迁移实验
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迁移实验
目的:检测细胞的迁移能力或药物对细胞迁移能力的影响。材料:HepG2细胞、BD公司insert、BD公司24孔板
步骤:
1.将饥饿24小时的细胞从孵箱取出,酶解好,弃酶,加入无血清培养基,吹打混匀,离心800 x 3min.
2.弃上清,细胞沉淀加入无血清培养基吹打混匀,计数,稀释浓度为2 x 105个/ml.
3.取出insert放入24孔板中。先加下室培养基(含血清1%)700微升,insert中加入200微升细胞悬液。
4.将insert放置到24孔板的相应位置,防止insert底部有气泡,否则将影响实验结果。
5.37℃孵箱4--6小时。
6.取出24孔板,弃去上下室培养基。下室加入700微升从-20保存的甲醛,4度放置1小时。
7.弃去甲醛,PBS洗一遍,下室加入苏木精700微升。染色20-30min.
8.回收苏木精。Insert 用PBS洗3遍,每次都用棉棒擦拭insert里边,将没有迁移的细胞擦去。
9.下室加入PBS700uL,将Insert放好,明视场照相(200倍)。每组每个Insert随意拍照6个视野,细胞计数取平均值。
10.细胞计数用imageJ软件。Open--分析--cell count。