clock 基因rs1801260多态性与抑郁症的关联分析胡义秋1，2，谢光荣2，詹林*（1.湖南农业大学科学技术师范学院，湖南长沙410128；2.中南大学湘雅二医院精神卫生研究所，湖南长沙410011）【摘要】目的：探讨clock 基因与汉族人群抑郁症的关联。
方法：用Snapshot SNP 分型技术对155例抑郁症患者（其中包括133名抑郁症睡眠障碍者）和150名正常对照进行clock 基因rs1801260位点分型，比较两组该基因多态性基因型和等位基因频率的差异。
结果：与对照组相比，患者组rs1801260多态性的基因型和等位基因的频率差异无统计学意义(P >0.05)；对rs1801260多态性二种基因型C/T 、T/T 抑郁症的临床资料比较，显示HAMA 总分差异具有统计学意义（t =2.012，P =0.047），其他各项没有明显差异（P >0.05）。
结论：clock 基因rs1801260多态性可能与中国汉族抑郁症的发病无关联，但与抑郁症的焦虑程度可能关联。
【关键词】抑郁症；clock 基因；关联研究中图分类号:R395.4文献标识码:A文章编号:1005-3611(2010)05-0591-03Association of Clock Gene rs1801260Polymorphism with DepressionsHU Yi-qiu ，XIE Guang-rong ，ZHAN LinTeachers College of Science and Technology ，Hunan Agriculture University ，Changsha 410128，C hina【Abstract 】Objective:To explore the association of clock gene with depression in Han Chinese.Methods:The clockgene rs1801260was genotyped by Snapshot SNP technique in 155depressions (includng 133dpressions with insominia)and 150normal controls.The genotype and allete gene frequency in the two groups were compared.Results:There were no significant differences in genotype and allete gene in clock gene rs1801260between depressions and healthy controls (P >0.05);As compared with the depression ’s clinical data of two genotypes of the rs1801260polymorphism C/T,T/T,there was statistically significant difference in HAMA total score (t =2.012,P =0.047),but no other significant difference (P >0.05).Conclusion:There is no association of clock gene rs1801260polymorphism with the incidence of depressions in Han Chinese,but maybe association with the level of anxiety in depressions.【Key words 】Depressions ；Clock gene ；Association study【基金项目】湖南省自然基金（08jj3067）*湖南农业大学东方科技学院临床流行病学研究表明：有关睡眠质量的抱怨见于50－90％的诊断为抑郁症的患者中[1]。
而且，普通人群中筛选的主诉为失眠的个体大多被诊断为抑郁症，在所有的具有失眠的精神障碍中，抑郁症是最普遍的障碍[2]。
睡眠紊乱与昼夜生物节律钟（circadianclock ）的调控功能有关，clock 基因是内源性分子昼夜节律钟的最重要的基因，编码的蛋白调整昼夜节律。
一些研究[3-5]已经强调了稳定的睡眠觉醒周期和适当的睡眠卫生保健对预防抑郁症的复发尤其是轻性抑郁症的再发有重要意义。
目前，睡眠紊乱是否是抑郁症的前驱症状或者是抑郁症的启动或风险因素还不清楚。
如果抑郁症患者睡眠障碍与抑郁症的易感性指标有关，那么生物钟基因遗传研究对抑郁症的理解可能开辟一个新的有兴趣的领域。
故本研究拟采用病例对照方法了解clock 基因多态性与中国汉族人群抑郁症的关系。
1对象与方法1.1对象1.1.1抑郁症组为2007年2月－2008年10月在中南大学湘雅二医院精神卫生研究所门诊和病房住院的重性抑郁症患者（其中133例伴睡眠障碍：主诉HAMD 睡眠障碍分大于或等于4分者）。
诊断的确定人由一名正高或两名副高职称的医师做出。
入组标准：①均符合《中国精神障碍分类方案及诊断标准（第三版）》（CCMD-3）和《美国精神障碍诊断与统计手册第4版》（DSM-IV ）的抑郁症诊断标准；②《汉密尔顿抑郁量表》（HAMD ）17项版本总分≥21分；③年龄18-60岁，性别不限，均为汉族；④无严重心、脑、肝、肾疾病及其他严重的躯体疾病；无营养不良、肥胖等;⑤无内分泌系统、免疫系统疾病、神经系统疾病，无急、慢性感染；⑥受试者或其监护人知情同意。
排除标准：①1年内有重大生活事件；②其他精神疾病和精神发育迟滞；③酒精和药物滥用史；④怀孕、哺乳妇女及月经期女性；⑤血常规、肝脏功中国临床心理学杂志2010年第18卷第5期·591·能、肾脏功能、心电图、脑电图及体格检查结果有明显异常。
共收集符合上述条件的抑郁症患者155例，其中男性60例，女性95例，年龄18-60岁，平均年龄34.82±12.47岁。
1.1.2对照组来自中南大学湘雅二医院体检中心的体检者，均为汉族，汉密尔顿抑郁量表（HAMD)总分少于7分，无重大躯体疾病、遗传性疾病，既往无精神病史及精神疾病阳性家族史。
共收集符合上述条件的正常对照者150名，男性63例，女性87例，平均年龄37.42±10.28岁。
1.2方法1.2.1DNA提取取肘静脉血2ml，用基因组DNA 提取试剂盒提取。
1.2.2基因型检测本研究利用标签SNP原理，通过在线查找/cgi-perl/gbrowse/ hapmap24_B36/（Rsquare=0.8；MAF=0.10），确定CLOCK基因标签SNP的rs1801260多态性为研究靶点。
利用SNaPshot SNP分型技术对305个样本进行CLOCK基因rs1801260位点分型。
①设计了1对PCR引物（rs1801260F：TACcagccagcaggaggtgat；rs1801260R：TGCCTTTCTGATTCCCTGGAG）用于扩增了包含该位点的101-179bp片段,也设计了1个紧邻SNP位点的延伸引物用于单碱基延伸。
引物用在线Primer3软件设计（/cgi-bin/primer3/primer3_www.cgi）。
延伸产物用虾碱酶（SAP）(from Promega)纯化后在ABI3130xl上样。
②PCR反应体系：（20μl）包含1x HotStarTaq buffer，2.0 mM Mg2+，0.2mM dNTP，每对引物0.1μM，1U Hot-StarTaq polymerase(Qiagen Inc.)和1μl样本DNA。
PCR循环程序：95o C15min；11cycles x(94o C20s，62o C-0.5o C/cycle40s，72o C1min)；24cycles x(94o C 20s，56o C30s，72o C1min)；72o C2min；4o C for ever。
③PCR产物纯化：PCR产物纯化根据ABI公司提供的操作说明采用SAP/Exo I酶法在15μl PCR产物中加入5U SAP和2U Exo I酶，37o C温浴1小时,然后75o C灭活15分钟。
1.3统计学分析用EXCEL软件建数据库，用SPSS11.5进行数据分析。
采用卡方检验进行Hardy-Weinberg遗传平衡度检验和组间基因型和等位基因频率比较，不同基因型组间的计量资料比较采用F检验。
2结果2.1三组CLOCK基因rs1801260多态性基因型和等位基因频率比较本研究共纳入抑郁症155例，其中抑郁症睡眠障碍133例，正常对照组150名，三组CLOCK基因rs1801260多态性基因型和等位基因频率比较见表1，经Hardy-Weinderg平衡的吻合度检验，三组的CLOCK基因rs1801260多态性基因型符合Hardy-Weinderg平衡定律（P>0.05）。
经χ2检验，抑郁症组、抑郁睡眠障碍组与对照组之间CLOCK基因rs1801260多态性基因型及等位基因总体分布的差异均无统计学意义（P>0.05）。
两两比较发现，各组之间CLOCK基因rs1801260多态性基因型及等位基因总体分布的差异均无统计学意义（P>0.05）。
表1三组CLOCK基因rs1801260多态性基因型和等位基因频率比较2.2抑郁症组CLOCK基因rs1801260多态性两种基因型临床资料的比较对抑郁症患者的临床资料进行了基因型C/T、T/ T的比较，计量资料进行独立样本t检验，计数资料进行卡方检验（或Fisher精确检验），结果显示，只有一项具有统计学意义，即HAMA总分（P<0.05），其余之间没有明显差异（P>0.05）。
见表2。
表2抑郁症CLOCK基因rs1801260多态性两种基因型人口学资料及临床资料的比较3讨论本研究没有发现抑郁症和抑郁症睡眠障碍患者rs1801260基因型和等位基因频率与正常对照者组有显著性差异。
这与Bailer[6]等对单相和双相抑郁症进行clockT3111C基因核苷酸多态性的研究结果一致。
但Bailer发现具有较高发病次数的情感障碍样本亚组显示了一些基因分型的差异。
本研究对抑郁症多次发作和首次发作的亚组比较没有发现基因分型的差异，可能与本研究样本量少有关，以后还需·592·Chinese Journal of Clinical Psychology Vol.18No.52010扩大样本量进行进一步研究。
