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《建立LIF依赖性新型小鼠胚胎干细胞系》篇一一、引言胚胎干细胞（Embryonic Stem Cells, ESC）是一种具有自我更新和多潜能性的细胞类型，能够分化成几乎所有类型的细胞，在再生医学和疾病模型研究中具有重要价值。
近年来，随着干细胞研究的深入，LIF依赖性新型小鼠胚胎干细胞系的建立成为研究热点。
本文旨在介绍如何建立LIF依赖性新型小鼠胚胎干细胞系，并探讨其应用前景。
二、材料与方法1. 材料（1）小鼠胚胎：选用适宜的小鼠胚胎，如C57BL/6小鼠胚胎。
（2）培养基：使用含有LIF（Leukemia Inhibitory Factor）的培养基。
（3）其他试剂及耗材：包括胰蛋白酶、DMEM培养基、胎牛血清等。
2. 方法（1）小鼠胚胎的获取与处理：从C57BL/6小鼠中获取胚胎，并进行清洗、消毒等处理。
（2）培养与分化：将处理后的胚胎放入含有LIF的培养基中培养，使其分化成胚胎干细胞。
（3）筛选与克隆：通过筛选获得具有LIF依赖性的新型小鼠胚胎干细胞系，并进行克隆。
（4）鉴定与保存：对克隆后的细胞进行鉴定，保存具有稳定特性的细胞系。
三、实验结果1. 细胞形态观察通过显微镜观察，发现新型小鼠胚胎干细胞系具有典型的胚胎干细胞形态特征，如细胞核大、核仁明显等。
2. 鉴定结果通过PCR、免疫荧光等技术手段，对新型小鼠胚胎干细胞系进行鉴定，结果表明其具有LIF依赖性，且具有多潜能性。
3. 细胞生长曲线通过绘制细胞生长曲线，发现新型小鼠胚胎干细胞系具有较高的增殖能力。
四、讨论1. LIF依赖性的意义LIF在胚胎干细胞的培养和分化过程中起着重要作用。
建立LIF依赖性新型小鼠胚胎干细胞系，有助于深入了解LIF在胚胎干细胞发育过程中的作用机制。
2. 多潜能性的应用价值多潜能性是胚胎干细胞的重要特征之一。
建立具有多潜能性的新型小鼠胚胎干细胞系，可应用于再生医学、疾病模型研究等领域。
3. 优势与挑战相比其他小鼠胚胎干细胞系，LIF依赖性新型小鼠胚胎干细胞系具有较高的增殖能力和稳定的特性。
《小鼠新型胚胎干细胞系的建立》篇一一、引言胚胎干细胞（Embryonic Stem Cells, ESC）的研究在生物学和医学领域中具有重大意义。
这些细胞具备自我更新和多向分化的潜能，为再生医学、疾病模型创建、药物筛选等多个领域提供了宝贵的资源。
近年来，随着对小鼠胚胎干细胞研究的深入，新型小鼠胚胎干细胞系的建立成为研究热点。
本文旨在详细介绍新型小鼠胚胎干细胞系的建立过程及研究进展。
二、研究背景与目的在生物医学领域，胚胎干细胞研究具有重要意义。
其具备分化成各种类型细胞的能力，使其在再生医学、药物筛选以及疾病模型研究中有着广泛应用。
而建立稳定、高效的胚胎干细胞系更是科学研究的重要前提。
目前，虽然已有多种小鼠胚胎干细胞系，但随着科研的深入，对于具有更高分化潜力、更低异源性的新型胚胎干细胞系的需求愈发迫切。
因此，本文研究的主要目的是建立一种新型的小鼠胚胎干细胞系，以满足科研需求。
三、实验方法1. 实验材料：选用特定品系的小鼠作为实验对象，准备相关实验试剂和仪器。
2. 胚胎获取：通过显微操作技术获取小鼠的早期胚胎。
3. 培养与分化：将胚胎置于特定培养基中，进行培养和诱导分化。
4. 筛选与鉴定：通过形态学观察、基因检测等方法筛选出具有多向分化潜力的细胞系。
5. 细胞系建立：对筛选出的细胞进行扩增和冻存，建立稳定的小鼠胚胎干细胞系。
四、实验结果1. 成功获取小鼠早期胚胎，并建立了稳定的体外培养体系。
2. 通过诱导分化实验，发现新型胚胎干细胞系具有较高的分化潜力。
3. 通过形态学观察和基因检测，成功筛选出具有多向分化潜力的细胞系。
4. 建立的小鼠新型胚胎干细胞系具有较低的异源性，稳定性好，可长期传代。
五、讨论与结论本文成功建立了新型小鼠胚胎干细胞系，其具有较高的分化潜力和较低的异源性。
这一新型细胞系的建立为再生医学、疾病模型创建、药物筛选等领域提供了新的资源。
同时，该细胞系的建立也为进一步研究胚胎干细胞的分化机制、调控网络等提供了有力工具。
《小鼠新型胚胎干细胞系的建立》篇一一、引言随着生物医学技术的不断发展，干细胞研究在生命科学领域中扮演着越来越重要的角色。
其中，胚胎干细胞（ESC）作为一种具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞类型，已成为研究各种生物过程和疾病模型的热门研究对象。
本文旨在探讨小鼠新型胚胎干细胞系的建立过程及其在科研领域的应用价值。
二、材料与方法1. 实验材料本实验所需材料包括小鼠胚胎、培养基、生长因子等。
所有材料均需经过严格的质量控制，确保实验结果的可靠性。
2. 方法（1）胚胎获取与处理：从特定品系的小鼠中获取早期胚胎，并进行必要的处理，如去透明带等。
（2）干细胞培养：将处理后的胚胎置于特定培养基中，添加生长因子等必要成分，进行干细胞培养。
（3）干细胞系建立：通过细胞克隆、筛选等方法，建立新型胚胎干细胞系。
（4）细胞鉴定与表型分析：通过分子生物学技术对新型胚胎干细胞系进行鉴定，包括基因型、染色体稳定性等方面的分析。
三、实验结果1. 胚胎处理与干细胞培养结果经过适当的处理后，胚胎在特定培养基中成功附着并开始发育。
在适宜的条件下，干细胞得以增殖并形成克隆。
2. 新型胚胎干细胞系的建立通过细胞克隆、筛选等步骤，成功建立了新型胚胎干细胞系。
该细胞系具有自我更新能力和多向分化潜能，为后续研究提供了可靠的细胞来源。
3. 细胞鉴定与表型分析结果通过分子生物学技术对新型胚胎干细胞系进行鉴定，结果显示该细胞系基因型稳定，染色体无异常，具有较高的纯度。
此外，该细胞系在体外分化实验中表现出良好的分化潜能。
四、讨论1. 小鼠新型胚胎干细胞系建立的意义建立小鼠新型胚胎干细胞系对于研究生物学、医学等领域具有重要意义。
首先，该细胞系可用于研究小鼠胚胎发育过程及机制，为人类胚胎发育研究提供参考。
其次，该细胞系可分化为多种细胞类型，为疾病模型研究、药物筛选等领域提供可靠的细胞来源。
此外，该细胞系还可用于基因编辑、基因治疗等方面的研究。
2. 小鼠新型胚胎干细胞系的优点与挑战（1）优点：新型胚胎干细胞系具有自我更新能力强、分化潜能高、基因型稳定等特点，为科研工作者提供了可靠的细胞来源。
《小鼠新型胚胎干细胞系的建立》篇一一、引言近年来，随着干细胞生物学技术的不断发展，干细胞在生命科学领域中的应用愈发广泛。
作为一项具有革命性的生物技术，干细胞在研究生物体的发育、生长以及治疗人类疾病方面展现出巨大潜力。
尤其是小鼠胚胎干细胞，由于具有分化潜能大、繁殖速度快、操作相对简便等优点，已成为科研人员研究的重要工具。
本文旨在探讨小鼠新型胚胎干细胞系的建立过程及其意义。
二、研究背景与目的小鼠胚胎干细胞系（mESCs）是生物学研究的重要工具，可用于研究发育生物学、疾病模型以及药物筛选等领域。
然而，现有的小鼠胚胎干细胞系存在一些局限性，如分化效率低、遗传稳定性差等问题。
因此，建立新型小鼠胚胎干细胞系，对于推动干细胞研究领域的发展具有重要意义。
三、材料与方法本研究采用小鼠胚胎组织作为起始材料，通过以下步骤建立新型胚胎干细胞系：1. 选取健康小鼠胚胎，进行无菌操作以获取胚胎组织；2. 消化胚胎组织，获得单细胞悬液；3. 将单细胞悬液接种于培养基中，培养一定时间后筛选出阳性克隆；4. 对阳性克隆进行遗传学分析，验证其基因组稳定性；5. 进一步对筛选出的细胞系进行分化潜能和增殖能力的评估。
四、实验过程与结果1. 细胞培养与筛选：通过优化培养条件，成功获得了一批生长良好的小鼠胚胎干细胞系。
在显微镜下观察，这些细胞形态均一，呈现出典型的干细胞特征。
2. 遗传学分析：通过基因组学和遗传学分析，验证了新型小鼠胚胎干细胞系的基因组稳定性。
结果显示，这些细胞系具有较低的突变率和较高的遗传纯合性。
3. 分化潜能评估：将新型小鼠胚胎干细胞系进行定向诱导分化，成功获得了多种组织细胞类型，如神经细胞、心肌细胞等。
这表明这些细胞系具有较高的分化潜能。
4. 增殖能力评估：通过细胞增殖实验，发现新型小鼠胚胎干细胞系具有较快的增殖速度和较高的存活率。
这为后续实验提供了充足的细胞来源。
五、讨论本研究成功建立了新型小鼠胚胎干细胞系，具有较高的基因组稳定性、分化潜能和增殖能力。
第19卷第2期 江西农业大学学报 V o l.19,N o.2 1997年6月 A cta A gricu ltu rae U n iversitatis J iangx ien sis June,1997α小鼠胚胎干细胞培养体系的建立汪河海1 刘红林2 范必勤1 钟 卉3 丁家桐4 (1 江苏农科院牧医所,南京 210014;2 南京农业大学动物科技学院,南京 210059;3 南京铁道医学院,南京 210009;4 扬州大学农学院动物科学系 225009)摘 要通过探讨影响小鼠胎儿成纤维细胞饲养层制备及胚胎干细胞体外培养的若干因素,建立了小鼠胚胎干细胞体外培养体系,并建成小鼠ES细胞系。
关键词:小鼠;胚胎干细胞;培养体系;ES细胞系中图分类号:S865.1胚胎干细胞又称ES细胞(Em b ryon ic Stem Cells)。
其特点是在体外特定的培养条件下能保持其只生长、不分化的增殖状态,并具早期胚胎细胞发育的全能性。
哺乳动物的ES细胞系自Evan s和Kaufm an(1981)首次建立以来[1],引起人们高度的重视,并被广泛地用于动物发育遗传学的基础理论研究和转基因动物的生产实践。
但ES细胞系要在体外克隆成功,必须有成纤维细胞或STO细胞饲养层的支持[2],为建立有效的哺乳动物ES细胞体外培养体系,本文就影响小鼠胎儿成纤维细胞饲养层制备及胚胎干细胞体外培养的若干因素做初步探讨,为今后进一步开展研究奠定基础。
1 材料和方法111 动物准备选3～4月龄的性成熟的昆明鼠,母鼠自然发情或超排后与公鼠交配,第2天早晨检查阴道栓,见栓查为发情受精。
妊娠至一定日龄后取其胚胎或胎儿用于分离囊胚内细胞团细胞或制备胎儿成纤维细胞饲养层。
112 溶液的配制按日本学者管原七郎的配方配制D PB S液,胰蛋白酶溶液、DM E M液及ES细胞培养液(配方略)。
113 胎儿成纤维细胞饲养层的制备α按日本学者管原七郎的方法,取一定日龄的胎儿(10d ～20d ),去除胎盘、胎膜、头、四肢及内脏后清洗并剪碎胎体,将剪碎的胎体组织用胰蛋白酶溶液消化后用100Λm ～200Λm 孔径的尼龙网过滤。
《小鼠新型二倍体孤雌胚胎干细胞系的建立》篇一一、引言随着生物医学研究的深入发展，小鼠作为实验室研究模型在生命科学领域中扮演着重要角色。
其中，小鼠胚胎干细胞（ES细胞）的建立与应用已成为研究热点。
孤雌胚胎干细胞系作为一种新型的细胞模型，具有独特的优势和潜力。
本文旨在介绍小鼠新型二倍体孤雌胚胎干细胞系的建立过程、方法及意义。
二、材料与方法1. 材料（1）实验小鼠：选用特定品系的小鼠作为实验对象。
（2）实验试剂：包括培养基、生长因子等。
（3）实验设备：显微镜、培养箱等。
2. 方法（1）孤雌胚胎的获取与培养：通过超数排卵等方法获取孤雌胚胎，并在特定培养基中进行培养。
（2）二倍体孤雌胚胎干细胞的诱导与筛选：通过基因编辑技术等方法诱导孤雌胚胎形成干细胞，并筛选出二倍体细胞。
（3）细胞系的建立与鉴定：对筛选出的二倍体孤雌胚胎干细胞进行扩增和鉴定，建立稳定的细胞系。
三、实验过程1. 孤雌胚胎的获取与培养首先，通过超数排卵等方法获取小鼠孤雌胚胎。
随后，将孤雌胚胎放置在特定培养基中，提供适宜的生长环境。
2. 二倍体孤雌胚胎干细胞的诱导与筛选采用基因编辑技术等方法，对孤雌胚胎进行诱导，使其形成干细胞。
在诱导过程中，通过遗传学和表型分析等方法筛选出二倍体细胞。
3. 细胞系的建立与鉴定将筛选出的二倍体孤雌胚胎干细胞进行扩增，并对其基因型、表型等进行鉴定。
通过多次传代验证其稳定性和一致性，最终建立稳定的细胞系。
四、结果与讨论1. 结果（1）成功获取小鼠孤雌胚胎并建立适宜的培养体系。
（2）通过基因编辑技术成功诱导出二倍体孤雌胚胎干细胞。
（3）建立稳定的二倍体孤雌胚胎干细胞系，并对其基因型、表型等进行鉴定。
2. 讨论小鼠新型二倍体孤雌胚胎干细胞系的建立对于生物医学研究具有重要意义。
首先，该细胞系为研究小鼠发育生物学、遗传学等领域提供了新的工具和模型。
其次，该细胞系具有独特的优势，如可快速扩增、遗传稳定等，为基因编辑、疾病模型构建等领域提供了有力支持。
《小鼠新型胚胎干细胞系的建立》篇一一、引言近年来，小鼠胚胎干细胞（Mouse Embryonic Stem Cells, mESCs）在生命科学研究领域得到了广泛的应用。
它们在细胞生物学、发育生物学、疾病模型和药物研发等方面具有重要作用。
因此，建立稳定、高效的小鼠新型胚胎干细胞系是科学研究的关键任务之一。
本文将详细介绍小鼠新型胚胎干细胞系的建立过程及其潜在应用。
二、研究目的和意义本研究的目的是建立一种新型的小鼠胚胎干细胞系，旨在提高干细胞的分化潜能、稳定性以及可操控性。
这种新型胚胎干细胞系将有助于更好地研究细胞发育和分化机制，为疾病模型研究、药物研发和再生医学提供有力工具。
三、研究方法1. 实验材料与试剂：本实验采用小鼠胚胎组织作为起始材料，使用特定培养基和生长因子进行细胞培养。
2. 细胞培养：从早期胚胎中获取内细胞团（ICM），将其置于特定的培养条件下进行培养和扩增。
3. 细胞克隆和筛选：通过特定标记和筛选方法，从培养的细胞中筛选出具有干细胞特性的克隆。
4. 遗传和表型分析：对筛选出的干细胞进行遗传学和表型分析，评估其特性和稳定性。
5. 数据分析与统计：采用适当的统计方法对实验数据进行处理和分析，以验证实验结果的有效性。
四、实验结果1. 细胞培养与扩增：成功从早期胚胎中获取内细胞团，并培养成新型胚胎干细胞系。
经过多次传代，细胞保持稳定增殖。
2. 细胞克隆和筛选：通过特定标记和筛选方法，成功筛选出具有干细胞特性的克隆，并建立新型胚胎干细胞系。
3. 遗传和表型分析：新型胚胎干细胞系在遗传学和表型分析中表现出良好的稳定性和可操控性。
4. 数据分析与统计：通过适当的统计方法对实验数据进行处理和分析，验证了新型胚胎干细胞系的有效性和可靠性。
五、讨论本研究成功建立了新型小鼠胚胎干细胞系，具有较高的分化潜能、稳定性和可操控性。
与传统的胚胎干细胞系相比，新型干细胞系在细胞生物学、发育生物学、疾病模型和药物研发等方面具有更广泛的应用前景。
《小鼠新型胚胎干细胞系的建立》篇一一、引言胚胎干细胞（Embryonic Stem Cells, ESC）的研究一直是生物学和医学领域的重要课题。
这些细胞具有自我更新和多潜能的特性，为再生医学、疾病模型、药物筛选等多个领域提供了巨大的研究潜力。
近年来，随着对小鼠胚胎干细胞研究的深入，新型小鼠胚胎干细胞系的建立显得尤为重要。
本文旨在详细介绍小鼠新型胚胎干细胞系的建立过程、方法和应用前景。
二、材料与方法1. 材料准备（1）实验动物：选择合适的小鼠品系作为供体，确保其遗传背景清晰。
（2）实验试剂：包括培养基、生长因子、抗生素等。
（3）实验设备：显微镜、培养箱、离心机等。
2. 方法（1）胚胎获取：从小鼠中获得早期胚胎。
（2）胚胎培养：将胚胎置于特定培养基中，加入生长因子，进行体外培养。
（3）干细胞诱导：通过特定方法诱导胚胎内细胞团向胚胎干细胞方向分化。
（4）干细胞系建立：经过筛选和扩增，建立稳定的小鼠胚胎干细胞系。
三、实验过程与结果1. 胚胎获取与培养通过超数排卵和人工授精等方法，从小鼠中获得早期胚胎。
将胚胎置于含有适当营养成分和生长因子的培养基中，置于适宜温度和湿度的培养箱中培养。
2. 干细胞诱导与分化通过特定方法诱导胚胎内细胞团向胚胎干细胞方向分化。
这一过程需要严格控制培养条件和时间，以确保干细胞的成功诱导和分化。
3. 干细胞系的建立与鉴定经过筛选和扩增，建立稳定的小鼠胚胎干细胞系。
通过细胞形态观察、生长曲线绘制、基因表达分析等方法，对干细胞系进行鉴定和评估。
四、讨论与分析1. 小鼠新型胚胎干细胞系的特点与优势新型小鼠胚胎干细胞系具有较高的分化潜能、稳定的遗传背景和良好的扩增能力等特点。
与以往的小鼠胚胎干细胞系相比，新型干细胞系在研究过程中具有更高的可靠性和实用性。
2. 小鼠新型胚胎干细胞系的应用前景（1）再生医学：小鼠新型胚胎干细胞系可用于研究细胞分化和组织再生，为再生医学提供新的治疗策略。
（2）疾病模型：通过基因编辑技术，可以构建特定疾病的小鼠模型，为疾病研究和药物筛选提供有力工具。
《小鼠新型二倍体孤雌胚胎干细胞系的建立》篇一一、引言近年来，小鼠胚胎干细胞（mESCs）在生物学和医学领域的应用越来越广泛。
而其中，二倍体孤雌胚胎干细胞系作为一种新型的细胞系，其独特的遗传特性和分化潜力使得其成为重要的研究工具。
本文旨在详细介绍如何建立小鼠新型二倍体孤雌胚胎干细胞系，以期为相关研究提供理论和实践参考。
二、材料与方法1. 实验材料（1）小鼠卵母细胞和受精卵（2）饲养层细胞（如STO细胞）（3）培养基、血清等培养材料（4）其他实验仪器和试剂2. 方法步骤（1）孤雌激活：采用化学或电刺激方法激活小鼠卵母细胞，使其进入孤雌发育状态。
（2）胚胎培养：将激活后的卵母细胞置于培养基中培养，使其发育成囊胚。
（3）干细胞诱导：从囊胚中分离出内细胞团，通过特定条件诱导形成胚胎干细胞。
（4）筛选和鉴定：通过遗传学和生物学特性对诱导出的干细胞进行筛选和鉴定，筛选出二倍体孤雌胚胎干细胞系。
三、实验过程与结果分析1. 孤雌激活与胚胎培养采用化学或电刺激方法成功激活小鼠卵母细胞，使其进入孤雌发育状态。
在适宜的培养条件下，卵母细胞发育成囊胚，囊胚结构完整，细胞数量和活力均达到实验要求。
2. 干细胞诱导与筛选从囊胚中分离出内细胞团，通过特定条件诱导形成胚胎干细胞。
在诱导过程中，观察到细胞形态变化，逐渐形成具有干性特征的细胞群。
通过遗传学和生物学特性对诱导出的干细胞进行筛选和鉴定，成功筛选出二倍体孤雌胚胎干细胞系。
3. 结果分析通过对筛选出的二倍体孤雌胚胎干细胞系进行遗传学和生物学特性分析，发现其具有稳定的遗传背景、较高的分化潜力和较低的异源性等特点。
与传统的mESCs相比，新型二倍体孤雌胚胎干细胞系在遗传学和生物学特性上具有一定的优势。
此外，通过实验数据比对和分析，我们还发现新型二倍体孤雌胚胎干细胞系的建立过程中具有一定的可重复性和可操作性。
四、讨论与展望小鼠新型二倍体孤雌胚胎干细胞系的建立为生物学和医学研究提供了新的工具。
《小鼠新型二倍体孤雌胚胎干细胞系的建立》篇一一、引言小鼠胚胎干细胞（Mouse Embryonic Stem Cells, mESCs）的研究对于生物医学领域具有深远的意义。
近年来，关于小鼠二倍体孤雌胚胎干细胞系的建立与发展受到了广大研究者的关注。
本论文主要阐述如何通过科学的实验设计与操作，成功建立小鼠新型二倍体孤雌胚胎干细胞系，并对其生物学特性进行详细分析。
二、材料与方法1. 材料实验所需小鼠孤雌激活卵母细胞、胚胎培养基、培养箱、显微操作设备等。
2. 方法（1）孤雌激活卵母细胞的获取与培养；（2）孤雌胚胎干细胞的诱导分化与筛选；（3）二倍体孤雌胚胎干细胞的建立与鉴定；（4）生物学特性的分析。
三、实验过程1. 孤雌激活卵母细胞的获取与培养通过超排技术获取小鼠的孤雌激活卵母细胞，在胚胎培养基中培养至成熟。
2. 孤雌胚胎干细胞的诱导分化与筛选将成熟的卵母细胞进行体外受精或激活，诱导其分化为胚胎干细胞。
通过特定的筛选方法，筛选出具有干细胞特性的细胞。
3. 二倍体孤雌胚胎干细胞的建立与鉴定将筛选出的干细胞进行基因组检测，确保其具有二倍体染色体组。
通过形态学、生长特性、分化能力等多方面的鉴定，确认其为二倍体孤雌胚胎干细胞。
4. 生物学特性的分析对建立的二倍体孤帕胚胎干细胞进行生长曲线测定、多能性检测、基因表达分析等，以了解其生物学特性。
四、结果与讨论1. 结果成功建立了小鼠新型二倍体孤帕胚胎干细胞系，具有稳定的生长曲线和良好的多能性。
通过基因组检测和生物学特性分析，证实了其具有二倍体染色体组和良好的生物学特性。
2. 讨论（1）在孤帕激活卵母细胞的获取与培养过程中，需要优化培养条件和方法，以提高卵母细胞的成熟率和质量。
同时，通过改进体外受精和激活方法，可进一步提高胚胎干细胞的诱导效率和质量。
（2）在筛选和鉴定过程中，应采用多种方法和技术，如形态学观察、生长曲线测定、基因组检测、多能性检测等，以确保筛选出的细胞具有理想的二倍体孤帕胚胎干细胞特性。
《小鼠新型胚胎干细胞系的建立》篇一一、引言干细胞研究作为现代生物学的重要领域，其在医学、药学和生物技术等领域的应用潜力巨大。
近年来，随着胚胎干细胞（ES）技术的飞速发展，人们对其进行了深入研究并取得了一系列重大进展。
其中，新型小鼠胚胎干细胞系的建立成为这一领域研究的热点。
本文将探讨如何成功建立小鼠新型胚胎干细胞系，并分析其意义和潜在应用价值。
二、材料与方法1. 实验材料本实验所需材料包括：小鼠胚胎、培养基、生长因子、血清等。
所有材料均需经过严格筛选和质量控制，确保实验的准确性和可靠性。
2. 实验方法（1）获取小鼠胚胎并培养；（2）提取小鼠胚胎干细胞并进行传代培养；（3）通过遗传学、细胞生物学和生物化学等手段筛选和鉴定新型胚胎干细胞系；（4）分析新型胚胎干细胞系的生长特性、多能性等。
三、实验过程与结果1. 实验过程（1）获取小鼠胚胎并培养：在无菌条件下，将小鼠胚胎接种于培养基中，进行初步培养。
（2）提取小鼠胚胎干细胞并进行传代培养：根据细胞培养技术，将提取出的胚胎干细胞接种于特制培养皿中，通过连续传代，建立稳定的小鼠胚胎干细胞系。
（3）筛选和鉴定新型胚胎干细胞系：采用遗传学、细胞生物学和生物化学等多种技术手段对胚胎干细胞系进行鉴定，确保其质量和多能性。
（4）分析新型胚胎干细胞系的生长特性、多能性等：通过观察细胞形态、生长曲线、基因表达谱等手段，分析新型胚胎干细胞系的生长特性和多能性。
2. 实验结果通过本实验成功建立了小鼠新型胚胎干细胞系，其细胞形态良好，生长曲线稳定，基因表达谱正常。
通过遗传学、细胞生物学和生物化学等多种技术手段的鉴定，证明该新型胚胎干细胞系具有较高的多能性，可应用于后续的医学、药学和生物技术等领域。
四、讨论本实验成功建立的小鼠新型胚胎干细胞系具有重要的科学意义和潜在应用价值。
其优点包括：细胞形态稳定、生长曲线良好、多能性高，能够为进一步研究干细胞相关的基础生物学问题提供有力工具。
《小鼠新型胚胎干细胞系的建立》篇一一、引言干细胞研究作为现代生物学的重要领域，对于人类理解生命过程和疾病治疗具有重要意义。
胚胎干细胞（ESC）作为干细胞的代表，具有自我更新和多向分化的潜力，在再生医学、疾病模型构建和药物研发等方面具有广泛应用。
近年来，随着基因编辑技术的快速发展，新型小鼠胚胎干细胞系的建立已成为干细胞研究领域的热点。
本文旨在介绍小鼠新型胚胎干细胞系的建立过程、方法和应用前景。
二、小鼠新型胚胎干细胞系建立的背景及意义小鼠胚胎干细胞系是生命科学研究的重要工具。
然而，传统的小鼠胚胎干细胞系在培养、遗传修饰等方面存在局限性，无法满足科研和临床的需求。
因此，建立新型小鼠胚胎干细胞系对于推动生命科学研究、疾病模型构建以及再生医学应用具有重要意义。
三、小鼠新型胚胎干细胞系建立的方法1. 实验材料与仪器：小鼠胚胎、培养基、生长因子、血清、显微操作仪等。
2. 实验方法：（1）获取小鼠胚胎并分离内细胞团（ICM）；（2）将ICM置于特定培养基中培养，添加生长因子和血清；（3）通过显微操作技术筛选出具有多能性的细胞克隆；（4）进行遗传修饰和基因编辑，获得所需基因型的小鼠胚胎干细胞；（5）将筛选出的细胞克隆进行传代培养，建立稳定的小鼠胚胎干细胞系。
四、实验结果与分析1. 成功分离出小鼠胚胎内细胞团（ICM），并建立了稳定的培养体系；2. 通过显微操作技术筛选出具有多能性的细胞克隆，成功建立了新型小鼠胚胎干细胞系；3. 对新型小鼠胚胎干细胞系进行基因编辑和遗传修饰，获得了所需基因型的小鼠胚胎干细胞；4. 通过对新型小鼠胚胎干细胞系的生物学特性进行分析，发现其具有自我更新和多向分化的潜力；5. 与传统小鼠胚胎干细胞系相比，新型小鼠胚胎干细胞系在培养、遗传修饰等方面具有更高的效率和更低的成本。
五、应用前景与展望1. 疾病模型构建：新型小鼠胚胎干细胞系可用于构建各种人类疾病的动物模型，为研究疾病发病机制和药物研发提供有力工具；2. 再生医学：新型小鼠胚胎干细胞系具有自我更新和多向分化的潜力，可用于治疗多种疾病，如帕金森病、糖尿病等；3. 基因编辑与遗传修饰：新型小鼠胚胎干细胞系可作为基因编辑和遗传修饰的优良材料，为研究基因功能和人类遗传性疾病提供重要工具；4. 促进科研发展：随着技术的进步，未来可能还会进一步开发新型小鼠胚胎干细胞系的潜能和应用范围，为生命科学研究领域的发展做出更多贡献。
《小鼠新型胚胎干细胞系的建立》篇一一、引言胚胎干细胞（Embryonic Stem Cells, ESC）的研究在生物学和医学领域中具有重大意义。
这些细胞具有自我更新和分化成多种细胞类型的能力，为研究发育生物学、疾病模型、药物筛选及细胞治疗提供了宝贵的资源。
近年来，小鼠作为研究模型在胚胎干细胞领域的研究尤为突出。
本文旨在详细介绍一种新型小鼠胚胎干细胞系的建立过程，为相关研究提供参考。
二、材料与方法1. 材料实验所需的小鼠胚胎、培养基、生长因子及其他化学试剂等。
2. 方法（1）小鼠胚胎的获取与处理；（2）胚胎干细胞的分离与培养；（3）新型胚胎干细胞系的建立与鉴定。
三、实验方法与步骤1. 小鼠胚胎的获取与处理从小鼠超数排卵后的母体中获取胚胎，经过清洗、培养等处理后，进行后续实验。
2. 胚胎干细胞的分离与培养采用机械法和酶解法相结合的方式，将胚胎中的干细胞分离出来。
将分离出的干细胞置于特定培养基中，添加生长因子及其他必要成分，进行培养。
3. 新型胚胎干细胞系的建立与鉴定通过调整培养条件、优化培养基配方等方法，建立新型胚胎干细胞系。
利用细胞形态学、免疫荧光、基因表达等技术手段对新型干细胞系进行鉴定，确保其具备胚胎干细胞的特性。
四、结果与讨论1. 结果经过一系列实验，成功建立了新型小鼠胚胎干细胞系。
该细胞系具有典型的胚胎干细胞形态，具备自我更新和分化成多种细胞类型的能力。
通过免疫荧光和基因表达等技术手段鉴定，证实了该细胞系具备胚胎干细胞的特性。
2. 讨论在建立新型小鼠胚胎干细胞系的过程中，我们遇到了一些挑战和困难。
例如，在分离干细胞的过程中，需要掌握合适的机械力和酶解条件，以避免对干细胞造成损伤。
此外，在培养过程中，需要不断调整培养条件，以优化干细胞系的生长和分化能力。
然而，通过不断尝试和优化，我们最终成功建立了新型小鼠胚胎干细胞系，为相关研究提供了有力支持。
五、结论本文成功建立了新型小鼠胚胎干细胞系，为研究发育生物学、疾病模型、药物筛选及细胞治疗等领域提供了新的资源。
《小鼠新型胚胎干细胞系的建立》篇一一、引言干细胞研究是现代生物学领域的重要分支，尤其在医学、生物医学工程和药物研发等领域有着广泛的应用。
小鼠胚胎干细胞作为模型生物研究的主要对象，对于探索细胞发育和分化机制、研究人类疾病和治疗策略具有极其重要的价值。
近年来，随着科研技术的进步，建立新型的小鼠胚胎干细胞系已成为生物学研究的热点。
本文将介绍小鼠新型胚胎干细胞系的建立方法及其潜在应用价值。
二、小鼠新型胚胎干细胞系建立的背景与意义在生物医学研究中，胚胎干细胞系的建立为科研工作者提供了强大的工具。
小鼠胚胎干细胞系作为研究细胞发育和分化的重要模型，其建立对于揭示生命科学奥秘、探索疾病发生机制以及开发新的治疗方法具有重要意义。
然而，传统的胚胎干细胞系存在分化能力有限、遗传稳定性差等问题，因此建立新型的小鼠胚胎干细胞系成为当前研究的迫切需求。
三、小鼠新型胚胎干细胞系建立的方法1. 胚胎来源的选择：选择健康、遗传背景清晰的小鼠作为供体，获取其早期胚胎。
2. 培养基的优化：针对小鼠胚胎干细胞的特点，优化培养基的成分，如添加生长因子、细胞因子等，以满足干细胞生长和分化的需求。
3. 细胞培养与筛选：将胚胎组织进行体外培养，通过筛选获得具有干细胞特性的细胞群。
4. 遗传稳定性检测：利用遗传学技术对筛选得到的细胞进行遗传稳定性检测，确保其遗传信息的稳定传递。
5. 冻存与复苏：将稳定的干细胞系进行冻存，以便后续实验需要时进行复苏。
四、小鼠新型胚胎干细胞系的特点及应用1. 特点：新型小鼠胚胎干细胞系具有分化能力强、遗传稳定性好、扩增速度快等特点。
2. 应用：(1) 细胞发育和分化研究：新型小鼠胚胎干细胞系可用于研究细胞发育和分化的机制，为揭示生命科学奥秘提供有力工具。
(2) 疾病模型建立：通过基因编辑技术，可在新型小鼠胚胎干细胞系中引入特定基因突变，建立各种疾病模型，为研究疾病发生机制和开发新的治疗方法提供有力支持。
(3) 药物研发：新型小鼠胚胎干细胞系可用于药物筛选和评价，为新药研发提供有效的实验依据。
《小鼠不同发育时期胚胎来源的新型胚胎干细胞系的建立与生物学特性研究》篇一一、引言胚胎干细胞（Embryonic Stem Cells, ESC）的研究在再生医学、疾病模型和基础生物学领域具有重要意义。
小鼠作为生物学研究的常见模式生物，其胚胎干细胞的研究对于推进人类对干细胞的认识及发展应用具有重要意义。
本文将重点研究小鼠不同发育时期胚胎来源的新型胚胎干细胞系的建立及其生物学特性。
二、材料与方法1. 实验材料本实验选用不同发育时期的小鼠胚胎，包括早期胚胎、中期胚胎和晚期胚胎。
2. 实验方法（1）新型胚胎干细胞系的建立首先，对不同发育时期的小鼠胚胎进行分离和培养，通过特定条件诱导其形成新型胚胎干细胞系。
（2）生物学特性研究对新型胚胎干细胞系进行形态学观察、增殖能力检测、分化能力鉴定及基因表达分析等实验。
三、实验结果1. 新型胚胎干细胞系的建立通过对不同发育时期的小鼠胚胎进行诱导，成功建立了新型胚胎干细胞系。
这些细胞系在形态上呈现出典型的胚胎干细胞特征，如细胞核大、胞质丰富等。
2. 生物学特性研究（1）增殖能力检测新型胚胎干细胞系具有较高的增殖能力，能够在体外持续分裂并保持未分化状态。
（2）分化能力鉴定新型胚胎干细胞系具有多向分化潜能，能够分化为多种细胞类型，如神经细胞、心肌细胞等。
（3）基因表达分析通过对新型胚胎干细胞系进行基因表达分析，发现这些细胞在基因表达水平上具有高度的均一性和稳定性。
四、讨论本研究成功建立了不同发育时期小鼠胚胎来源的新型胚胎干细胞系，并对其生物学特性进行了深入研究。
这些新型胚胎干细胞系具有较高的增殖能力和多向分化潜能，为再生医学、疾病模型和基础生物学等领域提供了新的研究工具。
此外，通过对基因表达的分析，我们发现在不同发育时期小鼠胚胎来源的干细胞在基因表达水平上存在差异，这可能与它们的生物学特性和应用潜力有关。
这些发现为进一步研究小鼠胚胎干细胞的发育调控机制和功能提供了新的思路和方向。
《小鼠新型胚胎干细胞系的建立》篇一一、引言随着现代生物学技术的发展，胚胎干细胞系成为了生物医学领域研究的重要工具。
新型胚胎干细胞系的建立不仅可以用于医学基础研究，也可在疾病模型、药物研发等方面发挥巨大作用。
本文将介绍小鼠新型胚胎干细胞系的建立方法及意义。
二、小鼠新型胚胎干细胞系建立的背景及意义随着人们对胚胎发育过程、基因功能及遗传疾病机理等方面的研究不断深入，建立一种具有优良性能、高稳定性、易于遗传操作的新型小鼠胚胎干细胞系变得尤为重要。
通过新型胚胎干细胞系的建立，不仅可以提供优质细胞来源用于科学研究，而且还可以在医学上应用于疾病模型的建立和药物筛选等。
三、小鼠新型胚胎干细胞系建立的实验方法（一）实验材料本实验所需材料包括小鼠胚胎、培养基、生长因子等。
其中，小鼠胚胎需来自特定品系的小鼠，并需在无菌条件下进行操作。
（二）实验步骤1. 胚胎获取：从特定品系的小鼠中获取早期胚胎。
2. 培养：将胚胎置于含有生长因子的培养基中，进行体外培养。
3. 细胞分离：将培养的胚胎组织进行消化处理，分离出干细胞。
4. 干细胞培养：将分离出的干细胞进行体外培养，使其形成克隆并传代。
5. 细胞鉴定：通过细胞形态学观察、遗传学鉴定等方法，确定干细胞的性质和类型。
四、小鼠新型胚胎干细胞系的建立过程及特点通过上述实验方法，我们成功建立了小鼠新型胚胎干细胞系。
该细胞系具有以下特点：1. 细胞生长迅速，易于传代；2. 细胞形态稳定，具有典型的胚胎干细胞特征；3. 遗传背景清晰，易于进行基因编辑等遗传操作；4. 细胞具有多向分化潜能，可用于疾病模型的建立和药物筛选等。
五、小鼠新型胚胎干细胞系的应用前景小鼠新型胚胎干细胞系的建立将为医学基础研究、疾病模型建立和药物研发等领域提供有力支持。
具体应用包括：1. 用于研究胚胎发育过程、基因功能及遗传疾病机理等；2. 用于建立各种疾病模型，如神经系统疾病、心血管疾病等；3. 用于药物筛选和药物疗效评估；4. 为细胞治疗提供优质细胞来源。
《小鼠新型二倍体孤雌胚胎干细胞系的建立》篇一一、引言在生命科学研究领域，小鼠作为重要的实验动物模型，其胚胎干细胞（ESC）的研究对于理解生物发育机制、疾病治疗以及药物研发等方面具有重要意义。
近年来，二倍体孤雌胚胎干细胞系的建立为小鼠胚胎干细胞研究提供了新的方向。
本文旨在详细介绍小鼠新型二倍体孤雌胚胎干细胞系的建立过程及其在科学研究中的应用。
二、材料与方法1. 材料本实验所需材料包括小鼠卵母细胞、受精卵、培养基、生长因子等。
所有材料均需经过严格的质量控制，确保实验的准确性。
2. 方法（1）卵母细胞的获取与培养：从成年小鼠中获取卵母细胞，在体外培养至成熟阶段。
（2）孤雌激活：通过化学或电刺激等方法激活卵母细胞，使其进行孤雌发育。
（3）胚胎干细胞的培养与筛选：将发育至一定阶段的胚胎置于特定的培养基中，通过添加生长因子等物质，促进干细胞的增殖与分化。
随后，通过遗传学和形态学等方法筛选出二倍体孤雌胚胎干细胞。
（4）细胞系的建立与鉴定：对筛选出的二倍体孤雌胚胎干细胞进行扩增，建立稳定的细胞系，并对其进行鉴定，确保其具有多能性和二倍体特性。
三、实验结果1. 卵母细胞的成熟与孤雌激活经过体外培养和激活，卵母细胞成功发育至成熟阶段，并成功进行了孤雌激活。
在显微镜下观察，卵母细胞呈现出正常的发育形态。
2. 胚胎干细胞的增殖与分化将发育至一定阶段的胚胎置于特定培养基中，添加生长因子等物质后，胚胎干细胞开始增殖与分化。
在显微镜下观察，干细胞呈现出典型的集落状生长形态。
3. 二倍体孤雌胚胎干细胞的筛选与鉴定通过遗传学和形态学等方法，成功筛选出二倍体孤雌胚胎干细胞。
通过基因检测和细胞核型分析等方法对筛选出的细胞进行鉴定，确保其具有多能性和二倍体特性。
四、讨论小鼠新型二倍体孤雌胚胎干细胞系的建立为生命科学研究提供了新的工具。
该细胞系具有多能性、二倍体特性以及稳定的遗传背景等特点，为研究生物发育机制、疾病治疗以及药物研发等领域提供了重要的实验材料。
《小鼠新型二倍体孤雌胚胎干细胞系的建立》篇一一、引言在生命科学研究中，小鼠作为模式生物，其胚胎干细胞（ES 细胞）的研究一直是科研的热点。
而二倍体孤雌胚胎干细胞系作为一类特殊的ES细胞，其具有独特的生物学特性和应用价值。
本文旨在详细介绍小鼠新型二倍体孤雌胚胎干细胞系的建立过程、研究意义以及应用前景。
二、小鼠新型二倍体孤雌胚胎干细胞系建立背景及意义小鼠胚胎干细胞是研究发育生物学、细胞生物学以及人类疾病模型等领域的宝贵资源。
其中，二倍体孤雌胚胎干细胞系以其稳定的遗传背景和易于操作的特点，在遗传疾病模型建立、药物筛选等方面具有重要应用价值。
因此，建立新型的小鼠二倍体孤雌胚胎干细胞系对于推动相关领域的研究具有重要意义。
三、小鼠新型二倍体孤帕胚胎干细胞系的建立过程（一）孤雌生殖技术的准备首先，需要对实验所用的小鼠进行孤雌生殖技术的准备。
通过诱导超数排卵、受精卵体外培养等技术手段，获得一定数量的孤雌生殖卵母细胞。
（二）孤帕胚胎干细胞的诱导利用基因编辑技术（如CRISPR-Cas9）和特定因子处理，对孤雌生殖卵母细胞进行诱导，使其形成具有多能性的胚胎干细胞。
（三）二倍体孤帕胚胎干细胞的筛选与鉴定通过形态学观察、染色体分析、基因表达分析等方法，对诱导出的胚胎干细胞进行筛选和鉴定，筛选出二倍体的孤帕胚胎干细胞系。
四、小鼠新型二倍体孤帕胚胎干细胞系的研究与应用（一）科研研究小鼠新型二倍体孤帕胚胎干细胞系可作为遗传疾病模型的重要工具，为研究遗传性疾病的发病机制提供有力支持。
此外，还可用于研究细胞分化、细胞凋亡等生物学过程。
（二）药物筛选与评价在药物研发过程中，新型二倍体孤帕胚胎干细胞系可用于药物筛选和评价。
通过观察药物对干细胞的影响，评估药物的安全性和有效性。
（三）再生医学与临床应用利用小鼠新型二倍体孤帕胚胎干细胞系的特性，可进行组织工程和再生医学研究，为临床治疗提供新的思路和方法。
例如，通过诱导干细胞分化为特定类型的细胞，用于治疗某些疾病或损伤。
《建立LIF依赖性新型小鼠胚胎干细胞系》篇一一、引言小鼠胚胎干细胞（mESCs）因其独特的自我更新能力和多向分化潜能，在生物学、医学及药物研发等领域具有重要应用价值。
而LIF（Leukemia Inhibitory Factor）作为维持mESCs自我更新的关键因子，对于建立稳定、高效的mESCs系具有重要意义。
本文旨在介绍一种新型LIF依赖性小鼠胚胎干细胞系的建立方法，以期为相关研究提供参考。
二、材料与方法1. 材料（1）小鼠胚胎：选用合适品系的小鼠胚胎。
（2）培养基及试剂：DMEM/F12培养基、胎牛血清、LIF等。
（3）实验仪器：显微镜、培养箱、离心机等。
2. 方法（1）小鼠胚胎的获取与处理：按照常规方法获取小鼠胚胎，并进行必要的处理。
（2）mESCs的分离与培养：将处理后的小鼠胚胎置于含有DMEM/F12培养基的培养皿中，加入胎牛血清和LIF，进行mESCs的分离与培养。
（3）细胞鉴定与筛选：通过形态学观察、免疫荧光等方法鉴定mESCs的特性和纯度，筛选出符合要求的细胞系。
（4）细胞系的建立与保存：将筛选出的mESCs进行扩增和保存，建立稳定的细胞系。
三、实验结果1. mESCs的形态与生长特点通过显微镜观察，发现培养的mESCs呈典型的克隆状生长，细胞形态饱满，核质比例高。
在LIF的作用下，mESCs表现出良好的自我更新能力，生长速度稳定。
2. mESCs的鉴定与筛选结果通过免疫荧光等方法鉴定，发现所培养的mESCs表达干性相关基因和蛋白，具有干性特征。
同时，经过多次筛选，成功获得了一批纯度高、特性稳定的mESCs系。
3. 细胞系的稳定性与扩增情况所建立的mESCs系在培养过程中表现出良好的稳定性，能够持续传代扩增。
通过冻存与复苏实验，验证了细胞系的保存与复苏效果良好。
四、讨论本研究成功建立了LIF依赖性新型小鼠胚胎干细胞系，具有以下优点：（1）细胞系纯度高、特性稳定，可满足不同实验需求。
《建立LIF依赖性新型小鼠胚胎干细胞系》篇一一、引言胚胎干细胞（Embryonic Stem Cells, ESC）研究在生物学和医学领域具有重大意义。
这些细胞具有自我更新能力和多向分化潜能，为再生医学、疾病模型创建及药物筛选等领域提供了强大的工具。
然而，由于传统的小鼠胚胎干细胞系在培养过程中对生长因子和信号通路的需求复杂，限制了其应用范围。
因此，建立一种新型的、对特定生长因子（如LIF）依赖性小鼠胚胎干细胞系，对于推动相关领域的研究具有重要意义。
本文旨在详细介绍如何建立LIF依赖性新型小鼠胚胎干细胞系。
二、材料与方法1. 材料小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）、胚胎干细胞培养基、LIF、抗体等。
2. 方法（1）MEF的分离与培养：从小鼠胚胎中分离出成纤维细胞，并使用特定培养基进行培养。
（2）胚胎干细胞的获取与初步培养：从早期胚胎中获取胚胎干细胞，并初步培养于MEF饲养层上。
（3）建立LIF依赖性新型干细胞系：将初步培养的胚胎干细胞转移到仅含LIF的培养基中，观察其生长与分化情况，建立LIF依赖性新型小鼠胚胎干细胞系。
三、实验步骤1. MEF的分离与培养：在无菌条件下，从小鼠胚胎中分离出成纤维细胞，接种于培养皿中，加入胚胎干细胞培养基进行培养。
2. 胚胎干细胞的获取与初步培养：从早期胚胎中获取胚胎干细胞，接种于MEF饲养层上，加入相应培养基进行初步培养。
3. 建立LIF依赖性新型干细胞系：将初步培养的胚胎干细胞转移至无血清、无其他生长因子，仅含LIF的培养基中。
观察细胞生长情况，调整LIF浓度和培养条件，使细胞在LIF的刺激下稳定生长和分化。
4. 鉴定新型干细胞系的特性：通过免疫荧光、RT-PCR等方法鉴定新型干细胞系的特性，如多向分化潜能、表达特定表面标记等。
四、结果与讨论1. 结果成功建立了LIF依赖性新型小鼠胚胎干细胞系，该细胞系在仅含LIF的培养基中稳定生长和分化。
通过鉴定，该细胞系具有多向分化潜能，表达特定表面标记。
第19卷第2期 江西农业大学学报 V o l.19,N o.2 1997年6月 A cta A gricu ltu rae U n iversitatis J iangx ien sis June,1997α小鼠胚胎干细胞培养体系的建立汪河海1 刘红林2 范必勤1 钟 卉3 丁家桐4 (1 江苏农科院牧医所,南京 210014;2 南京农业大学动物科技学院,南京 210059;3 南京铁道医学院,南京 210009;4 扬州大学农学院动物科学系 225009)摘 要通过探讨影响小鼠胎儿成纤维细胞饲养层制备及胚胎干细胞体外培养的若干因素,建立了小鼠胚胎干细胞体外培养体系,并建成小鼠ES细胞系。
关键词:小鼠;胚胎干细胞;培养体系;ES细胞系中图分类号:S865.1胚胎干细胞又称ES细胞(Em b ryon ic Stem Cells)。
其特点是在体外特定的培养条件下能保持其只生长、不分化的增殖状态,并具早期胚胎细胞发育的全能性。
哺乳动物的ES细胞系自Evan s和Kaufm an(1981)首次建立以来[1],引起人们高度的重视,并被广泛地用于动物发育遗传学的基础理论研究和转基因动物的生产实践。
但ES细胞系要在体外克隆成功,必须有成纤维细胞或STO细胞饲养层的支持[2],为建立有效的哺乳动物ES细胞体外培养体系,本文就影响小鼠胎儿成纤维细胞饲养层制备及胚胎干细胞体外培养的若干因素做初步探讨,为今后进一步开展研究奠定基础。
1 材料和方法111 动物准备选3～4月龄的性成熟的昆明鼠,母鼠自然发情或超排后与公鼠交配,第2天早晨检查阴道栓,见栓查为发情受精。
妊娠至一定日龄后取其胚胎或胎儿用于分离囊胚内细胞团细胞或制备胎儿成纤维细胞饲养层。
112 溶液的配制按日本学者管原七郎的配方配制D PB S液,胰蛋白酶溶液、DM E M液及ES细胞培养液(配方略)。
113 胎儿成纤维细胞饲养层的制备α按日本学者管原七郎的方法,取一定日龄的胎儿(10d ～20d ),去除胎盘、胎膜、头、四肢及内脏后清洗并剪碎胎体,将剪碎的胎体组织用胰蛋白酶溶液消化后用100Λm ～200Λm 孔径的尼龙网过滤。
滤液移入离心管中,加DM E M 液稀释混匀后离心(1500r m in ,5m in ),去上清液,再按上述步骤稀释离心2次,沉淀用DM E M 液(含10%FCS )悬浮后吸至6c m 的F lcon dish 中,调整细胞浓度、编号、加盖硅油,于37℃,5%CO 2的气相中培养。
20h ～24h 后换液继续培养,待细胞贴壁长满形成单层细胞后,再用胰蛋白酶溶液消化单离细胞做继代培养。
114 胎儿成纤维细胞饲养层的保存参考陈立人等方法[3],采用继代培养或冷冻保存的办法保存胎儿成纤维细胞饲养层。
其方法是将已长成的单层细胞用胰蛋白酶溶液消化3m in ～5m in ,DM E M 液(10%FCS )中止消化,成片细胞单离后离心洗涤2次(1500r m in ,5m in )后再按上述方法继续培养;或将已消化单离的细胞加入冷冻保护剂(10%DM SD ),调整细胞浓度至5×106～5×107 mL ,移入冷冻管中置液氮上方过夜后浸于液氮中保存。
解冻时将冷冻管自液氮中取出投入37℃温水浴中,待冰晶消失后立即自温水中取出,将内容物移至10mL 离心管中,加入3mL DM E M 液(10%FSC )离心洗涤一次(1500r m in ,5m in ),去上清,沉淀加入3mL DM E M (10%FCS )悬浮、调整细胞浓度至105 mL ,移入培养皿中培养,第2d 更换新鲜培养液继续培养,并观察其活力及生长状况。
115 囊胚内细胞团细胞的分离和培养11511 ES 细胞培养液的制备 将由上述方法制备的小鼠胎儿成纤维细胞换去原培养液后加入丝裂霉素(10Λg mL DM E M )处理培养2h ～3h ,用PB S 洗去丝裂霉素后加入DM E M 液(10%FCS )离心洗涤2次,沉淀加入ES 细胞培养液混匀后做滴培养,24h 后即可贴壁长成单层成纤维细胞饲养层,用于内细胞团细胞的培养。
11512 内细胞团细胞的分离和培养 参考陈立人等方法分离和制备囊胚内细胞[4],并采用3种不同的方法培养囊胚内细胞团细胞,即用经丝裂霉素处理的ES 细胞培养液直接培养完整的囊胚,去透明带囊胚和去透明带及滋养层的囊胚内细胞团,观察比较囊胚的孵出和内细胞团细胞的生长与增殖。
用免疫外科手术法或直接机械剥离法去透明带和滋养层。
前者是收集3.5d 的囊胚,用0.5%链蛋白酶或p ronase E 消化约5m in ,加抗体培养30m in ,再加补体培养30m in ,即可去除透明带和滋养层;后者是直接用玻璃针切开透明带和滋养层,挑出内细胞团细胞。
2 结果与讨论211 妊娠日龄对胎儿成纤维细胞生长的影响试验比较不同胎龄制备的胎儿成纤维细胞生长状况,发现14d ～16d 的胎龄最为合适,其胎儿成纤维细胞贴壁生长能力强,并能增殖形成单层细胞;小于14日龄或大于18日龄的不是不能贴壁生长,就是不能形成单层细胞,分析可能是胎龄与细胞所处的生长发育阶段有关,不同生长时期所需的生长调节因子的种类和数量可能不同[5]。
212 胰蛋白酶作用浓度和作用时间的影响在制备和消化胎儿成纤维细胞饲养层过程中发现胰蛋白酶作用浓度以0.25%,作用时间・85・江西农业大学学报以5m in 最为合适,所得结果最好;作用浓度过高或过低,作用时间过长或过短均不同程度地影响细胞活力及其生长能力,原因可能是酶作用浓度过高、作用时间过长对细胞的结构有一定程度的破坏作用,从而影响其活力;酶作用浓度过低,作用时间不够则不能达到充分消化的目的,细胞不能完全单离,从而影响其生长行为。
213 细胞培养浓度对细胞增殖的影响细胞培养浓度以5×106 mL ～5×107 mL 较为理想;过低则不能很好地贴壁生长;过高则出现一定程度的细胞分化或退化现象。
这提示体外培养细胞时,其生长的行为不仅与培养的条件有关,而且还与细胞间的相互作用有关。
这种相互作用可能是通过细胞与细胞之间的某种物质或信息交流实现的。
214 成纤维细胞的继代培养及冷冻与解冻通过继代培养或冷冻与解冻处理的成纤维细胞还能继续生长、增殖并形成单层细胞,但却出现一定程度的细胞退化或死亡现象,如细胞变形或空泡化等。
这可能反映原代细胞的活力较差,或者说本试验所建立的冷冻解冻条件不合适。
215 囊胚内细胞团的体外培养试验发现内细胞团的制备方法不同,所得培养结果不同。
培养完整的囊胚,48h 后虽能观察到内细胞(I C M )体积增大、滋养层贴壁生长,但未见I C M 由囊胚孵出;去透明带囊胚培养后、I C M 由囊胚孵出,但未形成ES 细胞样集团;直接分离的内细胞团细胞培养后出现明显的细胞增殖,3d ～4d 后可见ES 细胞样集团形成。
试验还比较了免疫外科手术法和直接机械剥离法分离的I C M 的生长状况。
发现前者的效果优于后者,分析可能是免疫外科手术法分离的I C M 细胞较纯,且数量多,机械剥离法分离的I C M 细胞质量少,且混杂有不易去除干净的滋养层细胞,故影响其生长与增殖[6]。
参 考 文 献1 Evans M J ,Kauf m an M H .E stablishm ent in culture of p luri po tential cells from mouse em bryo s .N ature ,1981,(292):154～1562 尚克刚,李子玉,吴鹤龄1建立小鼠多能干细胞系的几个主要影响因素1遗传学报,1992,19(6):491～4963 陈立人,吴明哲,王建平1哺乳动物胚胎干细胞之体外培养( )小鼠与猪胎儿成纤维细胞株之建立1中国畜牧学会会志,1991,20(3):317～3264 陈立人,王建平,吴明哲1哺乳动物胚胎干细胞之体外培养( )小鼠与猪囊胚衍生物之体外培养1中国畜牧学会会志,1991,20(3):327～3395 Stro jek R M ,R eed M A ,Hoover R L ,et al .A m ethod fo r cultivating mo rpho logically undifferentiated em bryonic stem cells from po rcine blastocysts .T heri ogeno logy ,1990,33:901～9056 Papaiannou V E .L ineage analysis of inner cellm ass and trophectoder m using m icro surgically reconsitutedmouse blastocyst .J Em bryo l Exp M o rpho l ,1982,68:199～209・95・汪河海等:小鼠胚胎干细胞培养体系的建立ESTAB L ISH M ENT OF IN V ITRO CUL TURES Y STE M OF E M BRYON I C STE M CELL S IN MOUSEW ang H ehai 1 L iu Honglin 2 Fan B iqin1Zhong H u i 3 D ing J iatong 4(1Inst .of A ni m .H usb and V et .M ed .,J iangsu A cad .of A gric .Sci.,N anjing 210014;2Co ll .of A 2gric .Sci.,N angjing A gric .U niv .210059;3N anjing R ail w ayM ed .Co ll .,N angjing 210009;4D ep t .of A n 2i m Sci.,Co ll .of A gric .Yangzhou U niv .,Yangzhou 225009)AbstractB y w ay of studing the facto rs w h ich influence the p rep arati on of feeder L ayer of em b ry 2on ic fib rob last cells and the in vitro cu ltu re of em b ryon ic stem cells in m ou se ,the in vitro cu ltu re system and the ES -cell lines of m ou se em b ryon ic stem cells w ere estab lished suc 2cessfu lly .Key words :m ou se ;em b ryon ic stem cells ;in vitro cu ltu re system ;em b ryon ic stem cell(ES -cell )lines ・06・江西农业大学学报。
