狂犬病抗体检测怎么做

狂犬病抗体检测标准狂犬病是一种由病毒引起的疾病，它主要通过动物的咬伤或唾液传播给人类。

由于狂犬病在人类中的致死率相当高，因此对疑似暴露于病毒的个体进行抗体检测是非常重要的。

这种检测有助于早期发现感染病例，采取适当的预防措施来避免病毒传播和控制疾病的传播。

狂犬病抗体检测标准包括两个关键方面：样本采集和实验室检测方法。

首先是样本采集。

狂犬病抗体检测通常通过采集个体的血清样本进行。

血清样本是血液中无细胞成分，含有抗体和其他血浆成分的部分。

采集样本时，应使用无菌的注射器或针头抽取2-5毫升的血液，并在一个无菌集装袋中保存和运输。

为了确保准确性和重复性，需要注意以下事项：1.采集血样的时间：在可能被感染的动物咬伤或暴露后，应尽快采集血液样本。

这是因为病毒会在人体内逐渐繁殖并引起感染，而早期采集血样可以确保检测到病毒的早期感染情况。

2.保存和运输：血清样本应该尽快送到实验室进行检测。

如果无法立即送达实验室，样本应在2-8摄氏度下冷藏保存，并在24小时内送达实验室。

长时间的运输和储存可能导致样本中的抗体结构发生变化，从而影响检测结果的准确性。

接下来是实验室检测方法。

狂犬病抗体检测通常使用酶联免疫吸附试验（ELISA）来检测血清中的狂犬病抗体。

这种检测方法具有高度的敏感性和特异性，可以快速而有效地检测出抗体的存在。

ELISA检测方法基于抗体和抗原之间的特异性结合原理：当抗原与其对应的抗体结合时，会发生可见的颜色反应。

在进行狂犬病抗体检测时，实验室会使用已知病毒抗原来与患者的血清样本进行反应。

如果患者的血清中存在狂犬病抗体，就会发生可见的颜色反应，以证明阳性结果。

为了确保狂犬病抗体检测的准确性和一致性，有一些标准和指南被制定出来。

这些标准包括：1.狂犬病国际标准血清：这是一种由已知抗体浓度的血清制成的标准样品。

在检测过程中，狂犬病国际标准血清被用作参考样本，以确保检测结果的准确性和可比性。

2.检测结果的解读标准：根据不同的检测方法和实验室标准，可能会存在不同的结果解释标准。

狂犬抗体检测方法狂犬病是一种由病毒引起的致命性感染疾病，对人类和许多动物有着严重的威胁。

狂犬病病毒主要通过动物的唾液传播，尤其是狗的咬伤。

因此，狂犬病抗体检测方法对于早期诊断和预防控制狂犬病具有重要意义。

狂犬抗体检测方法的发展经历了多个阶段，在不断的研究和实践中逐步完善和优化。

目前常用的狂犬抗体检测方法有酶联免疫吸附测定法（ELISA）和荧光抗体技术（FA）。

酶联免疫吸附测定法（ELISA）是一种常用的免疫学检测方法，通过检测血液中的特定抗体来确定体内是否存在狂犬病病毒。

ELISA的原理是利用抗体与抗原特异性结合的原理，将待测样品中的抗体与特异性抗原结合，然后加入特异性酶标记的二抗，最后通过加入底物并测定其反应物与酶的产物的颜色变化来检测抗体的存在与浓度。

ELISA方法可以快速、敏感地检测狂犬抗体，尤其适用于大规模筛查和疫情监测。

荧光抗体技术（FA）是一种常用的直接免疫荧光检测方法，可快速准确地检测狂犬抗体。

该方法通过使用特异性的荧光标记二抗与待测样品中的抗体结合，形成荧光复合物。

然后，在荧光显微镜下观察复合物的荧光信号是否存在来判断抗体的存在与浓度。

FA技术具有高度特异性、准确性和敏感性，可以快速定性地检测狂犬抗体，特别适用于急诊医学、流行病学调查和临床诊断。

除了ELISA和FA这两种常用的狂犬抗体检测方法外，还有其他一些辅助检测方法。

例如，中和试验是一种体外实验，利用抗体与病毒之间的特异性结合来中和病毒的活性，从而判断抗体的存在与浓度。

中和试验的优势在于可以量化抗体的中和效力，但需要耗费较长的时间和专业实验室条件。

此外，还有间接荧光抗体技术（IFA）、蛋白质微芯片和口腔黏膜免疫检测等方法，也可以用于狂犬抗体的检测。

狂犬抗体检测的过程需要采集相应样品，并进行实验室操作。

一般情况下，抗体检测的标本主要包括血清、脑脊液和唾液等。

在采集样品之前，需要注意遵守相应的采集和保存规范，以保证样品的质量和结果的准确性。

狂犬病病毒实验室检测方法摘要：狂犬病（Rabies）是一种重要的人兽共患传染病，由狂犬病病毒（Rabies virus，RV）感染温血动物和人后引起，近年来又有感染上升的趋势。

一种准确、灵敏、快速的实验室检测诊断方法就显得极为重要。

现就酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光抗体方法（FAT）、快速荧光抑制灶技术（RFFIT）、反转录－聚合酶链反应（RT-PCR）、荧光定量RT-PCR，基因芯片技术和恒温扩增技术等狂犬病病毒实验室诊断方法做一综述。

关键词：狂犬病狂犬病病毒检测方法狂犬病（Rabies）是一种重要的人兽共患传染病，由狂犬病病毒（Rabies virus，RV）感染温血动物和人后引起，以恐水、畏光、吞咽困难、狂躁、急性致死性脑脊髓炎，进行性麻痹和最终死亡为主要临床特征。

RV可感染多种温血动物引起死亡，表现为高度嗜神经性。

脑组织感染RV后遭到破坏，使得狂犬病感染的病死率几乎100%。

据WHO数据显示狂犬病在全世界150个国家和地区出现过狂犬病病例。

尽管狂犬病可以通过疫苗免疫进行预防，全世界每年仍有超过5.5 万人死于该病，主要集中在亚、非、拉等发展中国家[1]。

中国狂犬病疫情较严重，居世界第2位[2~3]，近年来，狂犬病疫情呈现回升的趋势[4]。

检测狂犬病抗原抗体、分析狂犬病的流行特点，并建立高效、快速、可靠的实验室检测方法可以有效控制此病的流行。

下面主要针对RV的形态特征和分子结构及主要的检测技术进行概述。

1、狂犬病病毒形态特征RV属于弹状病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病病毒属（Lyssavirus）血清/基因1 型，单股负链RNA病毒。

电镜下观察病毒粒子直径为70～80nm，长160～240nm，一端钝圆，另一端平凹，整体呈子弹状[5]。

病毒有双层脂质外膜，其外面镶嵌有1072-1900个8-10nm长的纤突(spike)，为糖蛋白，每个糖蛋白呈同源三聚体形式，电镜还显示了糖蛋白具有“头”和“茎”结构。

狂犬病病毒实验室检测方法摘要：狂犬病（Rabies）是一种重要的人兽共患传染病，由狂犬病病毒（Rabies virus，RV）感染温血动物和人后引起，近年来又有感染上升的趋势。

一种准确、灵敏、快速的实验室检测诊断方法就显得极为重要。

现就酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光抗体方法（FAT）、快速荧光抑制灶技术（RFFIT）、反转录－聚合酶链反应（RT-PCR）、荧光定量 RT-PCR，基因芯片技术和恒温扩增技术等狂犬病病毒实验室诊断方法做一综述。

关键词：狂犬病狂犬病病毒检测方法狂犬病（Rabies）是一种重要的人兽共患传染病，由狂犬病病毒（Rabies virus，RV）感染温血动物和人后引起，以恐水、畏光、吞咽困难、狂躁、急性致死性脑脊髓炎，进行性麻痹和最终死亡为主要临床特征。

RV可感染多种温血动物引起死亡，表现为高度嗜神经性。

脑组织感染RV后遭到破坏，使得狂犬病感染的病死率几乎 100%。

据WHO数据显示狂犬病在全世界150个国家和地区出现过狂犬病病例。

尽管狂犬病可以通过疫苗免疫进行预防，全世界每年仍有超过 5.5 万人死于该病，主要集中在亚、非、拉等发展中国家[1]。

中国狂犬病疫情较严重，居世界第2位[2~3]，近年来，狂犬病疫情呈现回升的趋势[4]。

检测狂犬病抗原抗体、分析狂犬病的流行特点，并建立高效、快速、可靠的实验室检测方法可以有效控制此病的流行。

下面主要针对RV的形态特征和分子结构及主要的检测技术进行概述。

1、狂犬病病毒形态特征RV属于弹状病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病病毒属（Lyssavirus）血清/基因 1 型，单股负链RNA病毒。

电镜下观察病毒粒子直径为70～80nm，长160～240nm，一端钝圆，另一端平凹，整体呈子弹状[5]。

病毒有双层脂质外膜，其外面镶嵌有1072-1900个8-10nm长的纤突(spike)，为糖蛋白，每个糖蛋白呈同源三聚体形式，电镜还显示了糖蛋白具有“头”和“茎”结构。

igg狂犬病抗体检测原理
IgG狂犬病抗体检测的原理是利用狂犬病抗体与狂犬病毒的抗原之间的特异性反应，来检测体内是否存在狂犬病抗体。

如果检测结果为阳性，说明被检测者已经产生了有效的狂犬病抗体，可以预防狂犬病的发生。

如果检测结果为阴性，则说明被检测者体内尚未产生狂犬病抗体，需要尽快接种狂犬疫苗以预防狂犬病。

在进行IgG狂犬病抗体检测时，通常采用酶联免疫法或化学发光法等免疫学方法进行检测。

这些方法的原理是利用抗原与抗体的特异性结合，通过在反应体系中加入酶或化学发光物质等标记物，使反应信号得以放大并被检测仪器所捕获，最终通过仪器读数来判断检测结果。

需要注意的是，IgG狂犬病抗体检测结果只能作为参考，不能作为唯一的判断标准。

对于疑似狂犬病病毒感染者，应该结合临床症状、流行病学史和其他实验室检查结果进行综合判断，并进行隔离观察和治疗。

狂犬病实验室诊断一、狂犬病实验室诊断病人发病后（死亡前）可采集其唾液（间隔3-6小时，至少采集3份）、脑脊液、血清及颈后带毛囊的小块皮肤；病人死后最好采集其脑组织标本（小脑和脑干）进行实验室检测。

直接免疫荧光法是狂犬病诊断的金标准，可以快速、敏感、特异地检测人和动物脑组织中的病毒抗原。

临床病例活体组织标本（如颈后部皮肤毛囊）亦可进行DFA检测。

直接快速免疫组化法及酶联免疫吸附测定法亦可特异检测狂犬病病毒抗原。

病毒核酸检测可用于早期诊断，以逆转录PCR法检测体液（唾液、血清等）和脑组织等标本，但需要严格的质量控制以保证结果的准确性。

脑组织及唾液等病毒含量高的样本还可进行病毒分离。

细胞培养分离所需时间（1-2天）远少于小鼠颅内接种分离法所需时间（10-21天），且前者的生物安全风险远小于后者。

未接种过疫苗的患者，发病早期几乎没有中和抗体产生，到发病晚期（通常在临床症状出现后7-8天），病毒在脑内大量增殖后突破血脑屏障进入血液，刺激机体产生低水平的中和抗体。

通过病毒中和试验检测病人血清或脑脊液中的中和抗体，可作为狂犬病诊断的依据之一。

世界卫生组织（WHO）推荐的抗狂犬病病毒中和抗体标准检测方法包括快速荧光灶抑制试验（RFFIT）和小鼠脑内中和试验（MNT）。

由于RFFIT法无需使用小鼠，所用时间短（24小时），目前已被广泛采用。

RFFIT方法也是我国现行药典规定的检测狂犬病病毒中和抗体的标准方法之一。

此外，常用的狂犬病病毒中和抗体检测方法还有荧光抗体病毒中和试验（FAVNT）。

用ELISA法测定的抗狂犬病病毒糖蛋白抗体滴度与用病毒中和试验测定的结果有一定的相关性（约80%符合率），但相应试剂盒尚未普及。

此外，还可以通过检测中和抗体，监测暴露前抗体背景及暴露后疫苗注射的免疫效果。

WHO狂犬病专家咨询委员会认为：中和抗体水平等于或高于0．5IU/ml时，接种者才具备了有效的保护能力；如果发现中和抗体水平低于0．5IU/ml，应进行加强免疫，至达到有效保护水平为止。

XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX作业指导书文件编号:XXX-XXXX-001 标题：狂犬病毒抗体荧光免疫检测细则版号：第IV版页码1/3 1.目的根据对狂犬抗体荧光免疫试验检测作必要的细化和补充,以规范本中心对狂犬抗体荧光免疫试验检测方法。

2.适用范围本检测细则适用于人体血液中狂犬抗体检测。

3.职责检测人员:负责按照本检测细则对被检品进行检测。

复核人员:负责对检测操作是否规范以及检测结果是否准确进行复核。

科室负责人:负责对科室综合管理和检测报告的签发。

4.样品收集和准备4.1不需要特殊准备,不需要病人禁食。

4.2 标本为血清。

4.3 血液应以一般法来收集,并该小心处理。

采集静脉的血液必须在无菌条件下，并避免样品溶血。

5.检测项目及参数本方法检测项目为狂犬病毒抗体检测。

6.检测仪器设备和材料6.1 一次性手套。

6.2 5%次氯酸钠或其他认可消毒液。

6.3 适用于盛装有可能受污染的物品的容器。

6.4 微量加液器液(10-100ul),准确度±2%及一次性加样头。

6.5 荧光显微镜。

7.检测环境条件本试验在23℃～29℃室温中进行。

8.狂犬抗体荧光免疫检测诊断试剂盒8.1 抗原基片:购自省CDC病毒所。

8.2 荧光素标记抗体:异硫氰酸荧光素标记的羊抗人IgG抗体。

8.3 缓冲溶液，PH7.2磷酸盐缓冲液。

8.4 质控物：阴、阳性对照。

8.5 缓冲甘油（PH7.2）。

8.6 湿盒。

9.检测原理采用含狂犬病毒抗原的细胞、组织片，加入待测标本,当标本中存在狂犬病毒抗体时,就能与包被狂犬病毒抗原结合成复合物；加入荧光标记的羊抗人IgG抗体，前复合物再与荧光标记的羊抗人IgG抗体形成抗原-抗体复合物，根据组织、细胞民荧光的部位来判断体内是否存在相应的抗体。

10.检测步骤10.1实验前准备10.1.1 取冷藏细胞抗原片，室温下吹干备用。

10.1.2 羊抗人IgG荧光抗体1份，PBS3份，1％伊文思兰加入后终浓度为万分之一。

狂犬病的实验诊断方法狂犬病是一种由狂犬病病毒引起的致命的神经系统疾病。

早期的病毒检测方法依赖于动物的大脑组织或脊髓液样本，但这些方法不仅需要病毒在大脑中进行复制，而且也有传播病毒的风险。

因此，近年来，研究人员已经发展出一些实验室诊断方法来检测狂犬病病毒。

目前，主要的实验室诊断方法包括直接免疫荧光试验（Direct Immunofluorescence Assay，DFA）、滴度测定法（VirusNeutralization Test，VNT）、聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）和免疫组织化学染色（Immunohistochemistry，IHC）。

直接免疫荧光试验是一种常用的狂犬病病毒检测方法。

它使用特异性单克隆抗体来识别狂犬病病毒的抗原。

通过在疾病动物的脑组织切片上施加单克隆抗体并且经过染色，病毒抗原会与抗体结合形成荧光染色，并通过荧光显微镜观察。

这种方法的优点是快速和准确，可以在病毒分离和动物死亡之前得出结果。

然而，它需要经过训练的实验室技术人员进行操作，并且有时可能出现假阴性结果。

滴度测定法是通过将狂犬病病毒与病毒中和抗体混合来测定病毒的滴度。

该方法基于当病毒与病毒中和抗体结合时，不能侵入新宿主细胞。

这种方法需要一定时间，通常需要3-5天才能得到结果。

这种方法的优点是可以测定病毒的效价，并且可以用于评估深度冷冻疫苗的效果。

然而，该方法需要繁琐的操作步骤，并且对实验室条件要求较高。

聚合酶链式反应是一种在检测狂犬病病毒中应用广泛的方法。

它通过扩增病毒RNA或DNA的特定区域来检测病毒。

首先，通过提取样品中的RNA或DNA，然后进行逆转录反应（对于RNA）或核酸扩增反应（对于DNA）以合成相应的cDNA或DNA，并最后通过PCR扩增目标区域。

这种方法极其敏感，可以检测到非常低浓度的病毒，但在操作过程中需要谨慎处理以避免污染。

此外，PCR方法已经逐渐从传统的实验室检测中发展到快速诊断方法，如实时定量PCR。

狂犬病抗体检测怎么做
说到狂犬病，大家都比较恐惧吧，因为我们都知道狂犬病发病，可能会直接威胁到人们的生命健康，所以说在生活当中，每个人都应该注意狂犬病疫苗的注射，尽量减少与那些没有注射过疫苗的宠物，或者动物接触，因为一旦受到它们的袭击，能会导致这些病毒感染，下面就是关于，狂犬病抗体的一个检测。

世卫组织规定的血清病毒中和抗体最低滴度为0.5IU/ml，已被广泛用作参考值。

这一指标可予以测定。

如受种者身体健康，则不管年龄大小或是否同时给予狂犬病免疫球蛋白，在进行暴露后预防的第14天，在大多数受种者中均应达到此水平。

暴露前体内中和抗体滴度达到这一水平者无一例发生狂犬病。

如果抗体水平达到这一标准，应该就不用担心狂犬病了。

但是过了疫苗有效期再次暴露的话还需要加强或重新全程注射狂犬疫苗。

想要有效地帮助自己预防狂犬病，那么在生活当中，最主要的还是应该减少，与那些动物太过的亲密接触，很多人都认为其实动物都没有攻击性，但是你忘了，每一个动物都会有自己原始的野性，所以希望想要保护好，自己就应该明白这点。

狂犬病病毒中和抗体检测实验流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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狂犬病毒ELISA抗体检测试验一、试验材料：1．预包被狂犬病毒抗原的微孔板2．酶标记物3．狂犬病毒IgG阳性对照4．狂犬病毒IgG临界对照5．狂犬病毒IgG阴性对照6．显色液A7．显色液B8．终止液9．浓缩洗涤液（10倍）10．样品稀释液11．封板膜二、操作方法：1．试剂盒放置室温平衡20～30分钟。

取出浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水作10倍稀释备用。

2．稀释样品：将已分离好的血清用样品稀释液做1:100稀释（即取10μl血清或血浆加入到1ml样品稀释液中），并充分混匀。

3．加样：取所需量的预包被微孔板条固定于板架上，加入稀释好的样品，100μl/孔，然后将阳性、阴性对照各加1孔，临界对照加3孔，100μl/孔，另留一孔不加样品作空白对照孔，在记录纸上记录各样品和对照品的次序或位置。

剩余的板条放入密封袋中保存。

4．孵育：加样完成后，置37℃恒温箱或水浴箱（用封板膜覆盖板条，以避免水珠滴入微孔）中孵育30分钟。

5．洗板：甩净孔中液体，拍干，用稀释好的洗涤液加满每孔，停留1分钟后甩净、拍干，反复洗板3次。

6．加酶：除空白对照外，其余各孔垂直滴加酶标记物50μl（1滴），置37℃孵育30分钟。

7．显色：按第5步洗板3次，拍干后每孔（含空白孔）垂直滴加显色液A、B各50μl（1滴），置37℃避光显色15分钟。

8．终止：每孔（含空白孔）立即加入终止液50μl（1滴），混匀后用酶标仪450nm波长测定A值。

三、结果判定：1．单波长检测：以空白孔调零，用酶标仪读取450nm处的A值。

2．双波长检测：用酶标仪读取450nm和630nm处的A值，以A450nm—A630nm计算A值。

3．阴性对照A值≤0.15,0.20≤临界对照A值平均值≤0.80，临界对照A值平均值/阴性对照A值平均值≥2.0，阳性对照A值＞临界对照A值平均值，证明实验成立，否则试验结果无效，需重新试验。

4．如样品孔A值≥临界对照A值的平均值判为阳性；反之为阴性。

狂犬病抗体检测标准一、引言狂犬病是一种致命的病毒性传染病，通过动物唾液传播给人类。

为了预防狂犬病的发生，疫苗接种是一种有效的手段。

然而，疫苗接种后是否产生足够的抗体以抵抗病毒感染，需要通过抗体检测来评估。

本文将详细介绍狂犬病抗体检测的标准。

二、抗体检测的原理狂犬病抗体检测是通过检测人体内的狂犬病病毒抗体来评估疫苗接种效果的方法。

当人体接种狂犬病疫苗后，免疫系统会产生针对狂犬病病毒的抗体。

这些抗体可以在人体内存在一段时间，并且可以通过特定的检测方法进行检测。

三、抗体检测的方法目前，常用的狂犬病抗体检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）和快速免疫色谱试验（RICT）。

1.酶联免疫吸附试验（ELISA）：ELISA是一种常用的狂犬病抗体检测方法。

该方法利用酶标记的抗体与待测样本中的狂犬病病毒抗体结合，然后通过底物显色反应来检测抗体的存在。

ELISA方法具有较高的灵敏度和特异性，可以定量检测抗体水平。

2.快速免疫色谱试验（RICT）：RICT是一种快速、简便的狂犬病抗体检测方法。

该方法采用特殊的色谱膜，将特异性抗体固定在膜上，然后与待测样本中的狂犬病病毒抗体进行反应。

通过观察色谱膜上的颜色变化来判断抗体的存在与否。

RICT方法操作简便，结果判读直观，适用于现场快速检测。

四、抗体检测的标准狂犬病抗体检测的标准主要包括以下几个方面：1.检测方法的准确性和可靠性：所使用的检测方法必须经过验证和标准化，以确保其准确性和可靠性。

不同的检测方法之间应进行比对和验证，以确定其一致性和相关性。

2.阳性判定标准：根据所使用的检测方法，制定合适的阳性判定标准。

一般来说，当样本中的抗体水平超过预设的阈值时，判定为阳性。

阈值的确定应根据所使用的疫苗类型、接种方案和目标人群等因素进行综合考虑。

3.抗体保护水平：通过研究和实践，确定抗体保护水平。

即当人体内的狂犬病病毒抗体达到一定的水平时，可以有效地预防狂犬病的发生。

这一水平应根据所使用的疫苗类型、接种方案和目标人群等因素进行确定。

狂犬病诊断标准分析一、狂犬病诊断标准（一）原国家卫生部2008年颁布的狂犬病诊断标准根据患者的流行病学、临床表现和实验室检查结果进行综合判断，病例确诊需要实验室证据。

1、临床诊断病例，符合下列任一项即可诊断典型的狂躁型狂犬病临床表现，明确的动物致伤史+典型的麻痹型狂犬病临床表现。

2、确诊病例，临床诊断病例加下列任一项，即可确诊:（1）直接荧光抗体法（或ELISA法）：检测患者唾液、脑脊液或颈后带毛囊的皮肤组织标本中狂犬病病毒抗原阳性，或用RT-PCR检测狂犬病病毒核酸阳性。

（2）细胞培养方法：从患者唾液或脑脊液等标本中分离出狂犬病病毒。

（3）脑组织检测：尸检脑组织标本，用直接荧光抗体法或ELISA法检测狂犬病病毒抗原阳性、RT-PCR检测狂犬病病毒核酸阳性、细胞培养方法分离出狂犬病病毒。

（二）WHO的狂犬病定义临床病例：病例具有急性神经性综合征（如脑炎），主要表现为机能亢奋（如狂躁型狂犬病）或者麻痹综合征（如麻痹型狂犬病），如果没有重症监护支持，病人通常会在首发症状出现后7-11天内进行性发展为昏迷和死亡，常见死因为呼吸循环衰竭。

符合下列实验室标准中的1种或几种即可确诊。

（1）存在病毒抗原。

（2）细胞培养方法或实验动物接种中分离到病毒。

（3）未接种疫苗者的脑脊液或血清中存在病毒特异性抗体。

（4）通过分子生物学方法在活体或尸检样本（如脑活检样本、皮肤、唾液、浓缩尿）中检测到病毒核酸。

（三）WHO的狂犬病病例分类疑似病例：符合临床病例定义的病例。

可能病例：疑似病例，同时具有与疑似狂犬病动物接触的可靠病史。

确诊病例：实验室确认的疑似病例或可能病例。

在缺少动物暴露史或临床疑似脑炎症状的情况下，如果实验室诊断检测明确，仍可进行确定性诊断。

对可能感染狂犬病的患者在采取适当预防措施情况下进行核磁共振成像检查可能有助于诊断。

无论临床类型如何，当脑干、海马、下丘脑、深层和皮层下白质以及深层和皮质灰质的核磁共振T2成像出现模糊、微弱的异常高信号时，均提示可能为狂犬病。

狂犬病毒ELISA抗体检测试验一、试验材料：1．预包被狂犬病毒抗原的微孔板2．酶标记物3．狂犬病毒IgG阳性对照4．狂犬病毒IgG临界对照5．狂犬病毒IgG阴性对照6．显色液A7．显色液B8．终止液9．浓缩洗涤液（10倍）10．样品稀释液11．封板膜二、操作方法：1．试剂盒放置室温平衡20～30分钟。

取出浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水作10倍稀释备用。

2．稀释样品：将已分离好的血清用样品稀释液做1:100稀释（即取10μl血清或血浆加入到1ml样品稀释液中），并充分混匀。

3．加样：取所需量的预包被微孔板条固定于板架上，加入稀释好的样品，100μl/孔，然后将阳性、阴性对照各加1孔，临界对照加3孔，100μl/孔，另留一孔不加样品作空白对照孔，在记录纸上记录各样品和对照品的次序或位置。

剩余的板条放入密封袋中保存。

4．孵育：加样完成后，置37℃恒温箱或水浴箱（用封板膜覆盖板条，以避免水珠滴入微孔）中孵育30分钟。

5．洗板：甩净孔中液体，拍干，用稀释好的洗涤液加满每孔，停留1分钟后甩净、拍干，反复洗板3次。

6．加酶：除空白对照外，其余各孔垂直滴加酶标记物50μl（1滴），置37℃孵育30分钟。

7．显色：按第5步洗板3次，拍干后每孔（含空白孔）垂直滴加显色液A、B各50μl（1滴），置37℃避光显色15分钟。

8．终止：每孔（含空白孔）立即加入终止液50μl（1滴），混匀后用酶标仪450nm波长测定A值。

三、结果判定：1．单波长检测：以空白孔调零，用酶标仪读取450nm处的A值。

2．双波长检测：用酶标仪读取450nm和630nm处的A值，以A450nm—A630nm计算A值。

3．阴性对照A值≤0.15,0.20≤临界对照A值平均值≤0.80，临界对照A值平均值/阴性对照A值平均值≥2.0，阳性对照A值＞临界对照A值平均值，证明实验成立，否则试验结果无效，需重新试验。

4．如样品孔A值≥临界对照A值的平均值判为阳性；反之为阴性。

附录ⅪA人用狂犬病疫苗效价测定法（NIH法）本法系将供试品免疫小鼠后，产生相应的抗体，通过小鼠抗体水平的变化测定供试品的免疫原性。

试剂稀释液（PBS）量取0.9%磷酸二氢钾溶液75ml、2.4%磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）溶液425ml、8.5%氯化钠溶液500ml，混合后加水至5000ml，调pH值至7.2～8.0。

攻击毒株CVS制备启开毒种，稀释成10-2悬液，接种11～13g小鼠，不少于8只，每只脑内接种0.03ml，连续传2～3代，选择接种4～5天有典型狂犬病症状的小鼠脑组织，研磨后加入含2%马血清或小牛血清制成20%悬液，经每分钟1000转离心10分钟，取上清液经病毒滴定（用10只18～20g小鼠滴定）及无菌检查符合规定后作攻击毒用。

参考疫苗的稀释参考疫苗用PBS稀释成1∶25、1∶125和1∶625等稀释度。

供试品溶液的制备供试品用PBS做5倍系列稀。

测定法用不同稀释度的供试品及参考疫苗分别免疫12～14g小鼠16只，每只小鼠腹腔注射0.5ml，间隔1周再免疫1次。

小鼠于第一次免疫后14天，用经预先测定的含5～100个LD50的病毒量进行脑内攻击，每只0.03ml。

同时将攻击毒稀释成100、10-1、10-2和 10-3进行毒力滴定，每个稀释度均不少于8只小鼠。

小鼠攻击后逐日观察14天，并记录死亡情况，统计第5天后死亡和呈典型脑症状的小鼠。

计算供试品和参考疫苗ED50值。

计算相对效力P＝T/S×dT /dS×D式中P为供试品效价，IU/ml;T为供试品ED50的倒数；S为参考疫苗ED50的倒数；dT为供试品的一次人用剂量，ml；dS为参考疫苗的一次人用剂量，ml;D为参考疫苗的效价，IU/ml。

【附注】（1）动物免疫时应将疫苗保存在冰浴中。

（2）各组动物均应在同样条件下饲养。

（3）攻击毒原病毒液(100 )注射的小鼠应80%以上死亡。