2015版中国药典微生物限度解析

10ml；膜剂为100cm²；贵重药品、微量包
1.1 总则：
• 如供试品有抗菌活性，应尽可能去除或中和。供 试品检查时, 若使用了中和剂或灭活剂，应确认 其有效性及对微生物无毒性。
• 供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其 对微生物无毒性以及与所使用中和剂或灭活剂的 相容性。
1.2计数方法：
• 平皿法 • 薄膜过滤法 • 最可能数法（Most-Probable-Number Method，
1.3.2计数培养基适用性检查【15版】
需氧菌总数 计数
霉菌和酵母 菌总数计数
金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌
胰酪大豆胨琼脂培养基 或 胰酪大豆胨液体培养基
白色念珠菌
胰酪大豆胨琼脂培养基
黑曲霉
白色念珠菌
沙氏葡萄糖琼脂培养基
黑曲霉
30～35 ℃ 不超过3天
30～35 ℃ 不超过5天 20～25 ℃ 不超过5天
30～35 ℃ 不超过3天
20～25 ℃ 不超过5天
每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿；接种量50~100cfu ； 同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 结果判定：
若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落 平均数的70 %，且菌落形态大小与对照培养基上的菌 落一致，判该培养基的适用性检查符合规定。
微生物限度检查法
《中国药典》2015年版修订后将分为三个附录： – 1、非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 – 2、非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 – 3、非无菌药品微生物限度标准
1.非无菌产品微生物限度检查： ----微生物计数法
1.1 总则：环境、要求 1.2 计数方法：平皿法、薄膜过滤法、最可能数法
菌液制备后若在室温下放置，应在2 小时内使用；若保存在2 ～8℃，可在24小时内使用。稳定的黑曲霉孢子悬液可保存在2ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ～8℃，在验证过的贮存期内使用。
1.3.2计数培养基适用性检查【10版】
细菌计数
霉菌及酵母 菌计数
金黄色葡萄球菌 营养琼脂培养基
铜绿假单胞菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌 黑曲霉
玫瑰红钠琼脂培养基
沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培
养基，20～25℃，2～3 天 【10版：改良马丁（琼脂）培养基，23~28 ℃ ，24~48h】
黑曲霉 〔CMCC(F) 98 003〕
沙氏葡萄糖琼脂培养基或马铃薯葡萄糖琼脂
培养基 ，20～25℃，5～7天 ，或直接获得 丰富孢子 【10版：改良马丁琼脂斜面培养基，23~28 ℃ ，5~7天】
1.3 计数培养基适用性检查和供试品计 数方法适用性试验
• 1.3.1菌液制备及使用 • 1.3.2计数培养基适用性检查 • 1.3.3计数方法适用性试验
1.3 计数培养基适用性检查和供试品计 数方法适用性试验
• 1.3.1菌液制备及使用 – 菌种 • 试验用菌株的传代次数不得超过5 代 （从菌种保藏中心获得的干燥菌种 为第0 代），并采用适宜的菌种保藏 技术进行保存，以保证试验菌株的 生物学特性。
简称MPN 法）。
– MPN 法用于微生物计数时精确度较差，但对于某些微 生物污染量很小的供试品，MPN 法可能是更适合的方 法。
• 供试品检查时, 应根据供试品理化特性和微生物限度标准 等因素选择计数方法，所选的方法必须具备检测充足样品 量的能力，以保证所获得的试验结果能够判断供试品是否 符合规定。所选方法的适用性须经确认。
1.3.1菌液制备及使用
试验菌株
试验菌液的制备
金黄色葡萄球菌 〔CMCC(B) 26 003)〕
铜绿假单胞菌 〔CMCC（B)10 104〕
枯草芽孢杆菌 〔CMCC(B) 63 501〕
胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培 养基
【10版：营养肉汤或营养琼脂培养基】 30～35℃，18～24小时
白色念珠菌 〔CMCC(F) 98 001〕
（MPN法） 1.3 计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用
性试验：菌种及菌液制备、培养基适用性检查 、计数方法适用性试验。 1.4 供试品检查：检验量、供试品检查 1.5 结果判断 1.6 稀释液、冲洗液及培养基
1.1 总则：
• 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温 细菌和真菌的计数。
• 当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否 符合规定的微生物限度标准时，应按规定进行检 验，包括样品的取样量和结果的判断等。除另有 规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。
每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿；接种量不大于100cfu ； 同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 结果判定：
被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平 均数的比值应在0.5-2 范围内，且菌落形态大小应与对 照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培 养基管比较，试验菌应生长良好。
1.3.3计数方法适用性试验
1. 供试液制备 2. 接种和稀释 3. 抗菌活性的去除与灭活 4. 供试品中微生物的回收
– 平皿法 – 薄膜过滤法 – 最可能数法（MPN 法）
5. 结果判断
1.4 供试品检查
• 1.4.1检验量
– 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml
或cm²）。
– 除另有规定外,一般供试品的检验量为10g 或
• 本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动 检测方法，但必须证明替代方法等效于药典规定 的检查方法。
1.1 总则：
• 环境： – 微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要 求。(在不低于GMP 现行版要求的D 级洁净环境 、局部洁净度不低于B 级的单向流空气区域内进 行)【10版：在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内】。 – 检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染 ，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检 出。 – 单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监 测。
1.3 计数培养基适用性检查和供试品计 数方法适用性试验
• 供试品微生物计数中所使用的培养基应进 行适用性检查。
• 供试品的微生物计数方法应进行方法适用 性试验【10版：方法验证】， 以确认所 采用的方法适合于该产品的微生物计数。
• 若检验程序或产品发生变化可能影响检验 结果时， 计数方法应重新进行适用性试 验。