流式细胞仪操作规程-
S O P
流式细胞仪操作规程目录
1：淋巴细胞亚群测定及绝对计数
2：活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的检测
3：HLA-B27测定
4：CD55／CD59测定
5：干细胞检测和绝对计数
6：白血病免疫分型测定
7：淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4测定8：细胞周期分析
9：活化血小板检测
10：血小板抗体测定
11：红细胞抗体测定
12：粒细胞抗体测定
淋巴细胞亚群测定
(流式细胞仪)
医院检验科
操作规程文件号：
200 年月日起实施
第1版
(共3页)
本规程每2年复审一次
复审日期：年月日
复审人：
规程编写者：
审批者：
批准日期：年月日
文件分发部门和／或个人
院档案室保管者：
检验科主任：
检验科实验室：
淋巴细胞亚群测定
方案（Protocol）1.选参数
4色点击
点击
3色
点击
（命名，点击save）2.画图
结果
此图为CD45圈门
如果做绝对计数，则
填写Flow-Count的浓
选中cell/ul即可
活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的测定
HLA-B27测定
方案（Protocol）
1.选参数
点击
点击
键入文件名，点击Save 2.画图
1.positive (+)
X-Mean=17.1
2.negative(-)
X-Mean=1.2 X-Mean=5.8
CD55/CD59测定
方案（Protocol）(同HLA-B27)
结果
1.RBC: normal
2.RBC: abnormal
3.WBC
干细胞检测和绝对计数
方案（Protocol）
同淋巴细胞亚群检测结果（Result）
白血病免疫分型测定
T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4检测
方案（Protocol）
细胞周期分析
方案（Protocol）
1.选参数
选择Cytometer Control点击Parameters后
2.画图
结果（Result）
血小板膜表面抗体测定
仪器
BeckmanCoulter EPICS XL/FC500/Altra
操作：
富集血小板法：
1）800r/min*15min,取上清，
2）加4－5ml鞘液，2000r/min*3min,弃上清，重复一次。
3) 分别向试管中加入准备好的10u1含血小板的PBS（血小板的量约为106）
（血小板若在正常范围，稀释到原量直接取10u1。）。
4) 分别向已编好号的试管中依次加入一抗和二抗（设对照）
5)混匀，避光，室温孵育20-30分钟
6)洗或不洗，上机测样
全血法：
1）加4－5ml鞘液，1500r/min*15min,弃上清，后同上3）－6）
报告结果
报告百分数
操作性能
精密度批内五次重复CV<2％
参考值
IgA<2.98% IgG<3.04%
IgM<3.0% IgD<2.91%
临床意义
为免疫性血小板减少性紫癜(ITP)诊断、治疗、预后估计的重要指标，在ITP、胶原性疾病时升高。
方案（Protocol）
红细胞膜蛋白结构测定
（红细胞抗体）
BeckmanCoulter EPICS XL/FC500/Altra
操作：
1) 分别向试管中加入混匀的100u1抗凝血（1：200稀释后）。
2) 按照要求，分别向已编好号的试管中依次加入一抗和二抗（设对照）
3)混匀，避光，室温孵育20-30分钟
4)上机测样
报告结果
报告百分数
操作性能
精密度批内五次重复CV<2％
参考值
IgA<2.78% IgG<2.98%
IgM<2.52% IgD<2.88%
临床意义
自身溶血性贫血的分型诊断
方案（Protocol）
粒细胞抗体测定
操作：
1) 溶血：a. OptiLyse C(按说明书步骤溶血)
b. 使用COULTER Q—PREP制备系统
开机---显示READY灯亮---选择35SEC灯亮---开门---放入试
管关门---自动进行溶血---显示READY灯亮---开门---取出试
管---再进行下一个样品测定。
（*溶血前确认A/B/C管路充满并能打出液体）
2) 分别向试管中加入经溶血处理得样本100u1。
3) 分别向已编好号的试管中依次加入一抗和二抗（设对照）
4)混匀，避光，室温孵育20-30分钟，洗涤离心
5)上机测样
报告结果
报告百分数
操作性能
精密度批内五次重复CV<2％
参考值
IgA<2.68% IgG<2.66%
IgM<2.49% IgD<3.4%
临床意义
白细胞减少症的分型诊断，大多数白细胞减少症患者抗体为阳性
方案（Protocol）
