细胞培养常用试剂配制
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常用试剂配制
PBS溶液配制:用电子天平准确称取NaCl 8.0 g,KCl 0.2 g,KH2P04 0.29 g,Na2HP04—12H20 1.42 g溶于800 mL的超纯水中,用磁场搅拌器搅拌至溶解后调节pH值为7.2~7.4,然后定容至1L。置于高压灭菌锅中灭菌30min,冷却到室温后分装,于4℃冰箱冷藏备用。
DMEM/12高糖培养液:将袋装的DMEM/12粉末溶于800ml的超纯水中,同时加入3.79碳酸氢钠,66mg青霉素钠和100mg的硫酸链霉素,用磁力搅拌器充分混匀,调节pH值为7.2-7.4,然后定容至1L。用孔径为0.229μm的滤膜过滤除菌,分装后置于4℃冰箱冷藏备用。用于培养细胞的培养液为上述DMEM/12高糖溶液中加入10%-20%(体积比)的胎牛血清。
0.25%胰蛋白酶一0.02%EDTA消化液:准确称取0.25g的Trypsin和0.02g的EDTA,用PBS在容量瓶中定容至100ml,调节pH值为7.2-7.4,用孔径为0.22μm的滤膜过滤除菌,用2mL的离心管分装,冻存于-20℃冰箱备用。
双抗:80mL的超纯水中加入80万u的青霉素钠和100万u的硫酸链霉素,0.22μm的滤膜过滤除菌后,用2mL的离心管分装,冻存于-20℃冰箱备用。
二甲亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)冻存液:将DMSO、FBS和DMEM/12按1:3:6的比例混匀,现配现用。