肝组织总蛋白提取的标准操作规程（编号：025）
1、目的及适用范围
该SOP用来规范肝组织总蛋白提取的操作。
2、主要仪器及试剂
均质仪、铁架台、冷冻台式离心机、微量移液器、单去污剂裂解液（50mmol/L Tris·HCl pH8.0，150mmol/L NaCl，1％TritonX-100，100μg/mL PMSF）
3、相关器皿的预处理
剪刀和均质仪的转头需彻底清洗后高压灭菌。
4、操作步骤
4.1 将少量肝组织块置于玻璃平皿中，用干净的剪刀将组织块尽量剪碎，同时去除结缔组织。
4.2 每100mg组织加400μL单去污剂裂解液（含PMSF）于15mL离心管中，使用均质仪进行匀浆，冰上操作。
4.3保持组织块低温状态，均质仪运行3s，停顿2s，直至组织完全碾碎成浆。
4.4 用微量移液器将裂解液移至1.5mL 离心管中，然后在4℃ 12000rpm离心5min，取上清分装于0.5mL离心管中并置于-20℃保存。
5、问题向导
蛋白得率低可能原因：
5.1 组织裂解不彻底
5.2 提取过程中的蛋白降解
6、注意事项
注意初始组织块的处理，尽量剪碎，尽量去除结缔组织。匀浆彻底，同时保证匀浆过程低温，防止蛋白降解。根据提取效果，适当调整Detergent的成分。
附：单去污剂裂解液配制方法
单去污剂裂解液：50mmol/L Tris·HCl pH8.0，150mmol/L NaCl，1％TritonX-100，100μg/ml PMSF 1moL/L Tris·HCl（pH8.0） 2.5mL
NaCl 0.438g
50
