克伦特罗(Clenbuterol)ELISA检测试剂盒说明书

盐酸克伦特罗酶联免疫检测试剂盒使用说明书一、概要克伦特罗（clenbμterol，CLE）是一种 －肾上腺受体激动剂，此类药品在临床上用于治疗支气管哮喘、慢性支气管炎和肺气肿等疾病。

因为该药可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖企业作为养殖促进剂非法使用。

人食用了饲喂克伦特罗作为添加剂的动物所产生的畜产品后，残留的克伦特罗可导致人体肌肉震颤、心悸、神经过敏、头痛、目眩、恶心、呕吐、发烧、战栗等症状，对消费者的健康造成极大危害。

我国农业部第235号文件规定不得检出。

本试剂盒是应用ELISA技术研发的药物残留检测产品,与仪器分析技术比较，能经济、快速地检测出尿样、肌肉、肝脏及饲料等中的克伦特罗。

二、测定原理本试剂盒是利用竞争ELISA方法，在酶标板微孔上预包被抗克伦特罗抗体。

检测时，加入标准品或样品溶液及克伦特罗酶结合物，他们竞争性地与克伦特罗抗体结合，形成抗原抗体复合物；用TMB底物显色；加入反应终止液后在450nm波长酶标仪下进行检测，样品中的克伦特罗浓度与吸收光强度成反比。

三、试剂盒组成酶标板1块(包被抗克伦特罗抗体)标准液6瓶（1ml/瓶）：0、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb。

酶结合物…………………………7ml显色剂A …………………………7ml显色剂B …………………………7ml终止液…………………………7ml10×浓缩洗涤液…………………50ml说明书……………………………1份四、需要但试剂盒中不提供的器材和试剂（1）设备……微孔板酶标仪(450nm)……振荡器……离心机……微量移液器：20μl～200μl,100μl~1000μl……容量瓶：100ml，500ml，1000ml（2）试剂……三氯乙酸……氢氧化钠……叔丁基甲醚色谱级……浓HCl……氯仿……磷酸……Tris……乙酸乙酯……乙腈五、样本前处理步骤样本处理前须知处理任何样本时，都须注意：（1）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。

盐酸克伦特罗ELISA试剂盒1．简要信息此试剂盒可以定量检测血清，尿，牛奶，奶粉，肝，饲料，眼等样品中的盐酸克伦特罗浓度。

可做96个检测2．介绍β-agonists药物是用来治疗人体和兽医的喘息病，过量的摄入 β-agonists将会使脂肪转化为肌肉组织。

在欧盟，家畜养殖过程中使用这种药物是非法的。

近年来使用盐酸克伦特罗或者其他B-动物兴奋剂导致的中毒事件也有不断的报道。

检测生物样品中的盐酸克伦特罗可以使用酶联免疫方法的筛选可以在短时间内检测大批量的样品。

尿样不需要前处理可以直接使用，而饲料和其他生物样品只需要简单的前处理。

3．使用方向此试剂盒是利用竞争酶联免疫方法检测 β-agonists药物残留，适合于检测人体，牛和猪的尿样，血清，以及眼，肝，饲料，牛奶和奶粉。

不需要样品纯化，对于尿和血清样品不需要前处理直接使用，对于其他生物样品的前处理也是非常快速的。

4．检测原理此试剂盒是在包被有山羊抗兔IgG的塑料微孔板上操作，克伦特罗标准品，样品，酶联结合物以及兔抗 β-agonists抗体加入到微孔中。

在培养期间，游离的 β-agonists和标记有酶的 β-agonists竞争于抗 β-agonists抗体结合，抗克伦特罗抗体和固定在微孔壁上的山羊抗兔IgG结合。

任何没有结合的酶联结合物在冲洗阶段，酶的活性是由加入的显色酶底物的量决定。

酶把无色的染色剂转变成蓝色，加入终止液后是微孔从蓝色变成黄色，然后通过450nm酶标仪读数，颜色的密度和样品中 β-agonists的浓度成反比。

5．提供的试剂●微孔板（12×8）：包被有山羊抗兔IgG●标准液：7瓶不同浓度的克伦特罗标准溶液（1ml容量），分别是0ppb, 0.15ppb, 0.3ppb, 0.6ppb, 1.25ppb,2.5ppb, 5ppb，白色盖子的玻璃瓶。

●抗 β-agonists抗体：12ml的蓝色盖玻璃瓶●酶联结合物：12ml的红色安培瓶●10倍浓缩的冲洗液：50mL的塑料瓶●底物溶液：24mL的塑料安培瓶●终止液：1瓶白色盖子的9ml溶液6．实验需要但是没有提供的材料样品准备过程：-盐酸-氢氧化钠-枯草杆菌蛋白酶-磷酸缓冲液-Ultra-turrax-平板离心机-研磨-天平-PH计检测过程：-20-200ul的可调精确微量加样枪以及加样头-50-200ul的可调多道微量加样枪以及加样头-450nm的酶标仪7．使用者需要的警告和注意点- 只能做提外检测- 试剂包含防腐剂，终止液包含硫酸具有腐蚀性。

克伦特罗酶联免疫检测试剂盒(产品编号：CB1418)使用说明书一、试剂盒简介本试剂盒适用于组织、饲料及尿样内所含克伦特罗的定量测试。

试剂盒性能稳定，操作便捷，灵敏度高。

试剂盒包括以下内容：注：所有浓缩液均需稀释后使用，稀释方法见试剂制备及使用检测下限二、CB1418 克伦特罗试剂盒检测原理1、在可拆解成条状的酶标板上，已包被了克伦特罗特异性抗体。

2、标准液或样品中的克伦特罗会和酶标记物争夺酶标板上抗体的结合位点，形成抗体/抗原复合物或抗体/酶标抗原复合物。

3、洗涤酶标板，除去游离的酶标记物。

加上底物/发色剂。

在一定的温度范围内，抗体/酶标抗原复合物催化底物/发色剂发生显色（蓝色）反应。

加入酸后，反应终止，同时反应物的颜色由蓝色转为黄色。

4、颜色的深度与克伦特罗含量成反比。

在450纳米（nm）波长的酶标仪上，可读出相应的吸光度值。

三、样品制备（一）尿液样品制备尿样不用处理，清亮尿样直接测定（如果尿样有比较严重的浑浊，要过滤或离心直至得到清亮尿样）（二）组织样品制备（肝、肾、肌肉、视网膜）所需要的试剂：50mmol/L 盐酸：一般购买的浓盐酸为10mol/L，所以用蒸馏水按体积比1（浓盐酸）：199（蒸馏水）进行稀释即可500mmol/L磷酸二氢钾缓冲液：例如用6.8g磷酸二氢钾固体溶于100mL蒸馏水中，再用强酸调pH值到3.050mmol/L磷酸二氢钾缓冲液：用500mmol/L磷酸二氢钾缓冲液稀释十倍，再检查pH值是否为3.01 mol/L氢氧化钠：例如用4.0g氢氧化钠固体溶于100mL蒸馏水甲醇(100%)：一般市场上购买的产品达到分析纯即可所需要的仪器：冷冻离心机：要有50mL的离心管和相应的转子均质器：要求转数在4000转以上样品前处理步骤：1.5g 粉碎的样品与25mL 50mmol/L HCL混合，振荡1.5小时，以达到均质的目的。

2.称6g均质物（相当于1g肝脏），加入离心瓶中3.离心15分钟/4000g或更高的转速，在10-15 OC（50-59℉）4.转移上清液到另一个离心瓶中，加300uL 1 mol/L氢氧化钠混合15分钟.5.加入4mL 500mmol/L磷酸二氢钾缓冲液pH 3.0，简单的混合并在4O℃保存至少1. 5小时或过夜6.离心15分钟/4000g或更高的转速，在10-15 OC（50-59℉），分离全部上清液（应该是清亮的，非常重要），使其升至室温（20-25℃），然后用以下方法进行C-18柱纯化C-18 柱纯化方法：（1）用3mL甲醇（100%）洗涤柱子，流速为1滴/每秒（2）用2mL 50mmol/L磷酸二氢钾缓冲液洗涤液过柱，流速为1滴/每秒（3）样品进柱（肝，肉，或组织的全部上清液），流速为1滴/4每秒（4）用2mL 50mmol/L磷酸二氢钾缓冲液洗涤液过柱，流速为1滴/每秒（5）用正压去除残留的流体并且用空气或氮气吹2分钟干燥柱子（6）用1mL甲醇（100%）洗脱样品，流速为1滴/4每秒（7）在50-60℃并且在弱空气或氮气流下完全蒸发甲醇（8）用1mL蒸馏水溶解干燥的残留物进行分析注意:A.所有试剂和样品处理必须在室温条件下（20-25℃）并严格控制过柱时的流速B.在第（7）步中如果很难蒸发干甲醇，说明含有一定的水分，原因主要出在第（5）步中没有吹干柱子或甲醇本身有质量问题C.最后处理完的样品可能有黄色，属于正常现象，不影响以后的实验D.未处理的样品冷冻保存E.HCL均质后的样品在2-8℃稳定3天F.以磷酸二氢钾缓冲液提取后的样品（C18 柱纯化之前）在2-8℃稳定2天,使用前离心G.C-18 柱纯化步骤6所获得的甲醇洗脱物可以冷冻保存数周, 在2-8℃稳定2周视网膜样品应该采用以下方法快速抽提：1)称取0.1g视网膜，加入贴有标签的聚苯乙烯容器中或玻璃试管中。

盐酸克伦特罗快速检测试剂盒产地：比利时Bio-X1.检测原理 8. 工作液的准备2.操作时间 9. 样品前处理3.检测下限 10. 酶联免疫实验设计4.回收率 11. 操作步骤5.交叉反应率 12. 结果计算6.试剂盒的组成 13. 结果分析7.需要设备及试剂 14.注意事项简介：克伦特罗（Clenbuterol）属于beta兴奋剂，是一种高选择性的兴奋剂和激素，具有水解脂肪、合成代谢和对非条纹肌肉组织的松弛作用。

进年来被一些人非法添加到饲料中以提高脂肪型动物的瘦肉率和加速动物的生长。

当用作生长调节剂时，其添加量是治疗量的5—10倍，常在动物体内残留而给消费者带来危害。

通常，HPLC或GC-MS是克伦特罗残留检测的确证方法，但是其前处理步骤费用昂贵，而ELISA快速检测试剂盒因成本低、操作简便、速度快、一次检测样本量大、仪器化低，现已成为常规的筛选方法。

1.检测原理：测定的基础是抗原抗体反应。

微孔板上包被有抗兔IgG（Clenbuterol抗体）的羊抗体，含有克伦特罗抗原的样品或标准品与酶标记物被加入到小孔中，经过孵育及洗涤步骤后，游离的抗原与抗原酶标记物竞争抗体结合位点，没有结合的抗原酶标记物在清洗步骤中被除去，将显色液加入到孔中并且孵育，结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。

加入反应终止液后使颜色由蓝色转为黄色。

在450nm处测量，吸光强度与样品的克伦特罗浓度成反比。

2.操作时间： 1小时(30分钟孵育+30分钟显色)3.检测下限：0.1ppb4.回收率：尿样和血清： 97-110%饲料： 95-100%肝脏/组织： 90-97%牛奶及奶粉 100%5.交叉反应率：Clenbuterol (克伦特罗) 100%Mabuterol（马普特罗） 100%Mapenterol（马喷特罗） 100%Salbutamal (沙丁胺醇) 8-9%Terbutalin (特普他林) 7-8%Simarterol(塞曼特罗) <0.1%Isoproterenol（异丙肾上腺素） <0.1%Fenoterol（非诺特罗） <0.1%6.试剂盒的组成：1)96孔酶标板：12条╳8孔（包被有羊抗兔IgG）.2)克伦特罗标准液6瓶：1ml /瓶，为Clenbuterol水溶液:0.1ng/ml，0.3 ng/ml，0.6 ng/ml，1.25 ng/ml，2.5 ng/ml，5 ng/ml3)酶联结合物Conjugate peroxidase： 6ml 黄盖4)抗Clenbuterol抗体溶液：Anti-clenbuterol antibody 11ml 红盖7)显色溶液Chromogen： 3 ml 黑盖8)样品稀释液（需20倍稀释）Diluent solution: 10ml 绿盖9)反应终止液Stop solution： 6ml 白盖7.需要设备及试剂（试剂盒中未提供）设备：1）均质器2）振荡器3）微孔酶标仪（450nm）4）离心机5）20ul，50ul，100ul，200ul微量加样器试剂：1）氢氧化钠2）0.01M HCL3）5M盐酸4）蒸馏水8.工作液的准备：1）洗液：用蒸馏水按（1+9）稀释2）样品稀释液：将样品稀释液用蒸馏水按（1+19）稀释（注：在使用前再配）。

实验一克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测克伦特罗（clenbuterol），化学名为4-氨基-α-[ (叔丁胺基)甲基]-3,5-二氯苯甲醇盐酸盐，属于β-兴奋剂（β-Agonist）的一种。

由于克伦特罗能显著降低胴体脂肪含量，提高瘦肉率和增加瘦肉产量（由此得名“瘦肉精”），曾在畜牧业上作为生长促进剂被广泛使用。

克伦特罗有较大的毒性，当人们食用高残留克伦特罗的动物性食品时，会出现心悸、头疼、目眩、恶心、呕吐、发烧、颤栗、神经过敏、血管扩张、心率加快、肌肉震颤等中毒症状。

因此，欧美等国早已禁止克伦特罗在畜牧生产上的应用，我国农业部于1997年3月发布[农牧发(1997)]3号文件，禁止克伦特罗在动物生产中的应用。

1999年再次发布文件，禁止其使用，并规定了在动物组织中的最高限量。

然而，由于经济利益的驱使，克伦特罗违法滥用的现象仍然较为普遍，中毒现象屡屡发生。

图1 克伦特罗分子结构式检测克伦特罗的方法主要有高效液相色谱法（HPLC），气相色谱－质谱法（GC-MS），毛细管区带电泳法（CE）和免疫分析技术（IA）等等。

HPLC法与GC-MS 法是克伦特罗残留检测的确证方法，其优点是检测精确度高，但因其仪器化程度高、检测时间长、过程繁琐、检测费用昂贵等而阻碍其推广应用，而酶联免疫分析（ELISA）快速检测技术因成本低、操作简单、速度快、一次检测样本量大、仪器化程度低，现已成为常用的筛选方法。

1 实验原理在微孔条上预包被偶联抗原；加入样品或标准品，样品或标准品中的克伦特罗与微孔条上预包被的偶联抗原竞争结合酶标记的克伦特罗单克隆抗体，游离的酶标记抗体通过洗涤被除去；再加入显色液，结合的酶标记抗体使无色的显色液转化为蓝色，加入反应终止液后再转变为黄色，在450nm处测量，样品吸光值与样品中克伦特罗含量成负相关，通过标准曲线即可计算出样品中克伦特罗含量。

检测原理示意图如下所示：①未包被酶标板②将包被抗原包被在酶标板上③首先将标准品或待检样品加入到包被好的酶标板微空内④然后加入辣根过氧化物酶标记的抗体，孵育期间包被抗原与样品中的被检药物将同时竞争酶标抗体，如果样品中的被检药物含量多则与包被抗原结合的酶标抗体就少，反之就多⑤通过洗涤将反应液中未与包被抗原结合的酶标抗体去除⑥加入底物缓冲液与底物液的混合液，酶标抗体上辣根过氧化物酶将催化底物进行显色反应（由无色变为蓝色）⑦达到显色时间后，加入硫酸溶液终止酶促反应，同时反应溶液由蓝色变为金黄色，此反应液可通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度值，从而通过软件计算得到待检药物的浓度2 实验材料（1）克伦特罗ELISA试剂盒：百睿或其他同类产品。

克伦特罗检测试剂盒使用说明书Kit Catalog No.BC-3003一、概要:克伦特罗(Clenbuterol)，俗称瘦肉精，是一种β2兴奋剂。

能提高动物体内的瘦肉的比例，并加速动物生长，而被广泛添加于动物饲料中，然而其会残留在动物体内，人类食用后会产生严重的副作用，轻则导致心跳及心率不正常，重则可引发心脏病。

目前，许多国家政府已明令禁止其使用于动物饲料中。

本公司研发生产的克伦特罗检测试剂盒的检测结果准确、稳定，可检测存在于动物的尿液、血清、血浆、组织(肌肉、心脏、肝脏等)、及动物饲料樣本中的克伦特罗。

样品前处理方式简单、方便，适用于各级政府食品安全检测机构、各类屠宰企业、肉类食品加工及饲料生产企业等。

二、检测原理:本试剂盒利用竞争酶联免疫方法，预先在微孔中包被羊抗兔抗体，实验时先后加入克伦特罗标准品，或待测样本，克伦特罗酶标抗原和兔抗克伦特罗抗体。

经过室温温育，反应液中的兔抗克伦特罗抗体与微孔板上的羊抗兔抗体结合，待测样品中的克伦特罗与克伦特罗酶标抗原竞争微孔板上的兔抗克伦特罗抗体。

洗涤后，没有与抗体结合的待测样品中的克伦特罗或酶标抗原被洗去，再加入反应底物，结合的酶标抗原的酶将底物转化为蓝色产物，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色。

反应完成后，样品中克伦特罗含量越多，反应呈色就越浅；反之，样品中克伦特罗含量越少，则呈色越深。

利用标准曲线可计算出样品中克伦特罗含量。

三、试剂盒提供试剂:1.羊抗兔抗体包被的微孔板:96孔。

2.克伦特罗参考标准品:0，0.05，0.25，1.00，2.50，5.00ppb (ng/ml);1.5ml/瓶，一套共6瓶。

3.克伦特罗酶标抗原试剂(1X):7ml/瓶。

4.兔抗克伦特罗抗体:7ml/瓶。

5.样品稀释液：100ml/瓶。

6.显色剂/底物：11ml/瓶。

7.反应终止液：11ml/瓶。

8.洗涤液(20X)：50ml/瓶，使用前稀释20倍。

四、其它试剂和仪器:1.试剂∙盐酸(5mM,10mM )∙氢氧化钠溶液(2.0M )2.仪器∙均质机(Ultra-turrax)∙微孔板酶标仪∙振荡器∙离心机∙氮气吹干仪或旋转蒸发器∙超声波破碎仪∙20µl,50µl,100µl,200µl,及1ml 移液器五、待测样品处理方法:1.尿液将样品在室温(18-25ºC)以4,000转离心10分钟后取上清液或者过滤后取滤液100克伦特罗检测试剂盒使用说明书Kit Catalog No.BC-3003μl,加入样品稀释液400μl （5倍稀释），用于下一步检测。

ELISA kit for quantitative detection of Clenbuterol概述：克伦特罗(Clenbuterol)属于一类β-兴奋剂，具有改进脂肪型动物体内肉与脂肪的比例的作用，亦可促进动物生长。

但同时，此药物还会使非横纹肌松弛，人体摄入后可引起心跳、心率不正常等副反应，甚至可导致心脏病。

因此在我国，克伦特罗在畜牧业上的使用是被严格禁止的。

本试剂盒利用竞争酶联免疫法对生物样品中的克伦特罗进行定量分析。

适用于动物尿液、血清、内脏等物质中克伦特罗的快速检测。

由于ELISA法的高通量与简便快速，适合大量样本的定量筛查，自样本加入至结果读出，不超过60分钟，检测灵敏度为0.1ppb。

一、简要原理试剂盒所提供的微孔板上包被有抗体，然后将校准品或样本中的克伦特罗与酶标记的克伦特罗加入微孔中后，两者可竞争结合克伦特罗抗体，洗去未结合的酶标记克伦特罗。

加入底物后，在酶作用下，底物溶液会显蓝色，加入终止剂后，溶液由蓝转为金黄色。

在450nm波长光下测吸光度，吸光度高低与校准品或样品中克伦特罗的含量呈反比，根据校准品的读数作出校准曲线，并利用校准曲线计算出样品中克伦特罗的含量。

二、试剂盒组成1.酶标96孔易折板(抗体已包被)……………………………………………………………………… 96孔2.克伦特罗校准品(0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb)…………………………… 1 套3.11×浓缩酶标记物…………………………………………………………………………1瓶4.底物溶液…………………………………………………………………………1瓶5.酶标稀释液………………………………………………………………………1瓶6.50×浓缩洗涤液……………………………………………………………………1瓶7.终止剂……………………………………………………………………………1瓶8.其他（说明书、自封袋、封板膜）…………………………………………………………………1套2-8℃贮存，有效期一年三、实验需要但试剂盒不提供的试剂和仪器1.试剂…………50mM盐酸溶液…………氯化钠…………50mM PH7.0 PBS (配制:9g NaCl；4.65g Na2HPO4·12H2O；0.56g NaH2PO4·2H2O 溶解于1000ml 蒸馏水中)…………2M 氢氧化钠溶液…………异丙醇和乙酸乙酯2.仪器…………微孔板酶标仪…………涡旋振荡器或超声波粉碎仪或摇床…………离心机及离心管…………20μl、200μl、1ml移液器…………氮吹仪或旋转蒸发仪ELISA kit for quantitative detection of Clenbuterol四、待测样品处理方法1.尿液新鲜尿液可直接测定，如尿液混浊，则离心取上清进行检测。

克伦特罗(Clenbuterol)ELISA检测试剂盒说明书一、概要克伦特罗（Clenbuterol）属于β-兴奋剂，因为该药可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖企业作为养殖促进剂非法使用。

人食用了饲喂克伦特罗作为添加剂的动物所产生的畜产品后，残留的克伦特罗可导致人体肌肉震颤、心悸、神经过敏、头痛、目眩、恶心、呕吐、发烧、战栗等症状，对消费者的健康造成极大危害。

因此世界许多国家现已被明令禁止在饲料中添加克伦特罗来增加动物的瘦肉率。

HPLC或GC-MS一直用作检测β兴奋剂的方法，但是其前处理步骤费用昂贵；而使用酶联免疫检测试剂盒方法则可以经济、快速地检测尿，肌肉，肝脏及饲料中的CLE。

本试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品，操作时间短于45min，能最大限度地减少操作误差和工作强度。

二、试验原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被克伦特罗抗原，样本残留的克伦特罗和微孔条上预包被的抗原竞争抗克伦特罗抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其残留物克伦特罗负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中克伦特罗的含量。

三、适用范围可定性、定量检测动物组织、饲料、尿液等样本中克伦特罗的残留量。

四、交叉反应率克伦特罗………………………………………………100%特普他林……………………………………………小于1%非诺特罗……………………………………………小于1%马布特罗……………………………………………小于1% 西马特罗…………………………………………小于1%溴布特罗……………………………………………小于1% 塞曼特罗……………………………………………小于1% 五、使用单位需自备的设备及试剂设备：┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm┅┅振荡器┅┅涡旋仪┅┅离心机┅┅天平：感量0.01g┅┅刻度移液管：10ml┅┅聚苯乙烯离心管：10ml、50ml┅┅微量移液器：单道20μl～200μl、200μl～1000μl多道250μl试剂：┅┅甲醇(分析纯) ┅┅氢氧化钠(分析纯)┅┅浓盐酸----去离子水六、提供的材料与试剂1、96孔酶标板×1块2、标准品×6瓶：(1ml/瓶）0ppb, 0.05ppb, 0.15ppb,0.45ppb, 1.35ppb,4.05ppb3、高浓度标准品：100ppb （1ml/瓶）4、克伦特罗酶标物…………………………………………7ml5、克伦特罗抗试剂…………………………………………9ml6、底物液A液………………………………………7ml7、底物液B液………………………………………7ml8、终止液…………………………………………7ml9、浓缩洗涤液(10×) ……………………………………40ml10、克伦特罗浓缩样品稀释液(2×)…………………………40ml七、溶液的配制配液1: 样品稀释液用去离子水将克伦特罗浓缩样品稀释液(2×)按1:1体积比进行稀释，即：1份克伦特罗浓缩样品稀释液(2×)+1份去离子水；用于提取样本的稀释，样品稀释液在4℃环境可保存一个月。

克伦特罗（瘦肉精）快速检测卡使用说明书（组织）（新）克伦特罗(瘦肉精)快速检测卡使用手册（纸巾、饲料）简介克伦特罗是一种克伦特罗受体。

由于该药能提高瘦肉率，减少脂肪沉积，促进动物生长，因此被一些畜牧业农民和养殖企业用作养殖促进剂。

人们食用以盐酸克仑特罗为添加剂的动物生产的畜产品后，残留的盐酸克仑特罗会对消费者的健康造成极大危害。

由盐酸克伦特罗引起的食物中毒在许多国家都有报道。

畜产品中盐酸克伦特罗的残留已成为社会各界关注的公共问题。

因此，世界上许多国家禁止使用克伦特罗来提高动物的瘦肉率。

结果检测原理安迪斯克伦特罗(瘦肉精)快速检测卡是采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术设计的一种快速检测试剂，可快速特异地检测尿液样品中的克伦特罗。

具有简单快速，无需仪器设备等特点，既可以在实验室进行，也可在养猪场、屠宰车间等实地进行测定。

由于样本量需要少、简便快速，适用于大量样本的筛查。

检测结果准确，灵敏度为5ppb，准确率在95%以上。

阴性阳性无效试剂盒组成：40次/盒。

1、检测试卡：40个。

2.样品提取物：0.5ml×40瓶。

3.样品稀释液：0.5ml×40瓶。

4.一次性取样滴管：40支。

5.一次性塑料手套：5副。

6.说明：1份。

a：阴性：对照线(c)和样品测试线(t)同时出现，表尿液样本中克伦特罗的浓度小于5ng/ml。

b:阳性：只有对照线(c)，无样品测试线(t)。

表明尿液样本中克伦特罗的浓度大于5ng/ml。

c：无效：对照线(c)和测试线(t)都不出现。

储存条件和保质期1、在4-30℃阴凉避光干燥处储存，忌冷冻。

2、环境温度在4-30℃下使用。

3、有效期见包装盒上。

4.储存期间避免光线、湿度和过热。

样品处理1.称取1g切碎或均质的组织、肉样本、肝脏和制剂合饲料样品，置于含0.5ml样品抽提液管，扭紧管盖，振摇样品１分钟后，100℃水浴10分钟。

2、冷却至室温，取20滴（0.5ml）清亮上清加入含0.5ml样品稀释管，充分混合，取上清液进行检测。

盐酸克仑特罗酶联免疫(ELISA) 快速检测试剂盒盐酸克仑特罗酶联免疫(ELISA)快速检测试剂盒1 概要盐酸克仑特罗（俗称瘦肉精）为一种人工合成的β肾上腺素兴奋剂，具有扩张支气管的作用，常用来防治哮喘、肺气肿等肺部疾病。

当其应用剂量达到治疗量的5~10倍时，具有能量重分配作用，可使肌肉合成增加，脂肪沉积减少，因此俗称为“瘦肉精”。

在畜牧业生产中一些非法使用者将其作为一种生长促进剂添加到动物饲料中，用以改善胴体的品质，同时也造成食品中盐酸克仑特罗（瘦肉精）的残留。

当人们食用盐酸克仑特罗残留的产品后会出现一系列的中毒症状。

我国禁止在畜牧业中使用盐酸克仑特罗。

本试剂盒可用于定量、定性检测饲料、动物尿液以及动物组织等样本中盐酸克仑特罗的残留。

2 原理本试剂盒采用直接竞争ELISA法检测样本中的盐酸克仑特罗。

在微孔板上预包被抗盐酸克仑特罗单克隆抗体，样本或标准溶液中的盐酸克仑特罗和HRP 标记的盐酸克仑特罗竞争结合微孔板中抗盐酸克仑特罗单克隆抗体，洗涤后用H2O2-TMB底物系统显色，样本吸光度值与其所含盐酸克仑特罗量成负相关，与标准曲线比较即可得出盐酸克仑特罗含量。

3 试剂盒组份每个试剂盒中的试剂可进行96个测量（包括标准测定），试剂盒组份：包被有抗盐酸克仑特罗抗体微孔板······················································96孔盐酸克仑特罗标准溶液··································································1.5 mL /瓶（6瓶）分别为0号：0 ppb ；1号：0.1 ppb ；2号：0.3 ppb ；3号：0.9 ppb ；4号：2.7 ppb ；5号：8.1 ppb盐酸克仑特罗-HRP标记物 ·······································································1瓶(6 mL) 20×浓缩洗涤液··························································································1瓶(50 mL) 底物溶液A ··································································································1瓶(7 mL) 底物溶液B ··································································································1瓶(7 mL) 终止液（含2 M的硫酸）·········································································1瓶(6 mL) 封板膜··········································································································3张说明书··········································································································1份4 另外所需试剂和仪器4.1 试剂：—0.01 M PBS（pH 5.5-6.0）：称取8 g NaCl，2.9 g Na2HPO4· 12H2O，0.2 g KCl，0.2 g KH2PO4，加超纯水溶解，调pH至 5.5-6.0，定容至1000 mL。

一、产品概要克伦特罗(瘦肉精)是一种肾上腺受体激动剂即神经兴奋剂。

80年代末期发现其对家畜具有促进生长，降低脂肪，提高瘦肉率的功效，曾被作为饲料添加剂使用。

然而，90 年代初期以来，出现多起克伦特罗(瘦肉精)中毒事件，并出现了死亡案例，因此被禁止使用。

克伦特罗快速检测试剂盒采用直接竞争酶联免疫一步法，可对尿液、饲料、肉类组织中的克伦特罗进行快速定量检测。

二、试剂原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测尿样、组织、饲料等样本中的盐酸克伦特罗（Clenbuterol Hydrochloride，Cle），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。

检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的盐酸克伦特罗和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗盐酸克伦特罗抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含盐酸克伦特罗含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中盐酸克伦特罗的残留量。

三、使用范围克伦特罗检测试剂盒可定性、定量检测动物组织（肌肉、肝脏等）、尿液、饲料、牛奶等样品中克仑特罗的残留量。

四、技术指标1 试剂盒灵敏度：(ng/ml)2 反应模式：25℃，30min～15min。

3 检测下限：尿液样本: 组织样本: 饲料样本:1ppb4 交叉反应率：克伦特罗（Clenbuterol）:100% 马布特罗（Mabuterol）:<1% 特普他林（Terbutalin）:<1% 溴布特罗（Brombuterol）:<1%沙丁胺醇（Salbutamol）:<1% 莱克多巴胺（Ractopamine）:<1%5 样本回收率：尿样:95%±10% 组织:85%±15% 饲料:85%±15%五、试剂盒组成酶标板、标准液、高标准液、酶标记物、抗体工作液、底物液A、底物液B、终止液、20X浓缩洗涤液、10X复溶液六、贮藏及保存期储藏条件：试剂盒于2-8℃保存，不要冷冻。

盐酸克伦特罗（瘦肉精）快速检测卡说明书【产品名称】产品名称：盐酸克伦特罗快速检测卡（胶体金法）英文名称：Clenbuterol Rapid Test Card(Colloidal Gold)【产品简介】盐酸克伦特罗（瘦肉精主要成分）是为提高猪肉瘦肉率而使用的兴奋剂药物，在动物可食性组织中蓄积，危害食用者的健康，我国已经禁止用其做动物饲料添加剂。

本产品用于快速检测猪肉和其他肉类肌肉组织中盐酸克伦特罗残留，检测过程只需20分钟，适用于家庭、超市、食堂、食品企业及检测机构快速筛查。

【产品组成】盐酸克伦特罗快速检测卡（5条）；200μL刻度吸管（5支）；提取瓶（内含盐酸克伦特罗提取液0.5mL，5瓶）；小勺（1个）。

【检测原理】本产品采用了竞争抑制免疫层析的原理。

【检测限】本产品检测方法对肌肉组织中盐酸克伦特罗的检出限为5 μg/kg。

【使用方法】1、取一小块瘦肉，用刀切成碎肉，用小勺将碎肉装入提取液的瓶盖内，高度与瓶盖相平（约2.0g）。

2、将瓶盖量取的碎肉转移到提取瓶内，盖紧瓶盖后振荡，使碎肉与提取液充分混匀，放入盛有热水(>80℃)的容器中热水浴10分钟后取出，冷却至室温。

3、从包装袋中取出检测卡，平放在桌面，用吸管从提取瓶中吸取肉品提取液，垂直滴加2-3滴于加样孔（S孔）中。

4、室温环境计时5分钟，对照结果判断示意图判定检测结果，其他时间判定无效。

【结果判断】阴性（-）：C线和T线都显色，表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于检出限。

阳性（+）：C线显色，T线不显色，表示样品中盐酸克伦特罗浓度等于或高于检出限。

无效：C线未出现，表明操作过程不正确或检测卡已失效。

在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的检测卡重新测试。

【注意事项】1、请按照使用方法进行测试，检测卡打开包装后1小时内使用，检测前将检测卡恢复至室温。

2、尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面，检测时避免阳光直射。

3、本检测卡为一次性产品，请勿重复使用。

®酶联免疫法定量检测克伦特罗摘要® （编号：）竞争酶标免疫分析法定量检测尿液，血清血浆，肝脏，肾脏，肉类和组织中地克伦特罗及其他β兴奋剂.试剂盒中包含有酶联免疫试验所需地所有试剂，包括标准溶液.试剂盒足够进行次检测（包括标准）.定量检测需要微孔板酶标仪.样品处理：尿液和血清血浆：不需要样品处理肝脏，肾脏，肉类，组织：用® (. . )纯化试验时间：样品制备（以个样品为例）尿液（离心或过滤）………….…………………….….…...约肝脏，肾脏，肉类，组织……………..………….…...……至少检测时间（孵育时间）……………………………….……………检测限：尿液，血清血浆中地克伦特罗………………..……………肝脏，肾脏，肉类，组织地克伦特罗………..……………回收率：尿样…………………………...………. ± 交叉反应：® 试剂盒地特异性是通过测定相应物质地交叉反应而得到地. .............................…………….…..............约文档收集自网络，仅用于个人学习.............................………………..............约文档收集自网络，仅用于个人学习......................…….…………............ 约文档收集自网络，仅用于个人学习........................…………...….........................约文档收集自网络，仅用于个人学习..............................………………............ 约文档收集自网络，仅用于个人学习............……………….................................. 约文档收集自网络，仅用于个人学习..................………………...........................约文档收集自网络，仅用于个人学习.................……………….................................约文档收集自网络，仅用于个人学习....................………………............................ 约文档收集自网络，仅用于个人学习..........................……………….................< 文档收集自网络，仅用于个人学习.................…………………..........................< 文档收集自网络，仅用于个人学习..........…………….…..............................< 文档收集自网络，仅用于个人学习. 用途® 竞争酶标免疫分析法定量检测尿液，血清血浆，肝脏，肾脏，肉类和组织中地克伦特罗及其他β兴奋剂.文档收集自网络，仅用于个人学习概要克伦特罗属于β兴奋剂，在畜牧业生产中常用于促进家畜地生产性能，特别是改进脂肪型动物地肉与脂肪地比例或加速动物生长.然而直到现在，这些化合物并没有被批准作为合法地加速生长调节剂.文档收集自网络，仅用于个人学习除了水解脂肪及合成代谢地作用外，克伦特罗还有对非条纹肌肉组织地松弛作用，当用作生长调节时，其剂量是治疗剂量地倍，因此，克伦特罗非常有可能残留在动物体内，不合法地使用会给消费者带来危害.文档收集自网络，仅用于个人学习测定原理测定地基础是抗原抗体反应，微孔板包被有针对克伦特罗抗体地捕捉抗体.加入克伦特罗抗体后，会与捕获抗体连接.经过孵育及洗板步骤后，加入标准、样品溶液及克伦特罗酶标记物，样品中地克伦特罗与克伦特罗酶标记物竞争克伦特罗抗体（竞争酶标免疫分析法），没有连接地克伦特罗酶标记物在洗涤步骤中被除去.将酶基质发色剂加入到孔中并且孵育.结合地酶标记物将发色剂转化为蓝色地产物.加入反应停止液后使颜色由蓝转变为黄色.在处测量，吸收光强度与样品中地克伦特罗浓度成反比.文档收集自网络，仅用于个人学习提供地试剂每一个盒中地试剂足够进行个试验（包括标准测定），盒中地材料如下×孔板（条×孔，可以拆分为单孔）包被有针对克伦特罗抗体地抗体.×克伦特罗标准溶液（. 瓶）（标准）, , , ,克伦特罗水溶液，直接应用液×酶标记物（）浓缩液…………………………红色帽×克伦特罗抗体（）浓缩液………………….黑色帽×基质发色剂（）红色溶液………………….蓝色帽×反应终止液（）含有硫酸....................黄色帽×缓冲液（）酶标记物和抗体稀释缓冲液需要地材料但盒中不提供设备—微孔板酶标仪（）搅拌器振荡器离心机和离心管（）—刻度移液管—μ μ 和μ微量加样器— ® (. .: )试剂—甲醇正庚烷（或正己烷）缓冲液，缓冲液，缓冲液，操作者应该注意之事项反应终止液含有硫酸，避免接触皮肤.储存条件保存试剂盒于° ( – °)，不要冷冻.将不用地微孔板放进原锡箔袋中并且与提供地干燥剂一起重新密封并保存在° ( – °).文档收集自网络，仅用于个人学习红色地基质发色剂对光敏感，因此要避光保存.不要使用超过有效期地试剂盒.不要交叉使用不同批号地试剂盒.试剂变质地迹象若发色试剂出现任何其他地颜色，表明发色剂变质，应当弃之.标准地吸光度值小于个单位(<)时，表示试剂可能变质.样品处理样品应当在阴凉处保存.这里提及到地所有样品处理方法适用于多种残留分析，不仅适用于克伦特罗，还适用于其他β兴奋剂.尿液和血清血浆（不需要样品处理）—取μ样品（尿液，血清血浆）直接进行检测（如果尿液混浊，建议试验前先进行离心或是过滤）.肉样低脂肪地肝脏，肾脏，肉类或组织—均质地样品，取出大部分进行试验取样品到离心管中，加入，均质振荡离心：或更高地转速° ( °)转移上清液（相当于样品）到一个新地离心管中，加入混合约文档收集自网络，仅用于个人学习加入缓冲液，，简单地混合并在°( °)保存至少. 小时或过夜文档收集自网络，仅用于个人学习离心：或更高地转速° ( °)移取上清液（相当于样品），使其升至室温( °°)，用® 柱纯化（见® 柱纯化步骤）文档收集自网络，仅用于个人学习高脂肪地肉类和组织—均质地样品，取出大部分进行试验取样品到离心管中，加入缓冲液，，振荡加入庚烷振荡以除去脂肪离心：或更高地转速° ( °)用巴斯德吸管除去上面地庚烷层及中间薄薄地脂肪层再用庚烷重复步骤向均质地肉液中加入半浓( )地盐酸，振荡小时（或是振荡过夜）称均质物（相当于样品）加入离心管中离心：或更高地转速° ( °)移取上清液到另一个离心管中，加入μ 混合加入缓冲液, , 简单地混合并在°( °)保存至少. 小时或过夜文档收集自网络，仅用于个人学习离心：或更高地转速° ( °)移取全部上清液（必须取干净），使其升至室温( °°)，用® 柱纯化（见® 柱纯化步骤）文档收集自网络，仅用于个人学习® 净化步骤(.: ):所有试剂和样品提取液都应当回升至室温( °°)滴速：滴秒—用甲醇（）洗涤柱子—用缓冲液，洗涤柱子—样品进柱（见或）—用缓冲液，洗涤柱子—用正压去除残留地流体并用空气或氮气吹干燥柱子—用甲醇（）洗脱样品，用一个新地小瓶（流速为滴分钟用正压或是真空收集全部提取液）文档收集自网络，仅用于个人学习—在°( °)并且在弱空气或氮气流下完全蒸发溶剂—用蒸馏水溶解干燥地残留物，取μ进行分析注意：对于污染浓度较高地样品（大约），如果需要进一步稀释，则用蒸馏水进行稀释.样品地储存方法—生肉样品应当冷冻保存—酸化后地样品在° ( °)下最多可稳定天—用缓冲液提取后地样品（在用® 柱净化前），在°下最多可保存天（适用之前要先离心）文档收集自网络，仅用于个人学习—用® 柱净化后地甲醇提取液在冷冻条件下可保存数周或是在° ( °)下可保存周文档收集自网络，仅用于个人学习—用蒸馏水溶解后地样品在°( °)下最多可保存周另外，牛奶、饲料、眼和毛发地处理方法，如有需要可与当地地分销商联系.检测步骤试验前准备. 使用之前将所有试剂回升至室温( °, °).. 克伦特罗酶标记物提供地克伦特罗酶标记物（盖红色帽地瓶）为浓缩液.由于稀释地酶标记物稳定性不好，所以只稀释实际需用量地酶标记物. 在吸取浓缩液之前，要轻轻地振摇以便充分混均.用缓冲液以: （）地比例稀释酶标记物浓缩液（µ浓缩液缓冲液，足够个微孔板条用）.文档收集自网络，仅用于个人学习. 克伦特罗抗体提供地克伦特罗抗体（盖有黑色帽地瓶）为浓缩液，由于稀释地抗体稳定性不好，所以只稀释实际需用量地抗体. 在吸取浓缩液之前，要轻轻地振摇以便充分混均.用缓冲液以: （）地比例稀释抗体浓缩液（µ浓缩液缓冲液，足够个微孔板条用）.文档收集自网络，仅用于个人学习测定程序洗涤步骤要按照推荐地方法进行，操作过程中不要让板孔干燥.. 将足够标准和样品所用数量地孔条插入微孔架，标准和样品做两个平行实验，记录下标准和样品地位置.. 加入µ稀释后地抗体溶液到微孔底部，在室温( °°)下孵育文档收集自网络，仅用于个人学习. 倒出孔中地液体，将微孔架倒置在吸水纸上拍打（每轮拍打次）以保证完全除去孔中地液体.用µ蒸馏水充入孔中，再次倒掉微孔中液体，重复操作两次以上.文档收集自网络，仅用于个人学习. 加入µ地标准或处理好地样品到各自地微孔中.标准和样品做两个平行实验.然后加入稀释后地酶标记物到微孔底部，小心地使酶标板在平面上做圆周运动以充分混合.室温( °°)下孵育. 文档收集自网络，仅用于个人学习. 倒出孔中地液体，将微孔架倒置在吸水纸上拍打（每轮拍打次）以保证完全除去孔中地液体.用µ蒸馏水充入孔中，再次倒掉微孔中液体，再重复操作两次以上.文档收集自网络，仅用于个人学习. 加入µ基质发色试剂到微孔中，小心地使酶标板在平面上做圆周运动以充分混合并在室温( °°)下暗处孵育.文档收集自网络，仅用于个人学习. 加入µ反应停止液到微孔中.混合好在处测量吸光度值以空气为空白，必须在加入停止液后内读取光度值.文档收集自网络，仅用于个人学习结果可用专门地® (. . )计算软件对® 试剂盒进行分析.文档收集自网络，仅用于个人学习标准曲线可以参考试剂盒中地质量报告.若不用计算软件，计算方法如下：标准地吸光度值（或样品）吸光度值文档收集自网络，仅用于个人学习标准地吸光度值所获得地标准和样品吸光度值除以第一个标准(标准)地吸光度值再乘以.因此标准等于并且以百分比给出吸光度值.计算地标准值绘成为一个对应克伦特罗地浓度()地半对数坐标系统曲线图，相对应每一个样品地浓度()可以从标准曲线上读出.文档收集自网络，仅用于个人学习地相当于地, 地, 地, 地, .文档收集自网络，仅用于个人学习为了获得样品中克伦特罗地实际浓度()，从标准曲线上读出地浓度值应当乘以相应地稀释倍数.根据样品处理方法而得到地稀释倍数如下：文档收集自网络，仅用于个人学习尿液和血清血浆……………………………...…………………肝脏、肾脏、肉类和组织…………………...…………………请注意此中文说明书与英文原文不同之处在于：柱( .: ) 纯化组织样品部分步骤原文：用蒸馏水溶解干燥地残留物,取进行分析改为：用蒸馏水溶解干燥地残留物,取进行分析组织样品地稀释倍数由改为如果您希望提高检测灵敏度，仍然可以按照英文原文地操作进行，即稀释倍数为,检测下限为文档收集自网络，仅用于个人学习。