最新1建立全脑缺血再灌注动物模型的实验研究进展汇总
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《远隔肢体缺血后处理调控SDF-1-CXCR4轴对大鼠全脑缺血损伤的影响》篇一远隔肢体缺血后处理调控SDF-1-CXCR4轴对大鼠全脑缺血损伤的影响一、引言随着医学的进步,缺血性损伤已成为全球范围内亟待解决的重大健康问题。
全脑缺血损伤因其致死致残率高,更是受到医学界的高度关注。
远隔肢体缺血后处理(Remote Ischemic Postconditioning, RIPC)作为一种新兴的缺血保护策略,被认为能够减轻全脑缺血再灌注时的损伤。
近年来,越来越多的研究表明,SDF-1(基质细胞衍生因子1)/CXCR4(C-X-C趋化因子受体4)轴在脑部缺血性损伤中发挥重要作用。
因此,本实验旨在探究远隔肢体缺血后处理如何调控SDF-1/CXCR4轴,从而对大鼠全脑缺血损伤的影响进行探讨。
二、实验方法(一)动物与模型建立实验选用的对象为SD大鼠,分为正常对照组、缺血对照组和远隔肢体缺血后处理组(RIPC组)。
利用四动脉结扎法建立全脑缺血模型。
(二)远隔肢体缺血后处理RIPC组在全脑缺血前,对大鼠的肢体进行短暂反复的缺血再灌注处理。
(三)SDF-1/CXCR4轴的检测通过免疫组织化学和Western Blot等方法,检测各组大鼠脑组织中SDF-1和CXCR4的表达水平。
三、实验结果(一)SDF-1/CXCR4轴的表达变化与正常对照组相比,全脑缺血后的大鼠脑组织中SDF-1和CXCR4的表达明显增加。
而经过远隔肢体缺血后处理的大鼠,其SDF-1和CXCR4的表达水平有所降低。
(二)RIPC对全脑缺血损伤的影响RIPC组大鼠在全脑缺血后的神经功能恢复情况明显优于缺血对照组,表现出更好的神经保护作用。
同时,RIPC组的脑组织病理学损伤程度也相对较轻。
(三)SDF-1/CXCR4轴与RIPC的关系远隔肢体缺血后处理能够降低SDF-1/CXCR4轴的表达水平,进而对全脑缺血再灌注时神经细胞的功能起到保护作用。
提示RIPC可能是通过调控SDF-1/CXCR4轴发挥其保护作用。
全脑缺血再灌注动物模型建立方法引言全脑缺血再灌注是一种临床上常见的危重症,常见于心脏骤停、溺水等情况下,出现全脑缺血缺氧,随后通过复苏措施进行再灌注。
建立全脑缺血再灌注动物模型对于深入研究相关疾病的发病机制,评估治疗方法具有重要意义。
本文将介绍一种常用的全脑缺血再灌注动物模型的建立方法。
动物模型选择建立全脑缺血再灌注模型时,主要选择小鼠或大鼠作为实验动物。
一般情况下,小鼠更为常用,因其易于操作、成本较低,且其脑血管结构与人类相似,因此具有较高的可比性。
对于大鼠,其相对较大的体积能够更好地模拟人体情况,但操作相对较为复杂。
手术操作准备在进行全脑缺血再灌注动物模型的建立前,需要进行手术操作的准备工作。
首先需要进行动物的麻醉和固定,确保手术操作的安全性。
其次需要准备全脑缺血再灌注模型所需的仪器和设备,包括导管、监测仪器等。
在手术操作前,还需要对实验动物进行术前处理,包括禁食、定时给予抗生素等。
手术操作步骤1. 麻醉和固定:将实验动物置于麻醉箱内,使用合适的麻醉药物使其达到麻醉状态。
随后将其固定在手术台上,以确保手术操作的稳定性。
2. 手术部位暴露:在麻醉状态下,对实验动物进行皮肤消毒,随后进行手术部位的切开,暴露出颅骨表面。
3. 血管结扎:通过显微外科手术操作,对实验动物的颅骨表面的动脉和静脉进行结扎,以模拟全脑缺血的状态。
4. 缺血时间控制:根据实验设计的需要,控制全脑缺血的时间,一般为15至20分钟。
5. 再灌注:在全脑缺血一定时间后,通过解开血管结扎,使血液重新灌注至大脑。
6. 术后处理:对实验动物进行术后处理,包括给予液体、保暖、饲养等。
检测指标和评价方法建立全脑缺血再灌注模型后,需要对实验动物进行一系列的检测和评价,以评估其神经功能恢复情况。
常用的评价指标包括神经行为学评分、脑组织病理学检测、神经元凋亡检测、脑组织炎症因子检测等。
通过对这些指标的检测和评价,可以全面地评估全脑缺血再灌注模型的建立效果,为后续的实验研究提供可靠的依据。
全脑缺血再灌注动物模型建立方法一、引言脑缺血再灌注模型是研究脑缺血再灌注损伤的重要手段,对于深入理解缺血性脑损伤的病理生理机制,探索新的治疗方法具有重要意义。
本文将详细介绍全脑缺血再灌注动物模型的建立方法。
二、准备工作1. 实验动物:选择健康成年小鼠、大鼠或兔,确保其无疾病、无遗传性疾病。
2. 设备:准备好手术器械、显微镜、止血钳、无创血压计、冰冻浴盆、恒温湿毛巾等。
3. 药物:准备适量麻醉剂、抗生素、输液用品等。
三、全脑缺血模型的建立1. 麻醉:使用麻醉剂对实验动物进行全身麻醉。
2. 暴露手术部位:对实验动物进行全身消毒,打开腹腔,暴露手术部位。
3. 制作全脑缺血:使用特制的夹子将实验动物的脑血管夹闭,制造全脑缺血。
具体夹闭部位和时间需要根据实验需求进行调整。
四、再灌注过程的控制1. 解除血管夹闭:缺血时间结束后,缓慢解除血管夹闭,恢复血流。
2. 观察再灌注情况:在再灌注过程中,密切观察实验动物的神态、行为变化,以及脑部颜色、肿胀等情况。
五、模型评估与结果记录1. 评估再灌注效果:再灌注过程结束后,评估实验动物的全脑缺血再灌注效果,记录相关数据。
2. 观察病理变化:对实验动物的大脑组织进行病理学检查,观察缺血再灌注损伤后的病理变化。
3. 结果记录与分析:将观察到的结果进行记录,并对结果进行分析,为后续研究提供基础数据。
六、注意事项1. 麻醉剂的使用要适量,避免对实验动物造成过大的伤害。
2. 手术过程中要保持无菌操作,避免感染。
3. 制作缺血模型时,要确保夹闭的血管部位准确,时间适当,避免影响实验结果。
4. 再灌注过程要缓慢,确保血流的恢复不会对实验动物造成过大的刺激。
5. 病理学检查要取样准确,切片处理要规范,确保检查结果的准确性。
七、总结本文详细介绍了全脑缺血再灌注动物模型的建立方法,包括准备工作、缺血模型的建立、再灌注过程的控制和结果记录等。
该模型可用于研究脑缺血再灌注损伤的病理生理机制和探索新的治疗方法。
急性脑缺血动物模型实验研究进展
刘红梅;高天明;佟振清
【期刊名称】《第一军医大学学报》
【年(卷),期】1999(19)4
【摘要】脑血管疾病是人类发病率最高的疾病之一,模拟临床疾病,研制较为可靠的脑缺血动物模型因而显得尤为重要。
本文着重介绍了常用啥齿动物全脑和局部脑缺血模型的种类、制作方法及特点,对系统研究脑血管疾病的发病机理、病理。
生理学改变,以及药物疗效、防治措施等,在实验动物模型的选择方面。
具有一定指导意义。
【总页数】3页(P368-370)
【关键词】脑缺血;动物模型;急性
【作者】刘红梅;高天明;佟振清
【作者单位】第一军医大学南方医院超声诊断科;第一军医大学生理学教研室【正文语种】中文
【中图分类】R743.31
【相关文献】
1.建立全脑缺血再灌注动物模型的实验研究进展 [J], 武钊;刘佩仪;文锐玲;林梓豪;黎允诗;黄伟青;欧阳斌
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3.大鼠急性局灶性脑缺血动物模型实验研究 [J], 温仲民;包仕尧
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5.急性局灶性脑缺血动物模型及治疗的实验研究 [J], 杨军;裘明德
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脑缺血再灌注损伤治疗的研究进展向军同济大学医学院,上海(200433)E-mail: Chelsea_JX@摘要:缺血性脑血管是现代社会致死致残的最主要疾病之一,其治疗原则及时恢复缺血区的血液再灌注,而随之而来的再灌注损伤又成为一大难题。
笔者对近年来脑缺血再灌注损伤的治疗研究综述如下。
关键词:脑缺血再灌注损伤;治疗;进展缺血性脑血管病是现代社会致死、致残的最主要疾病之一,其治疗原则是及时的恢复缺血区的血液灌注。
然而在某些情况下缺血后再灌注不仅没有使组织功能恢复,反而使缺血所致的功能障碍和结构破坏进一步加重,这种现象即缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury),抑制再灌注损伤已成为缺血性中风治疗的重要环节。
近年来针对脑缺血再灌注损伤的治疗研究取得一定成果,现将其综述如下。
1.自由基研究自由基(free radical)是外层轨道上有单个不配对价电子的原子、原子团和分子的总称,其化学性质极为活波,可与各种细胞成分(膜磷脂、蛋白、核酸)发生反应,导致细胞功能障碍和结构破坏。
在脑缺血再灌注时,机体的自由基产生和清除系统遭到破坏,导致大量自由基的存在,造成脑组织损伤和功能障碍。
由于再灌注治疗窗十分短暂(仅1-3小时),因此清除自由基应在再灌注前或者再灌注早期即开始。
自由基的清除主要靠自由基清除剂,包括酶性自由基清除剂,如超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、Prion蛋白(PrPc)等;低分子自由基清除剂,如维生素C、维生素E、谷胱甘肽等;其他如甘露醇、糖皮质激素等。
有研究表明,褪黑素(Melatonin MT)能够清除羟自由基、过氧亚氮阴离子、降低单线态氧毒性和自由基引起的脂质过氧化反应,是有效的自由基清除剂和间接抗氧化剂,具有较好的神经元保护作用[1-2]。
Cesario等[3]通过体内外实验观察发现,褪黑素的减轻脑缺血再灌注损伤作用,还与其对胶质细胞的保护作用有关,且胶质细胞对治疗比神经元更敏感。
《丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用及机制研究》篇一一、引言脑缺血再灌注损伤是临床常见的神经系统疾病,其发病机制复杂,治疗难度大。
丁苯酞作为一种药物,已被广泛用于缺血性脑血管病的治疗。
然而,关于丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用及其机制的研究尚不够深入。
因此,本研究旨在探讨丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用及潜在机制,以期为临床治疗提供理论依据。
二、材料与方法1. 实验动物与分组本实验选用健康成年SD大鼠,随机分为四组:正常对照组、模型组、丁苯酞预处理组和药物对照组。
2. 脑缺血再灌注模型制备采用线栓法制备脑缺血再灌注模型。
3. 丁苯酞预处理及给药方法在缺血前对丁苯酞预处理组和药物对照组进行丁苯酞预处理及给药。
4. 检测指标与方法通过神经功能评分、脑组织病理学检查、免疫组化等方法,观察各组大鼠的神经功能恢复情况、脑组织损伤程度及相关蛋白表达情况。
三、实验结果1. 神经功能评分与模型组相比,丁苯酞预处理组大鼠的神经功能评分明显改善,表明丁苯酞预处理有助于改善大鼠的神经功能。
2. 脑组织病理学检查脑组织病理学检查显示,丁苯酞预处理组大鼠的脑组织损伤程度较轻,脑水肿程度较低。
3. 免疫组化结果免疫组化结果显示,丁苯酞预处理可上调/下调相关蛋白的表达,如抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax等。
这表明丁苯酞预处理可能通过调节这些蛋白的表达来发挥神经保护作用。
四、讨论本研究表明,丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠具有显著的神经保护作用。
这可能与丁苯酞预处理能够调节相关蛋白的表达、减轻脑组织损伤、改善神经功能有关。
此外,丁苯酞预处理的机制可能涉及抗凋亡、抗炎等多种生物学过程。
然而,关于丁苯酞的具体作用机制仍需进一步研究。
五、结论本研究通过实验证实了丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠具有神经保护作用,并初步探讨了其潜在机制。
这为丁苯酞在缺血性脑血管病的治疗提供了理论依据,为进一步研究丁苯酞的作用机制及临床应用提供了参考。
缺血再灌注的实验原理缺血再灌注是指在一段时间内,组织或器官遭受缺血(血液供应不足)后,再次供应血液的过程。
这个过程中会引起一系列的病理生理学变化,对于研究机体的对缺血和再灌注的适应和损伤机制具有重要的意义。
缺血再灌注的实验原理主要包括以下几个方面:1. 缺血模型的建立:缺血再灌注实验的第一步是建立缺血模型。
常用的方法包括结扎、缩窄或堵塞供应血管等手段,使组织或器官在一段时间内得不到足够的血液供应。
常用的实验动物包括小鼠、大鼠和兔子等。
2. 缺血时间的控制:缺血的时间是实验中的关键因素之一,不同的缺血时间会引起不同程度的损伤。
通常情况下,短时间的缺血(如15分钟)可以模拟暂时性缺血,而长时间的缺血(如1小时以上)则会导致严重的缺血损伤。
在实验过程中,可以通过监测血流或组织氧分压等指标来控制缺血的时间。
3. 再灌注的时间和方式:在缺血一定时间后,再灌注是恢复组织或器官正常功能的关键步骤。
通常,再灌注可以通过解除结扎、放松或恢复供应血管等方式进行。
再灌注的时间和方式也会对实验结果产生影响,因此需要根据实验目的进行合理选择。
4. 生理指标的监测:在缺血再灌注实验过程中,可以通过监测一系列生理指标来评估实验结果。
包括血流量、血液氧分压、血液乳酸水平、组织或细胞损伤指标(如丙氨酸氨基转移酶、肌酸激酶等)等。
同时,还可以通过组织病理学检查来观察组织结构的变化和损伤程度。
5. 病理生理学变化的分析:通过对实验结果的分析,可以了解缺血再灌注对组织和器官的损伤程度以及机体的适应能力。
例如,长时间的缺血再灌注可以引起严重的组织坏死和炎症反应,而短时间的缺血再灌注则可以触发组织保护性的适应机制,如激活细胞凋亡、抗氧化反应等。
综上所述,缺血再灌注实验是一种常用的研究手段,通过建立缺血模型及控制缺血时间和再灌注方式来模拟缺血再灌注损伤,通过监测各种生理指标和分析病理生理学变化来研究机体对缺血再灌注的适应和损伤机制。
脑缺血动物模型及进展【摘要】建立一种符合临床脑缺血发病规律的动物模型是研究局灶性脑缺血发生机制及防治措施的基本条件。
近年来随着实验动物科学的不断发展,该领域的研究已取得了长足的进步。
现就局灶性脑缺血模型的制备及其研究进展作一综述。
【关键词】脑缺血;动物模型;进展脑缺血是以脑循环血流量减少为特征的中枢神经系统疾病,具有发病率高、致残率高和死亡率高的特点,严重地影响人类的生存质量。
据统计,我国脑血管疾病的自然人口发病率为每年 114-187人/10万,患病率为 253-620人/10万,病死率为每年 79-89人/10万。
60岁以上老年人脑血管疾病的平均发病率和病死率更高,分别为 1325.7人/10万和 886.1人/10万。
脑卒中 93%发生在 50岁及以上人群,75%以上为老年人。
目前我国脑血管疾病占人群死亡病因的第二位。
因此,模拟人类缺血性脑血管病的发病过程,建立重复性好、观测指标易于控制的脑缺血动物模型一直是人们普遍关注的课题。
经过研究者的不断努力,实验模型制备技术日臻完善,这为进一步系统研究脑缺血的病理生理、发病机制和防治措施等提供了坚实的基础。
现就局灶性脑缺血模型的制备及其研究进展综述如下。
1 动物模型在脑缺血研究中的价值和意义动物模型是医学研究中的一个重要手段,尤其对于缺血性脑血管病,能即刻制造或模拟血流下降或阻断,只有利用动物模型才能进行,具有方便、快捷、条件可控、脑缺血程度一致等优点。
但一般情况下,活体动物模型的制作多采用健康动物,缺乏人脑缺血前就存在的各种复杂的危险因素和病理生理学过程。
尽管如此,脑缺血动物模型在以下几个方面还是为研究提供了无法替代的价值:(1)不同脑缺血状态下的病理学改变;(2)缺血半暗带的研究;(3)再灌注损伤;(4)缺血本身导致的病理生理学变化;(5)干预治疗对缺血性损害的保护作用;(6)缺血性损害的部分机制。
2 脑缺血动物模型动物的选择2.1 脑缺血模型的动物选择的原则制备脑缺血动物模型一般需遵循一下原则:(1)选用与人体结构、功能、代谢及疾病特征相似的动物;(2)动物的解剖生理特点符合实验目的;(3)注意人与实验动物对同一刺激的反应差异,选用具有明显反应的动物;(4)选用患有类似人类疾病的近亲系或突变系动物;结构功能简单又能反映研究指标;(5)选用与实验设计、技术条件、实验方法等条件相适应的标准化动物;(6)在不影响实验质量的前提下选用易获得、最经济、最易饲养管理的动物。
《ANTs和VDAC1蛋白乳酸化修饰参与脑缺血再灌注损伤初探》篇一一、引言脑缺血再灌注损伤是缺血性脑血管病治疗过程中常见的问题,它指的是在恢复血液供应后,由于各种复杂的生物学机制导致神经细胞和组织的进一步损伤。
近年来,研究学者们不断深入探索与这一过程相关的生物标志物及信号通路,以寻求新的治疗策略。
其中,ANTs(线粒体相关膜蛋白)和VDAC1(电压依赖性阴离子通道蛋白1)作为重要的细胞内外调节蛋白,在脑缺血再灌注损伤中的乳酸化修饰及其潜在作用,成为了新的研究热点。
二、ANTs和VDAC1蛋白简介ANTs是线粒体内膜上的一个关键蛋白,它在维持线粒体正常功能方面发挥着重要作用。
而VDAC1则是一种位于线粒体外膜的通道蛋白,它在细胞内外物质交换和信号传递中起到关键作用。
这两者都与细胞能量代谢、凋亡等过程密切相关。
三、乳酸化修饰与脑缺血再灌注损伤乳酸化修饰是一种重要的蛋白质翻译后修饰过程,它涉及到蛋白质的翻译、折叠、转运等多个环节。
在脑缺血再灌注过程中,由于能量代谢的紊乱和氧化应激的增加,许多蛋白质会发生乳酸化修饰,其中ANTs和VDAC1也不例外。
这种修饰可能影响它们的结构和功能,进而影响细胞的能量代谢和凋亡过程。
四、ANTs和VDAC1的乳酸化修饰与脑缺血再灌注损伤的关系研究表明,在脑缺血再灌注过程中,ANTs和VDAC1的乳酸化修饰会显著增加。
这种修饰可能改变它们的亚细胞定位和与其它蛋白的相互作用,从而影响线粒体的功能。
具体来说,ANTs 的乳酸化可能导致其与线粒体呼吸链复合物的解离,降低线粒体的能量产生;而VDAC1的乳酸化则可能影响其作为离子通道的功能,导致细胞内外物质交换的紊乱。
这些变化都可能进一步加剧脑缺血再灌注损伤。
五、未来研究方向未来研究需要进一步明确ANTs和VDAC1乳酸化修饰的机制以及其在脑缺血再灌注损伤中的作用。
通过分子生物学、细胞生物学等手段,可以研究这两者的乳酸化修饰与其它生物标志物及信号通路的关系,探索新的治疗方法。
小鼠急性全脑缺血实验设计设计者:吴叶鸣一、实验目的:用二血管阻断加低血压法建立小鼠全脑缺血再灌注模型二、实验原理:MCAO模型的意义:大脑中动脉(MCA)是人类脑梗塞的多发部位,由于人类脑卒中的病因,临床表现,解剖部位很不一致,不便于精确分析脑缺血的病理生理特点和药物疗效,而临上严格的生化和形态学观察,很多需要外科手术进行取脑研究,这样使研究大大受限,因此,建立可靠的脑缺血模型是研究脑血管疾病的基础。
常用的有以下几种建立方法。
2.1两血管闭塞法通过夹闭双侧颈总动脉(CCA)合并低血压以减少脑血流量,造成急性脑缺血。
脑组织缺血程度可以通过测定脑血流量(CBF)反映出来。
啮齿动物(沙土鼠除外)脑血液循环有较人类丰富的侧支循环,仅结扎双侧CCA不足以明显降低CBF,必须结合降压药三甲噻吩、酚妥拉明等降低动脉血压至6.7 kPa,使CBF降低至正常的5%~15%。
采用这种方法复制的模型,能进行缺血再灌流损伤的研究,模拟了临床上休克、心功能不全、脑血管严重狭窄或阻塞合并血液低灌流引起的脑循环障碍,造成不同程度的脑组织缺血损伤。
因而,对于探讨人类缺血性脑损伤的发病规律,评价抗脑缺血药物的疗效等有价值。
缺点是:(1) 模型不能在清醒动物上复制,无法研究血管狭窄后行为学的变化;(2) 脑缺血时限长,有时导致脑缺血后抽搐、癫痫等并发症的发生。
2.2 四血管闭塞法Pulsinelli 等[2]在1979年通过阻断双侧CCA及椎动脉血流成功建立了四血管闭塞法大鼠全脑缺血模型。
手术分两个阶段:麻醉动物,颈前正中切口,分离CCA,将无损动脉夹轻放于双侧CCA周;同时枕部切口暴露第一颈椎翼小孔,电凝双侧椎动脉,造成永久性闭塞。
24 h后夹闭双侧CCA,造成明显的脑缺血。
以大脑皮层、纹状体、海马缺血最为明显。
解除动脉夹可进行脑缺血再灌流研究。
1983年,作者又改进这一模型,即在气管、食管、颈总动脉、颈外静脉后,颈部肌肉前置一手术丝线,夹闭CCA同时,在气管后扎紧这根丝线,以减少颈部皮下组织、肌肉血液对脑部的供应[3]。
1建立全脑缺血再灌注动物模型的实验研究进展医学院检验系,广东广州510182;2.广州医学院第一附属医院,广东广州510120)【关键词】全脑缺血再灌注动物模型实验研究进展心脏骤停(CA)是急诊医学常见的急症之一,因其居高不下的致死率及致残率给社会和家庭造成严重威胁,所以心肺脑复苏是现代医学研究的热点课题。
心搏骤停是指心跳及呼吸突然停止,血液循环终止。
由于脑细胞对缺氧十分敏感,循环停止4~6 min脑组织即可出现不可逆性损害[1]。
面对突如其来的心脏骤停,目前最有效的治疗方法是心肺复苏。
但是即使复苏后,心脏恢复了搏动,但脑功能的恢复是心肺复苏成功的关键。
一般心脏停止搏动,脑缺血、缺氧立即发生,如超过4~6 min就可以出现不可逆的大脑损害。
心脏停搏时间长,如>8 min以上,大脑功能很难恢复,成功率极小。
有学者研究认为,心脏停搏后,约50%左右患者死于中枢神经系统损害,即脑死亡。
即使心、肺复苏成功,生命保留,仍约有20%~50%左右存在着不同程度的脑功能障碍,成为植物状态(植物人)或痴残等[2]。
在成功进行心肺复苏后有20%~40%的患者遗留下永久性神经损害[3]。
鉴于脑保护和脑复苏的重要性,近年来对缺血性脑损伤的机制进行了大量的研究,脑是一个血流量大、代谢旺盛的器官,其功能几乎全靠葡萄糖的氧化代谢。
心脏骤停后引起的脑损害的病理生理主要是缺血缺氧性脑损伤以及自主循环恢复后的大脑缺血再灌注损伤,其中涉及兴奋性氨基酸的神经毒性、钙离子稳态失调、神经元凋亡等机制[4]。
所以心肺复苏的最终目的是脑复苏。
大量研究旨在寻找可减轻或预防脑缺血再灌注损伤的方法或药物,并且已经在动物模型上获得一定成功,但是这些方法和药物很少能成功用于临床。
缺血预处理对心脏和神经系统缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,但是在临床实践中预处理只适用于缺血再灌注可预期的情况。
尽快恢复灌注是减轻缺血导致的损伤和行为障碍的最有效方法,然而再灌注也可能加重损伤。
在再灌注早期,大量活性氧自由基的产生和钙超载导致了缺血再灌注损伤。
所以近年来围绕心肺脑复苏的保护机制及其方法成为专家学者们研究的热门,而建立有效、稳定的全脑缺血再灌注模型是实验研究的基础。
针对建立全脑缺血再灌注模型的实验方法有多种,包括:二血管阻断加低血压法、四血管阻断法、三血管阻断法、颈动脉负压分流法。
国内文献报道用四血管阻断法比较多[5],国外四血管阻断法、二血管阻断加低血压法均有应用及报道,但更偏向于后者[6]。
对比不同建模方法在实验过程中所显露出的特性,分析并总结各自的优缺点。
选择能较好地建立大鼠全脑缺血再灌注模型的方法,为脑复苏的深入研究提供良好的实验基础。
本文将从实验的可操作性、成功率、发展前景等方面对各类建模方法进行综述。
1制作全脑缺血再灌注动物模型及效果的判定1.1全脑缺血再灌注模型模拟心搏骤停在心肺复苏过程中,脑损害的病理生理主要是缺血缺氧性脑损伤以及自主循环恢复后的大脑缺血再灌注损伤,其中涉及兴奋性氨基酸的神经毒性、钙离子稳态失调、神经元凋亡等机制[4]。
心脏停搏引起完全性全脑缺血,急性缺血缺氧可造成细胞损伤,恢复血循环后又可引起再灌注损伤。
因此全脑缺血再灌注造成的结构破坏和功能障碍是脑复苏的重要病理生理过程。
目前主要是通过全脑缺血再灌注模型来模拟心搏骤停,即将头部的主要动脉进行阻断,从而导致全脑缺血,营造出脑组织缺血缺氧的状况。
1.2全脑缺血再灌注动物模型要求手术操作简便,致死率低,重复性好;缺血效果好,急、慢性缺血实验均可应用;再灌注方便、完全、充分;尽量能够保持颅脑的完整性;血液的流变性变化尽量要小[7]。
1.3二血管阻断加低血压法建立大鼠全脑缺血再灌注模型采用二血管阻断加低血压建立大鼠全脑缺血再灌注模型:10%水合氯醛(350 mg/kg)腹腔注射麻醉,分离暴露右侧股动脉,行股动脉插管,接BL-420生物机能记录系统监测动脉血压。
颈正中切口,分离双侧颈总动脉及作侧颈静脉,经左侧颈静脉插管,建立给药途径,静脉注射肝素150 IU/kg。
经左颈静脉回抽血液,当平均动脉压达35~40 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)时,用微型动脉夹夹闭双侧颈总动脉,此为缺血期开始。
期间经颈静脉回抽放血或静脉注射回输血液保持平均动脉压在35~40 mm Hg。
15 min缺血期后移去微型动脉夹,去除双侧颈总动脉的夹闭,回输血液,此为再灌注期。
1.4Pulsinelli四血管法及改良的四血管法建立大鼠全脑缺血再灌注模型四血管阻断法[8,9]主要是在颈前正中切口,分离双侧颈总动脉,套线备用。
同时枕部切口(颈部前倾30°,利于手术部位的暴露),借助手术显微镜分离暴露第一颈椎横突翼并找左右横突孔(椎动脉在人脑前从此孔下通过),将灼热的电烙铁尖头(直径0.5 mm)直接插入翼突孔,深度以2~3 mm为宜,电凝双侧椎动脉,造成永久性闭塞[10]。
也可采用钻透第一颈椎小孔的方法(即改良的四血管闭塞法),在直视下直接烧灼双侧椎动脉,成功率几乎100%。
24 h后用乙醚浅麻醉大鼠(也可在清醒状况下手术),颈部常规消毒,打开颈前正中切口,将套在双侧颈总动脉下的备用线结扎,根据实验需求可阻断血液流动10~60 min,松开结扎线后可实行再灌注研究[11]。
1.5三血管阻断法建立大鼠全脑缺血再灌注模型采用三血管阻断法[12]建立全脑缺血再灌注模型:20%乌拉坦1 000 mg/kg腹腔麻醉,经颈正中切口,分离双侧颈总动脉备用,剪去枕骨腹侧面部分颅骨,用5-0丝线结扎延髓腹侧面上的基底动脉,通过双侧颈总动脉的关闭和开放实现全脑缺血再灌流。
1.6颈动脉负压分流法制作大鼠全脑缺血再灌注模型颈动脉负压分流法[13,14]制模:采用水合氯醛腹腔麻醉(350 mg/kg),取颈部正中切口,分离左右颈总动脉及右颈外动脉;另取左侧腹股沟部切口,分离左股静脉并置管与输液器相连,从左股静脉注入肝素(180 U)后缓慢注入生理盐水;用微动脉夹夹闭两侧颈总动脉,从右颈外动脉向近心端插入套管针至颈内动脉与颈外动脉的分叉处,取出针芯,套管接三通与注射器相连,持续抽吸颈总动脉内血液,此为脑缺血开始,抽血速度平均为0.3 mL/min左右,由于大鼠在侧支循环及循环血量上的个体差异,控制抽血速度的负压以维持在使被抽血侧的颈总动脉在直视下处于塌陷状态为宜。
在抽血的同时,间断更换注射器,将抽出的血液从左股静脉持续回输,注意保持抽血速度与输入速度相等。
持续抽血30 min 后停止抽吸血液,拔出套管并结扎颈外动脉,去除两侧颈总动脉上的微动脉夹,此为再灌注开始。
1.7全脑缺血再灌注后开颅取脑组织进行观察将完成缺血再灌注实验的大鼠进行开颅并取其完整的大脑组织,进行形态学观察。
主要观察项如下:大脑组织的整体形态、脑沟脑回是否清晰、皮质的颜色、浅表血管的状态及血管内的血流情况。
在此基础上经苏木精-伊红染色(HE),在光镜下观察海马组织及顶叶皮质,主要观察神经元细胞的形态及排列情况、胞质的状态、细胞核的形状及核仁;光镜下观察海马区神经元细胞密度。
1.8实验大鼠与正常大鼠脑组织对比正常大鼠大脑无肿胀,脑沟脑回清晰,皮质颜色较红润;浅表血管丰富,充盈好,鲜红。
实验组大脑肿胀明显,脑沟脑回变浅,皮质颜色苍白;表面血管塌陷,血流少,部分基本无血流。
经HE染色后在光镜下观察海马组织及顶叶皮质,正常大鼠神经元细胞排列规则,胞质丰富,核呈圆形,核仁清楚;实验大鼠病理改变明显,可见大量神经元坏死变性,排列紊乱,神经元胞质浓缩,胞核固缩,核仁不清;光镜下观察海马区神经元细胞密度实验组比正常对照组低[15]。
2选择适当可行的方法建立全脑缺血再灌注模型2.1建立全脑缺血再灌注模型的方法脑复苏中存在全脑缺血再灌注损伤,而对脑缺血再灌注损伤的研究仍然是急诊医学中的重点,脑缺血再灌注模型的制作则是研究工作的重要环节。
全脑缺血再灌注模型制作方法有很多种:四血管阻断法,二血管阻断加低血压法,三血管阻断法,颈动脉负压分流法。
国内文献报道用四血管阻断法比较多,国外四血管阻断法、二血管阻断加低血压法均有应用及报道,但更偏向于后者。
2.2简述各种建模方法的特点2.2.1二血管阻断加低血压法优点:操作简便,用一次性手术即可完成,阻断完全可逆,可人为控制动物呼吸;可模拟临床上休克、心功能不全、脑血管严重狭窄或阻塞合并血液低灌流引起的脑循环障碍,造成不同程度的脑组织缺血损伤,对于探讨人类缺血性脑损伤的发病规律,评价抗脑缺血药物的疗效等有价值;成模效率较典型、稳定,可重复性好。
缺点:模型不能在清醒动物上复制,无法研究血管狭窄后行为学的变化;常因存在侧支循环而造成缺血不完全,部位不确定;脑缺血时限长,有时导致脑缺血后抽搐、癫病等并发症的发生,且又处于低血压状态,会干扰其他器官、组织的供血和实验结果。
2.2.2四血管阻断法优点:缺血完全,具有较强的可复制性;检验缺血是否成功的指标明确。
缺点:手术复杂,缺血的稳定性和成功率较差;个体差异大,术后存活率较低;被烧灼阻断的椎动脉不可再通,改变了正常的解剖结构,影响再灌注的脑血流量,造成再灌注不完全[16,17]。
2.2.3三血管阻断法优点:成功率高,缺血指标的观察明确简单;可根据实验需要,通过阻断CCA时间的长短控制脑缺血的程度。
缺点:手术难度较大,对实验者的要求较高,故可行性不高;在手术过程中对周围组织牵拉严重,在恢复血流时会受影响。
2.2.4颈动脉负压分流法优点:不改变脑血管的主要解剖结构,不影响基底动脉和椎动脉的血流,脑干无明显缺血;实施再灌注后,不改变血流动力学方向,仍保持原来的生理状态。
缺点:实验的操作较为复杂,很难保证其成功率。
2.3结论四血管阻断法由于个体差异大、成功率低并且在手术过程中翼突孔的区分是完全阻断双侧椎动脉的关键,在翼突孔前上方有一小切口,若肌肉分离不完全,易将该切口误以为翼突孔,若在此次灼烧,不但不能完全阻断双侧椎动脉,而且还易烧伤脊髓,甚至脑干,引起动物的立即死亡。
三血管阻断法因其操作的复杂性和较高的手术难度,对实验的成功率有较大影响,使该方法的动物致死率相对有所增高。
三血管和四血管阻断法均是通过较强有力的人为作用使血管血流阻断,骤然改变了正常的生理状况,造成了阻断的动脉血管内压力的改变,引起一系列应激性生理及病理反射,增加了脑缺血因素的复杂性。
对于颈动脉负压分流法,Bannister和Chapman[18]认为这种脑缺血主要是右侧大脑中动脉供应的区域缺血;然而一些学者经实验研究发现,造成这一差异的原因,可能与放血速度、颈内动脉压力降低程度以及动物种属差异等因素有关。
所以此方法在实验过程中受较多不确定的因素影响,故不被广泛采用。
二血管阻断法在可行性及成功率上具有显著的优势,就达到全脑缺血状态而言,此方法完全可以满足实验的要求,并且按照血流动力学观点来分析,二血管阻断加低血压法更符合血流动力学的要求。