血液实验实验报告
09 生物技术
摘要：血液在体内承担着物质运输、免疫等重要的生理功能。比较不同动物的血液组成和血细胞的差异，对了了解血液的功能以及不同动物体的特征有重要意义。制作血涂片用于观察红细胞、白细胞、血小板形态；使用血细胞计数板于显微镜下直接计数，计算分别得到红细胞、白细胞数目。
关键字：血液红细胞白细胞血细胞计数血涂片
第一章前言
血液在维持内环境稳定上起着重要作用，具有运输、缓冲、防御等功能。比较不同动物的血液组成和血细胞的差异，对了了解血液的功能以及不同动物体的特征有重要意义。
动物红细胞的形态、大小、数目与动物的进化和生态适应均有一定的关系，一般来说，动物越高等，红细胞的数目越多，而体积越小，同时血细胞也高度分化；白细胞体积（除鱼类）比红细胞大，但比重却比红细胞小。白细胞按其组成又分为粒细胞和无粒细胞。在不同生理状态下，白细胞数目波动较大。
通过观察不同脊椎动物的血涂片，并在镜下计数，即可初步观察到不同脊椎动物血细胞形态变化即数目变化。
第二章材料与方法
2.1 血涂片的制作与观察
2.1.1 材料
鲤鱼、牛蛙、家鸽、家兔、小白鼠血液样品，洁净载玻片，毛吸管，瑞氏染液，蜡笔
2.1.2方法
取末血样少量置于玻片的一端,左手
持载玻片,右手以边缘平滑的推片的一端
从血滴前方后移接触血滴，血滴即沿推片
散开，推片与载片夹角保持30-45度平稳
地向前移动，载片上保留下一薄层血膜。
待干后用蜡笔在血膜两侧划线，以防染液
溢出。然后将血膜平放在染色架上，加瑞
氏染液2-3滴，使覆盖整个血膜。固定
0.5-1.0分钟，滴加等量或稍多的新鲜蒸
馏水。与染料混匀染色5-10分钟。当液
面浮现一层金黄色金属状物质，表示染液
起了作用。用蒸馏水冲去染液,待自然干燥
后,即可置血涂片于显微镜下进行镜检。
红细胞
淡红色，无核的圆形细胞，因红细胞为双凹形，故边缘部分染色较深，中心较浅，直径7-8微米。
颗粒白细胞
嗜中性颗粒白细胞：体积略大于红细胞，细胞核被染成紫色分叶状，可分1-5叶。直径10-12微米。
嗜酸性颗粒白细胞：略大于嗜中性白细胞，细胞核染成紫色，通常为2叶，胞质充满嗜酸性大圆颗粒，被染成鲜红色。直径10-15微米。
嗜碱性颗粒白细胞：体积略小于嗜酸性白细胞，细胞质中有大小不等被染成紫色的颗粒，颗粒数目较嗜酸性白细胞的颗粒少，核1-2叶，染成淡蓝色。直径10-11微米。
淋巴细胞
胞质少，常为围绕细胞核的一薄层，其中无颗粒细胞核是肾形或马
蹄形，染成蓝紫色。
血小板
血小板体形甚小，形态不规则，染淡蓝色，内含紫色颗粒，无核，常聚集成团。
2.2 血细胞计数
2.2.1 材料
鲤鱼、牛蛙、家鸽、家兔、小白鼠、人体血液样品，柠檬酸钠，血细胞计数板，盖玻片，毛吸管。
2.2.2方法
1．计数原理：
血细胞计数板由一块长约7.5cm、宽3.5cm的厚玻璃制成，在中部1/3面积处有4条槽，内侧两条槽之间还有1条横槽相通，在中部构成2块长方形平台。此平台比整个载玻片平面低0.1mm。平台中部各有一个计数室，每个计数室分九大格，每格边长1mm，面积为1mm2，盖上盖玻片后体积为0.1mm3。四角的大格被划分为16个中方格，一般用作白细胞、血小板及组织培养的细胞计数。中央的大方格则由双线划分为25个中方格，每个中方格面积为0.04mm2，盖上盖玻片后体积为0.004mm3，每个中方格又分成16个小方格，用于红细胞、微生物细胞的计数。
计数方格为：
2.方法：
用毛吸管吸取10μl血液样本加柠檬酸钠至1ml（即稀释100倍）或2ml（即稀释200倍），轻轻摇匀。将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴、管将摇匀的血液稀释液由盖玻片边缘滴一小滴，让稀释液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，使计数室均能充满稀释液。取样时先要摇匀菌液，加样时计数室不可有气泡产生。
加样后静止2-3min，然后将血细胞计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。
红细胞数/L=N*25/（5*10*106*稀释倍数）
白细胞计数/L=N*稀释倍数*10*106/4
第三章结果
3.1血涂片的制作与观察
3.1.1鲤鱼、牛蛙、家鸽的血涂片都只观察到了红细胞，经查阅相关资料，白细胞有如下特点：
1、含量少由于白细胞含量为5000～10000个/立方毫米，而红细胞为400～500万个/立方毫米（男），其比例大约为1∶500（按最高含量），也即，大约观察500个红细胞才能看到1个白细胞。
2、颜色浅白细胞体积比红细胞大，圆球形，是无色有核的细胞。因而，在光镜下观察，由于其透光能力强，所以看到的白细胞颜色浅。
主观因素主要是来自于实验技能方面不过关。
解决方法：
可根据白细胞的透光能力较强这一特点，利用低倍镜找。方法是：
首先，应在低倍镜下调节细准焦螺旋，当看清细胞后，再继续向上调，使红细胞模糊不清。
然后，移动涂片，边移动边注意观察。会发现在视野中有一些小亮点，如星星在闪烁。将其中一个亮点置于视野中央，然后，再调细准焦螺旋使细胞清晰。观察后发现，此亮点便是要找的白细胞。如需仔细观察，可换高倍镜。但注意光线不要太亮。
3.1.2 家兔、小白鼠血涂片制作失败
血涂片制作失败原因分析：
1.现象：
以磷酸缓冲液为稀释液配制染剂，配比尝试了1：5，1：7，1:9,细胞几乎均不着色；
以蒸馏水为稀释液配制染剂，配比为1：5，染色较浅，但能看到细胞。
查阅相关资料：缓冲液pH值为6.24时，各血涂片的血细胞染色均较淡，尤其是白细胞中特殊颗粒显示不清，胞核、胞质对比不理想；随
