色谱柱的正确使用与维护

色谱柱的正确使用与维护
很多情况下，高效液相色谱系统 出现故障的根本原因在于色谱柱 出现不正常的现象，而与仪器本 身无关！
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打开新色谱柱的包装
• 打开包装，首先用“运输试剂”冲洗色谱柱1~2 •
• •
小时，流速0.5ml/min。大约相当于10~20倍的柱 体积。 所谓“运输试剂”是指色谱柱出厂后柱管内封存 的试剂，每种柱子所用的试剂不相同。 对于常用的C18柱，这种试剂采用甲醇即可。其 它类型的色谱柱看其相应说明书而定。 色谱柱如果长期不用，冲洗干净之后，也应该用 该种“运输试剂”充满，然后用堵头封好保存。
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色谱柱的使用
• 使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性
• • • •
流动相中有一定的溶解度） 大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5，尽量 不超过该色谱柱的pH范围 避免流动相组成及极性的剧烈变化 流动相使用前必须经脱气和过滤处理 压力升高是需要更换预柱的信号
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色谱柱的测试
• 新的色谱柱在使用之前应该在您自己的液
相色谱仪上进行性能测试：使用色谱柱附 带的检验报告上的测试条件和样品来测定 该色谱柱的柱效，看是否达到要求。 • 并且，在以后的使用过程中，应时常对色 谱柱进行测试，以随时判断其柱效好坏。 • 注意记录新柱子在常规分析条件下的操作 压力！
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用能溶解沉淀物的溶剂冲洗色谱柱
• 在不互溶溶剂中由于进样而产生的柱内不溶物沉淀
检查样品溶液和流动相是否互溶
• 由于温度的改变或固定相的干涸而产生的柱内不溶物沉淀
将色谱柱密封紧，并保持室温恒定
• 由于固定相对某些样品的强烈吸附而在柱头形成沉淀
使用相近填料的预柱（保护柱），并定期更换
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色谱柱堵塞的修复（1）
• 步骤1：使用含盐缓冲液后（如离子对试剂）
应用溶解性强的溶剂（如水）进行冲洗 • 步骤2：先断开检测器，使用对样品中的物 质有强溶解性的溶剂进行冲洗。对于反相 色谱柱，可使用甲醇、乙睛、四氢呋喃、 氯仿、庚烷等。在此条件下，应避免溶剂 的pH 低于2 或高于8。
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色谱柱堵塞的原因（1）
• 溶剂中的不溶物
应使用色谱纯溶剂，膜过滤（孔径不超过0.45μm）
• 样品中的不溶物
应对样品进行膜过滤（孔径不超过0.45μm）
• 泵、进样器等中的不溶物
在泵和进样器之间、进样器和柱子之间安装在线过滤器
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色谱柱堵塞的原因（2）
• 由于溶剂的不互溶而产生的柱内不溶物沉淀
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色谱柱堵塞的修复（3）
• 步骤5：若内置过滤器被堵塞，应冲洗或更换。但
柱连接端的拆卸或重装会导致柱效下降（有效塔 板数下降和不对称峰等）。若步骤5 不能降低柱 压，进行步骤6。 步骤6：若进口端的填料发生堵塞，柱子将不可能 被彻底恢复，只能通过去掉进口端的部分填料， 重新填充，进行有限的柱效恢复。在多数情况下， 柱效将严重地下降。 步骤7：若步骤6 无法改善柱子性能，那么柱子已 无法修复，只能更换新柱子。
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色谱柱的平衡
• 正式做实验之前，用流动相平衡色谱柱，
直到获得稳定的基线。 • 缓冲盐或离子对试剂浓度如果较低，则需 要较长的时间来平衡。 • 每天用足够的时间来平衡色谱柱，您就会 在处理问题方面获得最大的"补偿"，而且您 的色谱柱的寿命也会变得更长！
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色谱柱堵塞的修复（2）
若经过步骤1 和步骤2 后，压力仍没下降，进行步骤3
• 步骤3：断开检测器，将色谱柱反方向放置，
然后检查柱压
（1） 若压力稳定下降，进行步骤4 （2） 若压力不下降，进行步骤5
• 步骤4：保持色谱柱反方向连接，用低于0.5
ml/min 流速冲洗1~2 小时，然后换回正常 方向，重复步骤1、步骤2即可。
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其他注意的问题
• 在对-NH2改性的色谱柱（氨基柱）进行再
生时，由于-NH2可能以铵根离子的形式存 在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗， 然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。 • 如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全 洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸 冲洗非常有效。
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色谱柱使用之后
• 非常简单，但是非常重要：冲洗! • 对于常用的C18反相柱，如果使用极性或离
子性的缓冲溶液作流动相（含有酸、碱、 盐的流动相），应在实验完毕后用水将柱 子冲洗干净，然后保存于甲醇或乙腈之中。
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