不同品种灵芝中三萜类化合物的比较研究
邢增涛1 郁琼花2 张劲松1 潘迎捷1
(1 上海市农科院食用菌研究所,上海201106; 2 通标标准技术服务有限公司,上海200233)
摘要 本研究利用HPLC对同一灵芝菌种不同生长阶段及不同品种灵芝子实体中三萜类化合物的含量和图谱进行了分析。
结果表明在液体发酵7天左右的灵芝菌丝体中灵芝三萜类化合物的含量极低,而不同生长阶段的灵芝子实体中的三萜类化合物的变化较小,孢子粉中三萜类化合物的含量较子实体中低。
不同品种的灵芝子实体中三萜类化合物的种类和含量存在差异,黑芝中几乎不含三萜类化合物。
关键词 灵芝 HP LC 三萜类化合物 菌丝体 子实体
灵芝三萜类化合物是灵芝中的主要活性物质之一,也是现代灵芝化学和灵芝药理研究的重点。
目前,国内外的研究者已经从灵芝中分离纯化出100多个三萜类化合物。
另外,在真菌和高等植物的许多次生代谢产物中,三萜类化合物、黄酮类化合物及多酚类化合物等均被用作形态上比较接近的真菌或高等植物鉴别和分类的特征性化合物。
国外学者对灵芝做过类似的研究。
本文利用HPLC对同一菌种发酵菌丝体、不同生长阶段的灵芝子实体、孢子粉,以及在我国商业化栽培的几种灵芝子实体中的三萜类化合物的种类和含量进行分析。
为更合理地开发利用灵芝子实体和发酵菌丝体,以及分类和鉴定等提供科学的依据。
1 材料、仪器与试剂
灵芝发酵菌丝体、芝蕾期子实体、成熟期子实体、老化期子实体、孢子粉,菌种均为Ganoder ma lucidum0819,由上海农科院食用菌研究所药用真菌研究室选育。
不同品种的灵芝子实体由上海市农科院食用菌研究所育种室王南博士提供。
HPLC:Waters2690;检测器,Waters2487;色谱柱,Nova-Pak-C18,3 9mm 150mm(Waters)。
95%乙醇(分析纯),甲醇(光谱纯),冰醋酸(分析纯),乙腈(光谱纯),实验用水为重蒸馏水。
2 方法
2 1 供试样品的处理 分别准确称取经粉碎的灵芝样品各1克,加入适量95%的乙醇,超声提取1h,过滤,收集滤液。
重复提取3次。
合并滤液,于40 左右,减压除去乙醇。
用适量甲醇将样品溶出,定容至25ml,供测定。
2 2 HPLC分析条件 流动相:乙腈-2%乙酸(1 4)为A液;乙腈-2%乙酸(1 2)为B液。
色谱柱的处理:预先用100%的A洗脱液冲洗色谱柱,设定检测温度为37 ,流速为0 5ml/min。
梯度洗脱程序:0 5min,100%A;5 10m in,80%A;10 20min,70%A;20 30min,5%A;30 40min,40%A;
40 50min,20%A;50 100min100%B 1 。
进样量为20 l。
3 结果
结果见图1,其中1为液体发酵7天的灵芝菌丝体,2为芝蕾期子实体、3为成熟期子实体、4为老化期子实体、5为孢子粉。
图2为不同品种灵芝在同一培养基进行培养,并同一时期采收的老化期子实体中三萜类化合物的H PLC图谱,其中A为松杉灵芝、B为紫芝、C为灵芝0770、D为南韩灵芝、E为日本灵芝、F为灵芝0819、G为黑芝、H为江西黑芝。
4 讨论
从图1中可以看出,液体发酵7天左右的灵芝菌丝体中三萜类化合物的含量和种类几乎无法辨认。
据Sheau-Farn Yeh 2 、Rongsuey Chyr 3 等人的研究报道,
液体发酵灵芝时三萜类化合物的含量至
图1 不同生长阶段灵芝产品中三萜
类化合物的HP LC图谱
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培养30天左右时才达到高峰,所以尽管液体发酵灵芝时,培养7天时灵芝菌丝体的含量已经可以达到稳定的状态,但三萜类化合物的合成代谢可能尚未启动。
如果希望通过液体发酵来获得以灵芝三萜类化合物为主的产品,必须通过菌种的筛选、培养基配方的改进、培养条件的设定,以及适当延长培养时间,并通过化学检测手段的监控来完成,单纯以灵芝菌丝体含量的变化来控制液体发酵过程是不恰当
的。
图2 不同品种灵芝子实体中三萜类
化合物的HPL C 图谱
从图1中亦可发现,从灵芝子实体开始分化形成时,三萜类化合物的种类与含量便开始基本稳定下来,这与Masao H irotani 4
等人的研究报道是一致的。
但孢子粉中三萜类化合物的含量却相对较低,
这可能与超声提取不能完全将未经破壁的孢子粉内的三萜类化合物提取出来有关,也有可能是因为孢子粉中三萜类化合物的含量实际上就低于灵芝子实体中三萜的含量。
由图2可知,松杉灵芝与紫芝的三萜类化合物的H PLC 图谱比较相近,而日本灵芝与南韩灵芝的
比较相近,这说明如果以三萜类化合物的含量与种类作为灵芝分类的一个依据,仍然需要做一些细致的工作,找到某一菌种的特征性三萜类化合物,才能为灵芝的分类提供化学依据。
另外,发现不同产地的黑芝子实体中三萜类化合物的含量均没有检出,这与Masao H irotani 5 等人的实验结果相吻合的。
因此,在应用中不能将黑芝子实体代替紫芝和赤芝作为药用原料。
黑芝在芝型和色泽上容易与紫芝混淆,但通过对二者子实体中三萜类化合物的含量分析,就很容易将二者区分开。
目前在一些地区为追求灵芝品种的新、奇、特而大力发展黑芝的栽培,并有部分黑芝子实体进入原料药市场,这一做法是缺乏科学根据的,应给予制止。
由图2亦可以看出,我们所选育的灵芝菌种 灵芝0819中三萜类化合物的含量相对较高,说明完全可以通过对灵芝菌种的选育来提高目标产物的产量和质量。
基金项目:上海市农委重点项目
参考文献
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(2004-03-16收稿)
Comparative Study on Triterpenes in Different Ganoderma Species
X ing Zengtao 1
,Yu Q ionghua 2
,Zhang Jinsong 1
,Pan Yingjie
1
(1 Edible F ungi I nstitute,Shanghai Academy of Ag ricultural Sciences,Shanghai 201106; 2 SGS -CST C Standar ds T echnical Ser -
vices Co L td ,Shanghai 200233)
Abstract T he triterpene profiles of different G anoderma products was analysed by HPL C T he results showed that the seven -day fermented my celia had little tr iterpene and different gr owth stag es fruiting bodies almost had changeless triterpene Compar ed w ith t he fruiting body ,t he tr iter pene level of spore w as low er A mong different Ganoderma species,Ganoder ma atr um had little t riterpenes too
Key words Ganoder ma lucidum ;T r iter pene;HPL C;Fermented mycelia;F ruit ing body
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