铁皮石斛组培技术

铁皮石斛的组织培养研究

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课程：植物组织培养

目录

摘要 (3)

Abstract (4)

前言 (5)

1.培养基 (6)

1.1配方 (6)

1.2配制（以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例） (6)

1.3灭菌 (8)

2.转接 (9)

2.1转接前准备 (9)

2.2转接 (9)

2.3培养 (9)

3.炼苗 (10)

3.1炼苗目的 (10)

3.2炼苗方法 (10)

4.移栽 (11)

4.1基质选择 (11)

4.2移栽技术要求 (11)

5.结论与分析 (12)

参考文献 (13)

摘要

铁皮石斛(Dendrobium officinale)是兰科(Orchidaceae)石斛属(DendrobiumSw．)多年生草本植物。铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。铁皮石斛是传统名贵中药材，有生津益胃、清热养阴和清咽利嗓等功效，主要药用成分石斛多糖是一种免疫调节剂。铁皮石斛蒴果成熟时易开裂，且种子粒径小，自然繁殖率低。为了保护和有效利用铁皮石斛，通过组织培养技术大量快速繁殖铁皮石斛组培苗显得尤为重要。

关键词：铁皮石斛组织培养移栽培养基转接快速繁殖

Abstract

Dendrobium orchid Dendrobium is a perennial herb. It is the ultimate in DendrobiumSw,named for its ferric green epidermis.As a rare traditional Chinese herbal medicine,it contributes to dry dampness and strengthen the spleen,clear away lung-heat ,nourish yin ，clear away heat ,and so on.The main medicinal components of Dendrobium polysaccharide is a kind of immune modulators.When mature,its capsule cracks,in which seeds are in small particle size and have a low rate of natural reproduction.In order to protect and utilize the Dendrobium orchid Dendrobium ,it is particularly important to establish a rapid propagation by the tissue culture technique .

key words:Dendrobium orchid Dendrobium tissue culture

culture medium adapter rapid propagation

前言

多年生草本，具有气生根。茎直立丛生、高30-50cm，肉质稍扁，有节、有槽沟，黄绿色。单叶互生，叶片革质，无柄，狭长椭圆形或近披针形，叶鞘抱茎。总状花序腋生，每个花序有花2-3朵，白色，先端淡紫红色。

铁皮石斛为兰科石斛属多年生草本植物。作为我国传统的名贵中药,具有重要的药用价值。由于长期过度采挖,加之本身繁殖率低,导致其野生资源急剧减少,日趋濒危,现已被列为国家重点保护植物,成为国家重点保护的药材品种。

试验结果表明,MS、N6和B5等3种基本培养基对铁皮石斛芽诱导和增殖的效果, B5要优于其他基本培养基;在激素浓度配中,铁皮石斛原球茎在6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L中,增殖系数最大;天然附加物对铁皮石斛增殖的影响差异很大,实际应用中宜选用香蕉汁为添加剂;在B5+蔗糖30g/L+香蕉汁100mg/L+琼脂5.8g/L基本培养基中,加入的NAA对铁皮石斛芽的生根以1.0mg/L 处理的效果最好,但考虑到NAA价格较贵,且在浓度范围为0.2-1.0之间对生根的影响差异不明显,在实际应用中以选用0.2mg/L的NAA为好;生成的小苗经过炼苗后,在铺有一层苔藓的含有75％锯末+20％泥炭土+5％碎磁片的基质上能够良好的生长。

1.培养基

1.1配方

根据不同阶段，培养基配方有所差异。如表1-1

表1-1 各种培养基配方

不同阶段培养基备注

愈伤组织（原球茎）的诱导MS+2.0mg/L6-BA+3%蔗糖+0.8%

琼脂

pH=5.8

原球茎的增殖MS+20%马铃薯+3%蔗糖+0.8%琼

脂

pH =5.8

原球茎的分化

MS+20%马铃薯

+2.0mg/LNAA+3%蔗糖+0.8%琼脂

pH=5.8

幼株的生根壮苗MS+10%香蕉+2.0mg/LNAA+3%

蔗糖+0.8%琼脂

pH=5.4-5.6

1.2配制（以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例）

配方：10%香蕉（w/w）+MS +3%蔗糖（w/w）+0.8%琼脂（w/w）+2.0mg/L NAA 1）量取800ml蒸馏水于洁净的大烧杯中，加热至沸腾；

2）准确称量100g香蕉果肉，切成碎片状，并倒入上述烧杯中，加热煮沸5min，其间搅拌使之充分溶解；

3）按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序，量取MS各种母液于盛有50ml蒸馏水的烧杯，混合均匀；

4）将2）和3）的溶液混合，然后加入30g蔗糖，并移取2ml NAA（0.1mg/ml），混合均匀；

5）加热至沸腾，加入8g琼脂并煮沸5min，其间不断搅拌使之充分溶解；

6）冷却至50±5℃时，调pH至5.4—5.6。分装于培养瓶内，33.3ml/瓶。