1-免疫器官简介+骨髓细胞分离

肝脏是人体重要的实质器官，功能复杂，易受多种 病原体、毒物及免疫病理伤害。感染性疾病导致的急 性肝损伤是临床常见疾病，治疗不及时会危及生命。 建立合适而稳定的急性肝损伤模型可以为急性肝病病 因、病理生理、疗效判断等研究提供重要工具。目前 有多种方法来建立肝损伤动物模型。包括四氯化碳、 D-半乳糖苷以及刀豆蛋白A （ConA）等方法。

1. 中枢免疫器官:
• 胸腺：T细胞分化、成熟场所
• 骨髓：造血多能干细胞所在地；人及哺乳类 动物B细胞分化、成熟场所
• 腔上囊：鸟类B细胞分化、成熟场所
2.外周免疫器官:
• 淋巴结：过滤、清除异物 产生免疫应答
• 脾脏：血液滤过作用 产生免疫应答 产生吞噬细胞增强激素
• 皮肤、粘膜相关淋巴组织
免疫学创新实验
山东大学免疫学系
时间 内容
教学安排
第一次 免疫器官简介 小鼠免疫器官的识别和分离 小鼠骨髓细胞的分离和计数 小鼠急性肝损伤模型的诱导
第二次 小鼠急性肝损伤的观察和分析 流式细胞术检测小鼠脾细胞CD4
第三次 小鼠急性肝损伤血清学检测（ALT、TNF-a）
第四次 体外抗体形成细胞检测——QHS
3.皮肤和粘膜相关淋巴组织
➢ 皮肤相关淋巴组织 （SALT，skin associated lymphoid tissue) 包括: —表皮层、真皮层/免疫活性细胞 —表皮层/langerhans细胞， （ICC， immunocompetent cells，
免疫活性细胞）
—淋巴结/并指状DC（APC作用）
作用：摄取、转运抗原； 活化、增殖部位
M cells establish immunity in the digestive tract
二、小鼠免疫器官的识别和分离
颈椎脱臼法处死小鼠，识别并分离取得骨髓、胸腺、脾脏、 淋巴结
三、小鼠骨髓细胞的分离和计数
➢颈椎脱臼法处死小鼠，无菌剥离股骨和胫骨，去除两端 骨骺，用1ml注射器将骨髓冲出直至骨髓腔发白。 ➢用PBS反复冲洗细胞使其成为单个细胞悬液，收集骨髓 细胞，1600rpm离心5min，弃上清。 ➢加5ml Tris-NH4Cl 红细胞裂解液，室温孵育10min， 1600rpm，离心5min，弃上清。 ➢加5ml PBS混匀，1600rpm，离心5min，弃上清。 ➢加5ml PBS重悬细胞沉淀，计数，调整细胞浓度约为 1.5×106/ml。
Cellular components of the cutaneous immune system
➢粘膜相关淋巴组织
（MALT，mucosal associated lymphoid tissue)
包括： 消化道、呼吸道、泌尿生殖道黏膜。 (1)淋巴滤泡样结构----ICC活化、增殖部位 以B细胞为主,T细胞少 还有M细胞（membranous cells)：
WBC
1mm WBC 1mm
WBC
WBC
Cell concentration/ml = Total cell count in 4 squares /4 x 104
RBC
Cell concentration/ml = Total cell count in 5 squares x 5 x 104
四、小鼠急性肝损伤模型的诱导
注意事项：
1.黄色垃圾桶物品：手套、EP管、Tip头、注 射器（不含针头）
2.注射器针头回收放入器材车上的专门盒子内 3.生活垃圾不能放入黄色垃圾桶，请放入普通
垃圾桶
实验一
1、免疫器官简介 2、小鼠免疫器官的分离和识别 3、小鼠骨髓细胞的分离和计数 4、小鼠急性肝损伤模型的诱导
一、免疫器官简介
C57BL/6J小鼠，腹腔注射ConA 200mg/kg，24h