葡萄球菌属检验

金黄色葡萄球菌检测方法Revised as of 23 November 2020金黄色葡萄球菌检测方法1.纸片法目前广泛应用的一种方法，用纸片、膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过观察微生物在测试片上面的生长、显色来测定食品中微生物。

采用快速测试片检测具有显着的优点：可测定少量检品，不需要配制试剂，不需要大量的玻璃器皿，操作简便迅速；易于消毒保存，便于运输携带方便，价格低廉；除纸片外无其他任何废液废物，大大减少了工作量；可以在取样时同时接种，结果更能反映当时样本中真实细菌数，防止延长接种时间时细菌繁殖造成的污染。

技术优点：操作简单使用方便，避免了繁琐的操作。

技术缺点：用时间比较长，无法准确定性及计数。

此方法现在应用于快速检测领域，美国3M公司Petrifilm为载体的测试片应用最为广泛。

但其也存在一些问题：Petrifilm测试片上覆盖了一层薄膜，当样品粘液过多时会出现菌落的扩散和融合，影响计数；Petrifilm测试片面积较小，当菌量大于250cfu时，准确计数较困难；待测样品中含有的某些有机物可能使显色减缓。

使目视效果下降，导致计数偏低。

2.免疫学方法各种免疫学方法的基本原理都是抗原抗体反应。

抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。

金黄色葡萄球菌特异的抗原能激发机体产生相应的特异性抗体。

在免疫检测中，可利用单克隆抗体检测金黄色葡萄球菌的特异抗原，也可利用金黄色葡萄球菌抗原检测体内产生的特异抗体，两种方法均能判断机体的感染状况。

目前对于金黄色葡萄球菌的测定主要进行了肠毒素的测定，方法以酶联免疫吸附实验为主，有胶体金方法，也有用亲和素一生物素乳胶凝集实验和免疫荧光实验，但都有一定的局限性。

免疫学方法包括下面两个部分：（1）抗原抗体技术分析：抗原抗体技术是免疫技术中的核心部分，对于金黄色葡萄球菌检测全菌免疫筛选抗体是很困难的事情，现在目前市场有的大多都是对金黄色葡萄球菌毒素类进行免疫得到的抗体，金黄色葡萄球菌毒素有12种，军事医学科学院生产的金黄色葡萄球菌毒素A、B、C的抗体。

1．概述葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌等35个种，17个亚种。

金黄色葡萄球菌是最重要的致病葡萄球菌。

2. 标本类型血液、尿液、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。

3. 鉴定3.1 形态与染色革兰阳性球菌，成单、双、短链或不规则葡萄状排列。

3.2 培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色，周围有明显的?溶血环，部分菌落也可呈灰白色或柠檬色。

在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。

表皮葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色，多数不溶血。

3.3 生化反应金黄色葡萄球菌触酶试验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇，不分解棉子糖和水杨苷，明胶、血浆凝固酶和DNA酶试验阳性，七叶苷试验阴性。

3.4 鉴别要点3.4.1 本菌属特征革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，触酶试验阳性。

金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上菌落呈金黄色或白色，DNA酶和血浆凝固酶试验均阳性，发酵苷露醇。

3.4.2 与微球菌属的鉴别葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，镜下以葡萄状排列为主，菌体较小，而微球菌属为氧化型或无反应，镜下以四联排列为主，且菌体较大。

链球菌属葡触酶试验阳性，试验为发酵型，O/F葡萄球菌属与链球菌属的鉴别3.4.3萄糖O/F试验为氧化型，触酶试验阴性。

3.4.4 凝固酶试验阳性葡萄球菌的鉴别见下表1。

表1 凝固酶阳性葡萄球菌鉴别的关键性试验半乳糖海藻凝固硝酸溶血菌名触酶苷酶糖酶盐金黄色葡萄球菌金黄色亚-+++++种金黄色葡萄球菌厌氧亚种+-+---施氏葡萄球菌聚集亚种++++-ND中间葡萄球菌++d+++海豚葡萄球菌++++-NDS.lutrae++++++猪葡萄球菌d+-++-注：“+”为90%以上菌株为阳性，“-”为90%以上菌株为阴性，“d”为11%-89%阳性，“ND”为无资料。

3.5 操作步骤3.5.1 涂片、染色观察菌落特征，在血平板上挑取可疑菌落，涂片染色镜检。

葡萄球菌属鉴定一、目的对某一细菌的鉴定水平，可提供以下几方面的价值：（1）决定治病方法；（2）作流行病学研究；（3）了解细菌与感染的关系；（4）进行学术交流。

二、原理根据葡萄球菌的形态染色、培养特性、生化反应、抗原构造等将葡萄球菌由属鉴定到具体种类。

三、标本不同病种及不同检查目的而定，可为脓汁、渗透液、咽拭子、血、脑脊液、食物、呕吐物、粪便等，置于无菌瓶内送检。

四、试剂及器材革兰氏染液、培养皿、培养瓶、生化鉴定管、血浆、玻片、接种针（环）、酒精灯等。

五、鉴定程序标本涂片、染色痰、脓汁、血、脑脊液粪便、呕吐物平皿可凝菌落纯培养涂片、染色、触酶实验葡萄状（G+）、触酶（+）血浆凝固酶、葡萄糖甘露醇分解、高盐耐受实验甘露醇分解（需O2、甘露醇分解（—）厌O2均+）血浆凝固酶（+）、新生霉素（+）血浆凝固酶（—）新生霉素S R表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌六、质量控制每周进行一次葡萄球菌标准菌株的革兰氏染色、触酶、血浆凝固酶及新生霉素实验。

七、实验室解释及临床意义1、葡萄球菌广泛存在于自然界，医院内葡萄球菌的存在成为院内交叉感染的重要因素。

2、葡萄球菌是化脓性感染的重要病原菌。

3、葡萄球菌引起尿路感染的比例很大。

八、安全防护措施在操作过程中，要穿好工作衣，戴好口罩、手套，必要时戴眼罩，严格按操作规程，结束后，用次氯酸溶液（0.2%）擦拭实验台、显微镜手柄、载物台，浸泡手，然后紫外线消毒30分钟。

九、标本处理废弃标本，培养基等统一由专门人员高压消毒处理。

十、参考文献诊断细菌学，李仲兴等主编、第一版、香港、黄河文化出版社，1992。

bp培养基鉴别金色葡萄球菌的原理以bp培养基鉴别金色葡萄球菌的原理为标题金色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的致病菌，可以引起多种感染，包括皮肤感染、呼吸道感染和血液感染等。

因此，准确鉴定金色葡萄球菌对于临床医学和公共卫生具有重要意义。

BP培养基（Baird-Parker agar）是一种常用的选择性培养基，用于鉴别金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和其他葡萄球菌属菌株。

下面将介绍BP培养基鉴别金色葡萄球菌的原理。

BP培养基的组成中含有选择性物质和指示剂，能够抑制大多数细菌的生长，同时使金色葡萄球菌菌落呈现特殊的形态和颜色。

BP培养基中的选择性物质是亚硒酸钠（sodium selenite）和苯甲酸（phenylalanine），它们能够抑制大多数菌落的生长，但对金色葡萄球菌菌落的生长没有明显抑制作用。

BP培养基中的指示剂是酚红（phenol red），它能够在菌落中显示出特殊的颜色变化。

在BP培养基上，金色葡萄球菌形成的菌落呈现为典型的黑色或暗褐色，而其他葡萄球菌属菌株通常形成的菌落颜色较浅，无明显的黑色或暗褐色。

这是因为金色葡萄球菌能够产生酚酞酶（phenol-soluble modulins，PSMs），该酶能够将BP培养基中的苯甲酸氧化为苯酚，进而与酚红反应产生黑色或暗褐色的化合物。

而其他葡萄球菌属菌株没有或只产生少量酚酞酶，所以无法将苯甲酸氧化为苯酚，菌落颜色较浅。

BP培养基还能够利用金色葡萄球菌的凝集素（clumping factor）来鉴别。

金色葡萄球菌的凝集素能够与培养基中的凝集素抑制剂反应，使得金色葡萄球菌菌落周围形成边缘模糊的透明带，而其他葡萄球菌属菌株则不会产生这种现象。

通过上述原理，BP培养基能够有效鉴别金色葡萄球菌和其他葡萄球菌属菌株。

在实验室中，可以将待检菌种接种于BP培养基上进行培养，经过一定时间后观察菌落的颜色和形态，以及边缘透明带的形成情况，就可以初步判断菌株是否为金色葡萄球菌。

简述葡萄球菌属的鉴定要点。

葡萄球菌属是常见的细菌属，包括了许多病原菌。

对于葡萄球菌的鉴定，以下是一些要点：
1. 形态特征：葡萄球菌为革兰氏阳性球形细菌，通常呈成群聚集的形式，形成类似于葡萄串的结构。

2. 培养特性：葡萄球菌可以在常见的培养基上生长，通常需要高氧环境。

培养基上通常呈亮黄色或白色菌落。

3. 生化特性：葡萄球菌可以发酵葡萄糖，不发酵乳糖和蔗糖。

此外，一些生化反应也可以用于鉴定葡萄球菌。

4. 分子特征：现代分子生物学技术可以通过PCR、16S rRNA等方法对葡萄球菌进行鉴定，具有高度的准确性和灵敏度。

综上所述，对于葡萄球菌的鉴定，需要结合以上几个方面进行综合分析。

特别是在临床上，正确鉴定葡萄球菌的种类和特性对于治疗和预防感染非常重要。

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葡萄球菌属的检验程序通常包括以下步骤：
样品处理：将采集的样品用生理盐水或75%酒精进行表面消毒，然后使用无菌棉拭子擦拭样品表面，将拭子放入无菌试管中，做好标记，送往实验室进行培养。

细菌接种：将拭子接种于营养丰富的培养基中，如肉汤培养基或平板培养基。

接种时需要注意无菌操作，避免污染。

细菌培养：将接种好的培养基放入恒温器中进行培养，通常在37℃下培养24-48小时。

培养期间需要观察细菌的生长情况，记录细菌的生长情况。

细菌鉴定：根据细菌的生长情况、形态、染色等特点，对细菌进行初步鉴定。

可以采用生化反应、血清学试验等方法对细菌进行进一步鉴定。

药敏试验：对鉴定的细菌进行药敏试验，以确定细菌对各种抗生素的敏感性。

药敏试验是制定合理用药方案的重要依据。

报告结果：将细菌鉴定和药敏试验结果报告给医生，以便医生根据结果制定相应的治疗方案。

需要注意的是，葡萄球菌属的检验程序需要严格的无菌操作，以避免污染。

同时，不同实验室可能采用不同的方法和试剂进行细菌鉴定和药敏试验，因此结果可能会有一定的差异。

葡萄球菌属的常规鉴定标准操作程序1 概述葡萄球菌属是一类触媒试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌，表面葡萄球菌、腐生葡萄球菌等32个种。

是临床最常见的化脓性球菌，广泛分布于自然界中，在人体表面鼻、咽、肠道也经常存在。

2 形态与染色革兰阳性球菌，直径0.4~1.2µm成单、双、短链或不规则状排列。

在液体培养基浓汁标本中，往往排列成双或短链状多数有鞭毛。

3 培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上典型菌落为金黄色，周围有明显的透明（β）溶血环，部分菌落呈橙色，在高盐甘露醇平板上呈橙色菌落。

表皮葡萄球菌等其他葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色，不溶血。

4 生化反应触酶试验阳性，多数能分解葡萄糖、麦蚜糖、蔗糖和甘露醇。

不分解棉籽糖和水杨苷，液化明胶，血浆凝固酶和DNA酶实验分阳性。

5 鉴别要点5.1 本菌属特征：触酶实验阳性，革兰阳性球菌，葡萄状排列，菌落中等大小，中等干燥。

5.2 与微球菌属的鉴别：触酶实验都为阳性，但O∕F试验葡萄球菌属为发酵型，而微球菌为氧化型或无反应，而且菌体较葡萄菌属更大，排列呈四联状为主。

5.3 与链球菌属的鉴别：葡萄球菌属触酶试验都为阳性，而链球菌为阴性，O∕F试验葡萄球菌属为发酵型而链球菌为氧化型。

5.4 凝固酶阳性葡萄球菌的鉴别见下表。

结合型凝游离型凝鸟氨酸脱菌名PYP试验DNA试验VP试验固酶试验固酶试验羧酶实验金黄色葡萄球菌+ + - + + -中间型葡萄球菌- + + + - -施氏葡萄球菌+ - + + + -路邓葡萄球菌+ - + - + +注：“+”为90%以上菌株为阳性，“--”为90%以上菌株为阳性。

5.5 凝固酶阳性葡萄球菌的鉴别见下表+腐生葡萄球菌——+ V + +—溶血葡萄球菌+ ——V + ——人型葡萄球菌——+ —+ ——华纳葡萄球菌——+ V + ——模仿葡萄球菌+ —+ + + ——头状葡萄球菌——V + + ——耳葡萄球菌V ———V ——施氏葡萄球菌+ + —————路邓葡萄球菌+ V V — + —V注：“+"为90%以上菌株为阳性，“—”为90%以上菌株为阴性。

葡萄球菌属及检验1.同学们大家好，欢迎来到微生物检验技术课堂。

今天我们学习的内容是葡萄球菌属，葡萄球菌属是一类触酶试验阳性革兰染色阳性的球菌，因为他们在显微镜下经常成堆成团成葡萄串状，因此而得名。

2.葡萄球菌广泛分布于自然界，而且大多数没有致病性，构成了人体的正常菌群，但是我们要注意的是有些人体的皮肤和鼻咽部可携带致病性菌株，特别是医务工作者的携带菌率可高达70%以上，而其中金黄色葡萄球菌是致病性最强的一类，是引起医院感染的重要微生物，也是最常引起化脓性感染的球菌。

3.下面我们来学习葡萄球菌的生物学特性，首先来看一下它的形态与染色，革兰染色表现为阳性球菌，而且呈现不规则的葡萄串状排列，这类细菌它一般没有荚膜，没有鞭毛，而且不形成芽孢，大多数呢，也没有形成菌毛。

4.下面我们再来看它的培养特性，葡萄球菌属为需氧或兼性厌氧菌，最适的生长温度为35到37摄氏度，它们的营养要求不高，在大多数的培养均能够生长良好，我们来看一下右边这张图，这个是葡萄球菌在液体培养基中的生长现象，我们可以看到它呈均匀浑浊生长。

5.如果将这类球菌接种到普通琼脂平板上，培养24到48小时，那么就会在普通培养基上形成直径是2到3毫米大小的圆形菌落，而且菌落表面光滑凸起，边缘整齐湿润，并且不同的细菌可以产生不同的脂溶性色素，比如金黄色，白色，柠檬色等。

6.如果我们把金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上培养后观察结果，我们来一起看看菌落呈什么颜色呢？是金黄色，这主要是由于产生了脂溶性的金黄色色素的缘故，那我们再仔细观察一下，会发现菌落的周围有明显的β溶血环，这主要是由于金黄色葡萄球菌产生了溶血素的缘故。

7.另外葡萄球菌属中的某些菌株耐盐性强，他们能够耐受10%到15%的氯化钠，因此可以用高盐培养基对葡萄球菌属进行分离培养，当我们接种粪便，呕吐物或者是剩余食物的标本进行培养的时候，可以利于葡萄球菌的这个生长特点进行分离培养，因为在高盐的情况下，革兰阴性菌一般是不能生长的，从而达到分离选择培养的目的，我们再来看左边这张图，它显示的是金黄色葡萄球菌在高盐甘露醇平板上的培养结果，因金黄色葡萄球菌能够分解甘露醇，因此我们的菌落呈现的是淡橙黄色而表皮或者腐生葡萄球菌，呈现的则是白色或者是柠檬色。

食品葡萄球菌检测标准食品葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的细菌，广泛存在于环境中。

它可以引起食物中毒，严重时可能危及人体健康。

为了确保食品安全，许多国家和地区制定了食品葡萄球菌检测标准。

本文将介绍食品葡萄球菌检测标准的内容和相关要求。

1. 检测目标食品葡萄球菌检测标准的主要目标是确定食品样品中是否存在可生长的葡萄球菌，并评估其数量是否达到安全标准。

食品葡萄球菌主要通过内源性污染引入食品中，因此检测标准要求食品样品中菌落形成单位（CFU）的数量应低于安全限值。

2. 检测方法食品葡萄球菌检测主要采用传统的培养方法和分子生物学方法。

传统培养方法包括营养琼脂平板培养、液体培养和表面接种法。

分子生物学方法则使用PCR技术检测葡萄球菌的DNA。

无论使用哪种方法，都需要结合相关仪器设备和试剂盒进行检测。

3. 检测标准食品葡萄球菌检测标准通常根据食品类型和国家地区的法规要求而有所不同。

以某国家的食品葡萄球菌检测标准为例，其主要内容包括以下几个方面：(1) 样品准备：食品样品应按照标准的程序和方法采集，避免外源性污染。

样品应保持原样，并且在采样过程中要注意卫生和消毒。

(2) 培养方法：采用适当的培养基进行培养，通常是营养琼脂平板。

设置不同的培养条件，如温度、时间和气氛，以促使葡萄球菌生长。

(3) 检测限值：根据食品类型和国家地区的法规要求，规定了不同食品中葡萄球菌的允许数量上限。

常见的食品如肉制品、奶制品和糕点等都有相应的检测限值。

(4) 结果解读：根据培养结果和检测限值进行结果解读，判断样品是否合格。

如果样品中的葡萄球菌数量超过检测限值，则被认为不合格，需要采取相应的措施，如召回食品或进行再次处理。

4. 技术要求食品葡萄球菌检测标准还对检测所使用的仪器设备和试剂盒提出了一些要求。

检测仪器需要满足相关标准，如准确度、灵敏度和重复性等。

试剂盒要符合质量控制要求，并具备稳定性和可靠性。