中华中医药学刊贞杞口服液抗视疲劳实验研究陈文东1，付涛2，潘思佳2，陈祥蓉2，管家齐2（1．杭州市第三人民医院，浙江杭州310009；2．浙江中医药大学，浙江杭州310053）摘要：目的:探讨贞杞口服液对兔睫状体组织cAMP 与cGMP 的影响。
方法:参考文献，选取2 2．5kg 健康黑眼兔50只，雌雄各半。
普通饲养，除生理盐水组10只外，其他40只昼夜光照循环，昼30lux (照明度)，夜0lux 。
实验第6d ，将光照40只实验兔随机分为模型组、贞杞口服液高、低剂量组和杞菊地黄口服液阳性对照组。
每组各10只，分别给药3周。
在末次给药后的24h ，取实验兔，以断头法处死动物，迅速摘出双侧眼球，分离睫状体。
观察指标。
结果:高、低剂量贞杞口服液对兔眼睫状体组织的cGMP 有显著抑制作用，而组织中的cAMP 显著增加。
结论:贞杞口服液在抗视疲劳方面发挥重要作用，其作用机制可能与调节睫状体组织中cAMP 与cGMP 含量有关。
关键词：贞杞口服液;睫状体;cAMP 与cGMP中图分类号：R285．5文献标志码：A文章编号：1673－7717(2013)04－0911－03Experimental Study of Zhenqi Oral Solution on the Resistance of Visual FatigueCHEN Wendong 1，FU Tao 2，PAN Sijia 2，CHEN Xiangrong 2，GUAN Jiaqi 2（1．Hangzhou Third People Hospital ，Hangzhou 310009，Zhejiang ，China ；2．Zhejiang Chinese Medical University ，Hangzhou 310053，Zhejiang ，China ）Abstract ：Objective ：To investigate to the influence of Zhenqi oral liquid on the rabbit ciliary body tissue of cAMP and cGMP．Methods ：By reference ，50healthy black eyes rabbits weighted 2 2．5kg were selected ，25male and 25female rab-bits．All the rabbits were kept by general conditions ，in addition to 10in the normal saline groups ，others 40were given light cycle day and night ，day 30lux （illumination ），night 0lux．On the 6th day ，the 40lighted rabbits were randomly di-vided into model group ，Zhenqi oral liquid high and low doses groups and Qiju Dihuang oral liquid control group．10in each group were administered for 3weeks．After the last administration in the 24h ，animals were killed by decapitation ，and the eyes of bilateral were quickly pick out to isolate the ciliary body．Then the indicators were observed．Results ：The high and low doses of Zhenqi oral liquid inhibited the rabbit ciliary body tissue of cGMP significantly ，and the tissue of cAMP increased significantly．Conclusion ：Zhenqi oral liquid played an important role on visual fatigue resistance ，and its mechanism may be related to regulation of ciliary body tissue of cAMP and cGMP．Key words ：Zhenqi oral liquid ；ciliary body ；cAMP and cGMP收稿日期：2012－11－01作者简介：陈文东（1975－），女，浙江泰顺人，主管中药师，硕士，研究领域：中药制剂。
通讯作者：管家齐（1972－），男，安徽定远人，讲师，硕士，研究领域：中药药性与临床。
视疲劳又称眼疲劳（Asthenopia ），原为用以描述与用眼过度相关的一系列症状的名词。
因其产生原因复杂多样，多数学者认为视疲劳的产生是眼或全身器质性因素与精神心理因素相互交织形成的结果，属于身心医学范畴，但通常以患者自觉眼部症状为突出表现，因此，在临床上又常称为眼疲劳综合征［1］。
视疲劳症状通常表现为眼部的疼痛、酸胀、烧灼感、异物感、流泪、畏光、视物模糊、复视、眼睛干涩，甚至导致眼部炎症以及头痛、阅读不能。
尤其近距离工作时，远达不到“舒适和持久”的用眼状态，严重者甚至出现恶心、呕吐等全身症状，严重干扰了患者的视觉和生活质量。
近年来随着信息交流方式变化和工作节奏加快，人群中视疲劳患者有逐渐加多的趋势。
而在使用视频终端显示器（visual /video display terminal ，VDT ）［2］如计算机、电视机、电子游戏机的人群中，因为该环境对视功能影响特殊性，这一趋势表现的尤为明显。
目前我国对VDT 引起的视疲劳的研究尚处于起步阶段，与日益增长的VDT 操作人群、操作时间量、操作频率，这些超负荷的视觉使用率的增长不相符合。
因此，视疲劳的形成原因、发病机制和防治越来越得到人们的关注。
贞杞口服液是长期用于眼科的临床中药秘方配制而成的口服制剂，具有滋阴补肾、清热明目功能，用于改善视疲劳，提高暗视力适应能力。
本实验采用现代医学实验方法，研究黑眼兔经持续近视白炽灯照射造成视疲劳模型，并“贞杞口服液”治疗，探讨其对兔眼睫状体组织中cAMP （环磷酸腺苷）与cGMP （环磷酸鸟苷）含量的影响，进一步阐明119中华中医药学刊贞杞口服液在抗视疲劳方面的作用机制。
1材料与方法1．1实验动物2 2．5kg黑眼兔，清洁级，由浙江中医药大学实验动物中心提供。
动物实验条件合格证号：syxk（浙）2008－0116。
1．2实验药品贞杞口服液（由女贞子、枸杞子、菊花、决明子、桑葚子、山楂、黄芪、红花、菟丝子、远志组成）由杭州市第三人民医院制剂中心提供，批号：100416杞菊地黄口服液（由枸杞子、菊花、地黄、山药、山茱萸、牡丹皮、茯苓、泽泻组成）由杭州胡庆余堂药业有限公司生产，批号：1006071．3实验试剂兔（Rabbit）环磷酸腺苷（cAMP）ELISA检测试剂盒、兔（Rabbit）环磷酸鸟苷（cGMP）ELISA检测试剂盒，由上海史瑞可生物科技有限公司提供，批号：1010251．4主要仪器XHF－高速分散器（宁波新芝生物科技股份有限公司生产），501恒温水浴锅（杭州惠创化器设备有限公司），WH－861漩涡混合器（太仓市科教器材厂），台式高速冷冻离心机（Biofuge stratos Kendro Laboratory Products），酶标仪（IEC Micro CL17Thermo ELECTRON CORPORATION），电子天平（AR2140梅特勒－托利多仪器（上海）有限公司）。
1．5造模与分组1．5．1造模参考文献［3－4］，选取2 2．5kg健康黑眼兔50只，雌雄各半。
普通饲养，除生理盐水组10只外，其他40只昼夜光照循环，昼30lux（照明度），夜0lux，连续6d。
1．5．2分组造模后，将进行过光照的40只实验兔随机分为模型组、贞杞口服液高（10mL∕只）、低（2．5mL∕只）剂量组和杞菊地黄口服液（5mL∕只）阳性对照组。
每组各10只，分别给药3周。
各组家兔均采用经口给药，采用拔掉针头的注射器，将药从兔子嘴里直接喂食。
1．6观测指标在末次给药后的24h，取实验兔，以断头法处死动物，迅速摘出双侧眼球，在手术显微镜下仔细分离睫状体。
生理盐水冲洗后，滤纸吸干。
将双眼睫状体合为一个标本，电子天平称重。
然后用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10s/次，间隙30s，连续3 5次，在冰水中进行）。
将制备好的10%匀浆用低温低速离心机2000r/min左右离心1015min，将离心好的匀浆留上清液，弃下面沉淀。
根据实验需要，取适量上清液进行测定。
采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定实验兔睫状体中cAMP和cGMP含量。
按照试剂盒所示检测方法进行检测。
1．7统计方法数据统计采用SPSS统计软件处理，所有计量数据均表示为平均值ʃ标准差（珋xʃs）。
统计3次独立的实验数据，统计分析采用t检验，P＜0．05具有统计学意义。
2结果兔睫状体组织中cAMP与cGMP的变化，如表1 2、图1 2所示。
表1各组间睫状体组织中cAMP的比较（nmol/L）组别n cAMP生理盐水组10139．15ʃ38．36#模型组1045．48ʃ0．01▲贞杞口服液高剂量组1093．72ʃ9．60#贞杞口服液低剂量组1058．86ʃ4．20#杞菊地黄口服液组1069．92ʃ3．83#注：与生理盐水组比较有极显著意义，▲P＜0．01；与模型组比较有极显著意义，#P＜0．01。
图1各组cAMP趋势图从图1可以看出，模型组睫状体组织中cAMP较生理盐水组明显下降，而喂食药物的3个治疗组睫状体组织中cAMP则升高，其中贞杞口服液高剂量组更接近正常对照组。
表2各组间睫状体组织中cGMP的比较（nmol/L）组别n cGMP生理盐水组1030．68ʃ8．01☆模型组10148．41ʃ18．52■贞杞口服液高剂量组1049．30ʃ6．18☆贞杞口服液低剂量组10116．95ʃ7．38☆杞菊地黄口服液组1041．52ʃ2．48☆注：与生理盐水组比较有极显著意义，■P＜0．01；与模型组比较有极显著意义，☆P＜0．01。
图2各组cGMP趋势图从图2可以看出，模型组睫状体组织中cGMP较生理盐水组明显升高，而喂食药物的三个治疗组睫状体组织中cGMP均下降，其中贞杞口服液高剂量组和杞菊地黄口服液组与正常对照组更接近。
