PH＞PI ，此时蛋白质带负电
荷，彼此排斥，不容易析出。
缓慢滴加0.04mol/L盐酸溶液， 边滴边摇，直至产生明显的大量 沉淀，观察并记录沉淀与溶液颜 色的变化。
PH=PI，达到等电点时，
蓝色浅沉淀 蛋白质无电荷膜保护，彼
此聚集，容易析出。
继续滴入0.04mol/L盐酸溶液， 直至沉淀全部溶解，观察并记录 沉淀与溶液颜色的变化。
蓝色
PH＞PI ，此时蛋白质带负电荷，
彼此排斥，不容易析出。
结论：酪蛋白具有两性电离的性质， PH=PI时蛋白质容易沉淀， PH＜PI或PH＞PI
时，蛋白质带正电荷或负电荷，彼此排斥，不容易沉淀。
2. 蛋白质的变性 请填写下表
方法
盐析法
有机溶剂沉淀法
常用试剂
沉淀原理
滴入0.04mol/L 氢氧化钠溶液， 边滴边摇，使之再度产生明显的 颗粒。
滴数 颜色
滴数 颜色
继续滴加0.04mol/L 氢氧化钠溶 液，直至沉淀溶解，观察并记录 溶液颜色变化。
结论：
滴数 颜色
黄
pH3.8 —5.4
蓝
【实践操作】 2.取3支小试管，在上端标注学号、管号，如下操作，注意混匀
加入物体（滴）
PH＜PI，此时蛋白质带正电荷， 浅黄（白）彼此排斥，不容易析出。
滴入0.04mol/L 氢氧化钠溶液， 边滴边摇，使之再度产生明显的 颗粒。
继续滴加0.04mol/L 氢氧化钠溶 液，直至沉淀溶解，观察并记录 溶液颜色变化。
PH=PI，达到等电点时，
浅蓝色沉淀 蛋白质无电荷膜保护，彼
此聚集，容易析出。
2. 0.01% 溴甲酚绿（ BCG）溶液（指示剂，
pH3.8 —5.4） 3. 0.04 mol/L 盐酸溶液
pH3.8 —5.4
黄
蓝
4. 0.04 mol/L 氢氧化钠溶液
5. 1.0 mol/L 乙酸溶液
6. 0.1 mol/L 乙酸溶液
7. 0.01mol/L 乙酸溶液
【器材】
试管 试管架 毛滴管 记号笔
6.实验1出现明显沉淀，请老师检查后在实验报告上并签字确 认（应两次出现沉淀）。 7.实验2出现结果后请老师检查确认后给予实验成绩。
【实践操作】1.取洁净大试管1支，按表如下操作
操作步骤
结果
结果分析
加入 5g/L酪蛋白乙酸钠溶液 20滴， BCG指示剂6～7滴，混匀后，观 察并记录溶液的颜色。
蓝色
电
正 荷；当蛋白质溶液的 pH<pI时蛋白质分子带 电
荷。在pH值大于或小于 pI的溶液中，由于存在电
荷膜的保护，蛋白质分子不易析出。当溶液 pH等
于pI时，溶液的溶解性 最低，溶质容易析出。根
据酪蛋白在不同 pH溶液中的溶解度来观察蛋白质 的两性电离，并测定其等电点。
【试剂】
1. 5g/L 酪蛋白乙酸钠溶液
【实践操作】1.取洁净大试管1支，按表如下操作
操作步骤
结果
结果分析
加入 5g/L酪蛋白乙酸钠溶液 20滴，
BCG指示剂5滴，混匀后，观察并
记录溶液的颜色。
颜色
缓慢滴加0.04mol/L盐酸溶液， 边滴边摇，直至产生明显的大量 沉淀，观察并记录沉淀与溶液颜 色的变化。
滴数 颜色
继续滴入0.04mol/L盐酸溶液， 直至沉淀全部溶解，观察并记录 沉淀与溶液颜色的变化。
1
2
3
蒸馏水
16
30
34
0.01mol/L乙酸溶液
－
－
6
0.1 mol/L乙酸溶液
－
10
－
1.0 mol/L乙酸溶液
24
－
－
5g/L酪蛋白乙酸钠溶液 10
10
10
溶液PH值
3.2
4.7
5.9
立即混匀各管，静置 10分钟，观察各管沉淀情况
【结果与分析】
沉淀情况
结果分析
沉淀结果用“-，+，++，+++”表示并记录于表中。
【注意事项】 冒用他人结果，两人成绩全部取消，并加倍扣分。
1.沉淀符号，“－”表示无沉淀，“＋”表示浑浊无明显沉淀，“＋＋” 有明显沉淀，有小颗粒；“＋＋＋”表示大块沉淀。 2.四人共用一组试剂，在本座位，依次轮流添加，不可四处走动。 3.每组派一名代表到前面取一小试管蒸馏水，本组共用。 4.添加各种试剂注意用相应的毛滴管， 不可混用！！ 5.注意混匀试管，实验1中添加盐酸和氢氧化钠时注意边添加边震荡试管， 接近PI时逐滴添加，沉淀消失后停止添加试剂，在结果一栏 记入添加试剂 的滴数。
实验一
蛋白质的两性电离和等电点
【目的】验证蛋白质两性电离的性质 ,测定酪蛋白
【原理】 的等电点。
碱负酸正
NH3+ Pr
COOH
阳离子 pH<pI
OH H+
NH3+ Pr COO-
兼性离子 pH=pI
OH H+
NH2 Pr COO-
阴离子
pH>pI
【原理】
负 当蛋白质溶液的 pH>pI时，蛋白质分子带
立即混匀各管，静置 10分钟，观察各管沉淀情况
【结果与分析】
沉淀情况
－
＋＋＋
－
结果分析
酪蛋白于 PH=4.7时最容易析出，其等电点为 4.7。
沉淀结果用“-，+，++，+++”表示并记录于表中。
【思考题】 1.加入班氏试剂的作用？ 酪蛋白的等电点是 4.7。 2.加入班氏试剂的作用？
蛋白质分子中肽链的两个末端，游离的α－羧基 可电离成带负电荷的阴离子，游离的α－氨基可 电离成带正电荷的阳离子，此外多肽链中氨基酸 残基的侧链中也有可以电离的酸性和碱性集团。
对蛋白质生物 活性的影响
【实践操作】 2.取3支小试管，在上端标注学号、管号，如下操作，注意混匀
加入物体（滴）
1
2
3
蒸馏水
16
30
34
0.01mol/L乙酸溶液
－
－
6
0.1 mol/L乙酸溶液
－
10
－
1.0 mol/L乙酸溶液
24
－
－
5g/L酪蛋白乙酸钠溶液 10
10
10
溶液PH值
3.2
4.7
5.9
