第25次课 体内药物分析_PPT幻灯片

品量少、不能重复取样：生物样品多数在特定
条件下采集，无法再次取样，且浓度低、变化幅
度大，在测定前需浓缩、富集以适应分析方法要
求。
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2、唾液：
优点：样品易得，取样无痛苦，尤易为儿童接收。 缺点：药物浓度变化大 采取：漱口15分钟，收集自然流出或经舌在口内 搅动流出的唾液。也可采取物理、化学方法刺激 使唾液流出。
另外，在用药过量、误服或服毒等中毒事件中， 为解毒急救或判断案情，也需要进行体内药物分析； 还有对一些兴奋剂、致幻剂、镇静剂等药物滥用现象 也需要进行体内药物进行检测。
（三）体内药物分析的特点
1．干扰物质多：生物样品中含有大量的内源性物，
质如蛋白质、脂肪等，以及代谢物、结合物等，
样品一般均需经过分离、净化后才能进行分析。
免疫测定法原理
将被测药物作为抗原（ Ag ）免疫动物使其产
生抗体（Ab），然后根据抗原、标记抗原（ Ag* ）
与一定量的抗体分子竞争结合的程度来测定抗原
（药物）的含量。
Ag*t
标记抗原总量
Agt
+ Ab
Ag*-Ab+ Ag*f
游离标记抗原
Ag-Ab+ Agf
抗原总量
游离抗原
五 体内药物分析方法建立的一般实验步骤
③ 离子型药物：离子对提取发 ④ 提取技术：提取次数尽可能少，不要求提取完 全，而要求适量而稳定的提取率。
（2）液-固提取（LSE）：
将生物样品溶液通过填有适宜担体的小柱，使 药物保留在担体上，洗去杂质后，用适当的溶剂洗 脱下来测定；或杂质保留在担体上，先把药物洗脱 下来测定。
（四）被测组分的浓集
浓集方法：
1、末次提取时，加入溶剂尽可能少 2、挥去溶剂：
（1）通入气流（氮气）吹干 （2）减压法：适于易随气流挥发或遇热不稳定药物
（五）化学衍生化
GC中，极性较大、挥发性低的药物或代谢物→极性 小、稳定性好的衍生物
HPLC中，分子结构无紫外吸收→具紫外吸收或荧光 的衍生物
1、GC中化学衍生化：
（二）样品前处理的目的
1、提高测定方法灵敏度、准确度和专属性 2、保护测定仪器不受生物样品中类脂和蛋白质 等的污染。
（三）样品的分离与纯化
包括样品去除蛋白质、缀合物水解和待测组分的提取。
1、去除蛋白质
（1）加入与水相混溶的有机溶剂：乙腈、甲醇、乙 醇、丙酮等。 （2）加入中性盐：饱和硫酸铵、硫酸钠、枸橼酸盐 等。 （3）加入强酸：三氯醋酸、高氯酸、硫酸-钨酸等。
一 概述
（一）体内药物分析的概念
体内药物分析：是一门研究进入人或动物体内，存在 于生物样品（如体液、组织、器官和排泄物等）中的 药物及其代谢物和内源性物质的质与量变化规律的分 析方法学。
（二）体内药物分析的意义
通过体内药物分析结果可求得药物动力学参数， 可了解药物在体内的吸收、分布、代谢、排泄情况。 因此，体内药物分析为药物研究、制剂质量管理、临 床用药等提供了数据和信息。
多数药物是亲脂性的，可用有机溶剂提取出来， 而大多数内源性杂质是强极性的，不被提取出。
液-液提取中需注意的问题：
① 适当的有机溶剂：常用乙醚、氯仿等。 ② 适当的水相pH值：由药物的pKa值确定，一般碱 性药物在碱性条件、酸性药物在酸性条件下提取。
碱性药物最佳pH 高于pKa值1-2个pH单位 酸性药物最佳pH 低于pKa值1-2个pH单位 中性药物：多选碱性下提取
1、对照品测定：选择测定条件、浓度线性范围等 2、经过纯化处理的空白样品测定：测定空白值， 考虑分离度。 3、空白样品加对照品测定：求得样品回收率，检 验样品中是否有干扰。 4、体内实际样品测定
（4）加入金属离子：CuSO4-Na2WO4等。 （5）酶解法：常用枯草菌蛋白酶
2、缀合物水解
尿液中药物多数呈缀合物状态。 （1）酸水解：适量盐酸 （2）酶水解：常用葡萄糖醛酸苷酶或硫酸酯酶 或两者混合。
3、待测组分的提取
提取目的：从大量共存物中分离出所需要的微量组分 提取方法：
（1）液-液提取（LLE）：
烷基化、酰化、硅烷化等。
例：烷基化
RCOOH、ROH、RSH、RNH2 CH3I、CH3N2等
RCOOCH3、ROCH3、RSCH3、RNHCH3 极性降低，挥发性增加
2、HPLC中化学衍生化
常用衍生化试剂有：邻苯二醛、丹酰氯、荧胺等。
柱前衍生化 化学衍生化
柱后衍生化
四 含量测定方法
色谱分析法（HPLC、GC、TLC） 光度分析法（UV、荧光、可见） 免疫测定法（RIA、EIA、FIA）
尿液是很好的细菌生长液，若需收集24小时或 更长时间的样品或不能立即测定的，应置冰箱冷藏 或加防腐剂（1%甲苯、过饱和氯仿）保存。
三 生物样品前处理
（一）药物在体内的存在形式
游离型：原形药物或代谢物
缀合物：药物或其代谢物与葡萄糖醛酸等结合 结合物：药物与蛋白质结合
因此，在样品测定之前要进行适当的样品制备。 包括分离、纯化、浓集、必要时还需对待测组分进 行化学衍生化。
3、尿液：
尿样测定主要用于药物剂量回收研究、药物肾清 除率和生物利用度等研究，以及测定代谢物类型等。
优点：采取简便，取样量大，受试者无痛苦。 缺点：药物浓度变化也大，需采集一定时间内的尿 样。 采取：动物应在代谢笼中进行，通过笼下漏斗接收。
（二）样品贮存
取样后最好立即进行分析，不能立即分析的， 则短期内冷藏(4℃)，长期冰冻(-20℃) 。