Agilent1100高效液相色谱仪操作规程

Agilent1100series安捷伦⾼效液相⾊谱仪操作规程

Agilent1100⾼效液相⾊谱仪操作规程

1.仪器组成及开机

1.1仪器组成：

Agilent1100⾼效液相⾊谱系统主要由⼯作站、在线脱⽓机、柱温箱、输液泵、⾃动进样器、检测器等部件组成。

1.2开机：

1.2.1接通电源，打开计算机及⼯作站其它各部件开关，约30秒钟后，各部件进⼊待机状态，指⽰灯为黄⾊或⽆⾊。

1.2.2打开HP ChemStations,进⼊Instrument 1 online状态，约30秒钟后，计算机进⼊⼯作站的操作页⾯。该页⾯主要由以下⼏部分组成：

最上⽅为命令栏，依次为File,Run Control,Instrument等；命令栏下⽅为快捷操作图标，由多个样品连续进⾏分析、单个样品进样分析、调⽤⽂件、保存⽂件等；左边为样品信息栏；中部为⼯作站各部件的⼯作流程⽰意图，依次为进样器→输液泵→柱温箱→检测器→数据处理→报告；中下部为动态监测信号；右下部为⾊谱⼯作参数：进样体积、流速、分析停⽌时间、流动相⽐例、柱温、检测波长等。

2.⾊谱条件的设定(⾊谱条件的设定可以通过下列⼏种⽅法实现

2.1直接设定在操作页⾯的右下部⼀⾊谱⼯作参数中设定。将⿏标移移⾄要设定的参数如进样体积、流速、分析停⽌时间、流动相⽐例、柱温、检测波长等，单击⼀下，即可显⽰该参数的设置页⾯，键⼊设定值后，单击“OK”，即完成。

2.2 调⽤已设置好的⽂件在命令栏“Method”下，选择“Load Method”,或直接单击快捷键操作的“Load Method”图标，选定⽂件名，单击“OK”，此时，⼯作站即调⽤所选⽤⽂件中设定的参数。如欲进⾏修改，则可同2.1项下，在⾊谱⼯作参数中作修改；亦可在命令栏“Method”下，选择“Edit Entire Method”，在每个页⾯中键⼊设定值，单击“OK”。即完成。

安捷伦1100中文教程

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一、培训目的：

● 基本了解1100LC硬件操作。

● 掌握化学工作站的开机，关机，参数设定,学会数据采集,数据分析的基本操作。

二、培训准备：

1、仪器设备：Agilent 1100LC

● G1310A 单元泵)；G1312A(二元泵)；G1311A(四元泵)。

● G1313A（自动进样器）。

● G1316A（柱温箱）。

● G1314A（VWD检测器）。

● G1362A（示差检测器）。

● G1315A/B (DAD检测器)。

● G1321A (FLD检测器)。

● 色谱柱: Zorbax eclipse XDB C8,150mm×4.6mm i.d。

2、溶剂准备：

● 色谱级纯或优级纯乙腈（ACN）或甲醇。

● 二次蒸馏水

基本操作步骤:

(一)、开机：

1、打开计算机,进入Windows NT （或Windows 2000）画面,并运行Bootp Server程序。

2、打开1100 LC 各模块电源。

3、待各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online图标，化学工作站自动与1100LC通讯，进入的工作站画面如下所示。

4、从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面, 单击”View”菜单中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Sampling diagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。

5、把流动相放入溶剂瓶中。

Agilent1100高效液相色谱仪操作规程

1.仪器组成及开机

1.1仪器组成：

Agilent1100高效液相色谱系统主要由工作站、在线脱气机、柱温箱、输液泵、自动进样器、检测器等部件组成。

1.2开机：

1.2.1接通电源，打开计算机及工作站其它各部件开关，约30秒钟后，各部件进入待机状态，指示灯为黄色或无色。

1.2.2打开HP ChemStations,进入Instrument 1 online状态，约30秒钟后，计算机进入工作站的操作页面。该页面主要由以下几部分组成：

最上方为命令栏，依次为File,Run Control,Instrument等；命令栏下方为快捷操作图标，由多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件、保存文件等；左边为样品信息栏；中部为工作站各部件的工作流程示意图，依次为进样器→输液泵→柱温箱→检测器→数据处理→报告；中下部为动态监测信号；右下部为色谱工作参数：进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。

2.色谱条件的设定(色谱条件的设定可以通过下列几种方法实现

2.1直接设定在操作页面的右下部一色谱工作参数中设定。将鼠标移移至要设定的参数如进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等，单击一下，即可显示该参数的设置页面，键入设定值后，单击“OK”，即完成。

2.2 调用已设置好的文件在命令栏“Method”下，选择“Load Method”,或直接单击快捷键操作的“Load Method”图标，选定文件名，单击“OK”，此时，工作站即调用所选用文件中设定的参数。如欲进行修改，则可同2.1项下，在色谱工作参数中作修改；亦可在命令栏“Method”下，选择“Edit Entire Method”，在每个页面中键入设定值，单击“OK”。即完成。

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(一)、开机：

1、打开计算机,进入Windows NT （或Windows 2000）画面,并运行Bootp Server程序。

2、打开 1100 LC 各模块电源。

3、待各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online图标，化学工作站自动与1100LC 通讯，进入的工作站画面。

4、从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面, 单击”View”菜单中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Sampling diagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。

5、把流动相放入溶剂瓶中。

6、打开Purge阀。

7、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。

Agilent高效液相色谱仪标准操作程序

1.目的：建立一个高效液相色谱的标准操作程序。

2.范围：适用于Agilent高效液相的使用。

3.责任：使用Agilent高效液相的化验员。

4.程序

4.1工作环境

实验室温度为20～27℃，温度变化<3℃/hr，相对湿度<80%，液相色谱仪工作台，长2米、宽0.8米、承重大于80公斤，离墙距离0.3米以上。单相交流220V，（+5%～10%），50～60Hz，有单独的良好接地。配置稳压电源，功率大于2.5千瓦。

4.2使用前的准备

4.2.1二次蒸馏水，（建议用0.45微米水相滤膜过滤）；甲醇或乙晴（色谱纯），（建议用0.45微米有机相滤膜过滤）；其他样品所需流动相，（都需经过0.45微米滤膜过滤）。将上述溶剂放入超声波池，除去气泡，方可使用。

4.2.2把流动相放入溶剂瓶中，打开purge阀，单击pump图标，出现参数设定菜单，单击setup选项，进入pump编辑画面，设flow：5ml/min，单击OK；单击pump图标，出现参数设定菜单，单击pump control选项，选中ON，单击OK，则系统开始purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，切换通道继续purge，直到所有要用通道无气泡为止；单击pump图标，出现参数设定菜单，单击setup选项，进入pump编辑画面，设flow：1.0ml/min，关闭purge valve。单击pump下的的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，也可输入阻止分析和关泵的体积，单击OK。

4.2.3进行样品前处理（稀释或溶解至所需浓度）。

Agilent 1100 型高效液相色谱仪 [美国Agilent公司]一．仪器原理及结构

高效液相色谱（简称HPLC）是色谱法中最重要的一个分支。与气相色谱相比，HPLC的分离模式更为多样化，适用样品范围更广。它不仅能分离高沸点、强极性和热不稳定的化合物，而且适合于离子性、大分子及具有生物活性的化合物的分离。据估计，自然界20%的已知化合物能用气相色谱直接分析，而70%以上都可用HPLC分析。另外，经HPLC 分离后的样品组分很容易收集，故能用于制备分离。

HPLC有多种分离模式，但其仪器结构都基本相同，仪器流程如下：流动相置于储液瓶，由四元泵输入系统，样品用自动进样器从进样阀引入，经色谱柱分离后进入检测器进流动池，吸光度信号经放大后由记录仪记录。检测器则主要有UV-VIS、二极管阵列、示差折光、荧光、电化学及质谱等。图3-4为Agilent 1100 HPLC仪器的结构示意图，它主要由下面几部分组成：

（1）真空脱气机：高性能脱气，避免了烦琐的操作，可提高仪器的稳定性。

（2）四元输液泵：Agilent 1100泵是采用新的单向结构的活塞泵。流量设定范围从0.2至10mL·min-1，精度0.1mL·min-1。该泵可自动监测压缩性补偿值，保持高压条件下的流量准确度。其压力上限可在0-

4×104kPa(0-6000psi)的范围内调节。

（3）自动进样器：样品盘容量100×2mL，样品进样体积为0.1-1500µL。具有操作简便，准确度高，重现性好的特点。

（4）柱温箱：控温范围：低于室温10℃-80℃，可容纳30cm长的色谱柱，样品在此分离。根据样品类型和分离模式，可选用各种不同的液相色谱柱。

Agilent 1100 HPLC高效液相色谱仪操作简要

!准备

"如果配有柱塞清洗装置，确认柱塞清洗（Sealwash）管路充满10％的异丙醇。

"避免使用腐蚀性的流动相与溶剂；过滤流动相；使用高纯水；使用的流动相要互溶。

"过滤流动相，如果没有脱气机还需要对流动相进行脱气。

"过滤样品溶液

!开机

"打开计算机，进入windows操作系统

"运行Bootp（如果是Windows 2000, Bootp将自动运行），注意：在工作站工作过程中，不能关闭Bootp。

"打开1100系统各模块的电源

"待Bootp识别硬件地址后（可以看着是仪器的自检，此过程约需20秒），运行Chemstation的instrument 1 online。

!分析

"建立用于样品分析的Method，请参照现场培训手册。

1．从快捷工具栏中选中Method and Runcontrol或从菜单View中选中Method and Run Control。

2．从method菜单中选New Method。

3．从method菜单中选edit entire method。

4．按提示编辑适合分析你所分析样品的方法。

5．最后通过method菜单选择save method as保存方法。

"通过Method对样品进行分析，请参照培训手册

#对于单个样品

1．在Method and Runcontrol视图下，调用或建立一个适合所分析样品的方法。

2．在RunControl菜单下点Sample Info，在Sample Info表单里填上所分析样品的信息。

安捷伦1100高效液相色谱仪操作规程

1、操作前的准备

流动相的配制，流动相应用0.22μm或0.45μm的滤膜过滤，超声。

2、仪器的操作

2.1接通电源，打开电脑，双击桌面上的“仪器1联机”，进入工作站；单击菜单栏中的“运行控制”选择“样品信息”输入“操作者姓名”或者单击菜单栏中的“序列”选择“序列参数”中输入“操作者姓名”；将A、B、C、D四个通道的溶剂量设置好。

2.2排气逆时针旋松排空阀，将流速设为5ml/min，四个通道逐个进行排液，排液至整个管路没有气泡为止。

2.3首选项的设置单击菜单栏中的“视图”选择“全部菜单”，再单击菜单栏中的“视图”选择“首选项”，在“路径”选项卡中分别设定“序列路径”、“数据路径”、“方法路径”，（具体操作时只要单击“添加”后选择相应的路径即可）单击“确定”。

2.4编辑仪器方法

2.4.1单击“方法”选择“编辑完整方法”，根据需要钩选项目，“方法信息”，“仪器/采集”，“数据分析”，“运行时选项表”，单击“确定”。

2.4.2 出现“方法信息”窗口，如有需要输入方法信息（方法用途等），单击“确定”。

2.4.3出现“设置泵”窗口，根据方法需要设置“流速”、“停止时间”、“流动相比例”，将压力上限设为400bar，单击“确定”。

2.4.4出现“设置进样器”窗口，根据需要选择进样方法“标准进样”、“洗针进样”、“使用进样程序进样”（一般选择“标准进样”），输入相应的“进样量”，单击“确定”。

2.4.5出现“柱温箱温控方法”，输入“柱温”或“不控制”，单击“确定”。

Agilent 1100型HPLC操作规程

一、开机

1、开机前准备：流动相使用前必须过0.45um的滤膜（有机相的流动相必须为色谱纯；水相必须用新鲜注射用水，不能使用超过3天的注射用水，以防止长菌或长藻类）；把流动相放入溶剂瓶中。A瓶：为水相；B瓶：为有机相。

2、打开电脑，选Windows 2000，进入Windows 2000界面。

3、双击CAG Boodp server图标，放大CAG Boodp server小图标，出现窗口，5分钟内打开液相各部件电源开关，等待1100广播信息后，表示通讯成功连接，关闭CAG Boodp server窗口。

4、双击online图标，仪器自检，进入工作站。

该页面主要由以下几部分组成：

——最上方为命令栏，依次为File，Run Control，Instrumen…等；

——命令栏下方为快捷操作图标，如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件保存文件……等；

——中部为工作站各部件的工作流程示意图；依次为进样器-输液泵-柱温箱-检测器-数据处理-报告；

——中下部为动态监测信号；

——右下部为色谱工作参数：进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。

4、从“View”菜单中选择“Method and Control”画面。

二、编辑参数及方法

1、开始编辑完整方法：从“Method”菜单中选择“New method”，出现DEF-LC.M，从“Method”菜单中选择“Edit entire method”，选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和运行时间表等各项，单击“OK”，进入下一画面。

Agilent 1100高效液相色谱/质谱联用仪操作规程

一．开机前准备

2．在容器中放入已过滤脱气好的流动相，把吸滤过滤头放入容器中。

二．开机

1．打开微机，进入NT 2000，生成CAG Bootp Server界面。

2．打开空气泵开关，操作压力大于等于90PSI后，分别打开质谱、在线脱气机、泵、自动进样器、柱温箱、检测器的电源开关。打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关（需用针筒抽），控制流量大小，以能流出的最小流量为准。

3．在CAG Bootp Server上显示联机成功后过5分钟，点击instrument online1，进入工作站。

三．编缉仪器方法

1．在View 中选Diagnosis，进入Diagnosis 界面，选Maintenance，进入MSD pumpdown，将rough pump逆时针转2圈后，点Start，真空度达到后按Close，再回到Methord and Run 界面。

2．设置各仪器参数，等待整个系统平衡。

四．样品分析与采集

1．当色谱柱、系统平衡，基线稳定后。

2．在View 中选MSD TUNE，根据实验需要做相应的Autotune或Checktune，当MSD TUNE

通过后设置好样品信息，按Start，开始采集样品。

五．关机

1．冲洗色谱柱，排出流路中可能有的缓冲液。

2．在View 中选Diagnosis，进入Diagnosis 界面，点Maintenance，进入MSD Vent，将rough pump 顺时针关闭，点击

Start放真空，真空度放空后按Close，再回到Methord and Run control界面。

Agilent1100LC_MSD液相⾊谱质谱联⽤仪作业指导书

本细则根据⾼效液相⾊谱仪⽅法通则（JY⁄T 024－1996）、有机质谱分析⽅法通则（JY⁄T 003－1996）和美国Agilent 公司液相⾊谱质谱联⽤仪操作说明书制定。

1．适⽤范围

本⽅法适⽤于有机样品定性及定量分析。

样品要求：待测样品必须能溶解于⽔或其它有机溶剂中。若样品或配制的样品溶液发⽣沉淀，挥发，变质等异常现象时，应重新取样或重新配制溶液。

分⼦量范围：（100 ～2300）amu（单电荷）

分析前要求：在液相⾊谱仪上确定分离条件，使待测组分能完全分离，且该⾊谱条件中流动相不应含有不挥发性盐。

2．引⽤标准

有机质谱分析⽅法通则（JJG003－1996）

3．术语、符号、代号

详见《有机质谱分析⽅法通则》（JJG003－1996）

4．⽅法、原理

详见《有机质谱分析⽅法通则》（JJG003－1996）

5．试剂和材料

所有的溶剂均选⽤⾊谱级试剂，所⽤⽔的电导率应⼤于18KΩ，其余试剂为分析纯。

6．仪器设备

仪器：Agilent 1100 LC/MSD SL（液相⾊谱-质联⽤仪），配有ESI及APCI离⼦源

分⼦量范围：（100 ～2300）amu（单电荷）

扫描分辨率：半峰宽⼩于1；

检测灵敏度：SIM S⁄N ≥10∶1；1 pg Reserpine；

SCAN S⁄N ≥10∶1；50 pg Reserpine。

7．分析步骤

7. 1 环境：10℃～30℃，相对湿度⼩于70％。

7. 2 仪器校正：按仪器操作说明书进⾏调整，使得到的标准谱图在允许误差之内关注质量轴精度，质量轴稳定度，扫描分辨率，灵敏度。

Agilent1100高效液相色谱仪使用与维护操作规程

1目的

制定Agilent1100高效液相色谱仪使用与维护操作规程，确保操作人员能正确规范地操作，维护液相色谱仪。

2适用范围

适用于Agilent1100高效液相色谱仪的使用，维护。

3编写依据

Agilent1100高效液相色谱仪使用说明书

4职责

QC相关检验人员对本仪器操作规程的实施负责。

5内容

5.1安全注意事项

本仪器应良好接地，以防止触电及释放静电；本仪器经常处于高浓度的有机蒸汽环境中，故应通风良好，禁止出现电火花；配制流动相或接触有机溶剂时应戴橡胶手套及其它防护用品。

5.2仪器组成

本仪器由LC-10ATVP泵、7725手动进样器、柱温箱、Agilent1100紫外-可见光检测器、色谱工作站(N2000或其它工作站)。

5.3日常使用操作步骤

5.3.1开机

打开计算机，进入Windows系统，CAGBootpServer程序将自动运行。打开HPLC1100各模块电源，等仪器自检通过，并且与计算机通讯成功（约1～2min）后，进入Online工作站。

5.3.2系统初始化（主要目的：排除系统中的气泡）

5.3.2.1打开Purge阀

5.3.2.2加大泵流量并开启泵，快速冲洗实验通道，至无气泡从废液管排出。降低流量及溶剂比例成实验初始条件，并单击OK确认执行；

5.3.2.3关闭Purge阀，完成系统初始化。

5.3.3系统平衡（主要目的：平衡、稳定色谱柱、柱温以及灯的能量）

调出本次实验所需方法，保持泵继续工作，以实验初始的流动相冲洗、平衡柱子一段时间。（一般约30min，可自己根据本人的仪器配置情况计算，要求至少以色谱柱几何体积5～10倍体积的流动相冲洗、平衡系统。）