PCR实验室管理制度-PCR实验室检查指南合规版
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1.目的:
建立PCR实验室分区管理规定,保证检验结果的真实性。
2.范围:
适用于PCR实验室管理。
3.职责:
质量部。
4. 工作流程:
4.1 实验室按照功能分以下区域:
4.1.1试剂准备区(体系室):为PCR体系配制区域。
4.1.2标本制备区(模板室):为模板DNA制备、扩增体系模板添加的区域。
4.1.3扩增区(扩增室):为PCR模板进行扩增区域。
4.1.4扩增产物分析区(产物分析室):为PCR模板进行扩增、电泳检测或扩增产物分析的区域。本区域为PCR产物污染区。
4.2实验室要求:
4.2.1实验室着装要求
4.2.1.1试剂准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区,四个区域配备有不同颜色的防静电实验服和专用鞋套。进入实验室区域后,需更换对应区域的实验服及鞋套。
4.2.1.2各区域工作服及鞋套不能混穿。
4.2.1.3离开当前实验区域时,应在黄色警戒线内脱掉该区实验服和鞋套,再进入其他区域,更换相应区域的工作服和鞋套。
4.2.2各实验室内试验仪器、耗材、移液器使用规则:
4.2.2.1在各操作间配有专用仪器、耗材、移液器,绝不能混用以避免污染。
4.2.2.2每个房间都有功能标识,根据房间功能进行实验,不能混用。如试剂准备区不能用于模板DNA制备。
4.3 日常清洁要求:
4.3.1 各个实验室应配备专用的清洁设施,不得混用。
4.3.2 实验员每月用1mol/L盐酸(50ml 12mol/L盐酸(即浓盐酸)和550ml纯化水混合)擦拭操作台、门把手及移液器、离心机等设备外表面,30分钟后用清水擦拭。注意金属表面不能用本试剂进行擦拭,可用水代替反复擦洗。
4.3.3每个房间实验服在相应房间洗手盆中清洁,在相应房间自然晾干。各区域服装不能混洗,洗涤时以单件形式进行洗涤。
4.3.4 实验室紫外消毒要求:
实验室使用频率大于1次/月,则每周用屋顶紫外灯过夜照射1次,照射时间一般在15~16小时;如实验室使用频率小于1次/月,可在使用前再进行此操作。
4.4 污染源监控:每半年监控一次。
4.4.1 监控方法:对各实验室设施进行取样,将所取样品等同于一份临床样本,不同产品污染源检测应按照相应的产品“说明书”进行体系配制、加样、扩增等操作,依据扩增结果判断是否存在污染。
4.4.2 取样方法:准备22个装有1.0ml灭菌水的1.5ml离心管,将灭菌棉签沾湿后,涂抹采样部位,面积在20cm2左右,将棉签放回盛有无菌水的离心管中,折断棉签木棒部分,扣好管盖待检。
4.4.3取样部位:试剂准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。
试剂准备区:门把手1点、台面1点、超净工作台2点、移液器1点、冰箱门把手1点、地面1点;标本制备区:门把手1点、台面1点、生物安全柜2点、移液器1点、冰箱门把手1点、地面1点;扩增区:门把手1点、台面1点、PCR仪表面1点、地面1点;扩增产物分析区:门把手1点、台面1点、电泳仪表面1点、地面1点。共取样22个点。
4.4.4 监测结果判定标准:
PCR类:依照现有产品检验操作规程进行操作,产品中的相应阳性对照有特异扩增,产品中的相应阴性对照无扩增,取样点样品无扩增,则判定试剂准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区无污染,检验结果可信;取样点有扩增则证明相应区域有污染,需对相应部位进行清洁(用1mol/L盐酸擦拭),清洁后再次取样进行检验操作,取样点样品无扩增则证明实验室无污染。
4.5实验操作注意事项
4.5.1操作过程中应工作服、帽、鞋、手套等穿戴齐全,各区物品均为专用,不得交叉
使用,避免污染。
4.5.2实验过程中若出现标本及试剂污染工作台或移液器,应及时用酒精处理。实验结束后应立即清洁工作台,并定期对实验台及各种实验用品进行消毒。
4.5.3实验过程中的废弃样本及实验废弃物,需作为医疗废物统一回收处理。
4.6实验室日常管理按照《质检组实验室管理制度》《实验室安全管理制度》执行。
4.7 实验室压力要求:
4.7.1 实验室4个功能房间均为直排负压。
4.7.2 PCR检验实验室的空气流向应当按照试剂准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区方向进行,4个区域均为直排负压,压差梯度逐级增加,并安装压差监测装置,以有效证明空气流向,实验室对缓冲间压差不低于5帕。实验室直排风扇开启的顺序是扩增产物分析区→扩增区→标本制备区→试剂准备区,关闭直排风扇顺序则反之进行,以防止扩增产物顺空气气流进入扩增前的区域。空气流向为单向,禁止下游污染上游。
4.7.3 每天上午填写1次《PCR实验室压差记录》。
5. 相关文件:
《质检组实验室管理制度》
《实验室安全管理制度》
6. 相关记录:
《QF-PCR实验室污染监控记录》
《PCR实验室清洁记录》
《PCR实验室清洁剂配制记录》
《PCR实验室压差记录》