最新ELISA实验原理及操作
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ELISA实验原理及操作
ELISA检测抗体
Ag + Ab1 ↔ Ag-Ab1 Ag-Ab1 + Ab2* ↔ Ag-Ab1-Ab2*
ELISA实验原理及操作
Hale Waihona Puke Baidu
ELISA实验原理及操作
竞争 ELISA 检测 抗原
ELISA实验原理及操作
固定OD值
ELISA实验原理及操作
实验材料：
• 羊抗人血清白蛋白抗体（一抗） • 已知含量的人血清白蛋白（作标准曲线） • 待检人血清白蛋白 • 辣根过氧化物酶标记的驴抗羊抗体（二抗） • 包被液CBS：PH9.6，0.05mol/L碳酸盐缓冲
液 • 洗板液或稀释液：PH7.4，0.01mol/L PBS • 底物溶液：OPD-H2O2 • 终止液：2mol/L H2S04 • 酶标反应板（一条/人）
ELISA实验原理及操作
三、操作步骤
1. 包被抗原
抗原用包被液（CBS）稀释至合适浓度，加入到酶标 板中，100μl/孔，放入湿盒中，4℃过夜。
assay）
是一类常用的免疫酶技术。是将已知的 抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗 原抗体反应在固相表面进行。
常用的酶：辣根过氧化物酶(HRP) 碱性磷酸酶（AP）。
ELISA实验原理及操作
ELISA检测抗原
Ag + Ab* ↔ Ag-Ab*
ELISA实验原理及操作
ELISA检测抗体
Ab + Ag* ↔ Ab-Ag*
6. 终止反应
待出现明显颜色反应（或一定时间）后，加入终止液， 50ul/孔以终止反应。
7. 结果测定
用酶标仪在492nm波长下测定OD值。 以标准抗原的浓度为横坐标，相应的OD值为纵坐标绘 制标准曲线，计算未知抗原的浓度。
ELISA实验原理及操作
四、思考题
1. 在定量测定抗原时，直接ELISA与竞争ELISA有何 区别？从理论上分析一下各自的优缺点。
实验五 免疫酶技术及其应用 ——ELISA
ELISA实验原理及操作
一、实验目的
A. 了解和掌握免疫酶技术的测定原理。 B. 掌握酶联免疫吸附测定技术的操作步骤，学会利
用竞争ELISA的方法，定量测定抗体或抗原。 C. 了解免疫酶技术在生物学和医学研究的重要意义
及应用价值。
ELISA实验原理及操作
二、实验原理
待测抗原： 取50μl未知浓度的抗原按照同上操作。 250ul抗体
100ul 标准抗原
50ul
50ul
稀释板
50ul 稀释液
待测抗原 PBS
50ul
50ul
ELISA实验原理及操3作7℃，30 min
3. 与固相抗原的竞争结合
取稀释板中预孵育的抗原抗体混合液100μl，加入 酶标板的抗原孔中，放入37℃恒温培养箱中60 min。洗 板3次。
抗原100ul/孔
酶标板
湿盒中，4℃过夜
次日，用洗板液洗板3次（将洗板液加入每孔，1min后 倾去），以洗去未包被的游离抗原。
ELISA实验原理及操作
2. 抗原与抗体的预孵育
3. 制作标准曲线：
在稀释板中，用PBS倍比稀释标准抗原，每种浓度 的抗原最终为50μl，分别在各抗原孔中加入250μl一定浓 度的抗体，放入37℃恒温培养箱中30 min。
稀释板
100ul
37℃，60 min ELISA洗实验板原3理次及操作
酶标板
4. 酶标二抗的结合
酶标抗体用稀释液稀释至工作浓度后，加入每孔中， 100ul/孔，置湿盒中放37℃ 30min。洗板3次。
5. 加入底物显色液（用前再配制，并置棕色瓶内）
每孔加入底物显色液，100ul/孔，湿盒中37℃保温一定 时间。
2. 在实际操作中，你认为有哪些因素可以影响定量 检测的结果？（操作中应注意的问题）
3. 实验设计题：如何用竞争ELISA来定量检测抗体？
ELISA实验原理及操作
ELISA实验原理及操作
• 免疫酶技术(enzyme immunoassay)：
是将抗原和抗体的特异性免疫反应与酶 的催化反应相结合而建立的一种免疫检测 技术。
就是利用酶标记抗体或抗原，以检测 相应抗原或抗体的一种免疫学标记技术。
ELISA实验原理及操作
• 酶联免疫吸附试验ELISA （enzyme linked immunosorbent
• 免疫标记技术（immunolabelling technique）: 是指用荧光素、放射性同位素、酶、发光剂或
电子致密物质等作为示踪剂，标记抗体或抗原进行 的抗原抗体反应。
特点：高度灵敏、特异、快速，定性、定量、定位 分类：免疫酶技术、免疫荧光技术、放射免疫技术、 免疫电镜技术、免疫胶体金技术和发光免疫测定。
ELISA检测抗体
Ag + Ab1 ↔ Ag-Ab1 Ag-Ab1 + Ab2* ↔ Ag-Ab1-Ab2*
ELISA实验原理及操作
Hale Waihona Puke Baidu
ELISA实验原理及操作
竞争 ELISA 检测 抗原
ELISA实验原理及操作
固定OD值
ELISA实验原理及操作
实验材料：
• 羊抗人血清白蛋白抗体（一抗） • 已知含量的人血清白蛋白（作标准曲线） • 待检人血清白蛋白 • 辣根过氧化物酶标记的驴抗羊抗体（二抗） • 包被液CBS：PH9.6，0.05mol/L碳酸盐缓冲
液 • 洗板液或稀释液：PH7.4，0.01mol/L PBS • 底物溶液：OPD-H2O2 • 终止液：2mol/L H2S04 • 酶标反应板（一条/人）
ELISA实验原理及操作
三、操作步骤
1. 包被抗原
抗原用包被液（CBS）稀释至合适浓度，加入到酶标 板中，100μl/孔，放入湿盒中，4℃过夜。
assay）
是一类常用的免疫酶技术。是将已知的 抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗 原抗体反应在固相表面进行。
常用的酶：辣根过氧化物酶(HRP) 碱性磷酸酶（AP）。
ELISA实验原理及操作
ELISA检测抗原
Ag + Ab* ↔ Ag-Ab*
ELISA实验原理及操作
ELISA检测抗体
Ab + Ag* ↔ Ab-Ag*
6. 终止反应
待出现明显颜色反应（或一定时间）后，加入终止液， 50ul/孔以终止反应。
7. 结果测定
用酶标仪在492nm波长下测定OD值。 以标准抗原的浓度为横坐标，相应的OD值为纵坐标绘 制标准曲线，计算未知抗原的浓度。
ELISA实验原理及操作
四、思考题
1. 在定量测定抗原时，直接ELISA与竞争ELISA有何 区别？从理论上分析一下各自的优缺点。
实验五 免疫酶技术及其应用 ——ELISA
ELISA实验原理及操作
一、实验目的
A. 了解和掌握免疫酶技术的测定原理。 B. 掌握酶联免疫吸附测定技术的操作步骤，学会利
用竞争ELISA的方法，定量测定抗体或抗原。 C. 了解免疫酶技术在生物学和医学研究的重要意义
及应用价值。
ELISA实验原理及操作
二、实验原理
待测抗原： 取50μl未知浓度的抗原按照同上操作。 250ul抗体
100ul 标准抗原
50ul
50ul
稀释板
50ul 稀释液
待测抗原 PBS
50ul
50ul
ELISA实验原理及操3作7℃，30 min
3. 与固相抗原的竞争结合
取稀释板中预孵育的抗原抗体混合液100μl，加入 酶标板的抗原孔中，放入37℃恒温培养箱中60 min。洗 板3次。
抗原100ul/孔
酶标板
湿盒中，4℃过夜
次日，用洗板液洗板3次（将洗板液加入每孔，1min后 倾去），以洗去未包被的游离抗原。
ELISA实验原理及操作
2. 抗原与抗体的预孵育
3. 制作标准曲线：
在稀释板中，用PBS倍比稀释标准抗原，每种浓度 的抗原最终为50μl，分别在各抗原孔中加入250μl一定浓 度的抗体，放入37℃恒温培养箱中30 min。
稀释板
100ul
37℃，60 min ELISA洗实验板原3理次及操作
酶标板
4. 酶标二抗的结合
酶标抗体用稀释液稀释至工作浓度后，加入每孔中， 100ul/孔，置湿盒中放37℃ 30min。洗板3次。
5. 加入底物显色液（用前再配制，并置棕色瓶内）
每孔加入底物显色液，100ul/孔，湿盒中37℃保温一定 时间。
2. 在实际操作中，你认为有哪些因素可以影响定量 检测的结果？（操作中应注意的问题）
3. 实验设计题：如何用竞争ELISA来定量检测抗体？
ELISA实验原理及操作
ELISA实验原理及操作
• 免疫酶技术(enzyme immunoassay)：
是将抗原和抗体的特异性免疫反应与酶 的催化反应相结合而建立的一种免疫检测 技术。
就是利用酶标记抗体或抗原，以检测 相应抗原或抗体的一种免疫学标记技术。
ELISA实验原理及操作
• 酶联免疫吸附试验ELISA （enzyme linked immunosorbent
• 免疫标记技术（immunolabelling technique）: 是指用荧光素、放射性同位素、酶、发光剂或
电子致密物质等作为示踪剂，标记抗体或抗原进行 的抗原抗体反应。
特点：高度灵敏、特异、快速，定性、定量、定位 分类：免疫酶技术、免疫荧光技术、放射免疫技术、 免疫电镜技术、免疫胶体金技术和发光免疫测定。