石蜡切片制备方法和操作技术过程

入细胞。

常用的脱水剂是不同浓度的酒精。 酒精浓度可逐渐升高，脱水要充分。
(六)透明

用透明剂置换出材料中的脱水剂，使熔化的石蜡能顺利
进入材料中。

常为矿物质油或植物油。
二甲苯是目前应用最广的透明剂 作用迅速，但易使材料变脆。
•
(七)浸蜡
逐步清除材料中的透明剂，使石蜡充分渗透于材料内部。
醋酸-乙醇)、纳瓦兴(Navaschjn’s)固定液。

材料固定完毕，保存于加盖的容器内，贴上标签。
(三)抽气

植物材料内部由于含有空气，导致固定液不能完全渗入。
材料投入固定液后需要立即抽气，以便让固定液有效透入 材料组织中，排除材料内气泡的干扰。

一般抽气时间为20-30min。抽过气的材料在停止抽气后， 应沉入底部。
苏木精染色5min，自来水冲洗。
盐酸乙醇分色 流水冲洗 置伊红液2min 常规脱水，透明。
•
(十二) 封藏
封藏于中性树胶中，使材料能在显微镜下清晰地显示出来， 并能长期保存。


如今，生物切片机已经发展为五大系列、上百个品种，即轮式 切片机、平推式切片机、恒温冷冻切片机、震动切片机和超薄 切片机。
石蜡切片法的一般流程 • 取材 透明 染色 固定 浸蜡 封藏 抽气 包埋 洗涤 切片 脱水 贴片
• (一)取材

材料新鲜 组织块力求小而薄
勿使组织块受挤压、重复切割。
浸蜡是一个渐进的过程，浸蜡的时间视材料种类、大小而


调节。
•
(八)包埋
将浸蜡后的材料包埋于石蜡中。
(九)切片

即将包埋好的材料块用切片机切成所需厚度的切片带。
(十)贴片


用贴片剂把切片平铺贴在载玻片上，烘干后染色、观察。 常用的贴片剂有下列二种: (1) 明胶贴片剂 (2) 蛋清贴片剂 常用水捞法
保持组织原有形态 熟悉要取材的部位 选择好组织的切面
• (二)固定

将已切好的材料尽快地浸入相当于材料10-15倍体积的固定液 中，使细胞的新陈代谢瞬时停止，并保持细胞或组织的形态构 造及其内含物的状态不发生变化，使组织变硬，便于切片、着
色，同时具有防腐作用。

常用固定液：乙醇、甲醛、醋酸、FAA 固定液(福尔马林-冰
• (四)洗涤

固定液中的成分有可能会妨碍染色或发生沉淀、结晶，影
响观察；有的还会继续作用，使材料变质等，因此需要洗
去渗入细胞内部的固定液。

根据固定液的种类，需要用到不同的洗涤液，
常用的洗涤液有：水、70%乙醇或缓冲液
• (五)脱水

材料洗涤后残留的洗涤液，可能使材料分解变形，因此需用
脱水剂除去材料中的洗涤液，使组织逐渐变硬，以便让石蜡浸
• (十一) 染色

即根据植物细胞中不同的化学性质，用染料分别进行染色， 在不同染液的作用下，将其显示出来，使之在光学显微镜 下，能够完全的观察观察切片中细胞与组织的形态与构造 及其内含物，所以一般用混合染料染色。

常用的染料 苏木精-伊红（HE）染色法
步骤：

二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗。



④标本经石蜡包埋后，可永久保存。

在研究细胞、组织、胚胎以及微生物形态等方面石蜡切片 法是最理想的制片方法。
发 展 ：
石蜡切片技术应用已有300多年历史：

1665年，英国人胡克用来制作薄片的小刀可以称得上最早的 “切片机”； 一个世纪以后，英国植物学家John Hill设计了世界上第一台真 正意义上的切片机； 1883年，剑桥大学车间制造了一台轮转式切片机； 1894年Rudolf Jung开发了第一台能重复切片的滑动式切片机；
石蜡切片制备方法和操作技 术过程
报告人：Байду номын сангаас雪松
• 石蜡切片的简介 • 石蜡切片技术的发展
石蜡切片法的一般流程
石蜡切片：

是生物技术研究的一种操作方法，是以石蜡作包埋剂，用 切片机将材料切成薄片，经一系列处理制成永久玻片。 石蜡切片法是显微切片技术的主要方法，它有许多优点:
①比较节省时间，容易操作； ②可以切成薄的片段(2um)，而且能连续切片； ③容易附贴于玻片上；