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注意事项
根据组织类型选择适当的消化液。 控制消化时间，尽量减少细胞损伤。 尽快促进细胞贴壁，必要使用生长基质 涂抹瓶壁，或先少量细胞悬液接种，培 养3～5 h后，补足培养液。 适当提高细胞接种密度。
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小鼠肝细胞原代培养－消化法
1. 处死及消毒：脱颈处死小鼠, 浸入75% 酒精中1min, 沥干。 2. 取材：剪开腹部皮肤,撕开皮肤,暴露腹 膜,打开腹腔,取出肝脏。 3. 解剖：修剪除去肝门区血管结缔组织,剪 取一块蚕豆大小的肝组织。 4. 剪切：把肝组织剪成1 ～ 2mm３小块, 用无血清培养液淋洗2～3次。
5. 消化：将肝组织块移入小瓶中, 加8ml混合消 化液, 37℃、40min, 每隔5～10min顺时针摇 匀。 6. 过滤：消化液过100目筛网, 收集滤液, 移入 离心管。 7.离心：离心800rpm, 5min, 吸弃上清液。 8. 洗涤：用无血清培养液离心洗涤１次。 9. 重悬浮及计数：用RPIM1640培养液(含10%胎 牛血清)重悬浮肝细胞, （取样计数）。 10.接种及培养：将细胞接种于培养瓶中, 密度 为106/ml (2×105/cm2), 37℃、5%CO2培养。
