液相色谱-质谱联用

液相色谱-质谱联用 分析实习
分析测试中心
一、高效液相色谱概述
1、色谱分析的特点和优点：
1）分离度高：分离效率远大于其他分离技术如蒸馏、
萃取、离心等方法 2）应用范围广：几乎可以用于所有化合物的分析 3）分析速度快： 4）样品用量小：
5）灵敏度高
6）分离和测定一次完成（和光度法、电化学检测） 7）易于自动化，可在工业流程中使用
2、 色谱分类
按流动相主要可分为气相色谱和液相色谱
3、气相色谱和液相色谱的比较
气相色谱 1、只能分析挥发性物质，约20%的 化合物 2、不能用于热不稳定物质的分析 3、可得到很高的柱效 5、流动相为气体，无毒、易处理 6、仪器制造难度较小 高效液相色谱 几乎可以分析各种化合物 可用于热不稳定物质的分析 柱效不会很高 流动相有毒，费用较高 仪器制造难度较大
流动相
A+B+C C B A C B A C
B
A
C B C
图11-1
色谱洗脱原理图
A+B+C C B A C B A C B A
C B
C
信 号 A B C t，min
图11-1 色谱洗脱过程与色谱图
三. 色谱图的特征值
tR
检测信号
tM
时间t
图11-1 色谱图中的相关参数
四、 色谱的定性和定量分析
2、定量分析(Quantitative Analysis)
1）用峰高定量 必须保证在改变色谱条件下峰形不变化。另 外，峰高必须与样品的浓度成正比。 可变的条件如柱温，流速和进样体积必须精 确控制。此外，也应避免加样量的超载。 2）用峰面积定量 峰的展宽对定量结果没有影响，常用计算机 辅助积分计算。
若称量同样量的的试样，加 入恒定量的内标物，此时
f i ms 100% 为常数此时： fs m
Aቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ wi 常数 100% As Ai As
wi
六、HPLC的应用
1. 药学
2. 植物学
3. 环境检测
4. 食品分析 5. 化工
6. 临床、药物代谢
2. 外标法： 以欲测组分的纯物质来制作标准曲线。
mi f i Ai
Ai
mi
3.内标法
将一定量的，纯物质作内标物，加入到准确称量的 试样中，根据被测物和内标物的质量，及其在色谱峰上 的峰面积比，求出某组分的含量。 原理：若试样中组分质量为mi ,质量分数为wi , 在其中加 入质量为ms的内标物，试样质量为m,则
1、定性分析(Qualitative Analysis)
定性分析的依据： 1）组分保留时间或保留体积 2）色谱技术与其它技术连用。 气相色谱--质谱检测器（GC-MS） 高效液相色谱--紫外二极管阵列检测器 --红外光谱检测器（HPLC-IR --质谱检测器（LC-MS） *通过与标准化合物相比较，判断该物质是存在或不存在。
二、色谱分离的基本原理
使混合物中各组分在两相间进行分配，其中一相是
不动的，称为固定相，另一相是携带混合物流过此固定 相的流体，称为流动相。当流动相中所含混合物经过此 固定相时，就会与固定相发生作用。由于各组分在性质 和结构上的差异，与固定相发生作用的大小强弱也有差 异，因此在同一推动力的作用下，不同组分在固定相中 的滞留时间有长有短，从而按先后不同的次序从固定相 中流出。流出的物质用相应的检测器进行检测。
Ai f i ms mi As f s Ai ms wi 100% 100% f i 100% m m As m
* 只需测量试样中的几个组分，试样所有组分不能全部 出峰时，可采用此法。 * 由于是通过测量被测物和内标物在色谱峰上的峰面积 比值来进行计算的, 因而由于操作条件变化而引起的误差， 都将同时反映在被测组分和内标物的面积上，所以可以 得到较准确的结果。
五、几种常用的计算办法
1. 归一化法
若n个组分全部出峰，则i组分的百分含量wi(%)为：
mi mi wi 100% 100% m m1 m2 m3 ... mi ... mn Ai fi 100% A1 f1 A2 f 2 .....Ai fi ... An f n
内标物的选择： * 试样中不存在 ** 峰保留时间较接近，但与组分完全分离。 ***与组分的物理化学性质接近，有利于操作条件变化时， 被测组分和内标物的面积作匀称的变化。
4. 内标标准曲线法
Ai f i ms m A f Af m wi i 100% s s 100% i i s 100% m m As f s m
mi f i Ai ms f s As
mi Ai f i Asf s ms Ai f i mi ms As f s Ai f i ms mi As f s Ai f i m s wi 100% 100% 100% m m As f s m
一般以内标物为基准，fs=1, 则上式可简化为：