发酵工程实验报告产淀粉酶菌株的筛选
姓名：××
班级：生物技术
学号：××
指导老师：×××
产淀粉酶菌株的筛选
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（长春师范大学生命科学学院生物技术）
【摘要】为筛选产淀粉酶的高产菌株, 利用淀粉水解圈作为筛选模型, 从学校附近土壤中筛选得到产淀粉酶能力较强的细菌。对其酶活力进行测定, 最终得到产淀粉酶的高产菌株。
【关键词】淀粉酶;水解圈;酶活力;高产菌株
Screening of Strains Producing Starch
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(Technology of Biological Life Science College of Changchun Normal University)
[Abstract] for the high-yield strains were screened for amylase, the starch hydrolysis circle as a model for screening, screening from the school near the soil produced amylase ability of the bacteria. Determination of the enzyme activity, high yield strain eventually produced amylase.
[Key words] Amylase;Hydrolysis circle;Enzyme activity;Producing strain
前言：生活中的微生物无处不在，某些微生物给人们带来困扰，但更多的微生物对我们人类有必不可少的作用。淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类的总称,广泛存在于动植物和微生物中, 是最早实现工业生产并且迄今为止用途最广、产量最大的酶制剂品种。特别是20世纪60年代以来,由于酶法生产葡萄糖,以及用葡萄糖生产异构糖浆的大规模工业化, 淀粉酶的需要量越来越大,几乎占整个酶制剂总产量的50% 以上。微生物的许多种类都能产生淀粉酶。淀粉酶种类繁多,特点各异且用途广泛。因为淀粉酶的用途广泛, 各国在对淀粉酶产生菌的筛选方面都做了大量的研究工作,目前所得淀粉酶活力最高可达到260 U /mL左右。虽然不少微生物能产生淀粉酶,但适合商业生产需要的菌株仍然很少, 在淀粉酶生产过程中选择适合的菌株是最重要的前提条件。本文以土壤作为原料, 从中筛选出具有产淀粉酶能力的出发菌株,并对所得的出发菌株进行酶活力测定,使其给工业生产带来经济效益做大量的准备工作。
1. 材料与方法
1.1器材
①培养皿、量筒、试管、滴管、吸水纸、烧杯、移液管、三角瓶、酒精灯、玻璃棒、接种环、镊子、天平、滤纸、pH试纸、试管架、容量瓶等。
②恒温培养箱、高温灭菌锅、无菌操作台、控温摇床、分光光度计、离心机。
③棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、称量纸、试管架、药匙、吸耳球、镊子、酒精棉、废液瓶、胶塞、火柴。
1.2试剂
①牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、NaCl、蒸馏水、1mol/L NaOH、1mol/L HCl、无菌水、95%乙醇、75%酒精、酵母膏、KH2PO4、碘液、淀粉溶液（0.5%）、蔗糖溶液（1%）、3,5
—二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）、酒石酸钾钠、结晶酚、亚硫酸钠、磷酸缓冲液（0.2mol/L,pH6.8）、6mol/L NaOH。
牛肉膏蛋白胨培养基、固体淀粉培养基、种子培养基、发酵培养基。
1.3菌种
土壤稀释液
2. 操作步骤
2.1培养基的配制
2.1.1操作流程：
称量→溶解→调节pH→分装→加棉塞→包扎→灭菌→摆斜面
2.1.2操作步骤：
（1）称量药品：按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏和蛋白胨可分别放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。
（2）加热溶解：在烧杯中加入少于所需的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻璃棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入已溶解的药品中，再加热融化，在此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补充所失水分。
（3）调pH：用pH试纸检测培养基的pH值，若pH偏酸，可滴加1mol/L NaoH，边加边搅拌，并随时检测，直至达到所需pH范围。若偏碱，则用１mol/l HCL进行调节。注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。
（4）分装：按实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。分装量：固体培养基约试管高度的1/5；分装入三角瓶内的以不超过其容积的一半为宜，半固体培养基以试管高度的1/3为宜。
（5）加棉塞：培养基分装完毕后，在试管口和三角瓶口塞上用普通棉花（非脱脂棉）制作的棉塞，以防止外界微生物进入培养基内而造成污染。
（6）包扎：加塞后，将三角瓶的棉花外包一层牛皮纸或双层报纸，以防止灭菌时冷凝水沾湿棉塞。若培养基分装于试管中，则应先把装同类培养基的试管扎成捆后，再于棉花塞外一层牛皮纸。然后用记号笔注明培养基名称、组别、日期。
（7）灭菌：将上述培养基于121.3℃高压锅内，高压蒸汽灭菌20min。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。所用培养皿、移液管、涂布棒用牛皮纸包扎好，无菌水、试管包扎，一起高压灭菌。
（8）摆斜面：灭菌后，如制斜面，则需趁热将试管口端搁在一根长木条上，并调整斜度，使斜面的长度不超过试管总长的1/2，待其凝固。
2.2 微生物的分离与纯化
2.2.1 土样的采集
（1）地点选取：长春师范学院第一教学楼西侧家属楼门前菜园中的土壤（潮湿）。
（2）采集时间：2013-3-28,10:30.
（3）采集原则：地点选取后，用小铲子除去5cm表土，取离地面5-10cm处的土壤盛与袋中并标明时间、地点及环境情况。
2.2.2 土壤稀释液的制备
（1）取10g土壤样品加入装有90ml无菌水的无菌烧杯中，轻轻摇晃混匀，制成菌悬液。
（2）再分别取5只试管，分别加入9ml无菌水。然后把土壤菌液和5管9ml的无菌水排列好，依次编号1,2,3,4,5及6号管。
（3）在无菌操作条件下，用无菌移液管吸取1ml 10-1浓度（菌悬液）的菌液于装有9ml
