培养基模拟灌装验证的若干问题 顿昕

原因未在批记录中记载，仅在验证记录中记载了剔除数量。
5、在无细胞百白破联合疫苗配制工序的培养基模拟验证中，企业以完成 的b型流感嗜血杆菌结合疫苗的配制工序培养基验证代替本产品的验证，
但上述两种产品的处方促成、配制复杂程度存在差异。无细胞百白破联
合疫苗配制工序的物料包括：无细胞百日咳疫苗原液、白喉类毒素原液、 破伤风类毒素原液、氢氧化铝佐剂、**%氯化钠溶液、**%的PBS缓冲溶 液，而b型流感嗜血杆菌结合疫苗配制工序的物料仅有b型流感嗜血杆菌 结合疫苗原液和**氯化钠溶液两种物料。（附录1第47条）
Placebo mediums should be evaluated for their ability to support growth. Their placebo used in the process simulation is sodium phosphate in different forms (solution and anhydrous) and sodium chloride solution.
培养基灌装验证没有反应实际无菌API的生产过程。培养基灌 装验证未能包括连续生产13个批次时的日常干预的模拟。
Warning Letter
Your firm failed to design and perform an adequate aseptic process simulation (i.e., media fill) based upon the same controls used for routine production. We note that the (b)(4) was observed (b)(4) during actual production. However, this intervention was performed only once during the media fill in 2009.
3 检验操作方面缺陷共有2项：a.化验室霉菌培养箱部分 培养皿内滤膜未完全贴合在培养基上，培养基因密封不严 造成水分缺失；b.明胶空心胶囊环氧乙烷检验标准规定使 用聚乙二醇为固定液的毛细管柱，实际检验使用聚乙二醇 固定相的填充柱，未经确认。
关于水分流失的问题 清洗的问题
Warning Letter
或偏低
微生物生长
生长的范围
配制好的溶液在低温下保 低温会抑制微生物生长 培养基在储存容器中常温保存
存
抑菌因素影响分析
抑菌影响分析---灌装
风险点
解释
控制方法
生产过程中使用惰性气 体（如氮气）保护产品
培养基灌装量偏少
大多数需氧微生物，惰 性气体有一定的抑菌 作用
用压缩空气或空气来代替惰性 气体
西林瓶内壁不能被完全 接触，微生物不能生 长
对于模拟试验过程中消毒剂（如喷洒消毒酒精） 消毒剂会杀灭微生
的使用，应该注意不能超出正常生产时的使用 物
频率，不能将消毒剂直接接触到培养基上。
班次轮换，清场消毒
消毒剂会杀灭微生 对于两班次灌装，中间不进行多余平时的消毒清
物
场。
抑菌影响分析---冻干 风险点
抽真空
抑菌因素影响分析
解释
控制方法
过低真空度有抑菌作用 。过低真空度还会导 致培养基失水。
培养基灌装没有模拟实际的生产过程。
Warning Letter
- A routine production of a (b)(4) Injection vials lot would take approximately (b)(4) hours to be filled. Your written procedures for routine production require that an intervention take place every (b)(4) minutes for fill-weight verification measurements.
灌装好的西林瓶放入冻干机， 放置十小时以上模拟冻干过程 。但不进行抽真空的模拟操作 ，保持冻干机内正常气压
低温冷冻
低温会抑制微生物生长 不进行冷冻操作，保持常温
4、在2011年11月开展的对制剂分装车间培养基灌装试验中，灌装过程中剔除 的部分西林瓶数量在灌装批记录中未体现。具体情况如下，企业于2011年11月 3日签发了培养基灌装的验证方案，于2011年11月4日进行培养基灌装操作。 清洗西林瓶14940支，灌装13425支，剩余1515支由于培养基用完未灌装。在 灌装的13425支中，送QC实验室做无菌培养的有11845支，有88支用于目检/ 称量取样，有102支因未加塞剔除，有2支因轧盖不严剔除，以上数据在批记录 中有记载。另有357支在灌装开始阶段因生产线装配及排尽灌注针头空气而剔 除，有1031支因验证方案规定的各种原因而剔除，但以上剔除的西林瓶数量及
Warning Letter
Your firm failed to design and perform an adequate aseptic process simulation (i.e., media fill) based upon the same controls used for routine production. We note that the (b)(4) was observed (b)(4) during actual production. However, this intervention was performed only once during the media fill in 2009.
问题
此项验证在检查中是重点吗？经常有哪些缺陷被发现？
检查中发现的三类典型问题
1. 真实性方面的问题 2. 假阴性方面的问题 3. 代表性方面的问题 4. 异常结果调查 5. 验证过程中的环境监控
Байду номын сангаас
某企业在2010版GMP认证中的缺陷举例
1.培养基灌装验证中数据显示使用西林瓶7780余支、培养基 62500ml、乳糖2kg、胶塞和铝盖各6740支，实际灌装6130 支。批记录显示裂瓶数量为1530余支、培养基无剩余、乳糖 剩余0.46kg、胶塞和铝盖各600支，每支西林瓶灌装200mg 乳糖+8ml培养基，各种物料使用数量与剩余、废弃数量不相
SOP规定每几分钟就要对装量进行测试，但是模拟灌装时只 测试了几次。
Warning Letter
The process simulations (media fill) do not represent actual production operations for your sterile API. The process simulation performed by your firm in July 2009 failed to include simulation of the routine interventions performed in a typical campaign of 13 batches.
没有考虑可能存在的头孢残留对培养基中微生物的影响
问题：培养基促生长实验与阳性对照实验一样吗？
抑菌因素影响分析
抑菌影响分析---物料准备，储存过程
风险点
解释
控制方法
配制溶液的注射用水温 度高于６０℃
高温会抑制微生物生长
将配制培养基的注射用水冷却 到室温，在室温下（20-25℃ ）配制
正常生产溶液ｐＨ值偏高 酸性或碱性环境不利于 培养基的pH调整到适合微生物
无菌工艺验证（培养基模拟灌装？）若干问题的思考
咨询顾问 顿昕
问题
为什么我们如此重视无菌工艺验证（培养基模拟灌装验 证）？
培养基验证意味着什么？ QC参与？
问题
无菌工艺验证就是模拟灌装验证？模拟灌装验证就是培养 基模拟灌装验证？
安慰剂—惰性粉末
11:30
选择标准
无活性、易灭菌，易溶解，对培养基促进生长作用无副作用，易灌装，流动性 要好（培养基流动性较差） 常用安慰剂 聚乙二醇Polyethylene glycol 系列(PEG 6000,PEG 8000）, 甘露醇Mannitol， 乳糖Lactose等 包装形式，
吻合，质量管理人员未对产生的偏差进行充分分析。（附录 1第四十七条）主要缺陷
.江苏某企业：灌装检查/更衣/真的培养？
可能的假阴性
2、培养基模拟灌装验证未包含最差条件的描述；未描述 实际灌装过程；培养基在冻干箱降温到3℃，未做生长试 验；A级区在灌装中未进行动态监测。（附录1第四十七条 ）（主要缺陷）
培养基灌装所用的介质，没有评估其对微生物的抑菌影响。培 养基灌装所用的材料是磷酸钠和次氯酸钠的溶液。
Warning Letter
Gases used during process simulation should be evaluated for their inhibitory effect on microorganisms. Your response states that the nitrogen used in the process simulation is removed by the test membrane during filtration.
没有评估模拟过程中使用的气体（氮气）对微生物影响。
Warning Letter
Placebo mediums should be evaluated for their inhibitory effect on microorganisms. Your response does not indicate that your firm uses beta-lactamase to inhibit the effect of antibiotic residue in the production line during process simulation.
灭菌方法，
粉尘控制
抑菌性
溶解性：
6
问题
此验证频次越高越好嘛？
• BSE/TSE Risk 疯牛病 • Mycoplasma Risk 支原体
1.00800 TSB, irradiated 1.00550 TSB non animal, irradiated
8 Presentation title in footer | 00 Month 0000
6、培养基模拟灌装试验存在以下缺陷：（1）培养基模
拟灌装试验模拟的最差条件无相关数据支持，如：企业 在培养基模拟灌装试验中仅模拟1次干预倒瓶的操作， 少于实际生产操作中干预倒瓶次数；（2）在培养基模
拟灌装时按照正常生产工艺进行充氮气保护，未对氮气 可能的抑菌效果进行评估；（3）未根据培养基模拟灌 装试验确定有资质进入B级区进行操作的人员名单。 （附录1第47条）
10ml西林瓶灌装至少2-4ml培养 基，以保证足够量培养基用于 培养
抑菌因素影响分析
抑菌影响分析---中间过程
风险点
解释
控制方法
对设备的清洗、消毒和灭菌
消毒剂会杀灭微生 对设备的清洗、消毒和灭菌在灌装前后进行，灌
物
装前进行消毒要避免设备上的消毒剂残留。
正常生产时消毒剂（如喷洒消毒 酒精，对操作人员手部消毒） 的使用，
公司的培养基灌装验证未根据日常生产的控制进行设计和完 成，如在实际生产中观察到的一些干预操作
Warning Letter
The written procedures related to the production simulations – “media fills” - conducted to validate your capability to aseptically produce small volume parenteral (SVP) were found to be inadequate. The media fills for this line did not represent actual operations used in the aseptic production of ampoules and vials.
公司的培养基灌装验证未根据日常生产的控制进行设计和完 成，如在实际生产中观察到的一些干预操作