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第25次课 体内药物分析_PPT幻灯片
第25次课 体内药物分析_PPT幻灯片
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品量少、不能重复取样:生物样品多数在特定
条件下采集,无法再次取样,且浓度低、变化幅
度大,在测定前需浓缩、富集以适应分析方法要
求。
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2、唾液:
优点:样品易得,取样无痛苦,尤易为儿童接收。 缺点:药物浓度变化大 采取:漱口15分钟,收集自然流出或经舌在口内 搅动流出的唾液。也可采取物理、化学方法刺激 使唾液流出。
另外,在用药过量、误服或服毒等中毒事件中, 为解毒急救或判断案情,也需要进行体内药物分析; 还有对一些兴奋剂、致幻剂、镇静剂等药物滥用现象 也需要进行体内药物进行检测。
(三)体内药物分析的特点
1.干扰物质多:生物样品中含有大量的内源性物,
质如蛋白质、脂肪等,以及代谢物、结合物等,
样品一般均需经过分离、净化后才能进行分析。
免疫测定法原理
将被测药物作为抗原( Ag )免疫动物使其产
生抗体(Ab),然后根据抗原、标记抗原( Ag* )
与一定量的抗体分子竞争结合的程度来测定抗原
(药物)的含量。
Ag*t
标记抗原总量
Agt
+ Ab
Ag*-Ab+ Ag*f
游离标记抗原
Ag-Ab+ Agf
抗原总量
游离抗原
五 体内药物分析方法建立的一般实验步骤
③ 离子型药物:离子对提取发 ④ 提取技术:提取次数尽可能少,不要求提取完 全,而要求适量而稳定的提取率。
(2)液-固提取(LSE):
将生物样品溶液通过填有适宜担体的小柱,使 药物保留在担体上,洗去杂质后,用适当的溶剂洗 脱下来测定;或杂质保留在担体上,先把药物洗脱 下来测定。
(四)被测组分的浓集
浓集方法:
1、末次提取时,加入溶剂尽可能少 2、挥去溶剂:
(1)通入气流(氮气)吹干 (2)减压法:适于易随气流挥发或遇热不稳定药物
(五)化学衍生化
GC中,极性较大、挥发性低的药物或代谢物→极性 小、稳定性好的衍生物
HPLC中,分子结构无紫外吸收→具紫外吸收或荧光 的衍生物
1、GC中化学衍生化:
(二)样品前处理的目的
1、提高测定方法灵敏度、准确度和专属性 2、保护测定仪器不受生物样品中类脂和蛋白质 等的污染。
(三)样品的分离与纯化
包括样品去除蛋白质、缀合物水解和待测组分的提取。
1、去除蛋白质
(1)加入与水相混溶的有机溶剂:乙腈、甲醇、乙 醇、丙酮等。 (2)加入中性盐:饱和硫酸铵、硫酸钠、枸橼酸盐 等。 (3)加入强酸:三氯醋酸、高氯酸、硫酸-钨酸等。
一 概述
(一)体内药物分析的概念
体内药物分析:是一门研究进入人或动物体内,存在 于生物样品(如体液、组织、器官和排泄物等)中的 药物及其代谢物和内源性物质的质与量变化规律的分 析方法学。
(二)体内药物分析的意义
通过体内药物分析结果可求得药物动力学参数, 可了解药物在体内的吸收、分布、代谢、排泄情况。 因此,体内药物分析为药物研究、制剂质量管理、临 床用药等提供了数据和信息。
多数药物是亲脂性的,可用有机溶剂提取出来, 而大多数内源性杂质是强极性的,不被提取出。
液-液提取中需注意的问题:
① 适当的有机溶剂:常用乙醚、氯仿等。 ② 适当的水相pH值:由药物的pKa值确定,一般碱 性药物在碱性条件、酸性药物在酸性条件下提取。
碱性药物最佳pH 高于pKa值1-2个pH单位 酸性药物最佳pH 低于pKa值1-2个pH单位 中性药物:多选碱性下提取
1、对照品测定:选择测定条件、浓度线性范围等 2、经过纯化处理的空白样品测定:测定空白值, 考虑分离度。 3、空白样品加对照品测定:求得样品回收率,检 验样品中是否有干扰。 4、体内实际样品测定
(4)加入金属离子:CuSO4-Na2WO4等。 (5)酶解法:常用枯草菌蛋白酶
2、缀合物水解
尿液中药物多数呈缀合物状态。 (1)酸水解:适量盐酸 (2)酶水解:常用葡萄糖醛酸苷酶或硫酸酯酶 或两者混合。
3、待测组分的提取
提取目的:从大量共存物中分离出所需要的微量组分 提取方法:
(1)液-液提取(LLE):
烷基化、酰化、硅烷化等。
例:烷基化
RCOOH、ROH、RSH、RNH2 CH3I、CH3N2等
RCOOCH3、ROCH3、RSCH3、RNHCH3 极性降低,挥发性增加
2、HPLC中化学衍生化
常用衍生化试剂有:邻苯二醛、丹酰氯、荧胺等。
柱前衍生化 化学衍生化
柱后衍生化
四 含量测定方法
色谱分析法(HPLC、GC、TLC) 光度分析法(UV、荧光、可见) 免疫测定法(RIA、EIA、FIA)
尿液是很好的细菌生长液,若需收集24小时或 更长时间的样品或不能立即测定的,应置冰箱冷藏 或加防腐剂(1%甲苯、过饱和氯仿)保存。
三 生物样品前处理
(一)药物在体内的存在形式
游离型:原形药物或代谢物
缀合物:药物或其代谢物与葡萄糖醛酸等结合 结合物:药物与蛋白质结合
因此,在样品测定之前要进行适当的样品制备。 包括分离、纯化、浓集、必要时还需对待测组分进 行化学衍生化。
3、尿液:
尿样测定主要用于药物剂量回收研究、药物肾清 除率和生物利用度等研究,以及测定代谢物类型等。
优点:采取简便,取样量大,受试者无痛苦。 缺点:药物浓度变化也大,需采集一定时间内的尿 样。 采取:动物应在代谢笼中进行,通过笼下漏斗接收。
(二)样品贮存
取样后最好立即进行分析,不能立即分析的, 则短期内冷藏(4℃),长期冰冻(-20℃) 。
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