物的质量和结构。
4. 数据处理：将得到的质谱图和色谱图进行整合，即可得到样品中各化合物的相对含量、质量等信息。
二、分类颇受欢迎的色谱质谱联用技术有两种不同的模式：在线联用和离线联用。
在线联用是指色谱仪与质谱仪相连而形成一个单一的系统。
在在线联用中，在样品分离时即使离子化并进行质谱分析，因而可以直接获取特定化合物的相对含量和结构信息。
离线联用则是指从色谱柱中收集或者剪切分离出来的样品，对其进行离子化，然后通过质谱进行分析。
离线联用可以采用各种类型的色谱装置，不限制离子化的时间，因此更为灵活多变，适用于对化合物分离的要求较高的样品。
三、应用色谱质谱联用技术在食品、环境、药品、化妆品等领域得到了广泛应用，特别是在生物医学领域发挥重要作用。
例如在新药研发中，色谱质谱联用技术可以用来分析药物代谢产物，以评估其毒性。
在食品检测中，这种技术可以用于检测食品中的致癌物、残留农药等有害物质。
在环境监测中，可以用于检测大气中的有害气体、水中的微量污染物等。
采用柱切换色谱2离子阱质谱联用法研究复方丹参滴丸中丹参素及其代谢产物裴渭静1 赵新锋2 胡 震1 赵文明1 郑晓晖321(西安交通大学生命科学与技术学院,西安710049)2(西安交通大学中草药现代化研究及工程中心,西安710061)摘 要 采用柱切换高效液相色谱技术对人血清中的丹参素及其代谢产物进行富集和分离,利用对电喷雾离子阱多级质谱负离子模式进行结构分析。
一级流动相为甲醇2水(30∶70,V /V ),流速0.8mL /m in;二级流动相为甲醇2水2甲酸铵(15∶85∶0.5,V /V /V ),流速0.2mL /m in;在人血清中检测到丹参素及其代谢产物,并探讨了主要代谢产物乙酰化的丹参素(m /z 240.2)。
建立一种复方丹参滴丸中丹参素及其代谢产物在人体内代谢过程的高效分析方法。
该方法可用于复方丹参滴丸中丹参素及与其结构类似的其它药物的体内代谢研究。
关键词 复方丹参滴丸,丹参素,柱切换高效液相色谱技术,离子阱质谱 2004201212收稿;2004206226接受1 引 言复方丹参滴丸是根据复方丹参片[1]的处方,提取有效成分研制而成的中药滴丸剂。
主要成分为丹参(S alvia m iltorrhiza )、三七、冰片,临床用于治疗胸中憋闷,心绞痛,作为片剂的换代品,疗效高,作用迅速,副作用小,已被定为医院急诊必备中成药[2]。
丹参素为复方丹参滴丸的主要药效成分,对其分析和检测已有文献报道[3]。
柱切换高效液相色谱技术集样品净化、富集及分离为一体,样品前处理简单甚至不需要预处理就可直接进色谱分析,基本克服了以往样品前处理复杂、繁琐且耗费试剂、人工等缺点,该技术适合于分析含量低、干扰大、检测困难的复杂样品[4,5]。
液相色谱2多级质谱联用技术(LC 2MS n )可给出结构信息[6,7],对代谢产物准确定性[8,9]。
高效液相与高灵敏度的质谱结合,可对复杂样品进行实时分析,即使在色谱难分离的情况下,通过多级质谱对目标化合物进行碎片扫描,也可发现并突出混和物中的目标化合物,显著提高信噪比。
对基质复杂的体液样品中的微量成分仍可达到很高的检测灵敏度[10,11]。
本实验采用柱切换高效液相色谱2电喷雾离子阱质谱(CS 2HP LC 2ESI 2MS n )联用技术,在人血清中检测到了丹参素及其代谢产物,对主要代谢产物进行了机理探讨。
2 实验部分2.1 仪器和试剂1100系列高效液相色谱仪(美国Agilent 公司,包括DAD 和VWD 检测器、自动进样器、柱温箱内自动六通切换阀);1100系列电喷雾2离子阱质谱(美国Agilent 公司);TG L 216G 高速离心机(上海安宁科学仪器公司);基因公司Maxi m a 超纯水机;Sart orius BP221S 型电子天平(美国Sart orius 公司);TG328B 型电光分析天平(上海天平仪器厂)。
丹参素化学对照品(天津天士力制药股份有限公司提供);复方丹参滴丸(天津天士力制药股份有限公司,批号:20030716),规格:25mg/粒;甲醇(美国Fisher 公司,色谱纯);其它试剂均为分析纯。
实验用水为超纯水。
2.2 分析条件(1)色谱条件:一级柱:Agilent S B 2C 18柱(100mm ×2.1mm ,5μm );二级柱:Agilent S B 2C 18柱(150mm ×2.1mm ,5μm );一级流动相:甲醇2水(30∶70),流速:0.8mL /m in 。
(2)质谱条件:电喷雾离子源;负离子检测;喷雾电压3.5k V;毛细管电压-101V,毛细管温度180℃;干燥气流速7L /m in;干燥气温度325℃;雾化气压力35p si;雾化气温度325℃,相对碰撞能为第33卷2005年4月 分析化学(FE NX I HUAXUE ) 研究简报Chinese Journal of Analytical Che m istry 第4期505～50860%;化合物稳定性40%;质量扫描范围50～400a mu;刮削器电压-40V 。
2.3 样品制备2.3.1 对照品溶液的制备 称取一定量的丹参素对照品,加二级流动相配成0.246g/L 对照品溶液。
2.3.2 血清供试品溶液的制备 健康志愿者5名,空腹舌下含服10粒复方丹参滴丸,2.0h 后,静脉取血1.0mL,离心10m in (12000r/m in ),取血清样品0.5mL,置1mL 具塞离心试管中,加0.3mol/L 的三氯乙酸0.1mL,离心10m in (12000r/m in ),精密量取上清液置于试管中,氮气吹干,残渣用15%甲醇溶解,转入1mL 量瓶中,加15%甲醇至刻度,摇匀,滤过,作为给药供试品溶液。
志愿者未服用复方丹参滴丸时,取空白血清0.5mL,按上述方法制备,即得空白血清供试品溶液。
在未服用复方丹参滴丸药品的空白血清0.5mL 中,加入0.5mL 药品供试品溶液,按上述方法制备,即得空白血清加药供试品溶液。
2.3.3 药品供试品溶液的制备 将复方丹参滴丸20粒,研成粉末,50℃干燥至恒重,精密称取250mg,加15%甲醇30mL,超声处理20m in,滤过,减压蒸干,残渣转溶至100mL 量瓶中,以15%的甲醇定容。
2.4 待测物的CS 2HPLC 2ES I 2M S n 分析方法分别取对照品溶液和供试品溶液,自动进样器进样10μL,5m in 切换,选择负离子模式检测,先用全扫描(full scan )MS (相对碰撞能为零)质谱方式获得待测物的准分子离子峰[M -H ]-,再提高相对碰撞能,利用ESI 2MS n离子阱技术对准分子离子峰及其碎片离子进行多级质谱分析。
3 结果及讨论3.1 丹参素对照品的ES I 质谱裂解行为解析根据获得丹参素对照品的总离子流图和一级全扫描质谱图,对准分子离子m /z 196.6(M -H )及 图1 碎片离子m /z 196.6的二级扫描质谱图Fig .1 The electr os p ray i onizati on tan 2de m mass s pectra (ESI 2MS 2)of frag mentm /z 196.6m /z 394.6,分别进行二级质谱分析,逐渐增加电场强度,发现在MS 2时,m /z 196.6的碎片离子中,m /z 117.5、m /z 152.3相对丰度较大(见图1)。
m /z 394.6的主要碎片离子为m /z 196.6。
说明在负离子模式下,丹参素较易结合为二聚物,但提高电场能量后,二聚体几乎不存在,说明其不稳定性,或者是由于基质(溶剂)、电场等不稳定因素造成丹参素的二聚物的生成。
m /z 358.5是丹参素二聚物脱去2分子水后的碎片,虽然其离子强度远低于二聚体,但在一级和二级质谱中其离子强度保持稳定,说明二聚物脱水裂解反应是一个平衡反应,但对外界电场条件不敏感。
同时亦说明脱水的二聚物较二聚物本身更稳定,其离子强度低,可能由于脱水反应热力学方面的原因。
在对丹参素标准品进行电场强度梯度递增处理,同时进行裂解碎片的多级(五级)质谱分析时发现,丹参素是按照m /z 196.8→m /z 180.5→m /z 166.5→m /z 152.4→m /z 117.3过程进行裂解。
因此,推测丹参素的ESI 裂解行为如下所示:3.2 丹参素主要代谢产物的鉴定3.2.1 对照样品的分析 在2.2的分析条件下,对药品供试品溶液、空白血清、空白加样及含药血清供试品溶液进行了分析。
图2为其总离子流图,图3、图4、图5分别为药品供试品溶液、空白加样及含药血清供试品溶液中丹参素的全扫描一级质谱图。
与丹参素对照品一级质谱图相对比,可以看出在相同保留时间的片断(峰),二者的一级质谱图完全相同,这样即对此3种样品中的丹参素进行了定性分析。
3.2.2 含药血清样品的分析 对丹参素在人血清中的代谢产物进行了ESI 2MS 2分析。
图5为其全扫描一级质谱图,从图中可以看出,服药后血清样中除丹参素的准分子离子峰m /z 196.6及二聚体m /z 396.4存在外,相对丰度较大的峰主要有m /z 152.6、m /z 180.9、m /z 223.4、m /z 240.2,其中m /z 152.6、605 分析化学第33卷m /z 180.9在丹参素对照品的准分子离子峰m /z 196.8的二级质谱图中丰度较大。
与对照样品进行比较发现,对照样品的一级质谱分析中均未出现m /z 152.6、m /z 180.9,从而排除了基质对丹参素质谱裂解行为的影响以及滴丸中其他成分的干扰,因此推测m /z 152.6、m /z 180.9为丹参素的降解产物。
图4 空白加样血清中丹参素的一级质谱图Fig .4 The ESI 2MS of Danshensu in blank seru m addedwith co mpound Danshen dri pp ing p ill 图5 给药血清样品一级全扫描质谱图Fig .5 The ESI 2M S of seru m sa mp le3.2.3 特征代谢产物质谱分析 (1)碎片离子m /z 223.4的多级质谱分析 选m /z 223.4为母离子进行多级质谱分析,其二级质谱碎片离子主要为m /z 59.3、m /z 120.2、m /z 179.1(图略)。
在进行电场强度梯度递增处理,同时进行裂解碎片的多级(五级)质谱分析时发现,该离子是按照m /z 223.4→m /z 179.1→m /z 120.2→m /z 59.3过程进行裂解。
因此,判断m /z 223.4的ESI 裂解行为是:(2)碎片离子m /z 240.2的多级质谱分析 选m /z 240.2为母离子进行二级质谱分析,其二级质谱碎片离子主要为m /z 87.7、m /z 116.8、m /z 151.6、m /z 180.6、m /z 196.1、m /z 223.3(图略)。
在进行电场强度梯度递增处理,同时进行裂解碎片的多级(五级)质谱分析时发现,该离子是按照m /z 240.2→m /z223.4→m /z 196.1→m /z 180.6→m /z 151.6→m /z116.8→m /z 87.7过程进行裂解。
推测m /z 240.2为丹参素在乙酰化酶作用下存在于人血清中的主要代谢产物,其形成碎片离子的断裂方式如右。
3.3 小结(1)采用柱切换高效液相色谱2电喷雾离子阱质谱(CS 2HP LC 2ESI 2MS n )联用技术,建立了复方丹参滴丸中丹参素及其代谢产物在人体内代谢过程的高效分析方法;(2)采用柱切换高效液相色谱技术可有效的去除干扰物质,富集待测物质,样品前处理简单,易705第4期裴渭静等:采用柱切换色谱2离子阱质谱联用法研究复方丹参滴丸中丹参素及其代谢产物 805 分析化学第33卷于实现自动化操作;本实验采用柱切换法分离富集了复方丹参滴丸中的丹参素,如适当改变一级和二级流动相亦可对其中的三七皂苷进行分离富集以及后续的分析,或者对同一样品中极性相差较大的多类成分同时进行分析;(3)可为药物在人其它体液中代谢产物的研究提供方法学参考。
