实验一 巨噬细胞吞噬功能实验
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一、实验目的1. 了解巨噬细胞在免疫过程中的作用。
2. 掌握巨噬细胞的分离、培养和鉴定方法。
3. 学习巨噬细胞吞噬功能的检测方法。
二、实验原理巨噬细胞是一种具有强大吞噬功能的免疫细胞,在免疫过程中起着重要作用。
巨噬细胞能够识别、吞噬和消化病原微生物、凋亡细胞等异物,并参与抗原呈递、免疫调节等过程。
本实验通过分离、培养和鉴定小鼠腹腔巨噬细胞,并检测其吞噬功能,以了解巨噬细胞在免疫过程中的作用。
三、实验材料与仪器1. 实验动物:6-8周龄小鼠2. 试剂:胎牛血清、RPMI-1640培养基、无菌生理盐水、鸡红细胞、冷亚甲蓝染液等3. 仪器:超净工作台、CO2培养箱、倒置显微镜、移液器、培养皿、离心机等四、实验方法1. 巨噬细胞的分离与培养(1)小鼠处死后,打开腹腔,取出肠系膜,剪成1cm×1cm的小块。
(2)将小块组织放入装有生理盐水的培养皿中,用剪刀剪碎,制成组织悬液。
(3)将组织悬液移入离心管,以1000r/min的速度离心5min,弃去上清液。
(4)加入适量RPMI-1640培养基,重悬细胞,以1000r/min的速度离心5min,弃去上清液。
(5)加入适量胎牛血清的RPMI-1640培养基,重悬细胞,调整细胞浓度至1×10^6个/mL。
(6)将细胞悬液接种于培养皿中,放入CO2培养箱中培养24h。
2. 巨噬细胞的鉴定(1)取少量细胞悬液,加入适量台盼蓝染液,混匀,室温放置5min。
(2)用血细胞计数板计数,计算细胞死亡率。
(3)收集培养24h的细胞,用倒置显微镜观察细胞形态,判断细胞类型。
3. 巨噬细胞吞噬功能的检测(1)取适量鸡红细胞,用生理盐水洗涤3次,调整红细胞浓度为2×10^9个/mL。
(2)将鸡红细胞加入巨噬细胞培养液中,37℃、5%CO2条件下孵育30min。
(3)取出细胞,用生理盐水洗涤3次,弃去上清液。
(4)加入适量冷亚甲蓝染液,混匀,室温放置5min。
一、实验目的1. 观察和了解巨噬细胞对异物的吞噬过程。
2. 掌握巨噬细胞吞噬实验的操作方法。
3. 分析巨噬细胞的吞噬功能。
二、实验原理巨噬细胞是一种具有吞噬功能的免疫细胞,主要来源于单核细胞。
在机体受到病原体感染时,巨噬细胞可以吞噬病原体,并激活其他免疫细胞,共同参与机体的免疫反应。
本实验通过观察巨噬细胞对异物的吞噬过程,了解巨噬细胞的吞噬功能。
三、实验材料1. 小鼠:体重20-25g,雌雄不限。
2. 无菌生理盐水。
3. 鸡红细胞悬液。
4. 巨噬细胞培养液。
5. 巨噬细胞培养瓶。
6. 显微镜及配套设备。
7. 吸管、试管、离心机、移液器等。
四、实验步骤1. 实验前准备:将小鼠置于恒温恒湿的环境中饲养,适应环境。
实验前1天,用无菌生理盐水给小鼠灌胃,以提高巨噬细胞的活性。
2. 巨噬细胞培养:取小鼠腹腔巨噬细胞,加入巨噬细胞培养液,置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
3. 实验操作:a. 取鸡红细胞悬液,用生理盐水稀释至一定浓度。
b. 将培养好的巨噬细胞悬液加入鸡红细胞悬液中,混合均匀。
c. 将混合液加入巨噬细胞培养瓶中,置于培养箱中培养一段时间。
d. 取出培养瓶,用吸管轻轻吹打,使巨噬细胞与鸡红细胞分离。
e. 将分离后的巨噬细胞悬液离心,弃去上清液,收集沉淀。
4. 观察与记录:a. 取巨噬细胞沉淀,制成涂片。
b. 用姬姆萨染色液染色,置于显微镜下观察。
c. 记录巨噬细胞吞噬鸡红细胞的情况,包括吞噬细胞的形态、吞噬的鸡红细胞数量等。
五、实验结果与分析1. 观察结果:在显微镜下,观察到巨噬细胞呈现出典型的吞噬形态,细胞内含有多个鸡红细胞。
2. 分析:a. 巨噬细胞对鸡红细胞具有明显的吞噬作用,说明巨噬细胞在机体免疫过程中起着重要作用。
b. 吞噬细胞的形态变化与鸡红细胞的吞噬程度有关,吞噬程度越高,细胞形态变化越明显。
c. 通过观察巨噬细胞的吞噬功能,可以了解巨噬细胞在机体免疫反应中的活性。
六、实验结论本实验通过观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程,验证了巨噬细胞在机体免疫过程中的重要作用。
一、实验目的1. 了解巨噬细胞的基本生物学特性;2. 掌握巨噬细胞吞噬功能实验的操作方法;3. 分析巨噬细胞吞噬功能的影响因素。
二、实验原理巨噬细胞是免疫系统中的一种重要细胞,具有吞噬、清除病原体、分泌细胞因子等生物学功能。
本实验通过观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用,评估巨噬细胞的吞噬功能。
三、实验材料与试剂1. 实验动物:小鼠;2. 实验试剂:鸡红细胞、生理盐水、冷亚甲蓝染色液、培养皿、显微镜、移液器等。
四、实验方法1. 实验动物处理:取健康小鼠,腹腔注射6%无菌淀粉液1ml,诱导腹腔巨噬细胞产生。
2. 巨噬细胞收获:实验前3小时,将小鼠处死,无菌操作下取出腹腔液,加入等体积生理盐水,混匀后离心(1000r/min,10min),弃上清,用生理盐水洗涤2次,沉淀即为巨噬细胞。
3. 巨噬细胞吞噬实验:将收获的巨噬细胞加入培养皿中,加入适量鸡红细胞,37℃培养1小时。
4. 巨噬细胞染色:将培养好的巨噬细胞加入冷亚甲蓝染色液,染色5分钟。
5. 巨噬细胞观察:用显微镜观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的情况,计算吞噬百分率和吞噬指数。
五、实验结果与分析1. 实验结果:显微镜下观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象,部分鸡红细胞被吞噬细胞包裹。
2. 实验分析:(1)吞噬百分率:吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/巨噬细胞总数×100%;(2)吞噬指数:吞噬的鸡红细胞总数/吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数。
六、实验结论本实验成功观察到了巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象,说明巨噬细胞具有吞噬功能。
吞噬百分率和吞噬指数可以作为评估巨噬细胞吞噬功能的重要指标。
七、实验讨论1. 巨噬细胞在免疫系统中具有重要作用,吞噬功能是其重要生物学特性之一。
2. 本实验采用腹腔巨噬细胞,操作简便,结果可靠。
3. 影响巨噬细胞吞噬功能的主要因素包括:巨噬细胞的来源、成熟度、环境因素等。
4. 本实验为后续研究巨噬细胞吞噬功能的影响因素提供了基础。
八、实验总结本实验通过观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象,成功评估了巨噬细胞的吞噬功能。
实验一巨噬细胞吞噬功能实验1、【实验原理】(1)巨噬细胞作为单核吞噬细胞系统的主要细胞,具有活跃的吞噬功能。
能清除体内抗原物质及变性的细胞,在特异性及非特异性免疫中均起重要作用。
MΦ受抗原刺激后活化,可使其吞噬功能明显增强。
(2)此实验采用体内法,即:在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后,再给小鼠腹腔注射鸡红细胞30min后处死小鼠,取出腹腔液,以冷美蓝染色,油镜下计数吞噬鸡红细胞的百分数,及观察巨噬细胞中内因被杀死而染为蓝色的鸡红细胞的形态、数目,以判断巨噬细胞中的杀伤能力,由此间接地测定机体的非特异免疫水平。
2、【实验步骤】(1)试验前3d,小白鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml,诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。
(2)实验时,每只小鼠腹腔注射鸡红细胞液1ml,轻揉腹部,使红细胞在腹腔中分布均匀,利于吞噬(3)30min后,将小鼠拉颈处死,固定,打开腹腔暴露肠管,用吸管取出腹腔液,均匀涂布于载玻片上,然后再滴一小滴0.03%冷美蓝溶液,盖上盖玻片。
(4)低倍镜下找到观察区域后,换高倍镜下进行观察,计数3、【实验结果】4、【结果分析】(1)如图所示,在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后,再给小鼠注射鸡红细胞后镜检腹腔液,可观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象,并且可以看到部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。
(2)镜下可见吞噬细胞核呈蓝色,被吞噬的鸡红细胞呈椭圆形,其胞浆呈红色而核被染成蓝色。
(3)由于未将腹腔液和冷美蓝溶液充分混合均匀,使得视野中出现大片深染区域。
总体实验结果较好,视野中央可见清晰的吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞。
5、【注意事项】(1)涂片的薄厚要适当,否则影响计数。
(2)小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。
(3)如小鼠腹腔液过少,可注入适量生理盐水。
(4)剪开小鼠腹腔时应避免出血,否则将影响试验结果。
(5)被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化,时间过短未被吞噬,必须掌握好吞噬作用时间。
实验二双向琼脂扩散实验1、【实验原理】(1)可溶性抗原与相应抗体特异性结合,两者比例适当并有电解质存在及一定的温度条件下,经一定的时间,可形成肉眼可见的沉淀线/环的现象,称为沉淀反应。
巨噬细胞吞噬作用的观察细胞学实验报告实验目的:观察巨噬细胞的吞噬作用,了解巨噬细胞在防御机体内外侵犯的微生物和异物时的作用机制。
实验原理:巨噬细胞是一种能够吞噬和消化体内外各种微生物及其他异物的免疫细胞,其作用主要通过两种方式实现:异物与巨噬细胞表面的膜蛋白结合,通过膜囊泡(吞噬体)形成吞噬泡;吞噬泡与溶酶体融合,形成溶酶体-吞噬体复合物,完成异物的吞噬和溶解。
实验步骤:1.实验前准备1.1. 预先培养巨噬细胞至对数生长期,并调整细胞浓度为1×10^6 cells/mL;1.2.准备巨噬细胞富集培养液、悬浮液和含有正常培养液的对照组,分别标记为A、B和C组;1.3.准备大肠杆菌溶菌液;1.4.准备各组的显微镜载玻片。
2.差速计数法确定吞噬指数2.1.取3只显微镜载玻片,分别滴加A、B和C组巨噬细胞液,每个组各滴2滴;2.2.于25℃恒温槽中孵育15分钟;2.3.分别在显微镜下用10倍镜进行巨噬细胞数目计数;2.4.计算巨噬细胞吞噬指数,公式如下:吞噬指数=A-B/C-B。
3.吞噬试验3.1.在显微镜盖片上涂抹一层巨噬细胞富集液;3.2.将滴管中的巨噬细胞悬浮液加入巨噬细胞富集液之上,形成巨噬细胞层;3.3.在巨噬细胞层上滴加大肠杆菌溶菌液,并进行密封;3.4.将盖片置于37℃恒温槽中孵育30分钟;3.5.取出巨噬细胞盖片,用0.01%新洁尔灭溶液洗涤;3.6.加入吉姆萨酮染色试剂,显色15分钟后以洁净水洗净;3.7.在显微镜下观察巨噬细胞内的大肠杆菌数量。
4.数据处理4.1.统计吞噬细胞内大肠杆菌数量;4.2.分析吞噬指数和巨噬细胞内大肠杆菌数量的关系。
实验结果:根据差速计数法得出的巨噬细胞吞噬指数为0.67、在吞噬试验中观察到,巨噬细胞内存在许多吉姆萨酮染色的大肠杆菌。
实验讨论:巨噬细胞的吞噬作用是免疫系统中重要的第一道防线,可以吞噬和杀灭多种病原菌和异物。
实验结果表明,巨噬细胞吞噬指数为0.67,说明巨噬细胞具有较强的吞噬能力。
巨噬细胞吞噬功能测定【实验原理】巨噬细胞对颗粒性异物具有很强的吞噬功能。
当鸡红细胞被注入小鼠腹腔时,会被腹腔中的巨噬细胞吞噬。
取小鼠腹腔液涂片、染色,在显微镜下可见到鸡红细胞被吞噬的现象。
计算吞噬百分率和吞噬指数,可判断吞噬细胞的吞噬功能。
【试剂和器材】1. 动物体重20-25g的健康小鼠。
2. 1%鸡红细胞(CRBC)悬液自鸡液静脉或心脏采血,放Alsever液中保存(鸡血与Alsever 液1:5混合),置4℃可有效保存1个月,临用前用生理盐水将CRBC洗3次,按红细胞压积配成1%CRBC悬液。
3. 6%可溶性淀粉肉汤培养基肉汤培养基100ml加入可溶性淀粉6g,混匀,置100℃水浴煮沸消毒。
4. 其他试剂瑞氏(Wright)染液、生理盐水等。
5. 器材无菌注射器及针头、剪刀、镊子、解剖盘、载玻片、显微镜等。
【步骤和方法】1.试验前3天,于小鼠腹腔注射6%可溶性淀粉肉汤培养基1ml。
2.于试验当天,小鼠腹腔注入1%CRBC悬液0.5ml,并轻轻揉腹。
3.30min后小鼠颈椎脱臼处死,取腹腔液涂片,自然干燥后瑞氏染色,用油镜观察。
【结果判定】镜下可见吞噬细胞核呈蓝色,被吞噬的鸡红细胞呈椭圆形,其胞浆呈红色而核被染成蓝色。
呈油镜下随机观察100个巨噬细胞,计数吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数和吞噬的鸡红细胞总数。
吞噬百分率= (吞噬CRBC的巨噬细胞数/100)*100%吞噬指数= 吞噬细胞吞噬的CRBC总数/100【注意事项】1.涂片的薄厚要适当,否则影响计数。
2.小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。
3.如小鼠腹腔液过少,可注入适量生理盐水。
4.剪开小鼠腹腔时应避免出血,否则将影响试验结果。
5.被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化,时间过短未被吞噬,必须掌握好吞噬作用时间。
阿氏液配方:葡萄糖 2.05克柠檬酸钠0.8克柠檬酸0.055克氯化钠0.42克加蒸馏水至100毫升,加热溶解后将pH值调到6.1,经过69千帕,15分钟的高压灭菌,放置在4℃的环境内,保存备用。
实验一、巨噬细胞吞噬功能的观察
[原理]
吞噬细胞属于机体的固有免疫系统,对异物有识别和清除的能力。
巨噬细胞是吞噬细胞之一,主要分布于机体的淋巴结、脾脏、结缔组织等处。
[材料]
1.小鼠、1%绵羊红细胞、瑞氏染液等。
2.注射器、吸管、手术器械、显微镜等。
[方法]
1.实验前3天,小鼠腹腔注射硫乙醇酸钠培养基,诱导腹腔巨噬细胞。
2.将上述小鼠腹腔注射1%绵羊红细胞2ml/只,等待30-60min。
3.小鼠断颈椎处死,轻揉腹部约1min,吸取腹腔液做推片。
4.标本片充分干燥后,瑞氏染液染色10min,冲洗,吸干水后镜检。
5.镜下观察巨噬细胞的吞噬现象,计算吞噬百分数和吞噬指数。
吞噬百分数=(发生吞噬的巨噬细胞个数/所观察的巨噬细胞总个数)*100%
吞噬指数=所观察到的巨噬细胞一共吞噬的红细胞个数/所观察的巨噬细胞总个数
实验报告:要求画图、计算吞噬百分数和吞噬指数(以上为实验结果)、讨论(非必须)及结论。
强烈建议实验报告使用A4大小的纸张。
实验报告不返还,若要留底请自行备份。
巨噬细胞吞噬实验报告巨噬细胞吞噬实验报告巨噬细胞是一类重要的免疫细胞,它们在机体内起着清除病原体和细胞垃圾的重要作用。
巨噬细胞通过吞噬和消化来清除这些有害物质,从而维护机体的健康。
本次实验旨在探究巨噬细胞的吞噬能力,并观察不同条件下巨噬细胞的吞噬效果。
实验材料和方法:1. 巨噬细胞:从小鼠腹腔摘取巨噬细胞,经过离心、洗涤后制备成细胞悬液。
2. 有害物质:使用荧光染料标记的细菌和细胞碎片作为巨噬细胞吞噬的目标。
3. 细胞培养基:提供适宜的营养和环境条件供巨噬细胞生长。
4. 显微镜:观察和记录巨噬细胞的吞噬情况。
实验步骤:1. 将巨噬细胞悬液均匀分配到培养皿中,加入适量的细胞培养基,使巨噬细胞处于良好的生长状态。
2. 在巨噬细胞培养基中加入荧光染料标记的细菌和细胞碎片,使其与巨噬细胞悬液充分接触。
3. 将培养皿置于恒温培养箱中,以37摄氏度、5%二氧化碳的条件下培养巨噬细胞。
4. 在培养的不同时间点,取出培养皿进行显微镜观察,并记录巨噬细胞吞噬的数量和程度。
5. 对实验结果进行统计和分析,得出结论。
实验结果:在观察巨噬细胞吞噬的过程中,我们发现了一些有趣的现象。
首先,在实验开始的早期,巨噬细胞对细菌和细胞碎片的吞噬速度较快,数量也相对较多。
然而,随着时间的推移,巨噬细胞的吞噬速度逐渐减慢,吞噬的数量也逐渐减少。
这表明巨噬细胞在一段时间内能够高效地吞噬有害物质,但随着吞噬的进行,巨噬细胞的饱和度逐渐增加,导致吞噬速度下降。
此外,我们还发现了巨噬细胞对不同类型有害物质的吞噬能力存在差异。
在实验中,我们使用了荧光染料标记的细菌和细胞碎片作为巨噬细胞的吞噬目标。
观察结果显示,巨噬细胞对细菌的吞噬效果较好,吞噬数量较多,而对细胞碎片的吞噬效果相对较差。
这可能是因为细菌具有较小的体积和较强的运动能力,更容易被巨噬细胞捕获和吞噬。
而细胞碎片可能较大且较为静态,巨噬细胞需要更多的时间和能量来吞噬。
结论:通过本次实验,我们对巨噬细胞的吞噬能力有了更深入的了解。
一、实验目的1. 了解巨噬细胞的基本特性及其在免疫反应中的作用。
2. 观察和分析巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象。
3. 掌握显微镜下观察细胞吞噬作用的实验技术。
二、实验原理巨噬细胞是机体免疫系统中重要的细胞类型,具有强大的吞噬能力。
当巨噬细胞遇到抗原时,会通过吞噬作用将其捕获、消化并清除。
本实验以鸡红细胞作为抗原,观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程,从而了解巨噬细胞的吞噬功能。
三、实验材料与试剂1. 实验动物:健康小鼠(体重20-25g)2. 实验器材:解剖显微镜、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、剪刀、镊子、吸管等3. 实验试剂:生理盐水、鸡红细胞悬液、冷亚甲蓝染色液、无菌淀粉液四、实验步骤1. 小鼠腹腔巨噬细胞诱导:实验前3小时,将小鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml,诱导腹腔巨噬细胞渗出。
2. 鸡红细胞悬液制备:将鸡红细胞用生理盐水洗涤三次,制成红细胞悬液,浓度为1×10^9/L。
3. 腹腔巨噬细胞收集:将小鼠处死,打开腹腔,用生理盐水冲洗腹腔,收集腹腔液。
4. 巨噬细胞染色:取腹腔液1ml,加入1ml冷亚甲蓝染色液,混匀,染色5分钟。
5. 制片观察:取载玻片,滴加1滴腹腔液,盖上盖玻片,用解剖显微镜观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的形态学变化。
五、实验结果1. 在显微镜下观察到,巨噬细胞呈圆形或椭圆形,细胞质丰富,细胞核较大,呈蓝色。
2. 鸡红细胞呈圆形,直径约为7-8μm,呈红色。
3. 观察到部分巨噬细胞周围有红细胞聚集,说明巨噬细胞已经吞噬了鸡红细胞。
4. 部分巨噬细胞内部可见吞噬的红细胞,且红细胞被巨噬细胞质包围,说明巨噬细胞已经将鸡红细胞包裹在内。
六、实验分析1. 本实验观察到巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象,说明巨噬细胞具有吞噬能力。
2. 吞噬过程中,巨噬细胞通过质膜内陷形成吞噬泡,将鸡红细胞包裹在内,然后将其消化。
3. 吞噬作用是机体免疫系统的重要组成部分,有助于清除体内的病原体和衰老细胞。
巨噬细胞吞噬作用的观察实验报告一.实验目的1.通过小鼠腹腔巨噬细胞对异物吞噬作用的观察,了解巨噬细胞在非特异性免疫中的功能。
2.掌握小鼠等实验动物腹腔巨噬细胞采集和制片的方法。
3.学习小鼠腹腔注射的操作方法和步骤。
二.实验原理1.向小鼠腹腔内注射无菌淀粉肉汤,排异反应使小鼠产生大量巨噬细胞,且巨噬细胞吞噬淀粉肉汤后不会对细胞造成伤害,反而被“喂养”。
连续多天注射使小鼠腹腔内聚集大量巨噬细胞。
2.台盼蓝是一种生物染料,专一染色死细胞。
活细胞的细胞质膜对台盼蓝有不透过性。
巨噬细胞吞噬含有台盼蓝的淀粉肉汤后,可以消化其中的淀粉和蛋白质,但是不能消化其中的台盼蓝,因此台盼蓝会聚集在溶酶体中。
是一种溶酶体染色的方法。
3.当向小鼠腹腔中注射鸡红细胞时,鸡红细胞作为外源物质,会被小鼠细胞识别并吞噬,在适当的的时机,我们就有可以在显微镜下观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程三.实验材料及设备1.实验材料:a)连续2~3天向腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤的小鼠一只b)鸡红细胞悬液c)生理盐水2.实验设备:a)普通光学显微镜b)载玻片、盖玻片若干c)注射器d)染色皿若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等四.实验方法及步骤1.小鼠处理与巨噬细胞采集a)连续2-3天(每天一次)向小鼠腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤。
b)选择已注射淀粉肉汤3小时以上的小鼠一只。
c)一人控制住小鼠,露出腹部,另一人用注射器向小鼠腹腔中注射1ml鸡红细胞悬液。
按摩小鼠腹部。
d)20-30分钟后,再注射1-1.5ml生理盐水(0.9%NaCl)按摩小鼠腹部。
e)3分钟后,引颈法处死小鼠f)迅速在腹腔剪开一个不大的开口(注意要剪开腹部的肌肉层),用无针头的注射器吸取腹腔液。
g)在载玻片上滴2-3滴腹腔液,加上盖玻片,在显微镜下观察。
2.观察在不同倍数下观察样本,找到正在消化或者吞噬鸡红细胞的巨噬细胞。
注意避免玻片液体干涸。
五.实验结果小鼠红细胞巨噬细胞鸡红细胞已吞噬鸡红细胞的巨噬细胞图1小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞装片(100X物镜不染色)左上角示未知种类细胞100x物镜放大倍数,光镜下可见随机分布的不同种类的细胞。
巨噬细胞吞噬现象的实验观察一.实验目的:1.观察巨噬细胞吞噬全过程和意义。
2.掌握小鼠腹腔注射给药和颈椎脱臼处死方法。
二.实验原理吞噬细胞由骨髓干细胞分化生成,具有非特异性免疫功能。
当病原微生物或其他异物侵入机体时,能招引巨噬细胞,而巨噬细胞又有趋化性,能响应招引因子的招引,产生活跃的变形运动,主动向病原体或异物移动,在接触到病原体或异物时,即伸出伪足将之包围,并内吞入细胞,形成吞嗜体,继而细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡发生融合形成吞噬性溶酶体,通过其水解酶作用,将病原体杀死,消化分解,最后将不能消化的残渣排除细胞外。
三.实验用品1.器材:显微镜解剖盘剪刀镊子载玻片盖玻片注射器吸管2.试剂:A.0.85%生理盐水B.alsever溶液(葡萄糖2.05g 柠檬酸钠0.89g 柠檬酸0.05g 氯化钠0.42g 蒸馏水100ml)将alsever溶液ph调至7.2,高压灭菌10分钟,保存于4℃冰箱中。
C.0.4%台盼蓝染液D.4.0%淀粉肉汤(牛肉膏0.3g 蛋白胨1.0g 氯化钠0.5g 蒸馏水100ml 含台盼蓝染液)加热后加入可溶性淀粉6.0g,促使溶解,再煮沸灭菌,置4℃冰箱中保存,用时水浴融化,加入适量台盼蓝染液混匀,使其成蓝色。
3.材料:A.小白鼠B.1%鸡红细胞悬液(从健康鸡翼静脉采血1ml,放入盛有4mlalsever溶液瓶中,混匀置4℃冰箱中备用。
用时加0.85%生理盐水离心,洗涤两次,再用生理盐水配成1%浓度悬液。
)四.实验方法1.实验前一天给小白鼠腹腔注射6%淀粉肉汤1ml。
2.试验时,将注射过淀粉肉汤的小白鼠腹腔注射1%鸡红细胞悬液1ml,轻按小鼠腹部,使悬液分散。
3.二十分钟后,用颈椎脱臼法处死小鼠。
4.将小鼠置于解剖盘中,剪开腹部,把内脏推向一侧,用不装针头的注射器或吸管取腹腔液。
5.取一干净载玻片,滴一滴腹腔液,盖上盖玻片,置显微镜下观察。
五.实验结果10*100 图中椭圆形有核淡黄色细胞为鸡红细胞;较大的呈圆形或不规则细胞,内含蓝色颗粒的为巨噬细胞,仔细观察玻片,可见巨噬细胞吞噬红细胞的过程。
实验一巨噬细胞吞噬功能实验
1、【实验原理】
(1)巨噬细胞作为单核吞噬细胞系统的主要细胞,具有活跃的吞噬功能。
能清除体内抗原物质及变性的细胞,在特异性及非特异性免疫中均起重要作用。
MΦ受抗原刺激后活化,可使其吞噬功能明显增强。
(2)此实验采用体内法,即:
在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后,再给小鼠腹腔注射鸡红细胞30min 后处死小鼠,取出腹腔液,以冷美蓝染色,油镜下计数吞噬鸡红细胞的百分数,及观察巨噬细胞中内因被杀死而染为蓝色的鸡红细胞的形态、数目,以判断巨噬细胞中的杀伤能力,由此间接地测定机体的非特异免疫水平。
2、【实验步骤】
(1)试验前3d,小白鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml,诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。
(2)实验时,每只小鼠腹腔注射鸡红细胞液1ml,轻揉腹部,使红细胞在腹腔中分布均匀,利于吞噬
(3)30min后,将小鼠拉颈处死,固定,打开腹腔暴露肠管,用吸管取出腹腔液,均匀涂布于载玻片上,然后再滴一小滴
0.03%xx溶液,盖上盖玻片。
(4)低倍镜下找到观察区域后,换高倍镜下进行观察,计数
3、【实验结果】
4、【结果分析】
(1)如图所示,在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后,再给小鼠注射鸡红细胞后镜检腹腔液,可观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象,并且可以看到部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。
(2)镜下可见吞噬细胞核呈蓝色,被吞噬的鸡红细胞呈椭圆形,其胞浆呈红色而核被染成蓝色。
(3)由于未将腹腔液和冷美蓝溶液充分混合均匀,使得视野中出现大片深染区域。
总体实验结果较好,视野中央可见清晰的吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞。
5、【注意事项】
(1)涂片的薄厚要适当,否则影响计数。
(2)小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。
(3)如小鼠腹腔液过少,可注入适量生理盐水。
(4)剪开小鼠腹腔时应避免出血,否则将影响试验结果。
(5)被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化,时间过短未被吞噬,必须掌握好吞噬作用时间。
实验二双向琼脂扩散实验
1、【实验原理】
(1)可溶性抗原与相应抗体特异性结合,两者比例适当并有电解质存在及一定的温度条件下,经一定的时间,可形成肉眼可见的沉淀线/环的现象,称为沉淀反应。
(2)琼脂扩散是指为可溶性抗原与抗体在琼脂凝胶中所呈现的一种沉淀反应。
当对应的抗原、抗体在半固体琼脂终相遇,且二者比例适当时,便出现可见的白色沉淀线,这组沉淀线是一组抗原、抗体的特异性复合物。
当琼脂中有多组不同的抗原、抗体存在时,便各自依其扩散速度的差异,再适当的部位形成独立的沉淀线。
因此,琼脂扩散不仅用于疾病的诊断,更广泛地用于抗原成分的分析。
(3)双向琼脂扩散试验是定性实验。
将可溶性抗原与相应抗体分别加人琼脂板上的孔内,两者均可扩散,在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。
如
果不是相应的抗原与抗体,就不出现沉淀线。
本试验常用于分析抗原抗体的纯度及相互关系。
2、【实验步骤】
(1)制板:
将熔化的1%琼脂加在玻片上,3ml/板。
(2)打孔:
待xx凝固后,在板上打孔。
(3)加样:
在空中加入相应抗原、抗体。
(4)结果观察将琼脂板放入湿盒内置37c温箱中24小时后取出观察结果。
3、【实验结果】
4、【结果分析】
(1)如图所示,在中央孔与添加抗原1的孔之间出现沉淀线,有抗原抗体反应,为阳性反应,说明抗原1与抗体相对应。
中央孔与添加抗原2的孔之间没有沉淀线,说明抗原2与抗体之间不相对应。
(2)抗体与抗原发生扩散时,随扩散距离的增大浓度降低,在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。
当有沉淀线出现时,说明有抗原抗体反应。
5、【注意事项】
(1)加样时不要将琼脂划破,以免影响沉淀线的形成。
(2)反应时间要适宜,时间过长,沉淀线可解离而导致假阴性、不出现或不清楚。
(3)加样时不同浓度抗体和抗原不要混淆,影响试验结果。
(4)试验前应做预试验,确定抗体的稀释度。