关于鲎试剂在细菌内毒素检查法中使用的探讨

细菌内毒素试验（鲎试验）的全面解析一般细菌毒素可分为两类，一类为外毒素(Exotoxin)；它是一种毒性蛋白质，是细菌在生长过程中分泌到菌体外的毒性物质。

产生外毒素的细菌主要是革兰氏阳性菌。

如白喉杆菌、破伤风杆菌、肉毒杆菌、金黄色葡萄球菌以及少数革兰氏阴性菌。

另一类为内毒素(Endotoxin)，是革兰氏阴性菌的细胞壁的产物。

细菌在生活状态时不释放出来，只有当细菌死亡自溶或粘附在其它细胞时，才表现其毒性，内毒素的主要化学成分是脂多糖中的类脂A成分。

和热原的关系热原(pyrogen)系指能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。

它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。

热原是否就是内毒素？细菌内毒素是热原的一种，即细菌性热原。

细菌内毒素被认为是热原的本质，此事在学术上仍有争议，热原不仅是细菌内毒素。

但在药检的范畴，细菌内毒素是主要的热原物质，可以说无内毒素就无热原，控制内毒素就是控制热原。

热原反应：含有热原的注射剂注入人体可引起发热反应，使人体产生发冷、寒战、体温升高、出汗、恶心、呕吐等症状，有时体温可升至40℃，严重者甚至昏迷、虚脱，如不及时抢救，可危及生命。

来源和控制方法1、细菌内毒素的特性2、去除细菌内毒素的方法(1)吸附法此法是利用活性炭对热原的吸附作用达到去除作用的方法。

常用的吸附剂中，活性炭对热原的吸附作用最强，一般用量为总容量的0.1%-0.5% ，将溶液加热到70℃左右保温一定时间效果更好。

使用的活性炭应符合药典规定要求。

(2)蒸馏法此法是利用热原具有不挥发性而达到去除目的。

因此，凡适于蒸馏的药品均可用蒸馏法除去热原。

(3)热破坏法此法是利用热高温能破坏热原质达到去除目的。

因此，凡适用于高温处理的如热原检查试验中接触药液的容器，可用180℃干烤3小时，或250℃干烤30min以上。

(4)强酸强碱处理法此法利用强酸强碱能破坏热原而达到去除的目的。

(5)其他，也可以采用过滤等方法去除热原。

细菌内毒素与鲎试剂反应机理
细菌内毒素是一种由细菌产生的有毒物质，对人体健康带来严重的威胁。

鲎试剂是一种常用于检测细菌内毒素的试剂。

本文将探讨细菌内毒素与鲎试剂反应的机理。

鲎试剂是由鲎血清制成的，其中含有一种叫做鲎凝集素的蛋白质。

细菌内毒素与鲎凝集素之间存在一种特殊的相互作用。

细菌内毒素可以与鲎凝集素结合，形成一个复合物。

这个复合物会导致鲎凝集素发生聚集，形成一种凝集物。

通过观察鲎试剂在细菌内毒素存在下的凝集反应，我们可以判断细菌内毒素的存在与浓度。

当细菌内毒素浓度较高时，凝集反应会更明显。

而当细菌内毒素浓度较低时，凝集反应会较弱或不明显。

这种凝集反应的机理是基于鲎凝集素与细菌内毒素之间的亲和性。

鲎凝集素可以识别并结合特定的糖分子，而细菌内毒素上的一些糖分子与鲎凝集素具有亲和性。

当细菌内毒素存在时，鲎凝集素会与其结合，从而导致凝集反应的发生。

细菌内毒素与鲎试剂反应机理的研究对于细菌内毒素的检测和预防具有重要意义。

通过了解细菌内毒素与鲎试剂的相互作用，我们可以快速、准确地检测细菌内毒素的存在与浓度，从而采取相应的措施保护人体健康。

细菌内毒素与鲎试剂之间的反应机理是基于鲎凝集素与细菌内毒素之间的亲和性。

通过观察鲎试剂的凝集反应，我们可以判断细菌内毒素的存在与浓度。

这一研究对于细菌内毒素的检测和预防具有重要意义。

鲎试验检查细菌内毒素应注意的问题鲎试验检查细菌内毒素应注意的问题发布时间02年09月05日 09时18分方法：通过对干扰鲎试验准确性干扰因素的分析(包括鲎试剂本身、操作条件、配制原料等)，提出了鲎试验中应注意的问题。

结果：只要克服了检查中的干扰因素，鲎法具有比家兔法更简便、快速、灵敏度高、重现性好等优点。

鲎试验是利用鲎的变形细胞与微量内毒素产生凝集反应的现象，作为判断供试品中细菌内毒素限量是否符合规定的一种方法[1]。

它具有比家兔法更简便、快速、灵敏度高、重现性好等优点。

中国药典1995年版已收载细菌内毒素检查法(简称鲎试验)，但只用于几种输液的检查。

根据现有的实验证明，凡不干扰细菌内毒素检查或虽有干扰，但可以克服的药品注射剂，将能够全部以鲎法代替家兔热原检查法。

但是该法受到许多因素的影响，故在做鲎试验检查时，应注意下列问题。

1鲎试剂本身1.1鲎试剂灵敏度 为了保证检查细菌内毒素结果的准确性，用于试验的鲎试剂应首先核对灵敏度。

因为在我们的实际工作中，发现鲎试剂均符合药典规定标准前提下，由于生产厂家不同，部分鲎试剂的实测灵敏度与标示值有差异而导致检测同一检品时，用相同标示值的鲎试剂，出现不同结果。

因而先核对灵敏度可避免因鲎试剂本身造成的判断失误。

建议法定部门和生产单位应注意鲎试剂的质量检查。

1.2供试品稀释 在取样品时，一定要熟悉中国药典的内容，不能直接取大输液原液0.1ml进行检查，这是排除干扰因素的简单有效的方法。

因药典已明确规定试验中鲎试剂的灵敏度不超过0.5EU/ml，根据供试品的稀释公式： 供试品稀释倍数= L/λυL ：供试品的内毒素限量(1EU/ml)λυ：鲎试剂灵敏度的标示值(EU/ml)故检测大输液均应稀释后才能进行试验，如选用更高灵敏度的鲎试剂，则应增加样品的稀释倍数。

稀释用的细菌内毒素检查用水药典作了规定。

在4h内不得与鲎试剂产生凝集反应。

如果直接用供试品原液试验，就会使供试品的内毒素提高到0.5EU/ml或0.5EU/ml以下，这样，根据目前大输液的生产和贮藏条件，有些就会达不到，鲎法检出的阳性率会提高，兔法复核的机遇也将增多，势必会浪费人力物力。

应用鲎试剂凝胶法检查抗狂犬病血清中细菌内毒素的研究【摘要】目的研究鲎试剂凝胶法与家兔测温法检测抗狂犬病血清不同生产阶段产品中细菌内毒素与热原试验结果的相关性，来确定抗狂犬病血清细菌内毒素的限量标准。

方法确定内毒素的限值和供试品溶液最大有效稀释倍数；制备供试品溶液在最大有效稀释倍数下作干扰试验；确认无干扰作用后，用鲎试剂凝胶法检测抗狂犬病血清不同生产阶段产品进行细菌内毒素的限量检查，并与家兔测温法结果相对比。

结果连续检查十批抗狂犬病血清制品细菌内毒素的限量符合规定，鲎试剂凝胶法与家兔测温法试验符合率100%。

结论用鲎试剂凝胶法对抗狂犬病血清不同生产阶段产品进行细菌内毒素的限量检测为快速、准确，可用鲎试剂凝胶法代替家兔测温法检测抗狂犬病血清制品中热原。

工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，然后制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，每个内毒素浓度平行做4管，另外2管作为阴性对照管。

按凝胶法鲎试剂说明书检查操作进行，封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入(37±1)℃的恒温器中，保温(60±2)min。

然后取出观察结果。

1.2.1.4凝胶法干扰试验取3批经热原检查法检测合格的抗狂犬病血清，根据MVD将抗狂犬病血清溶液稀释做为3批供试品溶液，每批取36支鲎试剂，其中16支根据鲎试剂灵敏度的标示值（λ），将细菌内毒素工作标准品用供试品溶液溶解，然后制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，每个内毒素浓度平行做4管，作为干扰试验系列（E/S系列）；而另16支，也根据鲎试剂灵敏度的标示值（λ），将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，然后制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，每个内毒素浓度平行做4管，作为鲎试剂标示灵敏度的对照系列（E系列）；把剩余4管，2管作为供试品溶液检查（S），另外2管作为阴性对照（NC）。

按凝胶法鲎试剂说明书检查操作进行，封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入(37±1)℃的恒温器中，保温(60±2)min。

细菌内毒素与鲎试剂反应机理引言细菌内毒素是由细菌产生的一类有毒化合物，可以对人体和其他生物产生严重的危害。

鲎试剂是一种常用于检测细菌内毒素的试剂，通过与细菌内毒素发生反应来实现检测。

本文将介绍细菌内毒素与鲎试剂的反应机理，包括反应过程、影响因素以及实验方法等内容。

1. 细菌内毒素概述细菌内毒素是一类由细菌产生的有毒化合物，常见的包括脂多糖（LPS）和外毒素等。

这些化合物可以引起炎症反应、损伤组织和器官，并在严重情况下导致败血症等危险疾病。

2. 鲎试剂概述鲎试剂是一种常用于检测细菌内毒素的试剂，其原理是通过与细菌内毒素发生特异性反应来实现检测。

鲎试剂通常由两部分组成：辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗体和底物。

3. 反应机理细菌内毒素与鲎试剂的反应机理如下：1.鲎试剂中的抗体能够识别并结合特定的细菌内毒素。

2.细菌内毒素与抗体结合后，形成一个复合物。

3.复合物中的细菌内毒素能够与HRP标记的抗体发生反应。

4.HRP在适当条件下可以催化底物发生氧化反应，产生可检测的信号。

4. 影响因素细菌内毒素与鲎试剂反应的效果受到多种因素的影响，包括以下几个方面：1.温度：适宜的温度有助于提高反应速率和灵敏度。

一般情况下，常温或37摄氏度是常用的温度条件。

2.pH值：pH值对于鲎试剂反应具有重要影响。

不同细菌内毒素与鲎试剂之间可能存在最适宜pH值差异。

3.时间：反应时间需要根据具体实验条件进行优化。

过短或过长的反应时间都可能导致结果不准确。

4.细菌内毒素浓度：细菌内毒素浓度的高低直接影响反应的灵敏度和线性范围。

5. 实验方法以下是一种常用的实验方法，用于检测细菌内毒素与鲎试剂的反应：1.准备样品：收集待检测的细菌培养物，并将其离心沉淀。

将沉淀物重新悬浮于适当的缓冲液中。

2.添加试剂：将鲎试剂中标记有HRP的抗体加入样品中，充分混合。

3.反应条件：根据实验要求，调节温度、pH值和反应时间等条件。

4.反应停止：加入适当的停止液，停止反应，并阻断进一步产生信号。

鲎实验在五种大输液细菌内毒素检查中的应用本文主要介绍了鲎实验在细菌内毒素检查中的应用，详细分析了实验准备、实验环境、鲎试剂的灵敏度、具体的操作步骤等，从而为进一步做好鲎实验提供了依据。

标签：鲎实验；细菌内毒素细菌内毒素实验（BET），简称鲎实验，最早收载于1980年美国药典第20版，后来，英国药典、欧洲药典、日本药局方、中国药典等相继收载了该方法。

在BET法实施的过程中，人们逐渐认识到在所有药学领域和药品生产中对内毒素污染进行监督是非常必要的，而且，用鲎实验法要比家兔法迅速、经济、所需样品量少、操作过程工作量小、每天可进行许多样品的检测。

BET法具有家兔法所无可比拟的这些优点，现以广泛应用于药品的质量控制。

中国药典2010年版收载了12种药品进行细菌内毒素检查，将BET法作为法定标准收载，并对鲎试剂、细菌内毒素标准、试验程序、判断标准都作了具体的规定。

灭菌注射用水、注射用水、0.9﹪氯化钠注射液，2010年版药典规定，必须采用BET法检查细菌内毒素，不可采用热原检查法，5﹪和10﹪的葡萄糖注射液是中国药典2010年版收载品种葡萄糖注射液的两种规格，其检查项目虽是“热原检查”而不是细菌内霉素检查，其原因主要是10ml：2g；20ml：5 g及20ml：10g；三种规格的葡萄糖注射液，目前尚未做足够的细菌内毒素检查法的考核工作，故该品种热原检查项暂未作修定。

但是，BET法易受多种因素的影响，我们采用BET法近十年，就影响鲎实验的因素作了初步探讨，为使鲎实验结果准确，我们认为在实验过程中应注意以下几个方面：1 实验准备实验所用的卡介苗注射器、针头、镊子、试管、砂轮等器皿，应置烤箱中经180℃干烤至少2 h或至少30min，以除去外原性热原。

去除热源的器皿只能在2d内使用，超过2d时需做重新处理。

2 实验环境实验可在超净工作台上进行。

实验前应按无菌要求，对无菌室超净工作台用1﹪的84消毒液进行清洗消毒，我们曾尝试在控制区普通桌面上进行实验，实验结果表明，可能会因实验环境的影响带来假阳性结果。

细菌内毒素检查法研究进展摘要：细菌内毒素是革兰阴性菌细胞壁上的脂多糖，在极微量（1-5ng/kg体重）的情况下便可引起人体发热、白细胞减少、微循环障碍、全身炎症反应及多器官功能衰竭等严重不良反应，所以在药物生产中，尤其是注射剂的生产中，细菌内毒素的控制与检测非常重要，关乎人们的生命安全。

本文对细菌内毒素检查法研究进展进行探讨。

关键词：细菌内毒素检查法；鲎试剂；微量凝胶法；重组C因子法引言：细菌内毒素广泛存在于人们的生活中，可引起人体发热、白细胞减少、微循环障碍、内毒素休克、弥散性血管内凝血等症状，在药品生产过程中不可避免地会引入细菌内毒素，所以药品质量控制中对内毒素的检测尤为重要。

目前，细菌内毒素的检测方法有家兔热原试验法、鲎试剂法、微量凝胶法、重组C因子法、酶联免疫法等检测方法。

文章对这几种检测方法进行综述，比较各自的优缺点，以期为内毒素的检测提供更合理有效的方法。

概述细菌内毒素的检测方法：家兔热原试验法、鲎试剂法、微量凝胶法、重组C因子法、酶联免疫法等检测方法。

《中华人民共和国药典》（2015版）规定细菌内毒素的检测采用鲎试剂检测法。

鲎试剂是由美洲鲎或东方鲎的血液中变形细胞的溶解物提取而成。

我国每年对鲎试剂的需求为1000万支，使我国鲎资源面临着巨大压力。

由于近些年浅海环境的恶化，人们肆意地捕食，我国的鲎资源急剧减少，所以，寻找细菌内毒素检查法的替代方法和补充方法已经迫在眉睫。

二、细菌内毒素检查方法分析1、家兔法由于家兔对热原的反应与人基本相似，所以，采用家兔耳缘静脉注射的方式，监测家兔体温，用来定性检测热原。

但是家兔法存在很多缺点，如：不能定量检测热原、使用动物实验、检测周期长、灵敏度低等，因此家兔法正在逐步被取代。

2、鲎试剂法鲎试剂法是目前检查细菌内毒素的常用标准，鲎试剂主要含有：C因子、B因子、G因子、凝固蛋白酶原等物质，其反应原理是：首先C因子与细菌内毒素结合被激活为酶活性形式，然后活化的C因子将B因子活化，活化的B因子将凝固蛋白酶原活化为凝固蛋白酶，凝固蛋白酶将凝固蛋白原转化为凝固蛋白形成凝胶。

一、实验目的1. 了解鲎试验法的基本原理和操作步骤。

2. 学会使用鲎试验法检测细菌内毒素。

3. 掌握细菌内毒素对生物体的危害及预防措施。

二、实验原理鲎试验法是一种检测细菌内毒素的方法，其原理是鲎血液中的凝固酶在细菌内毒素的作用下，会发生凝固反应。

通过观察鲎血液凝固的情况，可以判断样品中是否含有细菌内毒素。

三、实验材料1. 鲎血液试剂2. 细菌内毒素标准品3. 待测样品4. 实验器材：移液器、试管、恒温水浴锅、计时器等四、实验步骤1. 准备工作（1）将鲎血液试剂置于37℃恒温水浴锅中预热10分钟。

（2）取试管若干，标记为A、B、C、D，分别加入鲎血液试剂。

2. 标准曲线绘制（1）取标准品，按照说明书要求，用生理盐水进行稀释，得到一系列浓度梯度的标准品溶液。

（2）取试管A，加入鲎血液试剂1ml，再加入标准品溶液0.1ml，混匀。

（3）按照相同方法，分别向试管B、C、D中加入不同浓度的标准品溶液，混匀。

（4）将试管置于37℃恒温水浴锅中孵育30分钟。

（5）观察各试管凝固情况，记录凝固时间。

3. 待测样品检测（1）取试管E，加入鲎血液试剂1ml，再加入待测样品0.1ml，混匀。

（2）将试管E置于37℃恒温水浴锅中孵育30分钟。

（3）观察试管E凝固情况，记录凝固时间。

4. 结果分析（1）以标准品浓度为横坐标，凝固时间为纵坐标，绘制标准曲线。

（2）根据待测样品的凝固时间，从标准曲线上查得对应的细菌内毒素浓度。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：通过绘制标准曲线，可以得到标准品浓度与凝固时间之间的关系，为待测样品的检测提供依据。

2. 待测样品检测：根据待测样品的凝固时间，从标准曲线上查得细菌内毒素浓度为5EU/ml。

六、实验结论本实验采用鲎试验法成功检测出待测样品中的细菌内毒素，浓度为5EU/ml。

结果表明，鲎试验法是一种简单、快速、灵敏的细菌内毒素检测方法，适用于临床和科研领域。

七、实验讨论1. 鲎试验法具有操作简便、快速、灵敏等优点，是一种理想的细菌内毒素检测方法。

一、实验目的1. 了解鲎实验的基本原理和方法；2. 掌握鲎实验的操作步骤；3. 学会观察和分析实验结果；4. 培养实验操作技能和实验报告撰写能力。

二、实验原理鲎实验是一种检测细菌内毒素的方法。

鲎是一种生活在海洋中的生物，其血液中含有一种特殊的凝固蛋白，当与细菌内毒素接触时，会迅速凝固。

通过观察鲎血液凝固的时间，可以判断细菌内毒素的存在和含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：鲎血液、细菌内毒素标准品、生理盐水、注射器、试管等；2. 实验仪器：恒温箱、显微镜、计时器等。

四、实验步骤1. 准备工作：将鲎血液和细菌内毒素标准品分别放入无菌试管中，加入适量生理盐水稀释；2. 设置实验组：将稀释后的鲎血液和细菌内毒素标准品分别加入两个无菌试管中，分别标记为实验组和对照组；3. 设置对照组：将稀释后的鲎血液和生理盐水分别加入两个无菌试管中，分别标记为实验组和对照组；4. 加入细菌内毒素：在实验组和对照组的试管中分别加入适量的细菌内毒素；5. 混匀：用无菌棉签轻轻搅拌试管中的混合液，使细菌内毒素充分溶解；6. 观察和记录：将实验组和对照组的试管放入恒温箱中，观察鲎血液凝固的时间，并记录实验结果；7. 结果分析：根据实验结果，判断细菌内毒素的存在和含量。

五、实验结果与分析1. 实验结果：实验组中，鲎血液在加入细菌内毒素后迅速凝固，对照组中，鲎血液在加入生理盐水后无明显变化；2. 结果分析：实验结果表明，细菌内毒素能引起鲎血液凝固，从而判断细菌内毒素的存在。

根据实验结果，可以推算出细菌内毒素的含量。

六、实验总结1. 鲎实验是一种检测细菌内毒素的有效方法，具有操作简便、灵敏度高、特异性强等优点；2. 在实验过程中，应注意无菌操作，避免污染；3. 通过本次实验，掌握了鲎实验的操作步骤，提高了实验操作技能和实验报告撰写能力。

七、注意事项1. 实验过程中，应严格遵守无菌操作原则，避免污染；2. 实验操作时应保持冷静，避免慌乱；3. 实验结果分析时，应结合理论知识，准确判断细菌内毒素的存在和含量；4. 实验报告撰写时，应清晰、简洁、有条理地表达实验过程和结果。

鲎试剂用于甘露醇注射液的细菌内毒素检测鲎试剂用于甘露醇注射液的细菌内毒素检测摘要目的：考察甘露醇注射液细菌内毒素检查法的可行性。

方法：采用细菌内毒素检查法(鲎试剂法)进行实验。

结果：样品经6倍稀释对鲎试剂的凝聚反应无干扰作用。

结论：鲎试剂适用于检测甘露醇注射液细菌内毒素。

关键词鲎试剂甘露醇注射液细菌内毒素目前《中国药典》2000年版二部规定甘露醇注射液的热原检查法为家兔法，家兔法操作不便、繁琐，费时，费用昂贵，并存在生物误差，为了克服上述缺点，笔者采用鲎试剂法检测甘露醇注射液中细菌内毒素。

本法操作简单、快速、灵敏度高、重现性好，且较经济等优点。

现报告如下： 1 实验材料鲎试剂(TAL：批号0411051、20040414，标示灵敏度λ＝0. 5Eu·ml-1、0. 25 Eu·ml-1，规格：0. 1ml／支)；细菌内毒素工作标准品(CSE：批号20040211效价10Eu·ml-1／支)；细菌内毒素检查用水(WBET：批号0405260规格5ml／支)。

以上均为湛江安度斯生物有限公司生产；甘露醇注射液(开开援生制药厂，批号04091132，05031731，05042522，规格均为250ml：50g)；Gr恒温电热水浴箱(北京长安科学仪器厂)；XW—80A型旋涡混合器(上海医疗大学仪器厂)；所用器皿均经250℃干烤处理至少1h。

2 方法与结果 2. 1 TAL灵敏度复核根据TAL灵敏度标示值(λ=0. 5Eu·ml-1、0. 25Eu·ml-1)，将CSE用WBET溶解，置于旋涡混合器上混匀15min，分别制成1. 0、0. 5、0.25、0. 125和0. 06Eu. ml-1浓度的内毒素标准溶液，按《中国药典》2000年版二部［1］规定的方法复核灵敏度，其结果见表1、2。

表1 TAL灵敏度的复核 TAL批号 CSE浓度(Eu·ml-1) 阴性对照 1. 0 0. 5 0. 25 0.125 0. 06 0411051 ++++ ++++ -------- ---- 20040414 ++++ ++++ ---- ---- ---- 结果表明，2个不同批号的TAL灵敏度测定值均在0. 5～2. 0λ之间，方可用于供试品的干扰实验。

美国药典24版细菌内毒素检查法本文是USP24细菌内毒素检查法（BACTERLAL ENDOTOXINS TEST）的译文，但目前执行的标准是USP24版第二增补本（USP—NF19 Second Supplement）的细菌内毒素检查法，读者可对照学习，从中可看出USP24细菌内毒素检查的不足之处。

本文将介绍用鲎试剂检测样品内或样品上存在的细菌内毒素浓度的方法。

鲎试剂（Limulus Amebocyte,LAL）来自鲎的循环细胞，经水提取而行，制备和检验后，用于凝固法。

反应的终点是将供检样品稀释后，与平行稀释的参考内毒素标准进行直接比较得到的。

测得的内毒素含量用规定的内毒素单位表示。

鲎试剂也是用浊度法或显色法来读取数据的，这些试齐只要能满足这些选择方法的要求，就可以使用。

在做试验时，需要先做出一条标准曲线，并用该曲线计算供检样品的内毒素含量，包括样品和对照液加鲎试剂后的培育时间和在分光光度计上读取光密度时使用的波长等操作，都应该事先规定好。

如果是终点浊度法，则到达培育期后，应立刻读取读数。

而动力学检测（凶手浊度法和显色法），光密度的测定是贯穿于整个反应期间，而用于计算结果的百分数就是从这些读数中计算出来的。

在用终点法的显色法检测时，在到达事先规定的反应时间后，添加停止酶反应的试剂使反应停止后，再读取数据。

1、参考内毒素标准与对照内毒素标准参考内毒素标准（Reference standard endotoxin,RSE）是美国药典（USP）的内毒素参考标准，其效价为每瓶10 000个USP内毒素单位（EU）。

每瓶参考内毒素标准加5ml鲎试剂用水（LAL Reagent Watet），用旋转搅拌器间歇搅拌30min使其溶解，制成原液，用这一原液制作合适的系列稀释。

原液应保存于冰箱中，用于以后的稀释，但保存时间不得超过14d。

用前，用旋转搅拌器强力搅拌至少3min，每一步稀释，至少搅拌30s，然后才能用它稀释下一步。

内毒素的检测-鲎实验
【实验原理】
鲎试验是检测内毒素的一种试验方法，试验灵敏，能检出微量（0.0001μg/ml）内毒素。

鲎是一种冷血动物，其血细胞的溶解产物与内毒素相遇即被凝固，机制尚不清楚，可能是溶解物中含有凝固蛋白原和一种高相对分子质量的凝固酶原，凝固酶原经内毒素激活转化成凝固酶，此酶使蛋白酶原变为凝固蛋白，再通过交联酶的作用，相互聚合形成纤维状凝胶。

【实验材料与仪器】
1.鲎试验试剂一套，待检测样品；
2.大肠杆菌内毒素（阳性对照）、无菌蒸馏水、待检液等；
3.吸管、小试管、试管架等。

【实验方法】
1.将鲎试剂按要求加入等量的不含有热原质的无菌蒸馏水，振摇2～3min使之溶解。

2.在试验管、阳性对照管及空白对照管中各加溶解物0.1ml。

3.试管中加待检液0.1ml，阳性对照管加大肠杆菌内毒素0.1ml，空白对照管加溶解水0.1ml，置37℃水浴1h后观察结果。

【实验结果】
1.阳性对照管出现凝固，空白对照管无变化时，试验结果正确，再观察待检测样品管。

2.试验管出现凝固为阳性，证明有内毒素存在，如未出现凝固，证
— 1 —
明无内毒素存在。

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鲎法测定细菌内毒素影响因素的研究进展董培智（山西省药品检验所太原030001 peizhid@）鲎试剂法是利用鲎血细胞溶解物（Limulus Amebocyte Lysate, LAL;Tachypleus Amebocyte Lysate,TAL）与微量（pg/ml级）细菌(主要是革兰氏阴性细菌,G-)的内毒素反应,从而检出被检物中内毒素的一种生物体外检测新技术。

因为其具有快速、简便、经济、灵敏度高、重现性好、一次可同时测几个样品等优点，自从一九六四年美国学者Levin 和Bang 发现此法以来[1]，鲎法正被日益广泛地应用于医药卫生、食品卫生、环境卫生、分子生物学、以及微生物学中。

鲎法大致可分为凝胶法（Gel-colt end point or Gel-colt method,Gelation Assay）、比浊法（Turbridimetric Assay）色原基质法（Chromogenic Substrate method）、以及免疫法（Immunology Assay）等。

本文依据文献报道，总结了近年来国内外学者在用这些方法测定细菌内毒素时发现的一些影响因素及其消除方法的研究进展，以供试验者参考。

1 试验条件与操作培养条件、操作环境可能引起各次实验之间、各实验室之间的结果差异[2]。

1.1 时间鲎试剂在液态时极不稳定, 室温放置太久会影响反应灵敏度，故加样结束后,应立即放入恒温水浴中。

[3]延长保温时间，可提高LAL的灵敏度。

[4]有研究者[5]发现细菌内毒素国家标准品和工作标准品的不同混合时间与相对活性之间具有一定的规律，即５分钟时混合点的活性最强，混合时间越长，活性反而降低，但在三十分钟以内的各混合点测定的灵敏度均在规定范围之内。

在显色法中灵敏度与时间有关，故实验过程中既要严格控制每个环节的保温时间，又要严格控制终止时间[2][6][7]。

1．2 温度凝胶试验规定的孵化温度为37℃。

鲎试剂检测盐酸土霉素中细菌内毒素的探讨
刘桂兰;熊学军
【期刊名称】《江西中医学院学报》
【年(卷),期】2002(014)002
【摘要】@@ 自1980年美国FDA宣布了鲎试剂法可以检测人用或兽用注射药品的内毒素后,各国药典陆续收载本法.<中国药典>(2000版)也正式收载了细菌内毒素法.本文参考国外药典,将本法进一步推广到抗生素中内毒素的检测,对盐酸土霉素中细菌内毒素的检测进行了探讨,取得满意的结果.现将实验过程报道如下:
【总页数】1页(P23)
【作者】刘桂兰;熊学军
【作者单位】江西国药有限责任公司,南昌,330002;江西国药有限责任公司,南昌,330002
【正文语种】中文
【中图分类】R944.1+1
【相关文献】
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