Masson三色染色试剂盒说明书

Masson三色法（根据Masson,1929）一、试剂配制（一）Weigert氏铁苏木素液（可用Herris苏木素代替）甲液：苏木素1g无水酒精（或95％酒精）100ml乙液：29％三氯化铁水溶液4ml蒸馏水95ml （30%三氯化铁溶液则为100ml）盐酸1ml临用时，取甲、乙液等量混合即可应用。

混合时应将乙液加人甲液内，染液呈紫黑色。

铁苏木素不能象明矾苏木素一样配制后可放置贮存备用，因铁与染色剂的色素根会化合生成不溶性沉淀，所以铁作媒染液时，必须与染液分别配制和分别保存，染片时临时混合应用。

由于这是一种铁苏木素，它将胞核染成黑色。

能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用，且不会被光线退色，因此比钾矾苏木素染色较为持久。

（二）丽春红酸性品红液丽春红（Ponceau 2R）0.7g酸性品红（acid fuchsin）0.3g蒸馏水99ml冰醋酸(glacial acetic acid) 1ml（三）1%磷钼酸水溶液磷钼酸（phosphomolybdic acid）1g蒸馏水加至100ml（四）2%苯胺蓝液苯胺蓝（aniline blue）2g冰醋酸（glacial acetic acid ）2ml蒸馏水加至100ml（五）亮绿液亮绿（light green）1g蒸馏水99ml冰醋酸（glacial acetic acid ）1ml（六）Bouin氏液苦味酸饱和液（1.22％）75ml福尔马林25ml冰醋酸5ml此液一般在临用时配制，对皮肤及肌腱有软化作用。

二、操作方法1．组织固定于Bouin氏液，流水冲洗一晚，常规脱水包埋。

2．切片脱蜡至水：（1）二甲苯中脱蜡10分钟×3次，用吸水纸吸干液体；（2）100%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；（3）95%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；；（4）流水2分钟，用吸水纸吸干水分；3．Weiger氏铁苏木素染5-10分钟。

Masson三色染色法
1.实验目的
MASSON染色观察病变的组织
2.实验材料
2.1石蜡切片
2.2仪器与试剂
2.2.1
（1）电热恒温干燥箱
（2）光学显微镜及拍照设备
（3）冰箱
（4）电子天平
（5）盖玻片
（6）染缸
2.2.2
（1）二甲苯
（2）无水乙醇
（3）Weigent氏苏木素液
（4）1％盐酸液
（5）立春红-品红溶液
（6）1％磷钼酸液
（7）1％淡绿液
（8）1％醋酸液
3.实验步骤：
操作方法：
(1)切片常规脱蜡至水，蒸馏水洗；
(2)Weigent氏苏木素液染核5-10分钟；
(3)自来水洗；
(4)1%盐酸酒精分化数秒（在显微镜下控制染色，除核为黑色，片中其他均混为白色）；
(5)自来水洗；
(6)丽春红—品红溶液5-10分钟
(7)清水水溶液洗；
(8)1%磷钼酸分化直到各种成分被染清晰10分钟（胶原纤维呈淡红色，肌纤维、纤维素呈鲜红色）；
(9)清水洗
(10)1%淡绿液染2—5分钟（或用2%苯胺蓝水溶液替代）
(11)1％醋酸水溶液处理2MIN
(12)常规脱水、透明、封片。

结果：胶原纤维绿色（或蓝色），肌肉、纤维素红色，红细胞橘黄色，核蓝黑色。

Human-肺癌-马松染色法
Human-肺-马松染色法
Human-软骨-马松染色法
Human-胰腺癌-马松染色法
武汉云克隆诊断试剂研究所。

Masson 三色染色液30ml+20ml*5RT产品简介：由Mallory 三色染色改造，利用两种或三种阴离子染料混合一起或先后作用完成染色，与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。

根据组织不同的渗透性能，选择分子大小不同的阴离子的染料进行染色，便可把不同组织成分显示出来。

包装内容：产品货号产品名称规格G1006-1重铬酸钾媒染剂30ml G1006-2Weigert 铁苏木素A 液20ml G1006-3Weigert 铁苏木素B 液20ml G1006-4丽春红酸性品红染液20ml G1006-5磷钼酸溶液20ml G1006-6苯胺蓝染液20ml保存条件：室温保存，有效期1年。

操作说明：1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min ，自来水洗。

2、重铬酸钾染色：切片入重铬酸钾浸泡过夜，自来水洗。

3、铁苏木素染色：铁苏木素A 液与B 液等比混合成铁苏木素染液，切片入铁苏木素3min ，自来水洗，盐酸酒精溶液分化，自来水冲洗。

4、丽春红酸性品红染色：切片入丽春红酸性品红浸染5-10min ，自来水漂洗。

5、磷钼酸染色：磷钼酸水溶液浸染1-3min 。

6、苯胺蓝染色：磷钼酸之后不用水洗，直接入苯胺蓝染液染3-6min 。

7、分化：切片用1%冰醋酸分化，两缸无水乙醇脱水。

8、透明封片：切片放入第三缸无水乙醇5min ，二甲苯5min 透明，中性树胶封片。

9、显微镜镜检，图像采集分析。

染色结果：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色。

弹力纤维呈棕色。

肌纤维、纤维素和红细胞染红色。

细胞核染蓝黑色。

G 1006注意事项：1、Weigert铁苏木素分A、B两液，临用前将两液等比例混合使用。

不宜预先混合，否则容易氧化沉淀而失去染色力。

2、重铬酸钾染完后水洗要稍快，切片洗干净即可。

3、根据切片的数量对铁苏木素染液进行更换，也可以现配现用；4、丽春红的染色程度要控制好，胶原部分不能是红色或者太红，会影响后续苯胺蓝的着色；5、冰醋酸分化苯胺蓝的过程中，若是分化过度，胶原蓝色太浅，若分化不足，易与丽春红的颜色叠加呈紫蓝色。

广州市外显子生物技术有限公司Http//Masson染色液说明书货号：S-1518规格：20ml产品组成：名称规格保存Weigert铁苏木素A液20ml RT避光Weigert铁苏木素B液20ml RT避光丽春红酸性品红染液20ml 2-4℃低温环境磷钼酸溶液20ml 2-4℃低温环境苯胺蓝染液20ml 2-4℃低温环境盐酸酒精分化液1%冰醋酸溶液20ml 2-4℃低温环境20ml 2-4℃低温环境简介：利用两种或三种阴离子染料混合一起或先后作用完成染色，与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关，根据组织不同的渗透性能，选择分子大小不同的阴离子的染料进行染色，便可把不同组织成分显示出来。

储存条件：本试剂盒应贮存于2-4℃低温环境。

有效期：原包装未开封试剂有效期为12 个月，在有效期内的已开封试剂应在开封后 6 个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。

操作步骤：1.切片脱蜡至水。

2.Weigert铁苏木素使用前Weigert铁苏木素A、B 液等比例混合。

染10-20分钟，流水稍洗。

3.盐酸酒精分化，流水冲洗数分钟。

4.丽春红酸性品红染液染5-10分钟，蒸馏水稍冲洗。

5.磷钼酸溶液处理约5分钟，去掉溶液，不用水洗，直接用苯胺蓝染液复染5分钟。

6.1%冰醋酸处理1分钟，95%酒精脱水。

7.无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树脂封固。

注意事项：1.Weigert铁苏木素分A、B两液，应于临用前将两液等份混合使用，而不宜预先混合，否则容易氧化沉淀而逐渐失去染色力。

2.磷钼酸处理时可在镜下控制，见肌纤维呈红色，胶原纤维呈淡红色即可。

染色结果：骨组织×200 结果判定：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色，弹力纤维呈棕色，肌纤维、纤维素和红细胞染红色，细胞核染蓝黑色。

Masson三色法（根据Masson,1929）一、试剂配制（一）Weigert氏铁苏木素液（可用Herris苏木素代替）甲液：苏木素1g无水酒精（或95％酒精）100ml乙液：29％三氯化铁水溶液4ml蒸馏水95ml （30%三氯化铁溶液则为100ml）盐酸1ml临用时，取甲、乙液等量混合即可应用。

混合时应将乙液加人甲液内，染液呈紫黑色。

铁苏木素不能象明矾苏木素一样配制后可放置贮存备用，因铁与染色剂的色素根会化合生成不溶性沉淀，所以铁作媒染液时，必须与染液分别配制和分别保存，染片时临时混合应用。

由于这是一种铁苏木素，它将胞核染成黑色。

能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用，且不会被光线退色，因此比钾矾苏木素染色较为持久。

（二）丽春红酸性品红液丽春红（Ponceau 2R）0.7g酸性品红（acid fuchsin）0.3g蒸馏水99ml冰醋酸(glacial acetic acid) 1ml（三）1%磷钼酸水溶液磷钼酸（phosphomolybdic acid）1g蒸馏水加至100ml（四）2%苯胺蓝液苯胺蓝（aniline blue）2g冰醋酸（glacial acetic acid ）2ml蒸馏水加至100ml（五）亮绿液亮绿（light green）1g蒸馏水99ml冰醋酸（glacial acetic acid ）1ml（六）Bouin氏液苦味酸饱和液（1.22％）75ml福尔马林25ml冰醋酸5ml此液一般在临用时配制，对皮肤及肌腱有软化作用。

二、操作方法1．组织固定于Bouin氏液，流水冲洗一晚，常规脱水包埋。

2．切片脱蜡至水：（1）二甲苯中脱蜡10分钟×3次，用吸水纸吸干液体；（2）100%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；（3）95%乙醇5分钟×2次，用吸水纸吸干液体；；（4）流水2分钟，用吸水纸吸干水分；3．Weiger氏铁苏木素染5-10分钟。

Masson染色,操作规程实验目的： Masson染色,用于显示组织中纤维的染色方法之一实验原理：Masson氏染色时胶原纤维呈蓝色(被苯胺蓝所染),肌纤维呈红色(被酸性品红和丽春红所染),这与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。

不同的组织和细胞成分,它们的孔隙大小是不同的。

孔隙的大小,决定了组织的渗透性。

如孔隙小,组织结构致密,渗透性低；孔隙宽,组织结构疏松,渗透性高。

如已固定的组织用一系列阴离子水溶性染料先后或混合染色,则可发现红细胞被最小分子的阴离子染料着染.肌纤维与胞质被中等大小的阴离子染料着染,而胶原纤维则被大分子的阴离子染料着染。

由此说明了红细胞对阴离子染料的渗透性最小,肌纤维与胞质次之,而胶原纤维具有最大的渗透性。

根据组织不同的渗透性能,选择分子大小不同的阴离子染料进行染色,便可把不同组织成分显示出来.而染料分子的大小,主要由其分子量来体现。

小分子量者易于穿透结构致密、渗透性低的组织,而大分子最者则只能进入结构疏松,渗透性高的组织。

一般来说,结构疏松,渗透性高的组织多选择大分子染料,而结构致密,渗透性低的组织多选择小分子染料。

试剂仪器：Harris 氏苏木精：苏木精0.4g，硫酸铝钾6g，黄色氧化汞0.16g，蒸馏水80ml。

将蒸馏水预热,预热过程中加入硫酸铝钾，沸腾后拔下电源，加入苏木精，接通电源再度沸腾后，拔掉电源，缓慢加入氧化汞，搅拌混匀，冷却后第二天加入5%比例的冰醋酸即可用。

透明玻璃瓶装缓慢氧化可省略冰醋酸，长期有效。

Masson丽春红酸性复红液：丽春红0.7g，酸性复红0.3g，蒸馏水99ml，冰醋酸1ml。

1%冰醋酸水溶液：冰醋酸1 ml，蒸馏水100 ml。

1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1g，蒸馏水100 ml。

1%苯胺蓝水溶液：苯胺蓝1g，蒸馏水100 ml，冰醋酸2 ml。

1%光绿水溶液：光绿 1g，蒸馏水100 ml实验操作程序：1、石蜡切片脱蜡至水。

2、铬化处理或去汞盐沉淀（甲醛固定的组织此步可略）。

Masson三色染色法
试剂
1.Bouin液
饱和苦味酸75ml，甲醛25ml，冰醋酸5ml.
2.Ⅰ液：1%比布列西猩红水溶液90ml，1%酸性复红水溶液10ml，冰醋酸1ml。

3.Ⅱ液：磷钼酸 2.5g，磷钨酸2.5g，蒸馏水100ml
4.Ⅲ液：苯胺蓝2.5g，冰醋酸2ml，蒸馏水100ml。

5.weigert铁苏木精液
A液
苏木精1g
90%乙醇100ml
B液
30%氯化铁4ml
蒸馏水100ml
纯盐酸1ml
A和B液需要分瓶存放，临用前A液和B液等量混合
6.1%冰醋酸水溶液冰醋酸1ml，蒸馏水100ml。

Masson三色染色步骤
染色步骤
1.石蜡切片常规脱蜡至水
2.Bouin液室温过夜或56℃1h
3.流水冲洗黄色消失
4.蒸馏水洗
5.Weigerrt铁苏木精染核10mins
6.盐酸酒精分化
7.流水冲洗10mins
8.蒸馏水洗
9.Ⅰ液2mins
10.蒸馏水洗
11.Ⅱ液15mins
12.Ⅲ液5mins
13.蒸馏水洗
14.1%冰醋酸浸洗5mins
15.常规脱水、透明、封固
结果
肌肉红色
胶原纤维蓝色
核黑色。

Masson 三色染色试剂盒（甲苯胺蓝）说明书修订日期：2018.07.31Cat number：KGMST-8004Store at 2-8℃ for 12 monthsFor Research Use Only（科研专用）【适用范围】Masson 三色染色试剂盒主要用于结缔组织染色。

用于判定各种组织、器官的病变程度与修复情况，以不同色调显示与区分某些非结缔组织及物质成分；如显示与区分肌肉及其肿瘤组织的正常或异常成分。

尤适用于软组织肿瘤的鉴别诊断。

【主要成分】【染色步骤】1、切片脱蜡处理至水。

2、滴加 1 滴（50-100µl）苏木素染色液（试剂 A）染色 5-10 分钟。

蒸馏水冲掉染液。

3、蒸馏水或自来水冲洗 2-5 分钟。

4、滴加 1 滴（50-100µl）复合染色液（试剂 B）染色 5 分钟。

5、蒸馏水或自来水冲洗一下（2-3 秒，冲掉染液即可）。

6、滴加 1 滴（50-100µl）磷钼酸（试剂 C）染色 1 分钟。

7、甩干或自然晾干。

8、滴加 1 滴（50-100µl）甲苯胺蓝染色液（试剂 D）染色 5min 左右。

9、蒸馏水或自来水冲洗一下（2-3 秒，冲掉染液即可）。

10、放入烘箱（50－60 摄氏度）烘干。

中性树胶封片。

【结果】胶元纤维、黏液、软骨、神经纤维呈蓝色；肌肉、弹力纤维呈红色；神经轴索呈粉红色；纤维素呈紫红色；红血球呈橘红色。

细胞核呈蓝紫色。

【注意事项】1、不同的固定液或固定时间以及不一样的组织，染色效果可有差异，要根据显微镜下观察来掌握染色或分化时间。

2、染色液必须充分淹盖组织。

3、每次染色宜用阳性切片作对照。

【有效期】12 个月仅供研究、不用于临床诊断。

Masson三色染色液说明书【产品名称】Masson三色染色液【包装规格】货号：DC0032套组包装规格：8×20ml/盒、8×100ml/盒、8×250ml/盒【预期用途】主要用于组织中结缔组织、肌肉和胶原纤维的组织细胞学染色。

【检验原理】Masson三色染色又称马松染色，是胶原纤维染色权威而经典的技术方法，所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性的显示胶原纤维和肌纤维。

该法染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关：分子的大小由分子量来体现，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构疏松的、渗透性高的组织，苯胺蓝的分子量很大，染色后肌纤维呈红色，胶原纤维呈蓝色，主要用于区分胶原纤维和肌纤维。

【主要组成成分】试剂组成主要成分1、Weigert铁苏木素A液苏木素2、Weigert铁苏木素B液三氯化铁3、酸性乙醇分化液乙醇4、蓝化液碳酸盐5、丽春红品红染色液丽春红、品红6、乙酸溶液乙酸7、磷钼酸溶液磷钼酸8、苯胺蓝染色液苯胺蓝【储存条件及有效期】5℃～35℃保存，原包装未开封染色液的有效期为l8个月，在有效期内的已开封染色液建议在开封后6个月内使用完，每次用后应及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。

【样本要求】组织片充分固定和脱蜡。

【检验方法】1、组织固定于Bouin氏固定液(另购)或Zenker氏固定液(另购)或10%中性福尔马林固定液(另购)等，流水冲洗，常规脱水包埋；2、切片常规脱蜡至水；3、取适量的Weigert铁苏木素A液和Weigert铁苏木素B液等量混合,即为Weigert铁苏木素染色液，用Weigert铁苏木素染色液染色，流水稍洗；4、酸性乙醇分化液分化数秒，流水冲洗数分钟；5、蓝化液返蓝数秒，流水冲洗数分钟；6、丽春红品红染色液染色数分钟，流水稍冲洗；7、将蒸馏水:乙酸溶液按一定的比例配制乙酸工作液，用乙酸工作液洗切片；8、磷钼酸溶液处理后，倾去玻片上磷钼酸溶液(不用水洗)；9、苯胺蓝染色液复染，倾去玻片上染色液(不用水洗)；10、用乙酸工作液处理切片，至切片无蓝色脱出(必要时镜下控制)；11、95%乙醇迅速脱水，无水乙醇脱水数次后，二甲苯透明，中性树胶封固。

GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS80013.2 v.A GENMED冰冻切片胶原纤维（MASSON）染色试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED冰冻切片胶原纤维（MASSON）染色试剂是一种旨在使用胞核－胞浆－胶原蛋白三色染料（trichrome），分析和区分存档中的冰冻组织切片中的胶原纤维（collagen fiber）的权威而经典的技术方法。

该技术由大师级科学家精心改良传统方法、成功实验证明的。

主要适用于胶原蛋白和平滑肌的鉴别分析。

广泛用于结缔组织、肌肉组织和胶原蛋白的研究等。

产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。

技术背景基于摩罗利（mallory）首次应用三色系统的方法，马森（masson）进行了改良，在三色复合染料体系中，使用苯胺篮（aniline blue）替代绿篮，作为胶原蛋白的染色。

三色复合染料选择性地染色肌肉、胶原纤维、纤维蛋白（fibrin）和红细胞。

肝肾疾病，例如纤维化（cirrhsis）等，其胶原蛋白增多。

产品内容GENMED清理液（Reagent A）XX毫升GENMED包氏液（Reagent B）XX毫升GENMED韦格液（Reagent C）XX毫升GENMED比氏液（Reagent D）XX毫升GENMED酸性液（Reagent E）XX毫升GENMED染色液（Reagent F）XX毫升GENMED修正液（Reagent G）XX毫升产品说明书1份保存方式保存在4℃冰箱里，避免光照；试剂具有腐蚀性，注意安全；有效保证6月用户自备小型玻璃染色缸：用于组织或切片处理的容器培养箱：用于样品反应孵育微波炉：用于样品反应孵育处理载玻片和盖玻片：用于切片后铺片中性树脂：用于切片封片光学显微镜：用于切片染色后观察分析实验步骤操作一：标准染色1．准备好XX微米厚的冰冻切片2．小心加上XX微升GENMED清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面3．室温下孵育XX分钟4．小心移去切片上的GENMED清理液（Reagent A）5．小心加入XX微升GENMED包氏液（Reagent B）在切片上，铺满整个切片样品表面6．放进60℃恒温培养箱孵育XX分钟（注意：避免干枯；如果强化效果，可以室温孵育16小时） 7．小心移去GENMED包氏液（Reagent B）8．室温下，小心将切片置入XX毫升GENMED清理液（Reagent A）中孵育2分钟9．小心移去切片上的GENMED清理液（Reagent A）10．小心加入XX微升GENMED韦格液（Reagent C）在切片上，铺满整个切片样品表面11．室温下孵育XX分钟12．小心移去GENMED韦格液（Reagent C）13．室温下，小心将切片置入XX毫升GENMED清理液（Reagent A）中孵育XX分钟14．小心移去切片上的GENMED清理液（Reagent A）15．小心加入XX微升GENMED比氏液（Reagent D）在切片上，铺满整个切片样品表面16．室温下孵育XX分钟（注意：可以延长至15分钟，增强染色效果）17．小心移去GENMED比氏液（Reagent D）18．小心加入XX微升GENMED清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面19．小心移去切片上的GENMED清理液（Reagent A）20．重复实验步骤18至19二次21．小心加入XX微升GENMED酸性液（Reagent E）在切片上，铺满整个切片样品表面（注意：可以孵育15分钟，增强染色效果）22．小心移去切片上的GENMED酸性液（Reagent E）23．小心加上XX微升 GENMED染色液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面24．室温下孵育XX分钟，避免光照（注意：可以延长至10分钟，增强染色效果）25．小心移去切片上的GENMED染色液（Reagent F）26．小心加上XX微升 GENMED修正液（Reagent G）在切片上，铺满整个切片样品表面27．室温下孵育XX分钟28．小心移去切片上的GENMED修正液（Reagent G）29．室温下，小心将切片置入XX毫升GENMED清理液（Reagent A）中孵育XX分钟30．小心移去切片上的GENMED清理液（Reagent A）31．放上盖玻片或封片（中性树脂）32．即刻在一般光学显微镜下观察：细胞核――呈现黑色细胞质――呈现红色肌纤维――呈现红色红细胞――呈现红色胶原纤维――呈现蓝色操作二：热处理染色1．准备好XX微米厚的冰冻切片2．小心加上XX微升GENMED清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面 3．室温下孵育XX分钟4．小心移去切片上的GENMED清理液（Reagent A）5．准备1个XX毫升烧杯或小型染色缸6．加入XX毫升GENMED包氏液（Reagent B）7．小心放进上述脱腊处理的切片8．放进微波炉（600瓦）加热XX分钟9．室温下静置15分钟10．取出切片，小心移去切片上的GENMED包氏液（Reagent B）11．室温下，小心将切片置入XX毫升GENMED清理液（Reagent A）中孵育5分钟 12．小心移去切片上的GENMED清理液（Reagent A）13．小心加入XX微升GENMED韦格液（Reagent C）在切片上，铺满整个切片样品表面 14．室温下孵育XX分钟15．小心移去GENMED韦格液（Reagent C）16．室温下，小心将切片置入XX毫升GENMED清理液（Reagent A）中孵育5分钟 17．小心移去切片上的GENMED清理液（Reagent A）18．小心加入XX微升GENMED比氏液（Reagent D）在切片上，铺满整个切片样品表面 19．室温下孵育XX分钟（注意：可以延长至15分钟，增强染色效果）20．小心移去GENMED比氏液（Reagent D）21．小心加入XX微升GENMED清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面 22．小心移去切片上的GENMED清理液（Reagent A）23．重复实验步骤21至22二次24．小心加入XX微升GENMED酸性液（Reagent E）在切片上，铺满整个切片样品表面 25．室温下孵育XX分钟（注意：可以延长至15分钟，增强染色效果）26．小心移去切片上的GENMED酸性液（Reagent E）27．小心加上XX微升 GENMED染色液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面 28．室温下孵育XX分钟，避免光照（注意：可以延长至10分钟，增强染色效果） 29．小心移去切片上的GENMED染色液（Reagent F）30．小心加上XX微升 GENMED修正液（Reagent G）在切片上，铺满整个切片样品表面 31．室温下孵育XX分钟32．小心移去切片上的GENMED修正液（Reagent G）33．室温下，小心将切片置入XX毫升GENMED清理液（Reagent A）中孵育2分钟 34．小心移去切片上的GENMED清理液（Reagent A）35．放上盖玻片或封片（中性树脂）36．即刻在一般光学显微镜下观察：细胞核――呈现黑色细胞质――呈现红色肌纤维――呈现红色红细胞――呈现红色胶原纤维――呈现蓝色注意事项1．本产品为50次操作2．操作时，须戴手套3．试剂具有腐蚀性，注意操作安全4．建议使用玻璃染色缸5．每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干6．试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面7．整个操作，在避光状态下进行8．染色完成后，即刻进行光学显微镜观察9．样品染色后保存，避免光照10．本公司提供系列特定组织染色试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定显色清晰使用承诺杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。

胶原纤维- MASSON'S 三色(TRI)目的：用于鉴别胶原纤维和平滑肌肿瘤，肝硬化的胶原纤维增生。

肝肾活检组织的常规染色。

原理：与名称暗示的一样，三种染料分别着染肌肉、胶原纤维、纤维蛋白和红细胞。

三色染色的基本原理是孔隙较小的组织被最小的染料分子着染。

只要大分子的染料能够穿透组织，而损失的总是较小的染料分子。

建议染色时首先染酸性染料。

比布里希猩红能与嗜酸性组织成分结合。

当用磷酸处理时，只有渗透性较小组织成分能保留红色，胶原纤维组织的红色被冲出。

同样原理使胶原纤维与苯胺蓝结合。

固定：首选Bouin's液，10%甲醛。

技术：石蜡切片4μm。

设备：蒸馏水清洗玻璃器皿，染色缸，60°C 烤箱或水浴箱，微波炉。

试剂：Bouin’s 固定液饱和苦味酸1500.0 ml甲醛500.0 ml冰醋酸100.0 ml混合溶解，标签，日期和签名。

保存期2年。

警告：致癌物质，刺激性。

比布里希猩红：比布里希猩红 2.7 gm酸性品红0.3 gm蒸馏水300.0 ml冰醋酸 3.0 ml混合溶解，标签，日期和签名。

保存期6个月。

警告：避免接触和吸入。

Weigert's铁苏木精原液A：苏木精 5.0 gm95% 酒精500.0 ml混合溶解，标签，日期和签名。

保存期1年。

警告：易燃性，避免接触和吸入。

原液B：29%三氯化铁20.0 ml蒸馏水475.0 ml盐酸 5.0 ml混合溶解，标签，日期和签名。

保存期1年。

Weigert's 苏木精工作液溶液A 25.0 ml溶液B 25.0 ml混合溶解，溶液可保留3-4。

磷钼酸/磷钨酸溶液：磷钼酸25.0 gm磷钨酸25.0 gm蒸馏水1000.0 ml混合溶解，标签，日期和签名。

保存期6个月。

警告：避免接触和吸入。

苯胺蓝：苯胺蓝 2.5 gm蒸馏水100.0 ml冰醋酸 1.0 ml混合溶解，标签，日期和签名。

保存期6个月。

警告：避免接触和吸入。

Masson三色染色液染色步骤及注意事项步骤一：预处理1. 切片：将需要染色的组织标本切成厚度约为5um的切片，将切片均匀地放置在已经预先烘干和标记好的玻片上。

2.固定：用10%中性缓冲福尔马林固定切片，固定时间约为24小时。

步骤二：染色1. 染色剂的准备：将Masson三色染色液购买回来后，根据品牌推荐比例稀释至适当浓度。

不同品牌染色液稀释比例可能有所不同，因此以具体品牌的说明为准。

2.染色操作：(1)将切片放入染色盒中，并将染色盒放入水浴中加热，温度为60-70摄氏度，时间为20-30分钟。

(2)将加热后的染色盒取出，用水冲洗2-3分钟，直至明显的污染物被冲走。

(3)将切片置于70%酒精中，时间为5分钟。

(4)在20%盐酸酒精中浸泡1-2秒钟，然后立即将切片漂洗至酸性的第一盐酸酒精。

(5)在酸性的第一盐酸酒精中浸泡30秒至1分钟，然后漂洗至酸性的第二盐酸酒精中。

(6)在酸性的第二盐酸酒精中浸泡30秒至1分钟，然后漂洗至蒸馏水中。

(7)转移到可溶性亮蓝GR中染色5分钟。

(8)快速漂洗后，放入蒸馏水中清洗1-2分钟。

(9)再次转移到1%醋酸中染色1分钟。

(10)最后，在6%石蜡溶液中浸泡5-10分钟。

步骤三：封片1.脱水：将切片放入95%乙醇中，时间为1-2分钟，然后放入绝对乙醇脱水2-3分钟。

2.渗透：将切片放入二氯甲烷中，时间为5分钟，再在房温下放置3-5分钟以充分渗透。

3. 封片：将切片放入500-1000ml锡兰红封片剂中，时间为1-2分钟，然后将切片转到盖玻片上，将封片剂挤满，盖上玻片，压平后放在60摄氏度的烘箱中加热2-3小时。

注意事项：1.操作中应注意个人防护，佩戴手套和口罩，避免接触有害物质。

2.染色过程中要严格控制温度和时间，避免染色过程中出现偏差。

3.在脱水和封片过程中要注意将切片完全浸透，防止切片变形或脱落。

4.染色溶液和液体处理过程中，应注意防止溅溢和污染，保持操作环境清洁。

Masson复合染色液的配制：酸性复红1 g丽春红2 g橘黄G 2 g0.25%醋酸300 ml混匀，过滤后备用。

亮绿染色液的配制：亮绿干粉0.1 g0.2%醋酸100 ml充分混匀，过滤后备用。

Masson染色（1）常规脱蜡至水：二甲苯Ⅰ10 min→二甲苯Ⅱ10 min→100%酒精Ⅰ5 min→100%酒精Ⅱ5 min→95％酒精3 min→90％酒精3 min→80％酒精3 min→70％酒精3 min→蒸馏水1 min（2）Masson染色：Masson复合液5 min→自来水过洗2次→0.2%醋酸Ⅰ1 min→0.2%醋酸Ⅱ1 min→自来水过洗1次→1%磷钨酸6 min→自来水过洗1次→亮绿15min→自来水过洗2次→0.2%醋酸Ⅰ1 min→0.2%醋酸Ⅱ1 min→自来水过洗1次（3）常规脱水透明：70%酒精30 s→80％酒精30 s→90%酒精30 s→95％酒精30 s→100%酒精Ⅰ5 min →100%酒精Ⅱ5 min→二甲苯Ⅰ5 min→二甲苯Ⅱ10 min→中性树胶封片至于操作要点的话觉得就是在masson复合液和亮绿的染色时间得摸索一下，还有就是70，80酒精时间尽量短，脱色很厉害，不过要是实在脱得严重的话，还可以倒回来重新染色附图一张，心肌梗死masson染色，肌纤维红色，胶原绿色，红细胞橘黄色高倍镜下•脱水4%多聚甲醛中固定，常规石蜡包埋切片；切片脱蜡至水后入重铬酸钾—醋酸液或3%升汞处理1小时；水洗后染Regaud氏苏木素10分钟；自来水充分洗后，用2%盐酸酒精分化；流水冲洗到蓝黑色；1%丽春红酸性品红液中染5分钟；蒸馏水洗；1%磷钼酸水溶液媒染5分钟；不经水洗入2%淡绿液3分钟；1%醋酸液分色1分钟；脱水、透明、中性树胶封固。

结果：细胞核染黑蓝色，胶原纤维呈绿色，神经胶质纤维、肌纤维、红细胞呈红色。