血清碱性磷酸酶ALP测定
1 检验目的
指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理
本试剂以国际临床化学会（IFCC）推荐方法为基础，所采用的反应原理与反应式如下。
ALP
对-硝基苯磷酸盐 + H2O ----------- 对硝基酚 + 磷酸
在上述反应中，对-硝基苯酚的生成速率与样本中碱性磷酸酶的活力成正比。
通过在405 nm处监测吸光度的上升速率，即可测得样本中碱性磷酸酶的活性。
3 标本采集与处理：
3.1 病人准备：无特殊要求。
3.2 标本类型：标本最好是无溶血的血清。
3.3 血清分离：应在收集后两小时内分离出来。
避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。
3.4 标本存放：2～3天内的活性损失：15～25℃保存：<10%；标本稳定性：4～8℃保存稳定7天；-20℃保存至少可稳定2个月标本。
如果分析延迟8小时以上，最好把血清冷藏。
冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。
3.5 标本运输：常温条件下运输
3.6 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。
4 实验材料：
4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司ALP试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成
试剂1（R1）：
乙酸
镁
3.0mmol/
L
硫酸锌 1.5mmol/L
HEDTA 3.0mmol/
L
AMP缓冲液420mmol/L
试剂2（R2）：对-硝基
苯磷酸盐
81.5mmol
/L
AMP缓冲液420mmol/L
HEDTA
5.0mmol/L
4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。
试剂启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定14天。
4.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
4.1.5 注意事项：试剂中含有稳定剂，可能存在一定的刺激作用或毒性，请勿直接接触皮肤、眼睛。
一旦接触，即用大量清水冲洗。
请勿吞服。
4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的ALP校准品对自动分析仪进行校准。
4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。
5 仪器
AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪
6 操作步骤
6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。
6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。
6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。
7 质量控制
在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
8 计算方法
以ALP复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以U/L报告。
9 参考值范围
成年人
男性 20～50岁 53～128U/L
男性 60岁以上 56～119U/L
女性 20～50岁 42～ 98U/L
女性 60岁以上 53～141U/L
儿童
男性女性
1～30天 75～319U/L 48～406U/L
1个月～1岁 82～383U/L 124～341U/L
1岁～3岁 104～345U/L 108～317U/L
4岁～6岁 93～309U/L 96～297U/L
7岁～9岁 86～315U/L 69～325U/L
10岁～12岁 42～362U/L 51～332U/L
13岁～15岁 74～390U/L 50～162U/L
16岁～18岁 52～171U/L 47～119U/L
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。
根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。
我室参考值 35-125 U/L
10 临床意义
碱性磷酸酶（ALP）是一种在碱性条件下具有较强活性的水解酶，并以多种形态存在于血液中，其大多来自骨骼的成骨细胞和肝脏，也来源于其他一些组织例如肾脏、胎盘、肠、睾丸、胸腺、肺及肿瘤。
在儿童生长期和妊娠期，血清中ALP 生理性活性增高，骨疾病与肝胆疾病等引起ALP病理性活性增高。
在肝胆疾病中引起ALP活性增高的原因包括胆道梗阻，例如因胆结石、肿瘤或炎症造成的胆汁郁积。
在传染性肝炎中也可发现ALP活性增高。
在骨疾病中，Paget病、骨软化症（佝偻病）、骨转移瘤和甲状旁腺功能亢进等，使成骨活性升高引起ALP活力增高。
11 操作性能
11.1 试剂空白：
a) 试剂空白吸光度应不大于0.800。
b）试剂空白吸光度变化率（ΔA/min）：应不大于0.0015。
11.2 分析灵敏度：10U/L样本的吸光度变化率（ΔA/min）应不小于0.003。
11.3 线性范围：试剂（盒）线性范围应覆盖[10～1000]U/L。
a) 线性相关系数（r）应不小于0.990；b) [≤50]U/L 范围内的线性偏差应不超过±6.0U/L，[＞50]U/L 范围内的线性偏差应不超过±10％。
11.4 准确度：相对偏差（B）应不大于±10%。
11.5 精密度：(1)重复性：变异系数（CV）应不大于5%；(2)批间差：相对极差（R）应不大于5%。
11.6 稳定性：试剂（盒）在2～8℃避光、密封的环境中贮存至12个月末，试剂性能应符合试剂空白、分析灵敏度、线性范围、精密度（重复性）和准确度的要求。
12 超出范围结果处理
本试剂的线性范围为[10～1000]U/L。
当样本中碱性磷酸酶活性高于1000U/L时当样品测定值超过上限时，应将样品用9 g/L氯化钠溶液作1：9稀释，重新测定，结果乘以10。
13 病危报警值的处理
无警告/危急值
14 方法局限性
14.1 测定结果的准确性依赖于对所使用分析仪器校准、测定温度和测定时间的控制。
14.2 样本中血红蛋白的浓度≤500mg/dL、胆红素浓度≤340μmol/L、甘油三酯浓度≤4mmo1/L对测定无干扰。
14.3 有关可能干扰本测定的药物或物质，请参阅参考文献16.3。
14.4 若试剂混浊或以水为空白在波长405nm处的吸光度值大于0.8时，则不能使用。
15 补救措施
当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。
16 参考文献
16.1 叶应妩，王毓山，申子瑜主编·全国临床检验操作规程·中华人民共和国卫生部医政司编·(第四版)
16.2 钱士匀主编.临床生物化学及生物化学检验实验指导.人民卫生出版社，2012年第5版
16.3 府伟灵,徐克前主编.临床生物化学检验.北京.人民卫生出版社,2012年第5版
16.4 试剂说明书。
