总糖与还原糖含量测定

总糖和还原糖的测定－高效液相色谱法葡萄酒、果酒－总糖和还原糖的测定－高效液相色谱法(Ⅱ法)1 范围本方法适用于葡萄酒、果酒及其相关产品中总糖和还原糖含量的测定。

2 原理利用样品中各种组分在液固两相分配系数的不同，令样品通过液相色谱柱，而将样品中的果糖、葡萄糖、蔗糖与其他组分分离。

然后再利用示差折光检测器进行鉴定，用外标法定量。

3 试剂与溶液3.1 乙腈：色谱纯；3.2 超纯水；3.3 乙腈-水（75＋25）：将乙腈和水按（75＋25）的比例混合（或根据仪器情况调整该比例至分离效果最佳），用脱气装置充分脱气后，再用0.45μm的油系过滤膜过滤。

该溶液用做流动相；3.4 糖标准溶液（含总糖45.000g/L）：分别称取干燥的葡萄糖、果糖、蔗糖各1.500g（精确至0.001g），移入100mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度。

该溶液含葡萄糖、果糖、蔗糖分别为15.000g/L。

4 仪器设备4.1 高效液相色谱仪：（配有记录系统或数据处理装置）；4.2 示差折光检测器；4.3 色谱柱：150 min×5.0mm（内径），Shim－pack CLCNH2 柱；4.4 微过滤膜：0.45μm，油系；4.5 脱气装置（或超声波装置）。

5 试样的制备将样品用超纯水稀释至含总糖量为45g/L 左右，并用0.45μm油系微过滤膜过滤。

6 分析步骤6.1 色谱条件a.柱温：室温；b.流动相：乙腈＋水；c.流速： 2mL/min；d.进样量：20μL。

6.2 测量：在同样的色谱条件下，将糖标准溶液和处理好的试样分别注入色谱仪。

开启记录系统后，扳动进样阀。

3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法是一种常用的测定还原糖和总糖含量的方法。

本文将介绍该方法的操作步骤、原理及注意事项。

一、操作步骤1. 样品制备：精确称取适量糖样品，加入足量去离子水稀释至1 mL，摇匀。

2. 试剂制备：(1) Na2CO3试液：称取0.5 g Na2CO3加入50 mL去离子水中，溶解并稀释至1 L。

(2) 3,5-二硝基水杨酸(DNS)重量浓度为1 g/L的甲醛溶液：按比例称取适量DNS和甲醛，在去离子水中稀释制成重量浓度为1 g/L的甲醛溶液。

3. 测定步骤：(1) 取3个试管，编号为A、B、C，并进行空白对照。

将A、B、C试管分别加入0.1 mL 样品，每个试管中加入相同量的0.9 mL去离子水。

在空白试管中加入相同量的去离子水代替样品。

(2) 在A试管中加入0.5 mL Na2CO3试液，摇匀。

(3) 将B试管浸于沸水中加热3-5分钟，使其中的还原糖完全还原。

(4) 在A、B两样品试管中加入0.5 mL甲醛溶液，摇匀并置于60℃水浴上加热10分钟。

(6) 加入1.5 mL水后，在空白对照试管和样品试管中均加入0.5 mL DNS溶液，摇匀。

(7) 在95℃水浴加热10分钟，并立即冷却至室温。

(8) 测量吸光度值，通过标准曲线计算样品中还原糖或总糖含量。

二、原理还原糖或总糖与Na2CO3在典型的碱性条件下发生醛基反应，把碳水化合物中的亲电基转化为醛基，再将其还原为对应的醇，生成糖醇和尿素等。

然后，在碱性条件下，醛基与3,5-二硝基水杨酸(DNS)反应，发生环化，生成糖醛酸化合物，这些化合物在pH9.0以下表现为桥形分子，具有紫色的吸收峰。

在高温条件下，DNS与糖醛酸化合物相结合，形成柿子色化合物，进一步增加吸收光的强度。

还原糖或总糖的含量可以通过比较样品的吸光度值和标准曲线来测定。

三、注意事项1. 避免试管附着并确保试管内部表面干净。

食品中转化糖（总糖）、还原糖的测定1安全性评估谨防试剂灼伤：加入碱性酒石酸铜甲乙液、20%氢氧化钠和2%盐酸试剂时，需佩戴一次性乳胶手套。

谨防玻璃割伤：使用前检查玻璃仪器外观完好无损，使用时注意轻拿轻放，清洗时，需佩戴防割手套。

谨防高温烫伤：滴定时，调节滴定管滴定速度的手需佩戴涂脂手套/一次性乳胶手套，且不裸露手腕皮肤，双手不碰及电陶炉表面。

2 目的规范食品中转化糖（总糖）、还原糖的检测流程，确保检测结果的准确性。

3 范围适用于各类食品中转化糖（总糖）、还原糖的测定。

4 依据参照GB 5009.7 - 2016食品安全国家标准食品中还原糖的测定、GB 5009.8 - 2016食品安全国家标准食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定。

5 检测原理还原糖（直接滴定法）：试样经除去蛋白质后，在加热条件下，以亚甲基蓝作指示剂，滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液（用葡萄糖标准溶液标定），根据样品液消耗体积计算还原糖含量。

转化糖（总糖）（酸水解-莱茵-埃农氏法）：试样经除去蛋白质后，其中蔗糖经盐酸水解转化为还原糖，再按还原糖测定，根据样品液消耗体积计算转化糖（总糖）含量。

注：①为消除氧化亚铜沉淀对滴定终点观察的干扰，在碱性酒石酸铜乙液中加入少量亚铁氰化钾，使之与Cu2O生成可溶性的无色络合物，而不再析出红色沉淀，其反应如下：Cu2O↓+K4Fe(CN)6+H2O=K2Cu2Fe(CN)6+2KOH②碱性酒石酸铜甲液和乙液应分别贮存，用时才混合，否则酒石酸钾钠铜络合物长期在碱性条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀，使试剂有效浓度降低。

6 试剂和仪器：实验室三级用水6.1 试剂2 %盐酸溶液，20 %氢氧化钠溶液，碱性酒石酸铜溶液：碱性酒石酸铜甲液（以下简称A 液）（硫酸铜+亚甲基蓝）+碱性酒石酸铜乙液（以下简称B液）（酒石酸钾钠+氢氧化钠+亚铁氰化钾），乙酸锌溶液（219 g/L），亚铁氰化钾溶液（106 g/L），葡萄糖标准溶液。

实验十四还原糖和总糖含量的测定（3,5-二硝基水杨酸比色法）一、目的植物体内的还原糖，主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。

它们在植物体内的分布，不仅反映植物体内碳水化合物的运转情况，而且也是呼吸作用的基质。

还原糖还能形成其他物质如有机酸等；此外，水果、蔬菜中含糖量的多少，也是鉴定其品质的重要指标。

还原糖在有机体的代谢中起着重要的作用，其他碳水化合物，如淀粉、蔗糖等，经水解也生成还原糖。

通过本实验，掌握还原糖定量测定的基本原理，学习比色定糖法的基本操作，熟悉分光光度计的使用方法。

二、原理各种单糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，再用酸水解法使没有还原性的双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖。

在碱性条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别求出样品中还原糖和总糖的含量。

三、仪器、试剂和材料1．仪器（1）刻度试管：25ml（2）离心管或玻璃漏斗2个（3）烧杯：100ml 1个（4）三角瓶：100ml 1个（5）容量瓶：100ml 3个（6）刻度吸管：lml 1个，2ml 4个，10mI 1个（7）恒温水浴（8）沸水浴（9）离心机（过滤法不用此设备）（10）电子天平（11）分光光度计2．试剂（1）lmg／ml葡萄糖标准液：准确称取100mg分析纯葡萄糖（预先在80℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100ml的容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。

（2）3,5-二硝基水杨酸试剂：将 6.3g 3,5-二硝基水杨酸和262ml 2mol／L NaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解。

实验二、总糖和还原糖的测定（一）──费林试剂热滴定法目的要求掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用直接滴定法测定还原糖的方法。

实验原理还原糖是指含有自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的单糖和某些二糖（如乳糖和麦芽糖）。

在碱性溶液中，还原糖能将Cu2+、Hg2+、Fe3+、Ag+等金属离子还原，而糖本身被氧化成糖酸及其他产物。

糖类的这种性质常被用于糖的定性和定量测定。

本实验采用费林试剂热滴定法。

费林试剂由甲、乙两种溶液组成。

甲液含硫酸铜和亚甲基蓝（氧化还原指示剂）；乙液含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。

将一定量的甲液和乙液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2NaOH + CuSO4 = Cu(OH)2+ Na2SO4在碱性溶液中，所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钠反应，生成可溶性的络合物酒石酸钾钠铜：在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，其反应如下：反应生成的氧化亚铜沉淀与费林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐，便于观察滴定终点。

Cu2O + K4Fe(CN)6 + H2O K2Cu2Fe(CN)6 + 2KOH滴定时以亚甲基蓝为氧化－还原指示剂。

因为亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型的亚甲基蓝，即达滴定终点。

根据样液量可计算出还原糖含量。

试剂和器材一、试剂费林试剂：甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g亚甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释到1000mL。

乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g NaOH，溶于蒸馏水中，再加入4g亚铁氰化钾［K4Fe（CN）6］，完全溶解后，用蒸馏水稀释到1000mL，贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。

0.1％葡萄糖标准溶液：准确称取1.000g经98～100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加蒸馏水溶解后移入100 0mL容量瓶中，加入5mL浓HCl（防止微生物生长），用蒸馏水稀释到1000mL。

总糖和还原糖含量的测定实验报告实验目的:植物体的还原糖，主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。

它们在植物体的分布，不仅反映植物体碳水化合物的运转情况，而且也是呼吸作用的基质。

还原糖还能形成其他物质如有机酸等。

此外，水果蔬菜中糖量的多少，也是坚定其品质的重要指标。

还原糖在有机体的代中起着重要的作用，其他碳水化合物，如淀粉蔗糖等，经水解也生成还原糖。

通过本实验，掌握还原糖定量测定的基本原理，练习比色定糖法的基本操作，热悉分光光度计的使用方法。

实验原理：1.还原糖还原糖是具有还原性的糖类的统称。

分子中含有游离醛基或者酮基的单糖和含有游离醛基的二糖都具有还原性。

如葡糖糖、果糖、半乳糖、乳糖、阿拉伯糖、麦芽糖等。

2.美拉德反应美拉德反应广泛分布于食品工业中的非酶褐变反应：还原糖与氨基酸/蛋白质在加热时发生的一系列复杂反应，生成棕/黑色的大分子物质，同时还产生具有不同气味的中间体分子，包括还原酮、醛和杂环化合物，为食物提供诱人可口的风味和诱人的色泽。

3.还原糖的测定方法：3,5-二硝基水酸法在波长540nm下，一定浓度围，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，可利用标准曲线法测定样品中的还原糖含量。

利用多糖能被酸水解为单糖的性质可以通过测定水解后的单糖含量来对总糖进行测定。

mbert-Beer定律A=lg(I 0/I)=lg（1/T）=KClA：吸光度I0：入射光强度I：透射光强度T：透光度（透射比）K：比例常数l：溶液厚度实验仪器，试剂与材料：1.实验仪器：UV2600紫外可见分光光度计2.实验试剂：（1）1.0mg/ml标准葡萄糖（2）3,5-二硝基水酸（DNS试剂）（3）6mol/L HCl（茜配置）（4）6mol/L NaOH（茜配置）（5）碘-碘化钾溶液3.实验材料：市售面粉。

实验步骤：1.还原糖的提取准确称取0.20g面粉，加蒸馏水约3ml，在研钵中磨成匀浆。

，转入三角烧瓶中，用约30ml蒸馏水冲洗研钵2~3次，洗出液也转入三角烧瓶中。

还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。

二、原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。

还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。

三、实验材料、主要仪器和试剂1. 实验材料小麦面粉；精密pH 试纸。

2. 主要仪器（1）具塞玻璃刻度试管：20mL×11（2）大离心管：50mL×2（3）烧杯：100mL×1（4）三角瓶：100mL×1（5）容量瓶：100mL×3（6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1（7）恒温水浴锅（8）沸水浴（9）离心机（10）扭力天平（11）分光光度计3. 试剂（1）1mg/mL 葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3gDNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。

总糖和还原糖的测定概述“总糖”是指所有能产生糖酸的物质组成的糖，其总量包括还原糖、酮糖和酸、葡萄糖酸、乳酸等。

还原糖是指可以被还原成糖醇的糖类物质。

在食品工业中，常用的还原糖为蔗糖、葡萄糖、果糖等。

“还原糖量”是指在一定条件下，还原糖产生的还原能力的测定值。

总糖检测的目的是了解食品中糖类物质的含量，在食品的研究、加工和贮藏过程中，有助于保证品质和控制产品的营养成分测定方法1. 材料准备（1）准确称取样品。

（2）为确保分析的精确性和可靠性，建议重复3次测定，然后求取平均值。

（3）测定仪器和设备。

2. 测定步骤（1）将样品加入锥形瓶中，加入10ml水，摇匀；（2）加入50%的硫酸，总体积到25ml；（3）恒温1小时；（4）取出，冷却至室温；（5）加少量洛丹酮酸钠蓝指示剂；（6）滴加NaOH溶液至紫红色转黄色，继续滴加至蓝色出现；（7）测量所需的NaOH用量（毫升）。

3. 计算公式总糖（％）=（所用的NaOH的毫升数×16.5） / (样品的克数×10)（3）送样、取样。

（1）样品制备：取适量样品称入烧杯中，加入适量水，搅拌均匀；过滤，保留滤液；（2）分装样品：取1ml样品分装至小孔量筒中；（3）加入试剂：将0.5ml盐酸、1ml氰化钠、1ml表面活性剂加入量筒中。

（4）后续操作：(1)小孔量筒体积调至50ml，在加0.1%碱液调整pH至8.5左右；(2)标准糖称定：取不同浓度的葡萄糖溶液，重复进行范围内可行的浓度测定和平均值；(3)比色：用还原糖标准曲线计算出样品中还原糖的含量；还原糖含量 (mg/ml)=[(标准吸光度-样品吸光度)×标准体积]/样品体积×标准浓度)绝对含量=还原糖含量×分析时总体积/取样量实验注意事项1.实验操作过程中必须严格按照实验操作规程进行，不能随意更改实验方法和实验步骤。

2.在进行测定总糖或者还原糖的过程中，水中的硫酸不能滴入试管或烧杯中，以免产生热量和蒸汽，导致安全事故的发生。

总糖和还原糖的测定──3,5－二硝基水杨酸法目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。

实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。

在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。

黄色桔红色试剂和器材一、试剂3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000ml容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液325ml，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000ml。

葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖200mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为2.0mg/ml。

6mol/L HCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。

碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。

6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。

0.1% 酚酞指示剂。

二、材料藕粉，小麦淀粉或玉米淀粉。

三、器材723PC、S22型分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。

一、葡萄糖标准曲线制作取5支15mm×180mm试管，按下表加入2.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。

管号葡萄糖标准液蒸馏水葡萄糖含量OD540 /ml /ml /mg0 1 00.210.80.42 0.4 0.6 0.83 0.6 0.4 1.24 0.8 0.2 1.65 1 0 2操作方法在上述试管中分别加入DNS试剂2.0ml，于沸水浴中加热2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9.0ml，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。

以1.0ml蒸馏水代替葡萄糖标准液按同样显色操作为空白调零点。

以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。

还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。

二、原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。

还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。

三、实验材料、主要仪器和试剂1. 实验材料小麦面粉；精密pH 试纸。

2. 主要仪器（1）具塞玻璃刻度试管：20mL×11（2）大离心管：50mL×2（3）烧杯：100mL×1（4）三角瓶：100mL×1（5）容量瓶：100mL×3（6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1（7）恒温水浴锅（8）沸水浴（9）离心机（10）扭力天平（11）分光光度计3. 试剂（1）1mg/mL 葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3gDNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。

还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。

二、原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。

还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。

三、实验材料、主要仪器和试剂1. 实验材料小麦面粉；精密pH 试纸。

2. 主要仪器（1）具塞玻璃刻度试管：20mL×11（2）大离心管：50mL×2（3）烧杯：100mL×1（4）三角瓶：100mL×1（5）容量瓶：100mL×3（6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1（7）恒温水浴锅（8）沸水浴（9）离心机（10）扭力天平（11）分光光度计3. 试剂（1）1mg/mL 葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3gDNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。

还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、材料、主要仪器和试剂1、材料小麦面粉；精密pH试纸。

2、主要仪器（1）具塞玻璃刻度试管：20mL×11 （2）大离心管：50mL×2（3）烧杯：100mL×1 （4）三角瓶：100mL×1（5）容量瓶：100mL×3 （6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1 （7）恒温水浴锅（8）沸水浴（9）离心机（10）分光光度计3、试剂（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3gDNS和262mL2MNaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。

（3）碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于100mL蒸馏水中。

（4）酚酞指示剂：称取0.1g酚酞，溶于250mL70%乙醇中。

（5）6MHCl和6MNaOH各100mL。

二、操作步骤1．制作葡萄糖标准曲线取7支20mL具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。

表1葡萄糖标准曲线制作管号1mg/mL 葡萄糖标准液（mL）蒸馏水（mL）DNS（mL）葡萄糖含量（mg）光密度值（OD540nm）0 0 2 1.5 01 0.2 1.8 1.5 0.22 0.4 1.6 1.5 0.43 0.6 1.4 1.5 0.64 0.8 1.2 1.5 0.85 1.0 1.0 1.5 1.06 1.2 0.8 1.5 1.2将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5min，取出，冷却至室温，用蒸馏水定容至20mL，加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色。