醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质

四、结果 将电泳图谱贴在实验报告中。
试剂和器材
1. 试剂： （1）血清：人血清或动物血清； （2）pH8.6巴比妥-巴比妥钠缓冲液：称取巴比妥钠 12.76g和巴比妥1.66g，溶于蒸溜水，定容至1000mL 。 （3）染色液：称取氨基黑10B 0.5g，加蒸溜水40mL， 甲醇50mL和冰醋酸10mL，混匀即可。 （4）漂洗液：取95％乙醇45mL，冰醋酸5mL和蒸溜水 50mL ，混匀即可。 2. 器材 ：
实验四 醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质
一、目的
1、了解电泳分离蛋白质的一般原理。 2、掌握醋酸纤维薄膜电泳分离蛋白质技术。
二、原理
电泳是指带电粒子在电场中向着与其电性 相反的电极移动的现象。蛋白质是两性电解 质。在pH小于其等电点的溶液中，蛋白质为 阳离子，在电场中向负极移动。在pH大于其
等电点的溶液中，蛋白质为阴离子，在电场中 向正极移动。血清中含有多种蛋白质，它们所 具有的可解离基团不同，在同一pH值的缓冲 液中所带净电荷不同，因此在电场中移动的速 度也就不同，故可利用电泳法将它们分离。
正常人血清醋酸纤维薄膜电泳示意图 1为清蛋白，2，3，4，5分别α1-，α2-，β-及γ球蛋白，6为点样原点 。
三、操作
1、准备： （1）浸泡：取8cm2cm醋酸纤维薄膜条一 张，浸入pH8.6的巴比妥-巴比妥钠缓冲液中， 浸泡约30min，完全浸透后，用镊子轻轻取 出，夹在滤纸中吸去多余的缓冲液，然后无 光泽面向上平放在干净滤纸上。 （ 2 ）点样：用玻棒醮取少许血清，均匀地 涂在载玻片的一端截面上（玻片宽度应小于 膜条），然后在距膜条一端1.5cm处轻轻落 下并随即提起。加样应力求均匀（可先在普 通滤纸上练习点样几次），要求在膜条上点 上细条状的血清样品。
本实验以醋酸纤维薄膜作为支持物，于浸 有缓冲液的薄膜一端加微量血清，膜两端连 接于缓冲液。所用缓冲液的pH为8.6，大于 血清中各种蛋白质的等电点。因此，各种蛋 白质皆带负电荷，在电场中向正极方向泳
动，因泳动速度不同而被分离。从正极端起， 依次为清蛋白、α1- 、α2- 、β-和γ-球蛋白， 将蛋白质染色后，可按染色区带位置进行定 性观察，也可对各条色带进行定量测定。
1.5cm
6.5cm
（－）
（＋）
（3）上槽：将点好样的膜条，无光泽面向 下，平悬于电泳槽支架的滤纸桥上，两端紧 贴在滤纸桥上，点样端置于负极，（把膜条 摆平拉直后）盖好电泳槽盖，平衡Fra Baidu bibliotek0min。
2．电泳： 待膜条浸润后，接通电源，调节电压
至160V，电泳45～60min。 3、染色与漂洗：
电泳完毕后，切断电源。用镊子取出膜条浸 于氨基黑10B染色液中浸染5～10min。取出后 用漂洗液浸洗4～5次，每次约5min，直至背 景无色为止，再浸于蒸馏水中，最后将膜条夹 于滤纸中吸干，至此可得电泳图谱。
醋酸纤维薄膜、滤纸、电泳仪、电泳槽、小镊子（无 齿）、烧杯、量筒、载玻片、培养皿。