儿茶酚胺类神经递质检测方法研究

儿茶酚胺检查方法儿茶酚胺（catecholamine）是指一类含有羟基化苯环的生物活性物质，包括肾上腺素（epinephrine）、去甲肾上腺素（norepinephrine）和多巴胺（dopamine）。

儿茶酚胺在人体内的分泌和代谢异常与多种疾病有关，如高血压、心血管疾病、精神障碍等。

因此，检查儿茶酚胺的水平可以作为疾病诊断和治疗的重要指标。

目前常用的方法包括高效液相色谱法、放免法以及气相色谱法等。

高效液相色谱法是目前儿茶酚胺检查的主要方法之一。

该方法基于儿茶酚胺具有发光性质，通过将样品与荧光标记的试剂一起注入液相色谱仪中，分离出儿茶酚胺，然后在荧光检测器中检测它们的发光信号，从而确定儿茶酚胺的水平。

这种方法具有灵敏度高、特异性好、操作简便等优点，被广泛用于生物学研究和临床诊断。

放免法是另一种常用于儿茶酚胺检查的方法。

它基于儿茶酚胺与特异性抗体之间的免疫反应，通过将样品与标记有酶、荧光物质或放射性同位素的抗体一起进行反应，然后通过测定其酶活性、荧光强度或放射性来确定儿茶酚胺的水平。

适用于临床实验室常规检测的优势之一是可同时检测多种儿茶酚胺，如肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺等，具有高灵敏度和高特异性。

气相色谱法是一种分离和测定儿茶酚胺的有效方法。

该方法基于儿茶酚胺的挥发性，通过样品的蒸发和在气相色谱柱中的分离，再经过检测器检测其峰的形成来定量测定儿茶酚胺的水平。

由于气相色谱法具有高分辨率和定量精度高的特点，被广泛应用于临床和研究领域。

需要注意的是，儿茶酚胺的检查方法需要特殊的样品制备步骤。

首先，需要选择合适的采样时间和方式，通常在早上或者剧烈运动后采集血液样品，以获得较高的儿茶酚胺水平。

其次，应尽量避免外部因素的影响，如戒除儿茶酚胺类药物、停止运动、戒烟等。

在采样后的处理过程中，要密封保存样品以防止儿茶酚胺的分解和损失。

此外，在检测前，还需要根据具体的检查方法准备样品，如提取、净化等。

总的来说，儿茶酚胺的检查方法有高效液相色谱法、放免法和气相色谱法等。

生物样品中儿茶酚胺类物质检测方法的研究进展儿茶酚胺类(CAs)物质主要包括去甲肾上腺素(NE)，肾上腺素(EP)和多巴胺(DA)，广泛用于高血压的诊断和治疗，心脏骤停，支气管哮喘，帕金森氏病，心肌梗塞和心脏手术等。

近年来，随着对CAs研究的深入，国内外很多研究者开始将前期的分离与后期的检测步骤相结合，从而开发了一系列高效、高选择性、高灵敏度的CAs类物质检测方法。

的应用。

接下来分别从电化学分析法，荧光分析法，化学发光分析法以及液质联用法四个方面来分别进行综述。

1.电化学分析法由于ECD的高选择性，因此ECD最常被用来检测CAs类物质。

实验方法通过电化学氧化，CAs类物质很容易转换成醌类物质。

近年来，HPLC-ECD联用法已成功被用于各种生物流体中CAs类物质的分析检测，如血浆、尿液以及组织样品，同样也被用于血浆、尿液以及鼠脑微透析样品中CAs类物质的分析检测。

近年来，CE与ECD联用的方法也被用来检测生物样品中的CAs类物质[1]。

2.荧光分析法FL因其具有高度的选择性和灵敏度而备受人们的青睐。

该法之所以能直接用来检测CAs类物质，是由于CAs类物质本身就具有荧光[2]。

方兰云[2]等建立了一种固相萃取-HPLC-FL联用的方法，对吸毒人员血浆中NE、EP和DA及其代谢产物分别进行了测定，该方法首先利用固相萃取小柱 (SUPELCO RIDA C18) 对血浆样品进行前处理，然后通过HPLC将待测物进行分离，最后经过FL对CAs及其代谢产物进行检测。

3.化学发光分析法3.1 LC-CL联用法LC-CL联用法由于其具有灵敏度高，仪器简单和自动化程度高等优点，被人们普遍用来检测生物流体中痕量CAs类物质。

到目前为止，用来检测CAs类物质的CL体系主要有鲁米诺化学发光体系、过氧化草酸酯发光体系以及ECL[4]。

3.2 CE-CL联用法CE作为一种新的分离技术已经被应用到许多相关领域，作为一种高效能的分离分析手段，国内外很多学者已经将其应用于CAs类物质的检测[5]，该方法分离时间短，操作简便，样本不需要进行衍生，但是其检测灵敏度较其他方法低。

儿茶酚胺及其代谢产物检测意义
儿茶酚胺是一类重要的神经递质，包括肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺等。

它们在调节中枢神经系统、自主神经系统和内分泌系统等方面起着重要作用。

因此，儿茶酚胺及其代谢产物的检测对于评估神经功能和疾病诊断具有重要意义。

儿茶酚胺及其代谢产物的检测可以用于以下方面：
1. 神经系统疾病诊断：儿茶酚胺的代谢产物在体内循环，其水平的改变可以反映某些神经系统疾病的存在和程度。

例如，儿茶酚胺代谢产物的测量可用于帕金森病、抑郁症和注意力缺陷多动症等疾病的诊断和疾病进展的监测。

2. 肿瘤生物标志物：某些神经内分泌肿瘤会产生过量的儿茶酚胺，如嗜铬细胞瘤和神经节细胞瘤。

通过检测儿茶酚胺及其代谢产物的水平，可以帮助诊断和监测这些肿瘤的存在和治疗效果。

3. 药物和毒物代谢研究：某些药物和毒物的代谢需要通过儿茶酚胺途径完成。

通过检测儿茶酚胺及其代谢产物的水平，可以了解药物和毒物在体内的代谢过程，评估其安全性和有效性。

综上所述，儿茶酚胺及其代谢产物的检测对于评估神经功能、神经系统疾病诊断和治疗效果评估等具有重要意义。

高效液相色谱法检测大脑神经递质多巴胺多巴胺（dopamine， DA）是一类儿茶酚胺类物质（CAs），它存在于神经组织及体液中，是下丘脑和脑垂体腺中的一种重要的神经递质，脑垂体内分泌功能的协调与多巴胺在脑内特定区域的分布及含量有密切关系，导致神经功能紊乱，是帕金森病（Parkinson’s disease）发病的一个重要影响因素。

另外，多巴胺还能够引起心脏兴奋，使血流量增加，以用于感染性休克和心源性休克。

所以，进行多巴胺检测的研究具有重要的现实意义[1]。

本文就多巴胺的高效液相色谱法检测作一综述。

高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）[2，3]也是通用的DA的检测方法。

近年来，由于高效液相色谱技术的不断发展，用HPLC法分离测定体液和组织中CAs的方法日趋完善，检测灵敏度可达pmol水平。

高效液相色谱法具有高分离率，所以在CAs的分析中受到极大重视，HPLC法同电化学检测和荧光检测相结合是目前最有效且最常用的方法。

CAs本身有自然荧光，经HPLC法分离后，可以利用它的荧光进行检测，但是由于其自然荧光相对比较弱，不能用作生物样品灵敏的选择性测定方法。

儿茶酚胺类物质具有两个官能团（氨基和邻二羟基），因此可以通过衍生化形成具有强荧光的物质，借此提高检测灵敏度。

吴予明等[4]利用HPLC和荧光检测器对嗜铬细胞瘤患者和正常人24h尿中DA含量进行测定，对样品进行调酸、萃取、调碱、吸附、洗涤、解析处理后，100微升进样，结果可见：多巴胺浓度在1.3*10-7mol/L～3.8*10-6mol/L内与色谱峰峰高的线性关系良好（r=0.998）精密度RSD（n=6）4.2%～10.3%。

衍生化可分成柱前衍生化和柱后衍生化两种，在分离前需要制备荧光衍生物的柱前衍生化是，有邻苯二甲醛（OPA）、荧光胺（FA）、丹磺酞氯（DNSCI） l，2一二苯基乙二胺（DPE）及萘一2，3一二羧醛等属于柱前衍生化试剂。

儿茶酚胺测定方法儿茶酚胺(也称为生物胺)是一类含有芳香胺结构的有机化合物，包括组胺、色胺、肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺等。

它们在人体内起着重要的生理功能，包括调节血压、控制神经传递、参与免疫反应等。

因此，准确测量儿茶酚胺的含量对于临床诊断、药物研发以及食品安全等方面具有重要意义。

目前，有多种方法可以用来测定儿茶酚胺的含量，其中最常用的方法包括高效液相色谱法、气相色谱法和电化学法。

下面将详细介绍这些方法的原理和优缺点。

1. 高效液相色谱法(HPLC)是测定儿茶酚胺含量最常用的方法之一。

它基于样品中的儿茶酚胺在液相中的化学行为进行分离和检测。

首先，样品经过合适的前处理步骤，如固相萃取、酸解等，以提取出儿茶酚胺。

然后，将提取液注入高效液相色谱仪中，通过固定相的相互作用与待测儿茶酚胺发生分离。

最后，使用紫外光检测器或电化学检测器在特定波长下进行检测和定量。

这种方法的优点是分离效果好、测量灵敏度高，具有较高的选择性和准确性。

然而，HPLC方法需要复杂的仪器装置和操作技术，在分析过程中可能会受到杂质的干扰。

2. 气相色谱法(GC)是另一种常用的儿茶酚胺测定方法。

与HPLC类似，样品需要经过前处理步骤来提取儿茶酚胺。

然后，将提取液注入气相色谱仪中，通过气相载气流动相与待测儿茶酚胺发生分离。

最后，使用火焰离子化检测器或电子捕获检测器进行检测和定量。

气相色谱法的优点是分离效果好，分析速度快，且对样品矩阵的干扰较小。

然而，这种方法对于热稳定性较差的儿茶酚胺样品可能会导致峰形变形或降解，同时需要较高的操作技术水平。

3. 电化学法是一种测定儿茶酚胺含量的简便方法。

基于儿茶酚胺的电化学活性，在适当的电极上触发与儿茶酚胺的氧化或还原反应，并利用产生的电流或电势信号进行测定和定量。

电化学法的优点是样品前处理简单，测量速度快，操作简便。

同时，电化学法对儿茶酚胺的测量灵敏度较高，且具有良好的选择性。

然而，由于儿茶酚胺具有不同的氧化还原性质，在不同pH值和电极材料条件下可能会出现不同的电化学行为，因此需要根据具体的分析对象选择适当的电极和工作条件。

化工科技,2020,28(5) ：75〜80SCIENCE & TECHNOLOGY IN CHEMICAL INDUSTRY综述专论生物样品中儿茶酚胺的分析方法研究进展周 慧1,董 佳】，贺茂芳12**，刘文杰1,程清轩】，何孝文1*基金项目：陕西省大学生创新创业训练计划项目(2018DC-43);西安医学院国家自然科学基金孵育项目(2017GJFY08).* * *通讯联系人：贺茂芳(1989-),女，陕西安康人，博士，西安医学院讲师，研究方向为药物分析与样品前处理. 作者简介：周慧(1998-),女，内蒙古呼和浩特人，西安医学院药学院本科生，研究方向为药物分析.收稿日期：2020-09-06(1.西安医学院药学院，陕西西安7100212.西安医学院药物研究所，陕西西安710021)摘要：儿茶酚胺(CAs)是重要的神经递质，在生物体内发挥着至关重要的生理功能.因此，建立选择性好、灵敏度高、快速准确的分析方法在临床诊断中具有重要意义.作者就近年来儿茶酚胺的分离 分析方法进行了综述，包括高效液相色谱法、毛细管电泳法、电化学法和光谱法，为建立CAs 的检测新方法提供了参考依据.关键词：生物样品；儿茶酚胺；分析方法中图分类号：R 927；O 657.3 文献标识码：A 文章编号：1008-0511(2020)05-0075-06儿茶酚胺(Catecholamines, CAs)类物质主要 包括去甲肾上腺素(Norepinephrine, NE)、5-羟色胺(5-Hydroxytryptamine, 5-HT )、肾上腺素(Epinephrine , E)和多巴胺(Dopamine, DA)［1］. CAs 既是神经传导介质，也是内分泌激素，在生物体内发挥重要的生理功能.临床上，可通过检 测人体中血浆或尿液中CAs 的浓度水平用于诊 断高血压、糖尿病、甲状腺功能异常等内分泌相关的疾病［23］.因此，建立选择性好、灵敏度高、快速 准确的分析方法具有重要意义.目前，测定CAs 的方法有高效液相色谱法(HPLC)、毛细管电泳 法(CE)、电化学法和荧光光度法(FL)等.作者就近年来CAs 的测定方法进行了评述，将为发展CAs 的检测新方法提供参考依据.1 HPLC 法HPLC 法由于具有方便、快速、准确等优点,是CAs 最常用的分析方法.由于CAs 分子中的 氢键易于和硅醇基形成氢键，从而造成不可逆吸 附，因此通常向流动相中加入酸改善峰型；或者向流动相中加入离子对试剂，如十八烷基磺酸钠，采用离子对色谱进行分离.HPLC 法常与电化学 检测器(ECD)、荧光检测器(FLD)、质谱(MS)等 联用，以提高灵敏度⑷，ECD 因其高灵敏度、高分离效率成为首选.1.1 HPLC-ECD李静娜等［］建立了 HPLC-ECD 法测定人体 血清中的CAs,首先采用氧化铝作为固相萃取材 料对CAs 进行预富集，再运用HPLC-ECD 检测,获得最低检出限为0.1 ng/mL.该方法操作简单，所需生物样本少，同时，还具有灵敏度高、回收 率和重现性良好的优点.于梦洋等6应用HPLC-ECD 检测大鼠血清 中的E 、NE 以及DA 的含量，研究了束缚挤压伤大鼠血清中CAs 的变化.结果显示，E 、NE 及DA 的分离效果良好，无内源性杂质的干扰，各物质的回收率分别为98.54%.99.21%和97.31%.张文等［］以掺铈纳米二氧化铅修饰电极作为HPLC 的检测器，建立了人体脑脊液中DA 等单胺类神经递质及其代谢产物的测定方法.该修饰电极具有良好的电催化作用，获得了较高的灵敏 度和良好的重现性.-76-化工科技第28卷曾文芳等归采用离子色谱分离、碳纳米管修饰电极检测，以c（硫酸）=10mmol/L-<p（乙月青）= 10%溶液为流动相测定CAso该方法的检出限为0.04〜0.09ng/mL,回收率为96%〜102%,具有准确度高、精密度好的特点，是一种简单快速的分析方法。

儿茶酚胺类物质的生物合成及其功能研究儿茶酚胺类物质是指一类通过由酪氨酸生成的生物活性物质，包括肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺等。

这些物质在生物体内具有重要的生理和病理功能，并广泛参与了许多重要的生物学过程。

本文将介绍儿茶酚胺类物质的生物合成、代谢以及它们在生物体内的功能。

一、儿茶酚胺类物质的生物合成儿茶酚胺类物质的生物合成通常是通过酪氨酸代谢途径实现的。

首先，酪氨酸在酪氨酸羟化酶的催化下被羟化为L-DOPA（3,4-二羟基苯丙氨酸）。

接着，L-DOPA通过L-芳香氨酸羟化酶的催化被羟化为多巴胺（3,4-二羟基苯乙胺）。

最终，多巴胺再被多巴胺β-羟化酶催化为去甲肾上腺素和肾上腺素。

二、儿茶酚胺类物质的代谢儿茶酚胺类物质在生物体内主要通过肝脏和肾脏代谢。

肾上腺素和去甲肾上腺素通过甲基转移酶催化被转化为甲基化产物metanephrine和normetanephrine，然后被肾脏转化为vanillylmandelic acid (VMA)。

多巴胺则主要通过有系膜细胞的分泌和肝细胞中的氧化酶的作用被代谢。

三、儿茶酚胺类物质在生物体内的功能儿茶酚胺类物质在生物体内具有重要的功能，包括了神经递质、荷尔蒙以及免疫调节等方面的作用。

1. 神经递质：多巴胺、去甲肾上腺素和肾上腺素都是重要的神经递质，在神经细胞间传递信号和控制神经系统的调节中具有极其重要的作用。

2. 荷尔蒙：肾上腺素和去甲肾上腺素属于压力荷尔蒙，能够影响心率、血压等生理指标。

多巴胺则可能影响心血管系统，如在肝硬化、急性心力衰竭等疾病中通过使用多巴胺来调节血流量。

3. 免疫调节：去甲肾上腺素可通过α和β肾上腺素受体来影响白细胞的迁移和增殖，对于免疫系统功能的调节具有一定的作用。

四、儿茶酚胺类物质在疾病中的作用儿茶酚胺类物质在疾病中的作用主要由其在生物体内的浓度和代谢状态决定。

在某些疾病中，浓度的改变能够导致一系列的生理和病理反应，甚至可引起严重的心血管疾病或其他生理紊乱。

分析方法在儿茶酚胺类物质测定中的应用药学一班0811034122 李梅•摘要儿茶酚胺为体内的神经递质，在调节各种生理功能方面起着重要的作用。

它的检测在神经生理研究与递质代谢异常相关疾病如：帕金森病，心脏病、甲亢等诊断治疗及预防有着重要的意义。

本文介绍了几种分析方法在儿茶酚胺类物质测定中的应用。

•关键词儿茶酚胺；高效液相色谱法；毛细管电泳；荧光光度法•儿茶酚胺类（CAs)化合物是人体内重要的生理活性物质。

主要包括肾上腺素(E)、去甲肾上腺素（NE）及多巴胺（DA）。

各种疾病特别是高血压、交感神经瘤及嗜铬细胞瘤等疾病，多使儿茶酚胺类物质发生显著变化。

因此儿茶酚胺物质及其代谢产物的检出和定量是对某些疾病诊断及治疗不可缺少的手段[1]。

•CA的分析研究始于20世纪40年代，早期的测定方法主要是三羟基吲哚法和乙二胺缩合法。

随着人们对CA研究的深入又报道了许多测定方法，主要有高效液相色谱法、毛细管电泳法、质谱法、电化学法、化学发光法、荧光光度法等。

本文介绍了其中几种分析方法。

包括高效液相色谱法、毛细管电泳法、荧光光度法。

分析方法分析方法•1 高效液相色谱法（HPLC）•2 毛细管电泳（CE）•3 荧光光度法•1 高效液相色谱法（HPLC)•高效液相色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。

HPLC法中以荧光检测器和电化学检测器最为灵敏，可测得体内微量的CA。

•1.1高效液相色谱荧光法（HPLC-FD）•荧光检测器（FD）是高压液相色谱仪常用的一种检测器。

用紫外线照射色谱馏分，当试样组分具有荧光性能时，即可检出。

其特点是选择性高，只对荧光物质有响应；灵敏度也高，适合于多环芳烃及各种荧光物质的痕量分析。

也可用于检测不发荧光但经化学反应后可发荧光的物质。

儿茶酚胺测定方法儿茶酚胺是一类在神经系统中广泛存在的化合物，包括肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺等。

测定儿茶酚胺的含量在许多疾病的诊断和治疗中非常重要，例如儿茶酚胺肿瘤、心血管疾病和神经精神疾病等。

本文将详细介绍测定儿茶酚胺含量的方法。

一、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种常用的测定儿茶酚胺的方法。

该方法主要基于将样品中的儿茶酚胺化合物分离出来，然后通过比较标准曲线对其进行定量分析。

其步骤包括样品制备、分离和检测三个部分。

首先，需要将样品中的儿茶酚胺通过提取、离心和洗涤等步骤提纯出来。

然后，分离儿茶酚胺化合物的常用方法是使用反相高效液相色谱柱，并使用梯度洗脱。

最后，利用紫外检测器或荧光检测器等检测儿茶酚胺的含量。

该方法的优势是具有高灵敏度和高准确性，并且适用于各种样品类型。

但是，该方法的缺点是需要昂贵的仪器设备和专业技能。

二、气相色谱法气相色谱法也是一种常用的测定儿茶酚胺的方法。

该方法基于将样品中的儿茶酚胺化合物从样品基质中分离，然后通过气相色谱分析其化学结构和量。

其步骤包括样品制备、分离和检测三个部分。

首先，需要将样品中的儿茶酚胺通过萃取、蒸馏和萃取等步骤提纯出来。

然后，通过气相色谱柱，对儿茶酚胺进行分离和定量。

最后，利用质谱检测器等检测儿茶酚胺的含量。

该方法的优点是简单易行，适用于许多样品类型，并且具有高灵敏度和高准确性。

但是，该方法的缺点是对设备和技能方面的要求高，并且存在一定的毒性和危险性。

三、放射性标记法放射性标记法也是一种测定儿茶酚胺含量的方法。

该方法基于补底酶法的原理，将放射性氧分子标记到化合物中，通过分析放射性同位素来定量化合物。

其步骤包括样品制备、标记化合物、测定并计算其含量三个部分。

首先，需要将样品中的儿茶酚胺通过提取、离心和洗涤等步骤提纯出来。

然后，通过放射性测量技术将氧分子标记到儿茶酚胺中，再通过放射计数测定其含量。

最后，通过计算定量化合物的含量。

该方法的优势在于其高度敏感性和精确度，可用于在毫克到纳克的级别下分析儿茶酚胺。

Advances in Clinical Medicine 临床医学进展, 2021, 11(4), 1571-1578Published Online April 2021 in Hans. /journal/acmhttps:///10.12677/acm.2021.114225液相色谱串联质谱法分析人体内儿茶酚胺及其代谢产物的研究进展闫亚娟1，黄猛2，伦立民21青岛大学医学部，山东青岛2青岛大学附属医院检验科，山东青岛收稿日期：2021年3月12日；录用日期：2021年4月9日；发布日期：2021年4月16日摘要儿茶酚胺，包括肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺，是由酪氨酸在一系列酶的催化作用下合成的。

儿茶酚胺通过自主调节在生理活动中发挥重要作用，维持人体的动态平衡。

儿茶酚胺及其代谢物的异常浓度(特别是高浓度)常提示神经内分泌肿瘤，特别是嗜铬细胞瘤和副神经节瘤的发生。

嗜铬细胞瘤和副神经节瘤的显著特点是不规律地释放儿茶酚胺，有时呈爆炸式释放，以及顽固性高血压。

正是由于这些性质，嗜铬细胞瘤和副神经节瘤可出现许多严重的并发症，但目前对嗜铬细胞瘤和副神经节瘤的诊断率很低。

原因之一是其临床表现具有高度的异质性和多样性，但更重要的原因是缺乏一种筛选和诊断嗜铬细胞瘤和副神经节瘤的超敏方法。

目前，医学组织通常通过检测尿液或血浆中的儿茶酚胺来筛查嗜铬细胞瘤和副神经节瘤。

然而，儿茶酚胺及其某些代谢物的浓度低、不稳定、极性高、分子结构高度相似，使得儿茶酚胺的准确定量非常困难。

本文概述了儿茶酚胺及其代谢物的检测现状，讨论了液相色谱串联质谱法联合检测儿茶酚胺及其代谢物的必要性，阐述了联合检测方法开发与验证的基本步骤及注意事项。

关键词液相色谱串联质谱法，儿茶酚胺，嗜铬细胞瘤，甲氧基肾上腺素，甲氧酪胺Research Progress in the Analysis ofCatecholamines and Their Metabolites inHuman Body by Liquid ChromatographyTandem Mass SpectrometryYajuan Yan1, Meng Huang2, Limin Lun21Medical College, Qingdao University, Qingdao Shandong闫亚娟 等2Department of Clinical Laboratory, The Affiliated Hospital of Qingdao University, Qingdao Shandong Received: Mar. 12th , 2021; accepted: Apr. 9th , 2021; published: Apr. 16th , 2021Abstract Catecholamine, including epinephrine, norepinephrine and dopamine, is derived from tyrosine by the catalysis of a series of enzymes. Catecholamines take an important role in physiological activity via autonomic regulation and keep a dynamic balance in human body. The abnormal concentration (particularly the high level) of catecholamines and their metabolites often indicates the occurrence of neuron endocrine neoplasm especially pheochromocytoma and paraganglioma. The prominent features of pheochromocytoma and paraganglioma are releasing Catecholamines irregularly and sometimes explosively as well as refractory hypertension. It is because these nature, pheochromocy-toma and paraganglioma can present with lots of serious complications. Unfortunately, the diagnosis rate of pheochromocytoma and paraganglioma is very low. One reason is its high heterogeneity and protean clinical presentation, but the more important reason is lacking a hypersensitive method to screen and diagnose pheochromocytoma and paraganglioma. At present, medical organization usually screens pheochromocytoma and paraganglioma by detecting the Catecholamines in urine or plasma. However, low concentration, instability, high polarity and high similarity in molecular structure of some metabolites make it very difficult for accurate quantification of the Catechola-mines. In this paper, the detection status of catecholamine and its metabolites is summarized, the necessity of LC-MS/MS combined detection of catecholamine and its metabolites is discussed, and the basic steps and precautions of the development and verification of the combined detection me-thod are explained. KeywordsLiquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry, Catecholamines, Pheochromocytoma, Metanephrine, MethoxytyramineCopyright © 2021 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). /licenses/by/4.0/1. 前沿儿茶酚胺(catecholamine, CA)，包括肾上腺素(Epinephrine, E)、去甲肾上腺素(Norepinephrine, NE)和多巴胺(Dopamine, DA)，是由酪氨酸在一系列酶的催化作用下产生的。

儿茶酚胺的分离检测方法概述佳木斯大学药学院药学专业班级:一班姓名：姜亭亭学号：0911074124儿茶酚胺类物质分离分析方法概述（姜亭亭佳木斯大学药学院药学一班）摘要儿茶酚胺类物质是一种内源性物质，当其的含量发生显著变化时，就代表人体出现了一些病变，如巴金森氏病、高血压等，若要对这些疾病进行诊断和治疗，儿茶酚胺类物质的检出和定量是不可缺少的手段，本文通过引用一些文献对儿茶酚胺类物质的一些分离分析方法进行了概述。

关键词儿茶酚胺；分离；检测儿茶酚胺类物质作为交感肾上腺素能神经元和肾上腺髓质合成与释放的单胺类神经递质，是生物体内具有较强生理学效应的内源性活性物质，它包括去甲肾上腺素( NE)、5-羟色胺（5-HT）、肾上腺素( E)和多巴胺( DA) ,这一类物质的化学结构特点是都含有一个双羟基苯核和一个带氨基的侧链。

此类物质在脑和神经信号传导中起着重要的作用并且与多种生理、病理现象密切相关，参与心率呼吸和睡眠等植物神经功能调控，是一类重要的神经递质，与人们的健康有密切关系。

在医学方面其含量测定不仅可作为神经母细胞瘤、嗜铬细胞瘤和原发性高血压的诊断依据，而且可应用于其他儿茶酚胺相关的疾病研究,如传统儿茶酚胺类物质活动症、忧郁症及神经系统变性病变如帕金森氏综合症，还与心血管疾病等的出现有关。

因此儿茶酚胺的分析在生物学和医学方面有着重要意义，此类物质的分离分析就更为关键，然而使用正确的方法是得到正确的结论前提[1~5] 。

早在20世纪40年代人们已经开始对儿茶酚胺类物质的检测分析[4]，早期的测定方法主要是三羟基吲哚法和乙二胺缩合法.随着分析科学的蓬勃发展人们对儿茶酚胺研究已经更加深入，目前主要的分离检测方法主要有高效液相色谱法（HPLC）、毛细管电泳法（CE）、化学修饰电极法、气相色谱法（GC）、离子交换色谱（IEC）、酶催化动力学光度法以及与质谱、电化学检测法、荧光检测法、化学发光检测法之间的联用等［1-5，7，8，10-16，18，21-22］。

儿茶酚胺影响的实验研究【关键词】夏膝口服液；自发性高血压；儿茶酚胺近年来研究表明，在高血压的发病过程中往往表现出神经系统、内分泌系统所构成的复杂网络的功能紊乱，其间的信息联系主要是通过神经递质、内分泌激素、细胞因子来完成的。

儿茶酚胺(CA)是调节心血管活动的重要神经递质及重要的全身调节激素，可直接作用于血管，参与心脏的各项生理及病理过程，其在血浆的含量与高血压病的发病关系密切。

现通过观察SHR大鼠血清儿茶酚胺水平变化探讨夏膝口服液的降压机理。

1 实验材料1.1 实验动物 12周龄的雄性SHR 40只，相同周龄的雄性Wistar��Kyoto大鼠(WKY)10只，体重(230±20) g(由北京维通利华公司提供)。

1.2 药物与试剂夏膝口服液(由长春中医药大学第一附属医院制剂室提供，批号：030108)；卡托普利片(上海华氏制药有限公司，批号：060601)；厄贝沙坦片(修正药业集团股份有限公司，批号：060501)；儿茶酚胺ELISA测定试剂盒(上海麦莎生物工程有限公司)。

1.3 主要仪器 BP��6无创动物血压测量系统(成都泰盟科技有限公司);MK��3全自动酶标分析仪(上海弘联公司)；京立LDZ5��2离心机(北京医用离心机厂);金怡MM��2微量振荡器(中国金坛市医疗仪器厂)。

2 实验方法2.1 实验分组实验前测定每只大鼠的血压，按血压从低到高排序，查随机数字表随机分为4组：夏膝口服液组、卡托普利组、厄贝沙坦组、空白对照组，每组10只；设10只WKY大鼠为正常对照组。

2.2 给药剂量及途径按人/鼠公斤体重的等效剂量换算公式计算大鼠给药量，5组动物每天上午按下列剂量灌胃给药1次：夏膝口服液组10 g・kg-1·d-1，厄贝沙坦组0.013 g・kg-1・d-1，卡托普利组0.0083 g・kg-1・d-1，空白对照组及正常对照组给以等体积蒸馏水灌胃。

2.3 观察指标血压值；血浆儿茶酚胺水平。

儿茶酚胺是一种含有儿茶酚和胺基的神经类物质。

通常，儿茶酚胺是由肾上腺髓质，肾上腺神经元及肾上腺外嗜铬体分泌的激素，包括肾上腺素、去甲肾上腺上腺上腺素、多巴胺和多巴。

但肾上腺髓质只释放肾上腺素与去甲肾上腺上腺上腺素，且以肾上腺素为主。

作为激素释放的肾上腺素和去甲肾上腺上腺上腺素具有交感神经兴奋心血管及促进能量代谢、升高血糖等作用。

测定尿儿茶酚胺对诊断嗜铬细胞瘤很有价值。

留取24h尿液，以浓盐酸5～10ml 作防腐剂，取10ml送检。

//胺：氨分子中的氢被烃基取代而生成的化合物儿茶酚：即邻苯二酚，儿茶酚多数以衍生物的形式存在于自然界中。

哺乳动物体内的拟交感胺，如肾上腺素、去甲肾上腺素等是儿茶酚的苯环上带有一个β-羟基乙胺侧链的化合物。

肾上腺素（adrenaline,epinephrine,AD）：是肾上腺髓质的主要激素，其生物合成主要是在髓质铬细胞中首先形成去甲肾上腺素，然后进一步经苯乙胺-N-甲基转移酶的作用，使去甲肾上腺素甲基化形成肾上腺素。

肾上腺素是由人体分泌出的一种激素。

当人经历某些刺激（例如兴奋，恐惧，紧张等）分泌出这种化学物质，能让人呼吸加快（提供大量氧气），心跳与血液流动加速，瞳孔放大，为身体活动提供更多能量，使反应更加快速。

肾上腺素是一种激素和神经传送体，由肾上腺释放。

肾上腺素的一般使心脏收缩力上升，心脏、肝、和筋骨的血管扩张和皮肤、粘膜的血管收缩，是拯救濒死的人或动物的必备品。

肾上腺素分子式（儿茶酚胺）去甲肾上腺素：（INN名称：Norepinephrine，也称Noradrenaline，缩写NE或NA），旧称“正肾上腺素”，是肾上腺素去掉N-甲基后形成的物质，在化学结构上也属于儿茶酚胺。

它既是一种神经递质，主要由交感节后神经元和脑内肾上腺素能神经末梢合成和分泌，是后者释放的主要递质，也是一种激素，由肾上腺髓质合成和分泌，但含量较少。

循环血液中的去甲肾上腺素主要来自肾上腺髓质。

去甲肾上腺素也能显著地增强心肌收缩力，使心率增快，心输出量增多；使除冠状动脉以外的小动脉强烈收缩，引起外周阻力明显增大而血压升高，故临床常作为升压药应用。

儿茶酚胺及其代谢物检测
儿茶酚胺（Catecholamine, CA）是一种含有儿茶酚和胺基的神经类物质。

儿茶酚胺包括去甲肾上腺素（NA或NE）、肾上腺素(Ad或E)和多巴胺（DA），这三种儿茶酚胺都是由酪氨酸为前体转化得到的。

迪信泰检测平台采用高效液相色谱(HPLC)和液相质谱联用(LC-MS)技术，可高效、精准的检测儿茶酚胺的含量变化。

对于常见神经递质或以上神经递质的同类物质，可结合标准品进行检测。

对于稀有的神经递质分子，如提供标准样品，迪信泰检测平台可提供定制检测。

此外，我们还提供其他多种神经递质检测服务，以满足您的不同需求。

样品制备
1）取动物脑部置于冰上剥离所要组织部位；
2）称重后加入组织裂解液；
3）置于1.5 mL离心管中充分匀浆；
4）超声破碎两次；
5）于14000 rpm离心15 min；
6）取上清于另一离心管；
7）重新离心一次，再次取上清液，-80℃保存；
8）取样品冰上溶化后再次离心后，过0.2 μm的耐酸过滤器；
9）用HPLC检测。

HPLC和LC-MS测定儿茶酚胺样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。

周期：2~3周
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）
2. 相关质谱参数（中英文）
3. 质谱图片
4. 原始数据
5. 儿茶酚胺含量信息。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910113608.8(22)申请日 2019.02.14(71)申请人 上海柯领生物医药科技有限公司地址 200032 上海市徐汇区茶陵路333号(72)发明人 陆优丽　姜凤丽　张美微　李水军　刘罡一　贾晶莹　忻亮　张梦琪　余成寅　(74)专利代理机构 上海申浩律师事务所 31280代理人 沈其梅(51)Int.Cl.G01N 30/02(2006.01)G01N 30/06(2006.01)(54)发明名称一种儿茶酚胺类激素的检测方法(57)摘要本发明提供一种儿茶酚胺类激素的检测方法，所述方法包括步骤：(1)对样品进行蛋白沉淀，取上清液；(2)对上清液进行丹磺酰氯衍生化；(3)衍生化后的液体进行固相萃取；(4)萃取获得的样品进行液相色谱串联质谱分析，计算获得儿茶酚胺及其氧甲基化代谢物的含量。

本发明方法操作简单方便，便于大规模操作，具有高通量、高灵敏度、高特异性。

权利要求书2页 说明书6页 附图1页CN 109613144 A 2019.04.12C N 109613144A权　利　要　求　书1/2页CN 109613144 A1.一种儿茶酚胺类激素的检测方法，其特征在于，所述方法包括步骤：(1)对样品进行蛋白沉淀，取上清液；(2)对上清液进行丹磺酰氯衍生化；(3)衍生化后的液体进行固相萃取；(4)萃取获得的样品进行液相色谱串联质谱分析，计算获得儿茶酚胺类激素的含量。

2.如权利要求1所述儿茶酚胺类激素的检测方法，其特征在于，所述儿茶酚胺类激素包括肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、变肾上腺素、变去甲肾上腺素和3-甲氧酪胺中的三种以上。

3.如权利要求1所述儿茶酚胺类激素的检测方法，其特征在于，所述步骤(4)中质谱通道还针对分析物选择了定量和定性离子对，并通过计算二者比值与标准样品的偏差来判断临床样本是否存在干扰。