酵母菌SD-URA培养基

1. LB培养基：10 g/L胰蛋白胨(进口)，5 g/L酵母提取物(进口)，10 g/L NaCl。

若配制固体培养基，加入15 g琼脂粉；
2. YPD培养基：22 g/L的一水合葡萄糖，20 g/L胰蛋白胨(进口)，10 g/L酵母提取物(进口)。

若配制固体培养基，加入20 g琼脂粉；
3. SC-Ura培养基：22 g/L含一水合葡萄糖，6.7 g/L YNB（无氨基酸酵母氮源），1.224g/L 氨基酸粉末（除Leu , Trp , His , Ura, Ade, Lys, Met以外的），配制相应缺陷型则补加其他7种氨基酸。

4. YPX 培养基：蛋白胨，20 g/L；酵母粉，10 g/L；木糖，20 g/L或50 g/L。

5. YPD+G418：G418：1ml/L
Leu（亮氨酸）0.38 g/L，
Ura（尿嘧啶）0.076 g/L，
100xHis（组氨酸）7.6g/L，加入10mL/L
100xTrp（色氨酸）7.6g/L, 加入10mL/L
100xAde（鸟嘌呤）7.6g/L 加入10mL/L
100xLys（赖氨酸）7.6g/L 加入10mL/L
100xMet（甲硫氨酸、蛋氨酸）7.6g/L 加入10mL/L
加入碱液调节pH至6.10左右。

若配制固体培养基，加入20 g琼脂粉；
全部氨基酸：。

酵母表达过程中用到的培养基毕赤酵母表达的培养基配制［5］2.1 LB（Luria－Bertani）培养基：Trypton l％Yeast Extract 0.5％NaCl l％PH 7.0制作平板时加入2％琼脂粉。

121℃高压灭菌20min。

可于室温保存。

用于培养pPICZαA 原核宿主菌TOP10F’时可加入Zeocin 25ug / ml。

2.2 LLB（Low Salt LB）培养基：Trypton l％Yeast Extract 0.5％NaCl 0.5％PH 7.0制作平板时加入2％琼脂粉。

121℃高压灭菌20min。

可于室温保存数月。

用于培养pPICZαA原核宿主菌TOP10F’时，加入Zeocin 25ug / ml，可以4℃条件下保存1～2周。

2.3 YPD （又称YEPD）Yeast Extract Peptone Dextrose Medium，（Yeast Extract Peptone Dextrose Medium，酵母浸出粉/胰蛋白胨/右旋葡萄糖培养基）Trypton 2%dextrose (glucose) 2%+agar 2%+Zeocin 100 μg/ml液体YPD培养基可常温保存；琼脂YPD平板在4℃可保存几个月。

加入Zeocin 100ug / ml，成为YPDZ培养基，可以4℃条件下保存1～2周。

2.4 YPDS + Zeocin 培养基（Yeast Extract Peptone Dextrose Medium）：yeast extract 1%peptone 2%dextrose (glucose) 2%sorbitol （山梨醇）1 M+agar 2%+ Zeocin 100 μg/ml不管是液体YPDS培养基，还是YPDS + Zeocin 培养基，都必须存放4℃条件下，有效期1～2周。

2.5 MGYMinimal Glycerol Medium （最小甘油培养基）（34%YNB；1%甘油；4*10-5%生物素）。

酵母双杂（Yeast two-hybrid）实验操作手册和注意事项一. 酵母双杂的原理1989年，Song和Field建立了第一个基于酵母的细胞内检测蛋白间相互作用的遗传系统。

很多真核生物的位点特异转录激活因子通常具有两个可分割开的结构域，即DNA特异结合域（DNA-binding domain，BD）与转录激活域（Transcriptional activation domain ，AD）。

这两个结构域各具功能，互不影响。

但一个完整的激活特定基因表达的激活因子必须同时含有这两个结构域,否则无法完成激活功能。

不同来源激活因子的BD区与AD结合后则特异地激活被BD结合的基因表达。

基于这个原理，可将两个待测蛋白分别与这两个结构域建成融合蛋白，并共表达于同一个酵母细胞内。

如果两个待测蛋白间能发生相互作用，就会通过待测蛋白的桥梁作用使AD与BD形成一个完整的转录激活因子并激活相应的报告基因表达。

通过对报告基因表型的测定可以很容易地知道待测蛋白分子间是否发生了相互作用。

酵母双杂交系统由三个部分组成：(1)与BD融合的蛋白表达载体，被表达的蛋白称诱饵蛋白(bait)。

(2)与AD融合的蛋白表达载体，被其表达的蛋白称靶蛋白(prey)。

(3)带有一个或多个报告基因的宿主菌株。

常用的报告基因有HIS3，URA3，LacZ和ADE2等。

而菌株则具有相应的缺陷型。

双杂交质粒上分别带有不同的抗性基因和营养标记基因。

这些有利于实验后期杂交质粒的鉴定与分离。

根据目前通用的系统中BD来源的不同主要分为GAL4系统和LexA系统。

后者因其BD来源于原核生物，在真核生物内缺少同源性，因此可以减少假阳性的出现。

二.所用的载体及相关信息1. pGBKT7载体的图谱和相关信息The pGBKT7 vector expresses proteins fused to amino acids 1–147 of the GAL4 DNA binding domain (DNA-BD). In yeast, fusion proteins are expressed at high levels from the constitutive ADH1promoter (PADH1); transcription is terminated by the T7 and ADH1 transcription termination signals(TT7 & ADH1). pGBKT7 also contains the T7 promoter, a c-Myc epitope tag, and a MCS. pGBKT7replicates autonomously in both E. coli and S. cerevisiae from the pUC and 2 m ori, respectively. Thevector carries the Kan r for selection in E. coli and the TRP1 nutritional marker for selection in yeast.Yeast strains containing pGBKT7 exhibit a higher transformation efficiency than strains carrying other DNA-BD domain vectors (1).b. pGADT7载体的图谱和相关信息pGADT7-T encodes a fusion of the SV40 large T-antigen (a.a. 86–708) and the GAL4 AD (a.a. 768–881). The SV40 large T DNA (GenBank LocusSV4CG) was derived from a plasmid referenced in Li & Fields (1993) and was cloned into pGADT7 using the EcoR I and Xho I sites. pGADT7-T has not been sequenced.三．实验主要流程A.需要准备的药品和设备1.两种酵母菌种(AH109,Y187)2.酵母培养所需的药品: Yeast nitrogen base without amino acidsAgar (for plates only)sterile 10×Dropout Solution单缺-T,-L(clontech公司)二缺-T/-L (clontech公司)四缺-T/-L/-Ade/-His(clontech公司)3.酵母转化所需的药品: 10×TE buffer10×LiAc40%PEGcarrier DNA4.酵母显色所需要的药品: x- -GAL5.其他仪器设备: 30℃恒温培养箱30℃摇床.水浴锅分光光度计B．DNA-BD和DN-AD fusion protein 载体的分别构建。

pGBKT7和pGADT7不要同时转入细胞，要先转入一个，平板培养，挑单菌落做液体培养，再转入另一个质粒，同时转入两个质粒的效率太低。

我做的时候转化率很高，从来没有出现过问题，转入第一个质粒（pGBKT7）通常在SD-Trp平板上可以有3000-4000个菌落，再转入pGADT7后，在双选择平板SD-Trp-Leu上至少也可以收获400-500个菌落。

需要注意的是，细胞转入pGBKT7后，在-Trp上挑选单菌落做液体培养时，不要用YPD培养液，要用SD-Trp培养液，这样才可以使转化的细胞充分生长。

转化实验的条件也很重要，如果你觉得这中间有什么不放心，你可以把protocol发给我看看。

我这里AH109长得很好，但实验室在国外，估计没法给你。

另外，你说AH109培养不好，是在什么选择平板上？在转完两个质粒以后做实验筛选时，应该先做LacZ和MEL1的显色，再做HIS3，最后做ADE2（因为ADE2的选择是最stringent 的）。

还有什么问题可以继续问我。

1.YPDA配制方法如下：先称好Yeast Extract 和Tryptone ，各10g/L 和20g/L ，加水885ml/L另外称取葡萄糖20g/L，放入另一个容器内，（如果量不多，也可以用50ml离心管）加水定容至100ml。

以上两个瓶子同时灭菌：115摄氏度，20min 。

灭菌完后，再混合。

最后加入已经过滤除菌的0.2％的ADE储液，15ml/L 。

121° 15min-80°取菌种，划线，30° 培养3天, 表面光滑而湿润，把平板用封口膜封好，4°冰箱保存，防止霉菌污染。

2.设置阴性对照最好用空载体，因为pGBKT7-Lam+pGADT7-T组成的阴性对照，在SD\-Trp-Leu-His 板上是能够生长的，但生长速度要比阳性对照慢好多。

而Y187或AH109空菌株，在SD\-Trp-Leu-His 板上不能生长，这说明，阴性对照在三缺板上有背景生长。

酵母菌的培养和观察目的认识酵母菌的形态特征，了解培养酵母菌的方法。

实验前的思考人类认识和利用酵母菌的历史悠久，早在史前时期，先人们就学会酿酒。

约在6000年前，就发明发面的方法。

直到十九世纪有了显微镜，人们才窥探到醉母菌的真面目。

对酵母菌做纯系培养分类研究的是与巴斯德同时代的丹麦人汉斯，他是为寻求酿造高品质啤酒的途径才去深入研究酵母菌的。

材料器具甜酒酿汁液，新鲜酵母，豆芽；显微镜，载玻片，盖玻皮，玻璃棒，镊子，滴管，吸水纸，酒精灯，石棉网，火柴，漏斗架，玻璃斗，量杯，三角烧瓶，烧杯，天平，量筒，棉絮；蔗糖，乳酸，碘液。

步骤1．观察酵母菌（1）用滴管从甜酒酿的汁液中吸取一滴汁液，滴在载玻片上，用针摊开，盖上盖玻片，在低倍镜下就能清楚地看到甜酒酿的汁液中悬浮着无数酵母菌。

再换高倍镜仔细观察一个酵母菌，可以看到酵母菌是椭圆形的单个细胞，细胞中有许多小颗粒，也有几个大的液泡（图示）。

有的酵母菌的一端长出大小不同的突起，这是酵母菌的芽体。

芽体成长脱落，就成为新的个体，有的芽体在从母体脱落前又长出突起。

这种繁殖方法叫出芽繁殖。

（2）在盖玻片一边加一滴碘液，从另一边用吸水纸把染液引入盖玻片下。

不久就能看到被染成棕褐色的细胞核和变成蓝紫色的淀粉粒。

2．培养酵母菌（1）用蔗糖液培养在盛有100毫升的三角烧瓶里加5克蔗糖，煮沸。

等到溶液稍稍冷却，加一小块鲜酵母，用玻璃棒搅拌均匀；再用棉絮塞紧瓶口。

然后把烧瓶放在25～30℃的温暖地方，数小时后就可见到溶液里有气泡产生，并散发出酒味。

这是因为酵母菌正在把糖分解成乙醇和二氧化碳。

（2）二三天后吸取溶液在显微镜下观察，就可看到已培养出大量酵母菌。

注意事项1．观察酵母菌时，视野里杂质较多，有淀粉粒、半分解的淀粉团块、曲霉孢子和其它杂菌等等，只要掌握住酵母菌的形状和体内具有液泡，尤其是染色后体内具有褐色的核和蓝色的淀粉粒这些特点，就可以跟其它杂菌区分开来。

2．发酵在缺氧的环境里仍能良好地进行，不必为了增加氧气去搅拌已放入菌种的培养液。

LexA酵母双杂交系统简介一、LexA酵母双杂交系统的设计原理报告质粒p8op-LacZ的GAL4 UAS编码序列被完全去除，因此在缺乏LexA融合激活剂的情况下，报告基因LacZ的转录活性为零，该基因的筛选标志为URA3，可以作为有自主复制能力的质粒存在于酵母EGY48菌株中，也可以被整合到EGY48基因组DNA上。

质粒pLexA的筛选标志为HIS3，在双杂交系统中用于表达DNA-BD(202个氨基酸残基组成的LexA蛋白)与目标蛋白(钓饵，Bait)的融合蛋白，该融合体的表达受酵母强启动子ADH1的调控，选择与报告基因的操纵子LexA×8结合。

质粒pB42AD的筛选标志为TRP1，在其供外源基因插入的多克隆位点(EcoR I与Xho I)上游，含有SV40核定位(SV40 nuclear localization)、HA(血凝素)及AD(来自于的88个氨基酸残基组成的B42蛋白)等几种编码序列，共同组成可以启动报告基因转录表达的激活成份。

在酵母EGY48的基因组中还整合有另一个报告基因Leu，它与LacZ报告基因具有相同的操纵子-LexA，但两者启动子不同。

根据双杂交系统的原理，如果某一复合物同时具有DNA-BD和AD的活性，即可激活报告基因的转录和表达。

分别将待测蛋白X、Y的编码序列插入pLexA质粒载体和pB42AD质粒载体的多克隆位点中，然后共同转入含有报告基因的酵母菌株，如果蛋白X与Y能相互作用，则启动报告基因的转录和表达，通过检测报告基因的表达情况，就可以间接反映蛋白X、Y是否具有相互作用以及作用的强弱。

如果将蛋白Y换为取自组织或血液的cDNA文库，则可用X从该文库中筛选出能与其相互作用的蛋白，并且可以获得编码这些蛋白的cDNA。

二、商品化酵母双杂交系统的组成1. 载体质粒：pLexA、pB42AD、p8op-LacZ、pB42AD-DNA文库2. 酵母菌株：EGY48、EGY48（p8op-LacZ）、YM4271（EGY48的伴侣菌株）3. 大肠杆菌菌株： KC8株4. 对照质粒：质粒用途pLexA-53，pB42AD-T 阳性对照pLexA-Pos(LexA/GAL4 AD融合蛋白〕阳性对照pLexA-Lam(LaminC蛋白少与其它蛋白相互作用) 假阳性检测质粒5. 引物：pLexA测序引物及pB42AD测序引物。

酵母双杂交检测（Yeast Two酵母双杂交检测（Yeast Two-Hybrid Assay）产品专题检测原理：酵母双杂交系统（Yeast two-hybrid assay）是⽤于体内研究蛋⽩相互作⽤的⼀种⾮常便利的⼯具，常⽤的如GAL4为基础的系统，使⽤酵母转录因⼦GAL4来检测转录激活后的蛋⽩相互作⽤。

某些转录因⼦（如GAL4）由两个可以分开，功能上相互独⽴的结构域组成，N端有⼀个147个氨基酸组成的DNA结合域（DNA binding domain，BD），C端有⼀个由113个氨基酸组成的转录激活域（transcription activation domain，AD）。

BD可以和上游激活序列（UAS）结合，⽽AD能激活UAS下游基因进⾏转录。

单独的BD或AD不能激活基因转录，两者只有通过某种⽅式结合在⼀起形成完整的转录激活因⼦的功能【见图1】。

酵母双杂交系统主要利⽤酵母GAL4的这个特性通过两个杂交蛋⽩在酵母细胞中的相互结合及对报告基因的转录激活来研究活细胞内蛋⽩质的相互作⽤，对蛋⽩质之间微弱、瞬间的作⽤都能通过报告基因敏感的检测到。

酵母双杂交系统应⽤：1）对新的与已经蛋⽩相互作⽤的鉴定2）对预测蛋⽩相互作⽤的确认3）对蛋⽩相互作⽤区域的鉴定双杂交检测原理图。

两个蛋⽩分别表达，⼀个（诱饵蛋⽩bait protein）融合到Gal4 DNA 图1.双杂交检测原理图。

结合域表达，另⼀个（诱捕蛋⽩prey protein）融合到Gal4转录激活结构域（AD）表达。

在Y2HGold酵母菌株中，只有当两个蛋⽩之间相互作⽤并结合到Gal4反应性启动⼦上才能活化报告基因（AUR1-C, ADE2, HIS3, 和MEL1）的表达。

酵母双杂交系统重要元件介绍（以Matchmarker GAL4-based two hybrid assay为例）诱饵（the bait）⼀、⼀、诱饵（为了建⽴GAL4 DNA-BD/bait融合蛋⽩，推荐使⽤质粒pGBKT7；要调查三元蛋⽩复合物，推荐使⽤含2个MCS区域的三杂交载体，能表达GAL4 DNA-BD/bait融合蛋⽩和第⼆个感兴趣蛋⽩，在bait和prey蛋⽩之间发挥桥梁作⽤。

1 pBait-AbAi载体的构建（酵母报道子的构建）注：酵母报道子（pBait-AbAi）包含目的顺式作用元件的一个或多个拷贝，且插入到pAbAi载体AbAi r报告基因的上游。

大量研究表明最有效的构建应包含目的DNA三个以上的首尾连接的拷贝。

首尾连接的拷贝产生方式很多，但对于长度小于20 bp的调控元件，人工合成寡核苷酸是最方便可靠的途径。

（1）设计并合成包含目的序列的两条反向平行的寡核苷酸序列，且两端加上与pAbAi载体酶切产物一致的粘性末端（建议合成一个目的序列的突变序列作为对照，以排除可能的假阳性）。

（2）用TE buffer溶解寡核苷酸至终浓度100 μmol/L。

（3）将正向链和反向链按照1:1的比例混合（退火后的双链寡核苷酸最大浓度为50 μmol/L）。

（4）95 ︒C保温30 s，去除二级结构。

（5）72 ︒C保温2 min，37 ︒C保温2 min，25 ︒C保温2min。

注：缓慢退火，有助于双链寡核苷酸的形成。

（6）冰上放置。

退火后的产物可贮存在-20 ︒C冰箱备用。

（7）酶切1 μL pAbAi载体，用凝胶回收纯化或柱纯化的方式纯化酶切产物。

注：回收前，可用琼脂糖凝胶检测是否酶切完全。

（8）将退火后的寡核苷酸稀释100倍至终浓度为0.5 μmol/L。

（9）在连接反应管中加入如下成分：pAbAi载体（50 ng/μL） 1.0 μLannealed oligonucleotide （0.5 μmol/L） 1.0 μL10×T4 DNA ligase buffer 1.5 μLBSA（10 mg/mL）0.5 μLNuclease-free H2O 10.5 μLT4 DNA ligase （400 U/μL）0.5 μL总体积15 μL注：如果有必要，可用1 μL nuclease-free H2O代替寡核苷酸作为阴性对照。

（10）将反应体系室温放置连接3 h，转化E coli，采用常规方法检测阳性克隆。

酵母菌液体培养基配方酵母菌液体培养基是一种用于培养和繁殖酵母菌的培养基。

它提供了酵母菌所需的营养物质和环境条件，使其能够正常生长和繁殖。

下面将介绍一种常用的酵母菌液体培养基配方。

配方：- 葡萄糖（20 g/L）：提供碳源，为酵母菌提供能量。

- 酵母浸出物（10 g/L）：提供氮源和维生素，促进酵母菌的生长和繁殖。

- 酵母精蛋白（5 g/L）：提供氮源和维生素，增强酵母菌的生长和繁殖能力。

- 氯化镁（1 g/L）：提供镁离子，维持细胞内环境稳定。

- 磷酸二氢钾（3 g/L）：提供磷酸盐，为酵母菌提供磷源。

- 氯化钙（0.1 g/L）：提供钙离子，维持细胞内钙离子平衡。

- 硫酸镁（0.5 g/L）：提供镁离子，维持细胞内环境稳定。

- 硫酸钾（0.5 g/L）：提供钾离子，维持细胞内钾离子平衡。

- 硫酸铵（1 g/L）：提供氮源，为酵母菌提供氮源。

- 氯化钠（1 g/L）：提供钠离子，维持细胞内钠离子平衡。

- 红曲粉（0.01 g/L）：提供维生素和生长因子，促进酵母菌的生长和繁殖。

将葡萄糖、酵母浸出物、酵母精蛋白、氯化镁、磷酸二氢钾、氯化钙、硫酸镁、硫酸钾、硫酸铵和氯化钠按照配方中的比例加入适量的蒸馏水中。

然后，将培养基混合均匀，并用蒸馏水调整pH值，使其保持在5.5-6.0的范围内。

pH的调整可以使用盐酸或氢氧化钠溶液进行。

接下来，将培养基分装到装有适量的量筒或瓶中，并用塞子或铝箔密封，以防止细菌和其他污染物的进入。

将培养基在121摄氏度高压蒸汽灭菌器中进行高温高压灭菌处理，以杀灭其中的细菌和其他有害微生物。

完成以上步骤后，酵母菌液体培养基就可以用于培养和繁殖酵母菌了。

总结：酵母菌液体培养基配方的制备是一个相对简单的过程，只需要将适量的各种营养物质按照一定比例加入蒸馏水中，并进行适当的pH 调整和高温高压灭菌处理，就可以得到一种适用于酵母菌生长和繁殖的培养基。

这种培养基可以广泛应用于酵母菌的实验室研究和工业生产中，为酵母菌的生长和繁殖提供了必要的条件和营养物质。

酵母菌液体培养基配方1. 液体培养基的简介液体培养基是一种生物学实验室中常用的基础实验工具。

它是由外源营养物质（如氮源和碳源）和微生物生长所需的微量元素和辅助因子（如维生素）等组成的一种稀释液体。

液体培养基通常是无色、透明和水样的，在湿度和营养充足的条件下，它可以提供一种适宜的环境，使菌群得以生长和繁殖。

2. 酵母菌液体培养基的制备酵母菌是真核微生物的一种，广泛存在于自然界中。

它们可以利用简单的碳源和氮源，快速繁殖并形成大量酒精、酶类和其他化学物质。

以下是酵母菌液体培养基的制备方法：2.1. 配方2.1.1. 基础配方- 酵母菌营养素培养基- 葡萄糖或果糖（碳源）- 麦芽提取物或酵母提取物（氮源）2.1.2. 辅助配方- 蛋白胨或肉汤提取物（氮源）- 尿素或硝酸钠（氮源）- 磷酸盐或硫酸铵（磷源）- 氯化钠（维持渗透压）- 硫酸镁（镁源）2.2. 制作过程1. 在1000毫升锥形瓶中加入500毫升无菌蒸馏水，加入培养基（50克/升）搅拌，煮沸2分钟，再加入碳源（注:本实验以果糖为例）和适量的胶体舒，搅拌均匀，待它冷却到室温。

2. 在液体培养基中加入酵母菌菌种（一般为0.5mL左右/升），利用瓶内自动摇床，将菌细胞悬浮于液体培养基中。

3. 在摇床上，以30℃恒温恒湿条件下，培养酵母菌液体至指定时期，获得想要的培养物。

3. 培养实验的注意事项酵母菌液体培养基在实验室内广泛应用，但在培养过程中，有一些注意事项需要注意：- 制备台、瓶盖、涂银纸、手套等需严格消毒，并穿戴无菌手套和口罩。

- 实验仪器设备也必须进行无菌处理和灭菌消毒。

- 在操作过程中，注意切断暴露的电源线和食品厂制造区域之间的连接。

- 在培养过程中，维持温度和湿度的稳定；避免太阳直接照射和环境过于寒冷。

- 在培养过程中，需要检查培养物的污染情况；如果发现有污染，需要及时清洗设备、更换液体培养基，以确保结果准确。

4. 结论酵母菌液体培养基是一种基础的实验工具，广泛用于生物学实验室中。

酵母菌稀释涂布平板法流程
酵母菌稀释涂布平板法是一种常用的酵母菌数量检测方法，其流程如下：
1. 准备培养基：选择适合酵母菌生长的培养基，如YPDA、SD等。

制备培养基时要注意无菌操作，避免污染。

2. 稀释酵母菌：将待检测的酵母菌悬浮液逐级稀释，以便在平板上形成适当数量的菌落。

通常使用生理盐水等稀释液。

3. 涂布平板：将稀释后的酵母菌悬液均匀涂布在培养基平板上。

可以使用平板扩散器或棉签等工具进行涂布。

注意避免涂布过厚或过薄，影响结果。

4. 培养：将涂布好的平板在恒温培养箱中进行培养，通常在30℃左右进行。

培养时间根据酵母菌种类和数量不同而不同，一般在1-3天之间。

5. 计数：在培养结束后，观察平板上的酵母菌菌落数量，使用显微镜或计数板等工具进行计数。

也可以使用电子计数器等现代化工具进行自动计数。

6. 分析结果：根据计数结果，计算出酵母菌数量，可以表述为CFU/mL或其他适当单位。

并结合其他信息，如样本来源、处理方法等，进行数据分析和评价。

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酵母菌的培养和观察目的认识酵母菌的形态特征，了解培养酵母菌的方法。

实验前的思考人类认识和利用酵母菌的历史悠久，早在史前时期，先人们就学会酿酒。

约在6000年前，就发明发面的方法。

直到十九世纪有了显微镜，人们才窥探到醉母菌的真面目。

对酵母菌做纯系培养分类研究的是与巴斯德同时代的丹麦人汉斯，他是为寻求酿造高品质啤酒的途径才去深入研究酵母菌的。

材料器具甜酒酿汁液，新鲜酵母，豆芽；显微镜，载玻片，盖玻皮，玻璃棒，镊子，滴管，吸水纸，酒精灯，石棉网，火柴，漏斗架，玻璃斗，量杯，三角烧瓶，烧杯，天平，量筒，棉絮；蔗糖，乳酸，碘液。

步骤1．观察酵母菌（1）用滴管从甜酒酿的汁液中吸取一滴汁液，滴在载玻片上，用针摊开，盖上盖玻片，在低倍镜下就能清楚地看到甜酒酿的汁液中悬浮着无数酵母菌。

再换高倍镜仔细观察一个酵母菌，可以看到酵母菌是椭圆形的单个细胞，细胞中有许多小颗粒，也有几个大的液泡（图示）。

有的酵母菌的一端长出大小不同的突起，这是酵母菌的芽体。

芽体成长脱落，就成为新的个体，有的芽体在从母体脱落前又长出突起。

这种繁殖方法叫出芽繁殖。

（2）在盖玻片一边加一滴碘液，从另一边用吸水纸把染液引入盖玻片下。

不久就能看到被染成棕褐色的细胞核和变成蓝紫色的淀粉粒。

2．培养酵母菌（1）用蔗糖液培养在盛有100毫升的三角烧瓶里加5克蔗糖，煮沸。

等到溶液稍稍冷却，加一小块鲜酵母，用玻璃棒搅拌均匀；再用棉絮塞紧瓶口。

然后把烧瓶放在25～30℃的温暖地方，数小时后就可见到溶液里有气泡产生，并散发出酒味。

这是因为酵母菌正在把糖分解成乙醇和二氧化碳。

（2）二三天后吸取溶液在显微镜下观察，就可看到已培养出大量酵母菌。

注意事项1．观察酵母菌时，视野里杂质较多，有淀粉粒、半分解的淀粉团块、曲霉孢子和其它杂菌等等，只要掌握住酵母菌的形状和体内具有液泡，尤其是染色后体内具有褐色的核和蓝色的淀粉粒这些特点，就可以跟其它杂菌区分开来。

2．发酵在缺氧的环境里仍能良好地进行，不必为了增加氧气去搅拌已放入菌种的培养液。

酵母菌培养基的配置流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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在配置酵母菌培养基之前，需要做好充分的准备。

酵母菌表面展示操作步骤之酵母菌培养与感染酵母菌是一种常见的真核微生物，被广泛应用于生物学研究和工业生产中。

酵母菌表面展示技术（Yeast Surface Display）是通过改造酵母菌表面蛋白，将外源蛋白或肽链展示在菌体表面，从而实现特定蛋白或肽链的酵母菌表面展示。

在实现酵母菌表面展示之前，首先需进行酵母菌的培养与感染操作。

一、酵母菌培养步骤：1. 准备培养基：选择适当的培养基，如YPD培养基含有酵母粉（1%），蛋白胨（2%），葡萄糖（2%）和琼脂（2%）等。

按照配方将培养基溶解于适当体积的无菌纯水中，并调节pH值至适合酵母菌生长的范围。

2. 稀释酵母菌预培养：从冷藏保存的酵母菌菌种中取出适量的菌液，按照适当比例将其接种到培养基中。

一般来说，选取1 mL菌种接种到50 mL培养基中。

3. 培养酵母菌：将上一步中接种的菌液瓶摇床上培养，通常温度为30℃，转速为200 rpm。

培养时间一般为过夜培养，即12-16小时。

4. 测定菌体浓度：培养结束后，可以通过测定吸光度来确定菌体的浓度。

使用比较浓缩菌体的光学密度作为相对参考，一般在600 nm波长下读取吸光度。

二、酵母菌感染步骤：1. 准备感染培养基：选择适当的感染培养基，如SD-URA培养基。

该培养基中不含尿嘧啶，可选择表达尿嘧啶合成基因URA3的酵母菌株感染。

如有需要，也可以添加适当的抗生素来选择表达目的蛋白的酵母菌。

2. 感染菌液的制备：将酵母菌预培养液按照一定比例接种到感染培养基中，并在适当的温度下孵育。

一般来说，感染液培养温度为30℃，转速为200 rpm，菌液的最终浓度可以根据实验需求来调整。

3. 感染培养：将感染菌液瓶摇床上培养，并在培养过程中维持适当的温度和转速。

培养时间根据实验需要，通常为4-6小时。

4. 目测确认感染效果：利用显微镜观察培养物，检查菌体是否有明显的感染效果，例如菌体形态变化、聚集等。

通过以上步骤，酵母菌的培养与感染操作就可以完成。

LexA酵母双杂交系统简介一、LexA酵母双杂交系统的设计原理报告质粒p8op-LacZ的GAL4 UAS编码序列被完全去除，因此在缺乏LexA融合激活剂的情况下，报告基因LacZ的转录活性为零，该基因的筛选标志为URA3，可以作为有自主复制能力的质粒存在于酵母EGY48菌株中，也可以被整合到EGY48基因组DNA上。

质粒pLexA的筛选标志为HIS3，在双杂交系统中用于表达DNA-BD(202个氨基酸残基组成的LexA蛋白)与目标蛋白(钓饵，Bait)的融合蛋白，该融合体的表达受酵母强启动子ADH1的调控，选择与报告基因的操纵子LexA×8结合。

质粒pB42AD的筛选标志为TRP1，在其供外源基因插入的多克隆位点(EcoR I与Xho I)上游，含有SV40核定位(SV40 nuclear localization)、HA(血凝素)及AD(来自于E.coli的88个氨基酸残基组成的B42蛋白)等几种编码序列，共同组成可以启动报告基因转录表达的激活成份。

在酵母EGY48的基因组中还整合有另一个报告基因Leu，它与LacZ报告基因具有相同的操纵子-LexA，但两者启动子不同。

根据双杂交系统的原理，如果某一复合物同时具有DNA-BD和AD的活性，即可激活报告基因的转录和表达。

分别将待测蛋白X、Y的编码序列插入pLexA质粒载体和pB42AD质粒载体的多克隆位点中，然后共同转入含有报告基因的酵母菌株，如果蛋白X与Y能相互作用，则启动报告基因的转录和表达，通过检测报告基因的表达情况，就可以间接反映蛋白X、Y是否具有相互作用以及作用的强弱。

如果将蛋白Y换为取自组织或血液的cDNA文库，则可用X从该文库中筛选出能与其相互作用的蛋白，并且可以获得编码这些蛋白的cDNA。

二、商品化酵母双杂交系统的组成1. 载体质粒：pLexA、pB42AD、p8op-LacZ、pB42AD-DNA文库2. 酵母菌株：EGY48、EGY48（p8op-LacZ）、YM4271（EGY48的伴侣菌株）3. 大肠杆菌菌株：E.coli KC8株4. 对照质粒：质粒用途pLexA-53，pB42AD-T 阳性对照pLexA-Pos(LexA/GAL4 AD融合蛋白〕阳性对照pLexA-Lam(LaminC蛋白少与其它蛋白相互作用) 假阳性检测质粒5. 引物：pLexA测序引物及pB42AD测序引物。

酵母双杂交培养基10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）溶液：不含-His，-Leu，-Trp，-Ura等成分的10×Dropout溶液：氨基酸10×浓度（mg/L）称重(g)（1 L）称重(g)（500 mL）L-Isoleucine 异亮氨酸300 0.3 0.15L-Valine 缬氨酸1500 1.5 0.75L-Arginine HCl 精氨酸200 0.2 0.1L-Lysine HCl 赖氨酸300 0.3 0.15L-Methionine 蛋氨酸200 0.2 0.1L-Phenylalanine 苯丙氨酸500 0.5 0.25L-Threonine 色氨酸2000 2.0 1.0L-Tyrosine 酪氨酸300 0.3 0.15加ddH2O定容后4℃保存100×氨基酸储备液：每100ml溶液中分别含有下列成分，配制后保存于4℃氨基酸储备液100 mL中含量100×His L-histidine HCl monohydrade 200 mg100×Trp L-Trytohan 200 mg100×Leu L-eucine 1 g100×Uracil 200 mg100×Adenine 400 mgSD 培养基：Yeast Nitrogen Base0.17 g(without amino acid and Ammonium Sulfate)Ammonium sulfate 0.5 g葡萄糖 2 g10×DO(-His –Leu –Trp –Ura)10 ml加ddH2O定容至100ml。

如果配固体培养基加入2％的琼脂粉。

SD相应的缺失培养基：加上除了缺失的氨基酸之外的其他的氨基酸储备液，100 ml S D+1 ml 100×氨基酸储备液。

例如：SD/-Leu：SD+100×His 、100×Trp、100×Uracil、100×Adenine各1 ml。

麦芽汁培养基和马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养酵母菌和霉菌。

马铃薯葡萄糖培养基有时也可用于培养放线菌。

豆芽汁葡萄糖培养基也是培养酵母菌及霉菌的一种优良培养基。

察氏培养基主要用于培养霉菌观察形态用。

麦芽汁培养基为天然培养基，马铃薯葡萄糖培养基和豆芽汁葡萄糖培养基二者均为半合成培养基，而察氏培养基则为合成培养基。

培养基配方中出现的自然pH系指培养基不经酸、碱调节而自然呈现的pH。

(一)麦芽汁培养基的配制1．培养基成分新鲜麦芽汁一般为10-15波林。

2．配制方法(1)用水将大麦或小麦洗净，用水浸泡6-12h，置于15℃阴凉处发芽，上盖纱布，每日早、中、晚淋水一次，待麦芽伸长至麦粒的两倍时，让其停止发芽，晒干或烘干，研磨成麦芽粉，贮存备用。

(2)取一份麦芽粉加四份水，在65℃水浴锅中保温3-4h，使其自行糖化，直至糖化完全(检查方法是取0.5ml的糖化液，加2滴碘液，如无蓝色出现，即表示糖化完全)。

(3) 糖化液用4-6层纱布过滤，滤液如仍混浊，可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清，加水20 m1，调匀至生泡沫，倒入糖化液中，搅拌煮沸，再过滤)。

(4)用波美比重计检测糖化液中糖浓度，将滤液用水稀释到10-15波林，调pH至6．4。

如当地有啤酒厂，可用未经发酵，未加酒花的新鲜麦芽汁，加水稀释到10-15波林后使用。

(5)如配固体麦芽汁培养基时，加入2％琼脂，加热融化，补充失水。

(6)分装、加塞、包扎。

(7)高压蒸汽灭菌100 Pa灭菌20 min。

（二)马铃薯葡萄糖培养基的配制1、培养基成分马铃薯20g葡萄糖 2 g琼脂 1.5-2g水100ml自然pH2．配制方法(1)配制20％马铃薯浸汁取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000m1。

80℃浸泡lh，用纱布过滤，然后补足失水至所需体积。

100 Pa灭菌20 min。

即成20％马铃薯浸汁，贮存备用。

（2)配制时，按每100 m1马铃薯浸汁加入2g葡萄糖，加热煮沸后加入2g琼脂，继续加热融化并补足失水。