Sourthern blot和Northern blot原理

Southern杂交Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。

一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量基本原理是：具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。

由于核酸分子的高度特异性及检测方法的灵敏性，综合凝胶电泳和核酸内切限制酶分析的结果，便可绘制出DNA分子的限制图谱。

Southern印迹杂交技术包括两个主要过程：一是将待测定核酸分子通过一定的方法转移并结合到一定的固相支持物（硝酸纤维素膜或尼龙膜）上，即印迹（blotting）；二是固定于膜上的核酸同位素标记的探针在一定的温度和离子强度下退火，即分子杂交过程。

该技术是1975年英国爱丁堡大学的E.M.Southern首创的，Southern印迹杂交故因此而得名。

Northern 印记杂交Northern blot 是一种通过检测RNA的表达水平来检测基因表达的方法，通过northern blot 的方法可以检测到细胞在生长发育特定阶段或者胁迫或病理环境下特定基因表达情况。

原理：在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。

Western杂交原理：是将蛋白质电泳、印迹、免疫测定融为一体的特异性蛋白质的检测方法。

其原理是：生物中含有一定量的目的蛋白。

先从生物细胞中提取总蛋白或目的蛋白，将蛋白质样品溶解于含有去污剂和还原剂的溶液中，经SDS-PAGE电泳将蛋白质按分子量大小分离，再把分离的各蛋白质条带原位转移到固相膜（硝酸纤维素膜或尼龙膜）上，接着将膜浸泡在高浓度的蛋白质溶液中温育，以封闭其非特异性位点。

核酸杂交技术(Southern Blot、Northern Blot ）（一）Southern Blot 原理：将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。

如果待检物中含有与探针互补的序列，则二…（一）Southern Blot原理：将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。

如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进行结合，游离探针洗涤后用自显影或其它合适的技术进行检测，从而显示出待检的片段及其相对大小。

用途：检测样品中的DNA及其含量，了解基因的状态, 如是否有点突变、扩增重排等。

（二）Northern Blot原理：在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。

用途：检测样品中是否含有基因的转录产物（mRNA）及其含量。

（三）探针标记技术1 标记物：放射性和非放射性两种放射性：非放射性：生物素、地高辛素、荧光素2、标记方法（1）切口平移法（2）随机引物法（3）末端标记法（4）单链DNA探针标记（5）寡核苷酸探针标记法northern blot简介Northern blot 是一种通过检测RNA的表达水平来检测基因表达的方法，通过northern blot的方法可以检测到细胞在生长发育特定阶段或者胁迫或病理环境下特定基因表达情况。

Northern blot 首先通过电泳的方法将不同的RNA分子依据其分子量大小加以区分，然后通过与特定基因互补配对的探针杂交来检测目的片段。

“Northern blot”这一术语实际指的是RNA分子从胶上转移到膜上的过程，当然它现在通指整个实验的过程。

Sourthern blot和Northern blot原理（一）Southern Blot原理：将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。

如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进行结合，游离探针洗涤后用自显影或其它合适的技术进行检测，从而显示出待检的片段及其相对大小。

用途：检测样品中的DNA及其含量，了解基因的状态, 如是否有点突变、扩增重排等。

DNA => 琼脂糖电泳 => 印迹转移 => 预杂交 => 杂交（变性探针） => 洗膜 => 放射自显影或显色（二）Northern Blot原理：在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。

用途：检测样品中是否含有基因的转录产物（mRNA）及其含量。

mRNA提取 => 甲醛变性电泳 => 印迹转移 => 预杂交 => 杂交（变性探针） =>洗膜 => 放射自显影或化学发光（三）二者异同Southern blot 是分析DNA的杂交技术，Northern blot是分析RNA的，而Western blot是分析蛋白质的Southern 和Northerin原理基本相同，都是利用DNA或RNA的复性过程，但过程上也有区别，主要是Southern是先电泳后变性，而Northern是先变性后电泳；Southern是碱变性，而Northern采用甲醛、乙二醛、二甲基亚砜等变性，因为采用碱变性会导致RNA水解（四）探针标记技术1 标记物：放射性和非放射性两种放射性：非放射性：生物素、地高辛素、荧光素2、标记方法（1）切口平移法（2）随机引物法（3）末端标记法（4）单链DNA探针标记（5）寡核苷酸探针标记法。

分子杂交分子杂交是指在分子克隆中的一类核酸和蛋白质分析方法，用于检测混合样品中特定核酸分子或蛋白质分子是否存在，以及其分子量大小。

根据其检测对象的不同可分为 Southern 杂交、Northern 杂交和 Western 杂交，以及由此而简化的斑点杂交、狭线杂交和菌落杂交等。

一、 Southern blotting1．转膜当目标 DNA 经过限制性酶切并通过琼脂糖凝胶电泳以后，在 0.4N NaOH 碱性条件下变性，再在 1.5M NaCl/1M Tris（pH7.4）条件下中和使 DNA 仍保持单链状态。

然后通过毛细管渗吸或电转移或真空转移的方式，将凝胶上的 DNA 转移到硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上。

最后通过80℃ 处理或紫外线照射将 DNA 固定在滤膜上。

图4-2是通过毛细管渗吸法进行 Southern blotting 的经典装置图。

2．分子杂交2.1 预杂交将结合了 DNA 分子的滤膜先与特定的预杂液进行预杂交，也就是将滤膜的空白处用鱼精 DNA 或牛奶蛋白封闭起来，防止在杂交过程中滤膜本身对探针的吸附。

2.2 杂交在一定的溶液条件和温度下，将标记的核酸探针与滤膜混合，如果滤膜上的DNA 分子存在与探针同源的序列，那么探针将与该分子形成杂合双链，从而吸附在滤膜上。

2.3 洗膜经过一定的洗涤程序将游离的探针分子除去。

3．检测3.1 放射性标记、检测在分子克隆操作中用于标记核酸分子的标记物主要是放射性同位素，如32P，33P和35S 。

在掺入核苷酸的标记过程中，只有三磷酸核苷酸的α位磷酸整合到核酸链中，因此使用α位磷酸被标记的三磷酸核苷酸，如 [ α- 32 P]dATP 。

而在标记 5' 末端磷酸基团的反应中一般使用γ位磷酸被标记的ATP 。

放射性的信号通过X- 光片放射自显影或磷屏扫描获取。

3.2 非放射性标记、检测。

其中应用最成功的是原德国宝灵曼公司开发的地高辛（digoxygenin, DIG）标记核酸探针。

Southern Blot原理及实验方法原理：将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。

如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进行结合，游离探针洗涤后用自显影或其它合适的技术进行检测，从而显示出待检的片段及其相对大小。

用途：检测样品中的DNA及其含量，了解基因的状态, 如是否有点突变、扩增重排等。

一、试剂变性液：1.5mol/L NaCl，0.5mol/L NaOH。

中和液：0.5mol/L Tris-HCl (pH=7.0)，1.5mol/L NaCl。

20×SSC：3mol/L NaCl，0.3mol/L 柠檬酸钠。

以上溶液均在100Kpa灭菌20分钟。

2×SSC：用无菌移液管吸取20×SSC溶液5mL，加无菌水45mL。

6×SSC：用无菌移液管吸取20×SSC溶液15mL，加无菌水75mL。

二、器材22cm×15cm瓷盘操作方法1. 在琼脂糖凝胶上电泳分离DNA。

取出凝胶，切去边缘多于部分，EB染色，在紫外灯下照相（放一标尺，可从像片中读出DNA迁移的距离）。

2. 将凝胶置于200mL变性液中，浸泡45分钟，并温和地不断振荡，使凝胶上的ds-DNA 转变为ss-DNA，然后用重蒸水冲洗凝胶几次。

3. 用中和液浸泡凝胶并不断地振荡45分钟，将凝胶中和至中性。

防止凝胶的碱性破坏硝酸纤维膜。

4. 取一个瓷盘，在底部放一块玻璃板（或一块海绵）使盛器内的20倍SSC转移滤液低于玻板表面，在玻板表面盖一张3mm的二号滤纸，滤纸两边浸没于20倍SSC溶液中，在玻璃和滤纸之间，赶掉所有的气泡。

5. 把凝胶底面朝上放在滤纸上，赶走两层之间出现的气泡。

6. 裁剪一张硝酸纤维膜，其长与宽大于凝胶1—2mm，并在角上作记号，以确定滤膜方位。

Northe‎r n Blot原理‎及实验方法原理：在变性条件下‎将待检的RN‎A样品进行琼‎脂糖凝胶电泳‎，继而将在凝胶‎中的位置转移‎到硝酸纤维素‎薄膜或尼龙膜‎上，固定后再与同‎位素或其它标‎记物标记的R‎N A探针进行‎反应。

用途：检测样品中是‎否含有基因的‎转录产物（mRNA）及其含量。

实验方法：[仪器、试剂、材料]（一）仪器恒温水浴‎箱，电泳仪，凝胶成像系统‎，真空转移仪，真空泵，UV交联仪，杂交炉，恒温摇床，脱色摇床，漩涡振荡器，分光光度计，微量移液器，电炉（或微波炉），离心管，烧杯，量筒，三角瓶等。

（二）材料总RNA‎样品或mRN‎A样品，探针模板DN‎A(25 ng)，尼龙膜（三）试剂：Northe‎r nMax Kit（Cat. # 1940，Ambion‎,Inc.），琼脂糖，DEPC, X光底片，底片暗盒，Random‎Primer‎， dNTP Mixtur‎e，111 TBq/mmol[a-32P]dCTP，Exo-free Klenow‎Fragme‎n t和10 X Buffer‎, Sephad‎e x G-50,SDS，双氧水,灭菌水等。

[方法与步骤]1.用具的准备：180度烤器‎皿：三角锥瓶、量筒、镊子、刀片等4小时‎。

电泳槽：清洗梳子和电‎泳槽，并用双氧水浸‎泡过夜，用DEPC水‎冲洗，干燥备用。

处理DEPC‎水(2 L)备用。

2．用RNAZa‎P去除用具表‎面的RNas‎e酶污染用R‎N AZap擦‎洗梳子，电泳槽，刀片等，然后用DEP‎C水冲洗二次‎，去除RNAZ‎a p。

3．制胶：1．称取0.36mg琼脂‎糖加入三角锥‎瓶中，加入32.4mlDEP‎C水后，微波炉加热至‎琼脂糖完全熔‎解。

60℃空气浴平衡溶‎液 (需加DEPC‎水补充蒸发的‎水分)2．在通风厨中加‎入3.6ml的10‎＊Denatu‎r ing Gel buffer‎，轻轻振荡混匀‎。

Northern Blot原理及实验方法原理：在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而将在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的RNA探针进行反应。

用途：检测样品中是否含有基因的转录产物（mRNA）及其含量。

实验方法：[仪器、试剂、材料]（一）仪器恒温水浴箱，电泳仪，凝胶成像系统，真空转移仪，真空泵，UV交联仪，杂交炉，恒温摇床，脱色摇床，漩涡振荡器，分光光度计，微量移液器，电炉（或微波炉），离心管，烧杯，量筒，三角瓶等。

（二）材料总RNA样品或mRNA样品，探针模板DNA(25 ng)，尼龙膜（三）试剂：NorthernMax Kit（Cat. # 1940，Ambion, Inc.），琼脂糖，DEPC, X光底片，底片暗盒，Random Primer，dNTP Mixture，111 TBq/mmol[a-32P]dCTP，Exo-free Klenow Fragment和10 X Buffer, Sephadex G-50,SDS，双氧水,灭菌水等。

[方法与步骤]1.用具的准备：180度烤器皿：三角锥瓶、量筒、镊子、刀片等4小时。

电泳槽：清洗梳子和电泳槽，并用双氧水浸泡过夜，用DEPC水冲洗，干燥备用。

处理DEPC水(2 L)备用。

2．用RNAZaP去除用具表面的RNase酶污染用RNAZap擦洗梳子，电泳槽，刀片等，然后用DEPC水冲洗二次，去除RNAZap。

3．制胶：1．称取0.36mg琼脂糖加入三角锥瓶中，加入32.4mlDEPC水后，微波炉加热至琼脂糖完全熔解。

60℃空气浴平衡溶液(需加DEPC水补充蒸发的水分)2．在通风厨中加入3.6ml的10＊Denaturing Gel buffer，轻轻振荡混匀。

注意尽量避免产生气泡。

3．将熔胶倒入制胶板中，插上梳子如果胶溶液上存在气泡，可以用热的玻璃棒或其它方法去除，或将气泡推到胶的边缘。

southern杂交和northern杂交的原理和应用杂交是指由不同基因型的个体交配而产生的后代。

南方杂交和北方杂交是两种不同的杂交方式，它们有着不同的原理和应用。

南方杂交是指将两个具有显著不同的基因型的个体进行交配。

这两个个体通常分别来自不同的地理区域，其中一个个体来自南方而另一个来自北方。

这种杂交的目的是将两个个体的有益特性结合在一起，以产生更适应广泛环境的后代。

南方杂交的原理是，南方个体常常具有较高的抗病性和更好的适应性，而北方个体则通常具有较高的生产力和耐寒性。

通过将这两种特性结合在一起，可以得到既具有高产性、适应广泛环境又具有较强抗病性的后代。

这种杂交可以在农业、畜牧业和林业等领域中应用，以提高作物、动物和树木的产量和耐受性。

北方杂交是指将两个具有显著不同的基因型的个体进行交配，其中一个个体来自北方而另一个来自南方。

这种杂交的目的是将两个个体的有益特性结合在一起，以产生适应北方环境的后代。

北方杂交的原理是，北方个体常常具有更好的耐冷性和更高的适应性，而南方个体则通常具有较高的生产力和更好的抗病性。

通过将这两种特性结合在一起，可以得到既具有适应北方环境又具有较高产量和较强抗病性的后代。

这种杂交可以在农业、畜牧业和林业等领域中应用，以提高作物、动物和树木在寒冷地区的适应性和产量。

南方杂交和北方杂交的应用在农业方面具有重要意义。

通过这些杂交方式，人们可以选择具有不同特性的个体进行交配，以产生具有更好适应性和生产力的后代。

这可以提高农作物的产量和耐受性，并减少对农药和化肥的需求。

此外，这些杂交还可以提高作物的抗病性，减少病害对农作物的危害。

在畜牧业方面，南方杂交和北方杂交可以提高家畜的适应性和产量，改善肉质和乳质，并减少疾病的传播。

在林业方面，这些杂交可以提高树木的生长速度和适应性，增加木材的产量和质量。

总之，南方杂交和北方杂交是两种重要的杂交方式，它们利用不同地理区域的个体的有益特性，通过交配将这些特性结合在一起，产生更适应广泛环境的后代。

Northern blot技术-1核酸杂交技术(Southern Blot、Northern Blot )(一)Southern Blot 原理: 将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。

如果待检物中含有与探针互补的序列，则二…(一)Southern Blot原理:将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。

如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进行结合，游离探针洗涤后用自显影或其它合适的技术进行检测，从而显示出待检的片段及其相对大小。

用途:检测样品中的DNA及其含量，了解基因的状态, 如是否有点突变、扩增重排等。

(二)Northern Blot原理:在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。

用途:检测样品中是否含有基因的转录产物(mRNA)及其含量。

(三)探针标记技术1 标记物:放射性和非放射性两种放射性:非放射性:生物素、地高辛素、荧光素2、标记方法(1)切口平移法(2)随机引物法(3)末端标记法(4)单链DNA探针标记(5)寡核苷酸探针标记法northern blot简介Northern blot 是一种通过检测RNA的表达水平来检测基因表达的方法，通过northern blot的方法可以检测到细胞在生长发育特定阶段或者胁迫或病理环境下特定基因表达情况。

Northern blot 首先通过电泳的方法将不同的RNA分子依据其分子量大小加以区分，然后通过与特定基因互补配对的探针杂交来检测目的片段。

northern blotNorthern Blot是一种高度敏感的分子生物学实验技术，用于检测和分析RNA分子的存在和表达水平。

它是Southern Blot的一种变体，Southern Blot用于DNA的检测和分析。

在分子生物学研究中，了解RNA的存在和表达是至关重要的。

不同的细胞和组织在基因表达方面存在差异，因此研究RNA的表达模式可以帮助我们理解细胞的功能和生理过程。

Northern Blot技术可以帮助我们在样本中检测和定量特定RNA分子的表达水平。

Northern Blot的基本原理是通过电泳分离RNA分子，并将其转移到固体媒介上，然后使用特定的探针进行杂交反应。

在这个过程中，可以确定目标RNA的存在和相对丰度。

下面将详细介绍Northern Blot的步骤和主要应用领域。

首先，要进行Northern Blot，我们需要从细胞或组织中提取总RNA。

RNA的提取可以使用不同的方法，例如TRIzol法或商业提取试剂盒。

提取后，我们可以通过琼脂糖凝胶电泳来分离RNA分子。

琼脂糖凝胶电泳是一种将RNA按照大小分离的方法，通常使用形成RNA陷阱的琼脂糖凝胶。

RNA样品经过电泳后，可以通过紫外线照射或染色来可视化。

分离完成后，将RNA迁移到固体媒介上，通常是尼龙膜。

迁移到尼龙膜上的RNA可以使用热转移法或电流转移法。

转移完成后，在膜上固定RNA，以便进行后续的共杂交反应。

共杂交反应是Northern Blot的关键步骤之一。

在这个步骤中，我们需要准备一个特定的探针，将其标记为放射性同位素或非放射性项目。

探针是一段具有亲和性的DNA或RNA序列，用于特异性地与我们感兴趣的RNA靶标杂交。

探针的制备需要事先从目标RNA中合成，并进行标记。

杂交反应通常在高温下进行，并可以在一夜之间进行。

在反应结束后，将膜进行洗涤以去除未呈现杂交的探针。

然后，膜可以通过放射自显影或使用特定的探针标记方法进行检测。

Northern Blot技术的主要应用之一是研究基因表达的调控机制。

Northern Blot原理及实验方法northern blot（RNA印迹杂交）注：Southern blot（DNA印迹杂交）Western Blot（蛋白质印迹)Northern blot 是一种通过检测RNA的表达水平来检测基因表达的方法。

首先通过电泳的方法将不同的RNA分子依据其分子量大小加以区分，然后通过与特定基因互补配对的探针杂交来检测目的片段。

“Northern blot”这一术语实际指的是RNA分子从胶上转移到膜上的过程，当然它现在通指整个实验的过程。

原理：在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。

用途：检测样品中是否含有基因的转录产物（mRNA）及其含量。

实验方法：[仪器、试剂、材料]（一）仪器恒温水浴箱，电泳仪，凝胶成像系统，真空转移仪，真空泵，UV 交联仪，杂交炉，恒温摇床，脱色摇床，漩涡振荡器，分光光度计，微量移液器，电炉（或微波炉），离心管，烧杯，量筒，三角瓶，等。

（二）材料总RNA样品或mRNA样品，探针模板DNA(25 ng)，尼龙膜（三）试剂NorthernMax Kit（Cat. # 1940，Ambion, Inc.），琼脂糖，DEPC, X光底片，底片暗盒，Random Primer， dNTP Mixture，111 TBq/mmol[a-32P]dCTP，Exo-free Klenow Fragment和10 X Buffer, Sephadex G-50,SDS，双氧水, 灭菌水等。

[方法与步骤]1. 用具的准备：180度烤器皿：三角锥瓶、量筒、镊子、刀片等4小时。

电泳槽：清洗梳子和电泳槽，并用双氧水浸泡过夜，用DEPC水冲洗，干燥备用。

处理DEPC水(2 L)备用。

2．用RNAZaP去除用具表面的RNase酶污染用RNAZap擦洗梳子，电泳槽，刀片等，然后用DEPC水冲洗二次，去除RNAZap。

一，名词解释1.（Northern blot）Northern印迹杂交。

这是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。

Northern 印迹杂交的RNA吸印与Southern印迹杂交的DNA吸印方法类似，RNA印迹技术正好与DNA相对应，故被称为Northern印迹杂交。

（Southern blot）Southern印迹杂交是一种常用的DNA定量的分子生物学方法。

一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量。

2.（cis-acting element）顺式作用元件。

存在于基因旁侧序列中能影响基因表达的序列，它们的作用是参与基因表达的调控，本身不编码任何蛋白质, 仅仅提供一个作用位点, 要与反式作用因子相互作用而起作用。

(trans-acting factor)反式作用因子。

是指能直接或间接地识别或结合在各类顺式作用元件核心序列上参与调控靶基因转录效率的蛋白质。

3. (VNTR )可变数目串联重复多态性。

可变数目串联重复序列是重复单位为9~24bp，重复次数变化大，呈高度多态性的DNA序列，又称小卫星DNA，拷贝数10~1000不等。

（STR）短串联重复序列。

又称微卫星DNA，是一类简单的寡核苷酸串联重复序列，其重复单位为2~6bp，重复次数10~60次左右，其长度通常小于150bp，分布在所有染色体中。

4.（viral oncogene）病毒癌基因。

病毒（大多是逆转录病毒）具有的一种可以使宿主细胞发生癌变的基因。

源自细胞中的正常基因。

(cell-oncogene)细胞癌基因。

存在于正常的细胞基因组中，与病毒癌基因有同源序列，具有促进正常细胞生长、增殖、分化和发育等生理功能。

在正常细胞内未激活的细胞癌基因叫原癌基因，当其受到某些条件激活时，结构和表达发生异常，能使细胞发生恶性转化。

northern blot原理
Northern blot是一种将RNA进行分离和检测的技术，其原理主要包括以下步骤：
1. RNA的提取：从细胞中提取RNA，通常使用酚/氯仿或商用RNA提取试剂盒等方法。

提取到的RNA应进行纯化和浓缩处理。

2. RNA的电泳分离：将RNA样品加入琼脂糖凝胶中，使用电场让RNA沿电场方向移动。

不同长度的RNA会在凝胶上形成不同的带状，即分子量较大的RNA 会在凝胶上移动较慢，分子量较小的RNA会移动较快。

3. 将RNA传递到薄膜上：使用纸、纤维素、尼龙等材料制成的薄膜来转移RNA 到薄膜上。

这个过程可以通过静电吸附、压力转移等方式完成。

4. 薄膜上的RNA固定：将RNA固定在薄膜上，通常使用紫外线辐射、烘烤或交联等方法。

5. 探针杂交：将标记有荧光物质或放射性同位素的引物探针加入到薄膜上，与特定的RNA序列匹配杂交。

6. 杂交信号检测：通过荧光显微镜、放射性探测器等设备对薄膜进行扫描，检测RNA与引物探针杂交的信号。

通过这些步骤可得到RNA表达与数量的信息，北方印迹技术被广泛应用于基因表达的研究和分析。

Southern杂交和Northern杂交是两种常用的分子生物学技术，它们主要通过探针与DNA序列互相配对来检测目标DNA片段是否存在，并确定其大小和数量。

Southern杂交：Southern杂交是一种检测DNA序列的技术，它利用DNA探针与杂交物中的目标DNA 特异性结合，来检测目标DNA序列的存在和数量。

这种方法一般应用于DNA分子量较大的靶标（如基因、整个染色体等）的检测，可以用于鉴定基因的剪接等多种分子生物学研究。

Southern杂交的原理是将DNA样本在电泳板上进行电泳分离，然后用互补的DNA探针杂交分离出目标DNA，在膜或凝胶上通过探针与目标DNA结合来检测。

Northern杂交：Northern杂交是一种检测RNA序列的技术，它利用RNA探针与杂交物中的目标RNA 特异性结合，来检测目标RNA序列的存在和数量。

这种方法一般应用于研究基因表达调控、细胞信号转导和病理生理等方面。

Northern杂交的原理与Southern杂交类似，也是先将RNA 样本在凝胶上进行电泳分离，然后用互补的RNA探针进行杂交分离出目标RNA，在膜或凝胶上通过探针与目标RNA结合来检测。

Southern杂交和Northern杂交的应用：Southern杂交和Northern杂交技术广泛应用于分子生物学、遗传学及生命科学领域。

它们可以用于：1. 检测基因的表达和剪接变异等2. 研究基因家族和功能3. 鉴定细胞中的某一DNA或RNA序列的存在4. 研究基因转录和翻译的调控机制5. 检测突变或重组基因的存在6. 进行基因诊断和疾病基因筛查等除了上述的应用外，Southern杂交和Northern杂交技术还可以广泛应用于以下领域：1. 植物和动物遗传图谱的构建：能够通过探针与DNA或RNA序列的配对来研究基因表达、调控和功能等信息，对于植物和动物的遗传图谱构建有重要的意义。

2. 生物安全监测：利用Southern杂交和Northern杂交技术可以检测到转基因食品或者是非法贩卖的野生动物制品等违法行为，具有重要的生物安全监测作用。

sourthern blot的意思
Southern blot是一种分子生物学实验技术，用于检测和分离DNA 序列。

它是由爱德华·南方（Edwin Southern）于1975年发明的，因此得名。

Southern blot的主要步骤包括DNA提取、DNA酶切、电泳分离、转移和杂交。

首先，从待检测的样品（如细胞或组织）中提取DNA。

然后，将DNA进行限制酶切，以产生特定的DNA片段。

接下来，将DNA片段进行电泳分离，根据其大小将DNA分离成不同的带状条纹。

分离完毕后，将DNA条带转移到固体（通常是膜）上，这个过程称为转移。

最后，在膜上进行DNA杂交，用标记的探针与目标DNA序列结合，从而可视化或检测目标DNA。

Southern blot的应用非常广泛。

它可以用于检测基因的存在和拷贝数，查找特定的DNA序列，识别DNA突变或多态性，以及研究基因组结构和功能。

例如，科学家可以使用Southern blot来确定基因是否存在于特定物种中，或者在哪些组织中表达。

此外，Southern blot还可以用于亲子鉴定、疾病诊断和研究DNA修复等领域。

尽管Southern blot是一种有力的技术，但它也存在一些局限性。

首先，该技术需要大量的DNA样品，并且需要耗费较长的时间来完成。

此外，Southern blot对目标DNA序列的选择性较低，特异
性较差。

因此，随着新的分子生物学技术的发展，如聚合酶链反应（PCR）和DNA测序，Southern blot在某些应用中逐渐被取代。

sourthern印迹法摘要：1.Sourthern 印迹法的概述2.Sourthern 印迹法的原理3.Sourthern 印迹法的操作步骤4.Sourthern 印迹法的应用领域5.Sourthern 印迹法的优缺点正文：【概述】Sourthern 印迹法是一种分子生物学技术，主要用于分析特定基因的表达水平。

这种方法通过检测基因转录的产物，即RNA，从而揭示基因在特定条件下的表达情况。

Southern 印迹法与其他印迹法（如Northern 印迹法和Western 印迹法）一起，为研究者提供了一种全面分析基因表达的方法。

【原理】Southern 印迹法的原理是通过核酸内切酶消化DNA，将DNA 片段转移至固定化介质上，然后通过碱变性将RNA 释放，接着进行反转录为cDNA，最后通过PCR 扩增特定基因片段，从而检测基因的表达水平。

【操作步骤】Southern 印迹法的操作步骤主要包括以下几个方面：1.选取特定基因的DNA 片段，用核酸内切酶进行消化。

2.将消化后的DNA 片段转移至固定化介质上。

3.通过碱变性将RNA 释放，并反转录为cDNA。

4.进行PCR 扩增特定基因片段。

5.通过电泳检测和定量分析扩增产物。

【应用领域】Southern 印迹法广泛应用于分子生物学、基因组学、生物信息学等领域，主要用途是研究基因表达水平、基因突变、基因拷贝数变异等。

【优缺点】Southern 印迹法的优点包括：1.可检测特定基因的表达水平，有助于研究基因功能。

2.高灵敏度和特异性，能够检测到低丰度的基因表达。

3.可应用于多种生物体和组织样本。

缺点包括：1.操作步骤相对复杂，技术要求较高。

2.需要使用较多试剂和仪器设备，成本较高。

northern blotting原理Northern blotting是一种分子生物学技术，用于检测RNA分子的存在和表达水平。

该技术以物种的RNA为模板，通过电泳分离和转移到膜上以及特异性探针的杂交来检测目标RNA的存在和表达水平。

Northern blotting的原理基于RNA的分子结构和性质。

RNA分子是由核苷酸链组成的，包括单链RNA（mRNA、tRNA、rRNA 等）和双链RNA（dsRNA）。

在Northern blotting中，首先将RNA样本通过电泳进行分离，根据RNA的大小和电荷，将RNA 分子从混合物中分离出来。

通常使用琼脂糖凝胶作为分离介质，通过施加电场使RNA分子在凝胶上移动，根据大小进行分离。

分离完毕后，将RNA转移到具有亲水性的膜上，例如尼龙或硝酸纤维素膜。

这一步骤被称为转移或电转移，主要是为了将RNA固定在膜上以进行后续的杂交反应。

转移可以通过将膜和凝胶叠加在一起，并施加电场使RNA从凝胶中转移到膜上来完成。

在膜上固定RNA后，接下来的步骤是进行杂交反应。

杂交是通过将RNA膜与特异性探针进行反应来检测目标RNA的存在和表达水平。

探针是一种由DNA或RNA构成的分子，与目标RNA序列互补配对。

探针可以标记为放射性同位素，如^32P，或非放射性标记物，如生物素或荧光染料，以便在后续的检测步骤中进行可视化。

在进行杂交反应时，将膜和探针一起孵育在适当的缓冲液中，以促进两者之间的特异性配对。

通过调节温度和反应时间，可以使探针与目标RNA发生互补配对，并形成稳定的杂交复合物。

杂交完成后，通过洗涤去除非特异性杂交物质，以减少背景信号的干扰。

通过适当的检测方法来检测目标RNA的存在和表达水平。

放射性同位素标记的探针可以通过放射自显影的方法进行可视化，而非放射性标记物则需要使用相应的检测试剂盒进行可视化。

通过检测探针的信号强度或对比目标RNA与参考RNA的信号强度，可以确定目标RNA的存在和相对表达水平。

印迹法的基本原理及应用印迹法的基本原理及应用印迹法(blotting)即转移电泳，是20世纪70年代发展起来的一种新方法。

Southern于1975年建立了检测特异DNA片段的DNA-RNA 杂交法，称作Southern 印迹法。

1977年Alwine等把此方法应用到RNA的研究方面，称作Nouthern印迹法。

1979年Towbin等则把该方法扩展应用到蛋白质分析方面，称作Western印迹法。

1982年Reinhart报道的双向蛋白质印迹法，称作Eastern印迹法。

目前，有人把Southern，Nouthern，Western印迹法分别称作DNA印迹法，RNA印迹法和蛋白质印迹法。

而每一种印迹法又可以分为斑点印迹法和电泳转移印迹法。

前者是将样品直接吸附于固相载体上，而后者则是将样品先经过电泳后在转移到固相载体表面上，其余操作基本相同。

由于核酸和蛋白质等大分子物质印迹到固相载体，容易和各种探针发生化学或免疫反应，因而对检测样品(尤其是粗样品)中某些组分的理化性质是有益的。

其操作过程所需的试剂量少，灵敏度高，所以应用较为普遍。

印迹法的基本原理(一)概念1．探针用化学方法将有识别能力的物质(如抗原、激素、核酸等)和酶(如辣根过氧化物酶)或核素(如3H、35S、32P)，或荧光物质(如异硫氰荧光素、地高辛等)结合成的复合物称作探针。

2．固相载体即用于吸附生命大分子物质的固体材料。

这类材料有硝酸纤维素(nitrocellulose，NC)膜，尼龙膜(nylon-membranes，NDM)，重氮苄氧甲基(yloxymethyl，DBM)膜和重氮苄硫醚(diazophenylthiaether，DPT)纸等。

最常用的是孔径为0．45／lm 的NC膜，因为它成本低廉，结合力强，背景较清晰。

而对于检测核酸和酸性蛋白质来说，理想载体是带正电的尼龙膜，它与负电荷物质结合力很强，操作亦简单。

但因为其与负离子型染料也易结合，背景值高，故使用受到一些限制。