多糖提取方法
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Shibata最原始GE-3提取方法(略有改进)一般来说这是用来提Umbilicaria中的带乙酰基的多糖的。
1.用研钵粉碎地衣体,加入20倍重量的蒸馏水,水浴锅加热浸提3小时(80℃左右)。
2.过滤浸提液,取上清液。将过滤后的地衣体继续用上述方法浸提两次,每次3小时。
3.合并三次浸提上清液,抽滤。
4.将浸提液旋转蒸发浓缩至一定体积(约100-200ml)。
5.加入约3倍体积的无水乙醇,沉淀多糖。放入4℃中冷藏过夜。收集沉淀。
6.真空冷冻干燥。(可省略)
7.将收集的沉淀溶于热水(80℃),过滤掉不溶于热水的部分。
8.将滤液-20℃冰冻过夜,第二天融化,离心(8000r/min左右)收集不溶解的部分。
9.用丙酮清洗一次,乙醚清洗三次。
10.真空冷冻干燥,即得纤维性粉末GE-3。
需要的仪器:水浴锅,旋转蒸发仪,大型离心机,真空泵,真空冷冻干燥机
乙醇回流提多糖的方法
1.用研钵粉碎地衣体,加入10倍重量的体积的95%的乙醇回流2-3h左右。
2.冷却室温,收集过滤后的地衣体,将残渣自然阴干。
3.重复1-2步骤一次。
4.将乙醇处理后的残渣,加20倍体积重量的蒸馏水煮3h左右。过滤收集上清液和残渣。
5.重复4步骤2次。
6.合并三次上清液,旋转蒸发浓缩至黏稠。
7.加入3倍体积的无水乙醇沉淀多糖,边加入边搅拌。4℃冷藏过夜。
8.收集沉淀。
9.用乙醚清洗几次。
10.真空冷冻干燥。
需要的仪器:回流冷凝管,加热套,水浴锅,旋转蒸发仪,大型离心机,真空泵,真空冷冻干燥机